一、精浆肌酸激酶活性与男性不育的关系分析（论文文献综述）
张继伟[1]（2021）在《金龟毓麟方治疗特发性弱精子症（肾虚肝郁型）临床观察及机制研究》文中指出背景:全球约有7240万人受生育问题的困扰,特发性弱精子症占24%～30%。目前现代医学治疗特发性弱精子症存在一定局限性,缺乏针对病因的治疗,而中医药在治疗特发性弱精子症方面有一定优势。金龟毓麟方为中国中医科学院西苑医院男科经验方,具补肾填精,疏肝通络功效,对特发性弱精子症（肾虚肝郁型）具有一定疗效,但未对其有效性与安全性进行系统评价,其作用机制亦尚未明确。故设计本课题以验证其有效性与安全性及可能作用机制。本研究分为以下3个部分:研究1金龟毓麟方治疗特发性弱精子症（肾虚肝郁型）的有效性与安全性临床研究目的:评价中药复方金龟毓麟方治疗特发性弱精子症（肾虚肝郁型）的有效性与安全性。方法:本研究为随机、对照试验,共纳入患者124例,均于2019年12月-2020男12月就诊于中国中医科学院西苑医院男科门诊,均符合特发性弱精子症（肾虚肝郁型）的纳排标准。采用SAS软件产生随机编码,按1:1随机分为试验组（62例）和对照组（62例）。试验组给予金龟毓麟方（制龟甲15g、郁金12g、柴胡12g,熟地黄15g、鹿角胶6g、菟丝子10g、覆盆子10g、生麦芽12g、鸡血藤10g、炙甘草6g）。服用方法:每日2次,一次1袋。对照组给予左卡尼汀口服液（国药准字:H19990372）,服用方法:每次10ml,每日3次。两组用药12周,随访4周。主要疗效指标包括前向运动精子（PR）、精子总活力（PR+NP）;次要疗效指标包括中医证候评分、精子浓度、精液量、受孕率。安全性指标包括血常规、尿常规、肝肾功能（ALT、AST、BUN、CREA）、心电图,入组前和观察完成后各检查一次。结果:本研究共入组患者124例,共脱落11例,其中试验组脱落4例,对照组脱落7例,总脱落率为8.87%。本研究有效性分析只针对符合方案集（PPS）数据进行统计分析。1.主要疗效指标:（1）PR级精子:①组内比较:与治疗前比较,对照组治疗4周后PR级精子活力改变无统计学差异（P>0.05）:治疗8周、12周后可提高PR级精子活力（P<0.05）。与治疗前比较,试验组在治疗4周、8周、12周后均可显着提高PR级精子活力（P<0.05）。②同时期组间比较:与对照组比较,试验组治疗4周后在提高PR级精子活力方面无统计学差异（P>0.05）;治疗8周、12周后,在提高PR级精子活力方面优于对照组（P<0.05）。（2）PR+NP级精子:①组内比较:与治疗前比较,对照组治疗4周后在提高PR+NP级精子方面无统计学差异（P>0.05）;治疗8周、12周后可提高PR+NP级精子活力（P<0.05）。与治疗前比较,试验组治疗4周、8周、12周后均可提高PR+NP级精子活力（P<0.05）。②同时期组间比较:与对照组比较,治疗4周后试验组在提高PR+NP级精子方面无统计学差异（P>0.05）;治疗8周、12周后试验组在提高PR+NP级精子方面均优于对照组（P<0.05）。2.次要疗效指标:（1）中医证候评分:①组内比较:与治疗前比较,对照组治疗4周、8周、12周后,在降低中医证候评分方面均无统计学差异（P>0.05）;与治疗前比较,试验组治疗4周、8周、12周后可显着降低中医证候评分（P<0.05）。②同时期组间比较:试验组治疗4周、8周、12周后在降低中医证候评分方面均优于对照组（P<0.05）。（2）精液量:①组内比较:与治疗前比较,对照组与试验组分别在治疗4周、8周、12周后,在改善精液量方面均无统计学差异（P>0.05）;②同时期组间比较:与对照组比较,试验组分别治疗4周、8周、12周后在改善精液量方面无统计学差异（P>0.05）。（3）精子浓度:①组内比较:与治疗前比较,对照组与试验组分别在治疗4周、8周、12周后,在改善精子浓度方面均无统计学差异（P>0.05）;②同时期组间比较:与对照组比较,试验组分别治疗4周、8周、12周后在改善精子浓度方面无统计学差异（P>0.05）。（4）受孕率:①组内比较:与治疗前比较,对照组与试验组分别在治疗4周、8周、12周后,在受孕率方面均无统计学差异（P>0.05）;②同时期组间比较:与对照组比较,试验组分别治疗4周、8周、12周后在受孕率方面无统计学差异（P>0.05）。3.安全性评价:本研究共发生7例轻度不良事件,其中试验组发生4例,对照组3例,以上不良事件均为轻度,不适症状在给予指导服用方法后自行缓解,未见不良反应。两组血常规、尿常规、肝肾功能（ALT、AST、BUN、CREA）、心电图均未见明显异常。结论:金龟毓麟方在提高特发性弱精子症PR级和PR+NP级精子活力及降低中医证候评分方面均优于左卡尼汀口服液,且未见明显不良反应,表明金龟毓麟方在治疗肾虚肝郁型特发性弱精子症方面安全有效。研究2金龟毓麟方对奥硝唑诱导弱精子症模型大鼠的药效学研究目的:观察金龟毓麟方对奥硝唑（Omidazole,ORN）诱导的弱精子症模型大鼠精液质量、睾丸和附睾重量及病理形态、性激素、肝肾功能的影响。方法:将60只雄性SPF级SD大鼠进行编号,采用随机数字表法将其随机分为空白组、模型组、金龟毓麟方组（低剂量组、中剂量组、高剂量组）、左卡尼汀组每组各10只。空白组给予1mL/100g 0.5%的CMC-Na溶液;模型组;400mg/（kg·d）ORN;金龟毓麟方低剂量组:4.9g 生药/kg·d+400 mg/（kg.d）ORN;金龟毓麟方中剂量组:9.7g生药/kg·d+400mg/（kg·d）ORN;金龟毓麟方高剂量组:19.4g 生药/kg.d+400mg/（kg.d）ORN;左卡尼汀组 100mg/（kg·d）+400mg/（kg·d）ORN。灌胃时间:实验组上午给予400mg/（kg.d）ORN,下午给予金龟毓麟方浓缩液,灌胃28天。末次给药断食24小时后,腹腔麻醉称体重,取睾丸及附睾称重,计算附睾、睾丸系数。左侧附睾尾部制备附睾匀浆,温浴评估精子活力。大鼠右侧附睾、睾丸固定染色。腹主动脉取血,采用酶联免疫吸附法及生化分析仪分别测定性激素（FSH、LH、T）、肝肾功（ALT、AST、UREA、BUN、CREA）。结果:1.大鼠一般情况:空白组大鼠饮食无明显改变,体毛浓密光泽,活动度良好,精神状态可,大小便无明显异常。模型组大鼠饮食减少、体毛疏松,光泽度下降,活动度方面部分可见少动、运动迟缓,精神倦怠、萎靡或见易怒,大便稀溏,小便色黄。左卡尼汀组大鼠饮食增加,精神状态较好,活动灵敏,小便颜色正常,大便偶有偏稀。金龟毓麟方组各大鼠饮食较模型组食量增加,体毛疏松但有光泽、活动度较模型组运动量增加,精神状态较模型组灵敏、部分可见易怒现象,大便质地好转,小便颜色恢复正常。中、高剂量组精神状态和饮食量较低剂量组改善明显。2.金龟毓麟方对大鼠精子质量的影响:（1）大鼠精子活力:与模型组比较,中剂量组、高剂量组、左卡尼汀组在提高PR级精子、PR+NP级精子活力方面均有统计学差异（P<0.05）。高剂量组在提高PR+NP级精子方面优于左卡尼汀组（P<0.05）。（2）大鼠精子浓度:各组与模型组比较大鼠精子浓度改变均无统计学差异（P>0.05）。3.大鼠睾丸、附睾重量及脏器指数变化:（1）大鼠睾丸变化情况:各组与模型组比较大鼠睾丸重量、睾丸系数改变均无统计学差异（P>0.05）。（2）大鼠附睾变化情况:与空白组比较,模型组附睾重量、附睾脏器系数下降（P<0.05）。与模型组比较,金龟毓麟方高剂量组可增加附睾重量与附睾系数（P<0.05）。4.金龟毓麟方对大鼠肝肾功的影响:各组与模型组比较大鼠肝肾功能（ALT、AST、UREA、BUN、CREA）改变均无统计学差异（P>0.05）。结论:1.400 mg/（kg·d）ORN灌胃28天,对大鼠体重、睾丸重量及脏器指数、精子浓度无明显影响,但可引起附睾损伤,造成大鼠精子活力下降。2.金龟毓麟方可改善ORN诱导的弱精子症大鼠附睾损伤,提高大鼠精子活力,对大鼠肝肾功能（ALT、AST、UREA、BUN、CREA）及性激素（FSH、LH、T）无明显影响,初步验证了金龟毓麟方治疗弱精子症的有效性与安全性。研究3 基于Pink1/Parkin信号通路研究金龟毓麟方调控线粒体自噬改善ORN诱导的弱精子症大鼠的作用机制目的:从Pink1/Parkin信号通路介导的线粒体自噬角度探讨金龟毓麟方治疗弱精子症的机制,进一步揭示ORN所致弱精子症大鼠的机制以及金龟毓麟方的保护作用。方法:将40只大鼠随机分为空白组、模型组、金龟毓麟方组（低剂量组、高剂量组）,灌胃取材等同研究2。精子氧化应激检测采用SOD、MDA及GSH-Px活性检测试剂盒检测;精子线粒体功能检测采用JC-1线粒体膜电位检测试剂盒与流式细胞仪检测;采用ATP含量检测试剂盒检测精子线粒体ATP含量。精子线粒体自噬相关指标检测:采用Real-time PCR和Western Blot检测精子Pink1、Parkin、p62 和 LC3 Ⅱ/Ⅰ、TOM20、Beclin 1 mRNA 及蛋白表达水平。结果:1.精子氧化应激指标变化:与空白组比较,模型组大鼠附睾精子中MDA含量升高（P<0.01）,SOD与GSH-Px含量降低（P<0.01）。与模型组比较,金龟毓麟方低剂量组、高剂量组大鼠附睾精子中MDA含量均降低（P<0.05）,SOD与 GSH-Px 含量均升高（P<0.05,P<0.01）。2.大鼠精子线粒体功能指标变化:（1）线粒体膜电位（Mitochondrial membrane potential,MMP）:与空白组比较,模型组精子线粒体MMP下降明显,精子早期凋亡率增加（P<0.01,P<0.001）;与模型组比较,金龟毓麟方各组可升高MMP,降低精子早期凋亡率（P<0.05,P<0.01）。（2）线粒体ATP:与空白组比较,模型组精子线粒体ATP含量显着降低（P<0.001）。与模型组比较,金龟毓麟方低剂量组提高精子线粒体ATP方面无统计学差异（P>0.05）;高剂量组可提高精子线粒体ATP含量（P<0.01）。3.线粒体自噬相关指标变化:（1）与空白组比较,模型组大鼠Pink1 mRNA及蛋白表达增加（P<0.01）。与模型组比较,金龟毓麟方低剂量组、高剂量组可降低Pink1mRNA及蛋白表达（P<0.05,P<0.01）。（2）与空白组比较,模型组大鼠Parkin mRNA及蛋白表达均增加（P<0.01）。与模型组比较,金龟毓麟方低、高剂量组可降低Parkin mRNA及蛋白表达（P<0.05,P<0.01）。（3）与空白组比较,模型组大鼠p62 mRNA及蛋白表达降低（P<0.01,P<0.001）。与模型组比较,金龟毓麟方低剂量、高剂量组可增加p62 mRNA及蛋白表达（P<0.05,P<0.01）。（4）与空白组比较,模型组大鼠LC3 mRNA及LC3 Ⅱ/Ⅰ蛋白表达增加（P<0.001）。与模型组比较,金龟毓麟方低剂量、高剂量组LC3 mRNA及LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达降低（P<0.05,P<0.001）。（5）与空白组比较,模型组大鼠TOM20 mRNA及蛋白表达降低（P<0.05,P<0.01）。与模型组比较,金龟毓麟方低剂量组、高剂量组TOM20 mRNA表达增加（P<0.05,P<0.01）;低剂量组TOM20蛋白表达增高（P<0.05）。（6）与空白组比较,模型组大鼠Beclin 1mRNA及蛋白表达增加（P<0.05,P<0.001）。与模型组比较,金龟毓麟方低剂量、高剂量组BeclinlmRNA及蛋白表达降低（P<0.05,P<0.001）。结论:1.400mg/（kg·d）ORN诱导的弱精子症大鼠可能通过氧化应激损伤,引起线粒体 MMP 与 ATP 下降,导致 Pink1、Parkin、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、BeclinlmRNA 及蛋白表达上调,p62、TOM20mRNA及蛋白表达下调,提示ORN通过氧化应激损伤引起线粒体功能障碍,导致精子线粒体自噬激活。2.金龟毓麟方可减轻弱精子症大鼠精子氧化应激损伤,提高精子线粒体MMP 与 ATP 水平,下调 Pink1、Parkin、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin1mRNA 及蛋白表达,上调p62、TOM20mRNA及蛋白表达,提示金龟毓麟方通过抑制Pink1/Parkin线粒体自噬通路改善精子活力。
宫雅雯,崔彤,李圆龙,王树松[2]（2020）在《精液中生殖相关酶的研究进展》文中研究指明在精子的生成、成熟和受精中,精液中的多种酶起着关键性作用。如果由于疾病或某些因素影响精液中酶的活性必将影响精子功能,对男性生殖产生不利影响。对精液中酶的检测可以帮助评估精液质量,并反映附属性腺功能状况,本文对精液中酶的研究进展进行综述。
晏斌[3]（2020）在《灵归方对奥硝唑诱导的弱精子症模型大鼠附睾功能影响的实验研究》文中研究指明背景:2010年世界卫生组织（World Health Organization,WHO）估计全世界大约有4850万对夫妇（8～12%）患有不孕不育,其患病率因国家和地区而异,男性因素所致生育问题的分布在20%～70%之间,精子数量少、形态异常、运动能力差是与男性因素相关的常见原因。随着世界范围内男性不育症的不断增多,它已成为一个越来越引起临床重视的健康问题。目前西医治疗男性不育症主要方式为药物治疗、手术及辅助生殖技术,但是存在疗效不确定、造成侵入性损害、价格高,或伴随不良反应和其他高风险的问题,使得男性不育症患者寻求其他治疗策略。随着中医药研究的发展,中医药成为男性不育症治疗中重要的方法之一,提供了安全、有效的治疗选择。灵归方为中国中医科学院西苑医院男科经验处方,由仙灵脾、当归、熟地黄、山药等13味药组成,具有补肾、活血的功效,前期临床研究发现灵归方有提高弱精子症患者精子活动率的作用,但其具体作用机制不明,故设计本研究以阐明灵归方改善精子活动率的可能机制。实验分为两部分,第一部分为探索使用奥硝唑（Ornidazole,ORN）制备弱精子症动物模型,观察不同剂量（200,400,800 mg/（kg·d））的ORN对于雄性SD大鼠精子浓度、活动率的影响;第二部分为保护性实验,设置对照组、模型组、灵归方组、左卡尼汀组,综合评价灵归方对弱精子症模型大鼠精液质量、附睾左旋肉碱（L-carnitine,LC）含量、附睾肉碱转运蛋白（Carnitine/organiccation transporter2,OCTN2）的蛋白及mRNA表达水平的影响,并检测灵归方干预后大鼠血清性激素水平,附睾SOD、GSH-Px活性以及MDA含量,光学显微镜观察睾丸、附睾组织病理学变化。第一部分:ORN诱导弱精子症模型大鼠的研究目的:观察不同剂量的ORN灌胃对雄性SD大鼠精液质量的影响,以制备弱精子症模型大鼠。方法:将40只雄性SD大鼠进行编号,使用电子秤称重并详细记录。按照随机数字表法将其分为对照组、模型1组、模型2组、模型3组各10只,具体给药方法为:模型 1 组:200mg/（kg·d）ORN;模型 2 组:400mg/（kg·d）ORN;模型 3组:800mg/（kg·d）ORN;对照组:1ml/100g0.5%CMC-Na（由于 ORN 水溶性差,故采用CMC-Na溶解后灌胃）。按照1ml/100g体重进行给药,连续灌胃20天,观察大鼠一般情况变化,在末次给药24小时后用5%水合氯酸溶液（0.7ml/100g）进行腹部注射麻醉,水合氯酸溶液使用剂量为按照0.4ml/100g体质量进行计算,大鼠麻醉后,称体重,取睾丸及附睾分别称重,计算睾丸、附睾脏器系数,并取大鼠左侧附睾尾进行精子浓度和活动率（PR+NP级精子百分率）分析。结果:1.在实验进行过程中,由于灌胃操作导致模型3组1只大鼠死亡。对照组一般状态良好,饮食正常,体毛浓密,且有光泽,大小便正常,活动量大,较活跃,存在笼内打斗现象;与对照组比较,模型1组上述各项征象无显着下降,饮食无明显减少,饮水量相当,体毛正常,光泽度稍差,活动量未见减少,存在笼内打斗现象,精神可;模型2组较对照组上述征象有下降,饮食量减少,体毛较稀疏,体毛光泽度不及模型1组,活动量以及打斗现象无明显减少,精神尚可;模型3组较对照组上述指标有显着下降,饮食量减少,体毛稀疏,体毛光泽度明显降低且不及模型2组,活动量少,打斗现象减少,精神差。2.与对照组比较,模型1组大鼠体重,睾丸、附睾重量,以及睾丸、附睾脏器系数变化差异均无统计学意义（P>0.05）;模型2组体重,睾丸、附睾重量以及睾丸、附睾脏器系数有下降趋势,但无统计学差异（P>0.05）;模型3组体重,睾丸、附睾重量以及睾丸、附睾脏器系数均下降,有统计学差异（P<0.05）。3.与对照组比较,模型1组与模型2组精子浓度改变无统计学差异（P>0.05）,模型3组精子浓度下降（P<0.01）;与对照组比较,模型1组（PR+NP）级精子浓度及精子活动率无统计学改变（P>0.05）,模型2组、模型3组（PR+NP）级精子浓度及精子活动率均下降（P<0.01）。结论:1.200 mg/（kg·d）ORN灌胃20天对于大鼠体重,睾丸、附睾重量及脏器系数,精子浓度、（PR+NP）级精子浓度及活动率均无影响。2.400 mg/（kg·d）ORN灌胃20天,对大鼠精子浓度无影响,但可导致（PR+NP）级精子浓度及精子活动率下降,可用于制备弱精子症模型大鼠。3.800 mg/（kg·d）ORN灌胃20天可导致大鼠精子浓度、（PR+NP）级精子浓度及活动率均明显下降,可用于制备少弱精子症模型大鼠。第二部分:灵归方对ORN诱导的弱精子症模型大鼠附睾功能影响的实验研究实验一:灵归方对ORN诱导的弱精子症模型大鼠附睾LC相关通路的影响目的:观察灵归方对ORN诱导弱精子症模型大鼠精液质量、附睾LC含量,附睾OCTN2蛋白及mRNA表达水平的影响,揭示ORN诱导弱精子症模型大鼠附睾能量代谢障碍以及灵归方改善弱精子症大鼠附睾功能的相关机制。方法:将40只雄性SD大鼠进行编号,使用普通电子秤称重并详细记录。按照随机数字表法将其分为对照组、模型组、左卡尼汀组、灵归方组,每组各10只,具体给药方法为:对照组:1ml/100g 0.5%CMC-Na;模型组:400mg/（kg·d）ORN;左卡尼汀组:LC 100mg/（kg·d）+400mg/（kg·d）ORN;灵归方组:灵归方浓缩液,按 17.5g 生药/kg+400mg/（kg·d）ORN,连续灌胃 20 天,ORN 均为上午 8:00-9:00灌胃,干预药物为下午5:30-6:30灌胃。末次给药24 h后,5%的水合氯醛腹腔麻醉,剪开阴囊,取出实验大鼠右侧附睾,用于进行精子浓度及活动率检测;左侧附睾在（pH 7.2～7.4）0.01mol/LPBS缓冲液配制的4%多聚甲醛固定液中进行固定,用于附睾LC含量、OCTN2蛋白与mRNA表达的检测。其中高效液相色谱法测定附睾中LC含量,免疫印迹法（Western Blotting,WB）检测大鼠附睾OCTN2蛋白表达,逆转录聚合酶链反应（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR）检测大鼠附睾OCTN2 mRNA表达。结果:1.与对照组比较,各组精子浓度改变无统计学差异（P>0.05）;模型组（PR+NP）级精子浓度及精子活动率下降（P<0.05）。与模型组比较,灵归方组与左卡尼汀组（PR+NP）级精子浓度及精子活动率升高,有统计学差异（P<0.05）;灵归方组与左卡尼汀组比较,（PR+NP）级精子浓度及精子活动率差异无统计学意义（P>0.05）。2.与对照组比较,模型组附睾LC含量下降（P<0.05）;与模型组比较,灵归方组与左卡尼汀组附睾LC含量升高（P<0.05）;且左卡尼汀组附睾LC含量高于灵归方组（P<0.05）。3.与对照组比较,模型组OCTN2蛋白表达下降（P<0.05）;与模型组比较,灵归方组、左卡尼汀组OCTN2蛋白表达升高（P<0.05）;灵归方组与左卡尼汀组比较,OCTN2蛋白表达差异无统计学意义（P>0.05）。4.与对照组比较,模型组OCTN2 mRNA表达下调（P<0.05）;与模型组比较,灵归方组、左卡尼汀组OCTN2 mRNA表达上调（P<0.05）;灵归方组与左卡尼汀组比较,OCTN2 mRNA表达差异无统计学意义（P>0.05）。结论:1.400mg/（kg·d）ORN连续灌胃20天可导致大鼠精子活动率下降,可能与抑制附睾OCTN2蛋白及mRNA表达,引起血浆向附睾LC转运减少,导致附睾LC含量下降有关。2.灵归方能够提高ORN诱导弱精子症模型大鼠（PR+NP）级精子浓度及精子活动率,可能与增加大鼠附睾LC含量有关。3.灵归方可以上调ORN所致弱精子症模型大鼠附睾中OCTN2蛋白及mRNA的表达,从而增加LC从血浆向附睾转运。实验二:灵归方对弱精子症模型大鼠血清性激素及附睾氧化应激反应的影响目的:观察灵归方对ORN所致弱精子症模型大鼠血清性激素水平,附睾SOD、GSH-Px、MDA的影响,进一步揭示ORN造成弱精子症模型大鼠的可能机制以及灵归方的保护作用。方法:分组及灌胃方式同实验一。股动脉取血,酶联免疫吸附试验法测定大鼠血清中FSH、LH、T含量,取右侧附睾组织制备成5%的组织匀浆,将匀浆3000rpm离心10min,取上清进行SOD、GSH-Px活性以及MDA含量的检测。左侧睾丸、附睾部分置于4%多聚甲醛固定,随后用于观察睾丸、附睾结构组织病理学变化。结果:1.与对照组比较,各组FSH、LH及T水平改变均无统计学差异（P>0.05）。2.与对照组比较,模型组附睾GSH-Px、SOD活性下降,MDA含量升高（P<0.05）;与模型组比较,左卡尼汀组及灵归方组GSH-Px、SOD活性升高,MDA含量下降,均有统计学差异（P<0.01）;灵归方组与左卡尼汀组相比GSH-Px、SOD活性以及MDA含量比较无统计学差异（P>0.05）。3.在显微镜下可见各组大鼠睾丸中各生精小管结构正常,管腔明显,整齐排列,大量精子及精子细胞充满生精小管管腔,形态正常;各级生精细胞结构完整,层次清晰,各级生精细胞分裂活跃,各细胞形态未见明显异常,各组之间的形态学差异并不明显;各组附睾组织形态学改变并不明显,管腔中可见大量的精子,模型组附睾管腔中可见少量脱落细胞成分。结论:1.400mg/（kg·d）ORN连续灌胃20天对雄性SD大鼠血清性激素水平,睾丸、附睾组织形态并无显着影响,但是会引起附睾GSH-Px、SOD活性下降,MDA含量升高,可能是导致大鼠精子活动率下降的原因之一。2.灵归方可以增加附睾SOD、GSH-Px活性,降低MDA含量,减少ORN所致弱精子症模型大鼠附睾氧化损伤,维持正常的精子成熟环境。
卡迪丽娅·居尔艾特提拜克[4]（2019）在《精浆维生素D与男性生殖功能指标的临床及基础研究》文中研究指明背景:维生素D是指一组在调节人体内钙和磷的稳态方面具有明显作用的脂溶性类固醇。在人体中,维生素D主要以维生素D3（胆钙化醇）和维生素D2（麦角钙化醇）两种形式存在。维生素D在肝脏经历了第一次羟基化并产生了 25羟基维生素 D（25 hydroxyvitamin D,25（OH）D）,25（OH）D 是维生素 D 的主要循环形式,是评估体内维生素D水平的最佳指标。接着,25（OH）D被运送到肾脏,经历另一步羟化过程,转变为具有生物学活性的1α,25二羟基维生素D（1α,25-dihydroxycholecalciferol,1,25（OH）2D）。近年来,维生素D缺乏已成为全球性的健康问题,对维生素D与男性生殖系统的研究也逐渐成为热点。此前有研究分析了血清维生素D水平与男性生殖功能的关系,但尚无统一结论。目的:本研究旨在综合探讨血清及精浆维生素D水平与男性生殖功能的关系,为研究维生素D对男性生殖的具体作用机制提供研究方向。并在体外以维生素D的活性物质—1,25（OH）2D处理精子,研究其对精子的具体作用机制。方法:临床试验:根据纳排标准纳入来我科男科门诊检查的不育患者及正常体检者,通过电化学发光免疫分析法（Electrochemiluminescence immunoassay,ECLIA）检测25（OH）D水平,并评估血清和精浆25（OH）D与精液质量,精子运动学参数,循环抑制素B（Inhibin B,INHB）,抗苗勒管激素（Anti-Mullerian Hormone,AMH）,及精浆生化指标之间的关系。体外实验:用密度梯度离心法获取精子,在不含或者含不同浓度1,25（OH）2D的培养液中进行孵育,检测精子的运动参数,爬高能力及相关指标的变化。结果:临床试验:血清25（OH）D与精液量,精浆果糖浓度,总果糖量和总锌量呈正相关。精浆25（OH）D水平与血清25（OH）D水平无关,而与精液量和精子运动参数呈正相关。体外实验:使用维生素D的活性形式1,25（OH）2D孵育精子,精子的运动学参数显着增加,尤其是在用0.1nmol/L 1,25（OH）2D处理30分钟时,增加最为显着。在这种孵育条件下,精子的爬高高度伴随三磷酸腺苷（Adenosine triphosphate,ATP）的增加而提升。精子胞内的环磷酸腺苷（Cyclic adenosine monophosphate,cAMP）的浓度升高,蛋白激酶 A（Protein kinase A,PKA）的活性增加,同时PKA抑制剂（H89）阻碍了 1,25（OH）2D对ATP的促进作用。精子胞内钙离子和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（Nicotinamide adenine dinucleotide,NADH）的浓度都有增加,磷脂酶 C（Phospholipase C,PLC）抑制剂 U-73122 阻碍了 1,25（OH）2D对胞内钙离子及NADH的促进作用,而线粒体钙离子转运体（Mitochondrial calcium uniporter,MCU）抑制剂（Ru360）没有阻碍 1,25（OH）2D 对 NADH 及 ATP的促进作用。结论:1.精浆中的维生素D可能参与了精子运动的调节。2.1,25（OH）2D可通过促进cAMP/PKA通路及细胞内钙离子的增加来促进ATP合成,从而增强精子活力。
杨金坤[5]（2019）在《液化2号方对精液不液化（阴虚火旺型）及精子DNA碎片率影响的临床研究》文中研究指明1目的探讨液化2号方对精液不液化症、精子DNA损伤的影响及临床疗效观察。2方法2.1理论研究对CNKI数据库及万方数据库检索所得到的文献材料进行研究,结合西医相关机制研究,共同分析精液不液化症患者的中医病因、病机及证候分布的规律,对其中医学病因、病机以及临床疗效进行总结,探讨滋阴降火法在阴虚火旺型精液不液化症治疗上的理论依据。2.2临床研究撷取2018年1月至2018年10月就诊于安徽中医药大学第一附属医院男科门诊的阴虚火旺型精液不液化症患者60例。借助于随机数字表法将其随机分为对照组（30例）和研究组（30例）,对照组用知柏地黄丸治疗,研究组用液化2号方治疗。通过中科恒业精子图像分析系统对精液的粘稠度及液化时间进行分析,借助于精子染色质扩散法（SCD）对精子DFI水平进行检测,进而观察液化2号方在临床疗效和DFI水平等方面的影响。3结果3.1理论研究结果对CNKI数据库及万方数据库检索所得到的文献材料进行研究,结合西医相关机制研究,共同分析了精液不液化症患者的中医病因、病机及证候分布的规律,对其中医学病因、病机以及临床疗效进行了总结,探讨了滋阴降火法在阴虚火旺型精液不液化症治疗上的理论依据。3.2临床研究结果3.2.1精液不液化症患者的精液粘稠度及液化时间的变化通过对60例精液不液化症患者精液的液化时间及粘稠度进行检测,发现对照组患者相对于研究组,其精液粘稠度较高,液化时间明显延长（P<0.05）。3.2.2精液不液化症患者精子DFI的变化与正常对照组比较,研究组中精液不液化症的患者,其精子DFI水平明显降低,差异有统计学意义（P<0.05）。3.2.3液化2号方治疗精液不液化症患者的临床疗效经过12周的治疗,两组之间的总有效率分别为:液化2号方组93.33%,知柏地黄丸组80.00%。两研究组的总有效率具有显着差异,表明与对照组相比,治疗组的总有效率更具有优势,有统计学意义（p<0.05）。3.2.4液化2号方对患者精液的粘稠度、液化时间的影响与治疗前相比,研究组患者的精液液化时间明显缩短,液化状态显着改善（P<0.05;P<0.05）,精液量无明显差异（P>0.05）;与对照组相比,研究组患者的精液液化时间显着下降（P<0.05）。3.2.5液化2号方对患者精子DFI水平的影响相比治疗之前,研究组及对照组患者精子DFI水平均有显着改善（P<0.05或P<0.01）;研究组的改善情况高于对照组,差异存在统计学意义（P<0.05）。4结论4.1观察精液不液化症患者60例,其中有30例患者的精子DFI水平有显着提高,且均高于对照组,且证明差异具有统计学意义（P<0.05）。4.2液化2号方除了对患者精液液化的状态和时间有所改善,亦可以明显地改善患者的精子DFI水平,且在临床疗效方面优于对照组。
陆金春[6]（2018）在《精液生化指标的全自动检测及临床应用》文中研究表明人精浆富含潜在的男性不育和男性生殖系统疾病的生物标志物,对男性不育的诊断和治疗有应用价值。精液生化指标检测在经历了手工法、半自动法后,目前已进入全自动检测的时代。精液生化指标的全自动检测有如下优势:试剂组成简单,每个测试所用试剂量少;参数设置简单;全程自动化程序操作,误差小;检测时间短,适于批量检测,可大大节省人力成本;定标和质控操作简便,可确保检测结果准确可靠;结果按样本顺序输出,适应临床诊疗需要;开放型试剂,适用于各种全自动生化分析仪。目前已可用于全自动检测法的精液生化指标包括精浆总α-葡糖苷酶和中性α-葡糖苷酶,精浆果糖、酸性磷酸酶、γ谷氨酰转肽酶、锌、柠檬酸、尿酸、超氧化物歧化酶、肉碱,精子顶体酶和乳酸脱氢酶C4,以及精液游离弹性蛋白酶。这些指标可用于评估附睾、精囊和前列腺的分泌功能,精子顶体和能量代谢功能,精浆的抗氧化功能以及男性生殖道有无感染或隐性感染等。
朱培冉[7]（2017）在《黄体生成素与抗氧化物通路基因多态性与男性不育相关性研究》文中研究指明目的:不孕不育已成为一个全球性的问题,正受到越来越多的关注。在引起不孕不育的因素中,男女双方各占50%。男性不育是一个复杂、多因素疾病,其中遗传因素是重要病因之一。下丘脑-垂体-性腺轴中的黄体生成素以及抗氧化物通路中的酶[超氧化物歧化酶2（SOD2）、对氧磷酯酶1（PON1）、醌氧化物还原酶1（NQO1）]对精子的生成都起着不可替代的作用。黄体生成素与抗氧化物酶基因的多态性会影响黄体生成素以及抗氧化物酶的活性,影响其功能的正常发挥,进而造成生精障碍。虽然国内外对黄体生成素基因多态性以及抗氧化物通路中酶基因多态性与男性不育之间的相关性进行了研究,但是由于样本量大小及种群选取范围不同,导致研究结果也各不相同。为了更加清楚的认识黄体生成素基因多态性以及抗氧化物通路基因多态性与男性不育之间的关系。本研究分析了LHB（rs34349826和rs6521）,SOD2 rs4880,PON1 rs662以及NQO1 rs1800566与男性不育发病风险的相关性。方法:利用病例-对照组的方法共收集829例样本,包括405例不育男性（非梗阻性无精子症145例、严重少精子症173例以及轻度少精子症87例）作为病例组,424例已正常生育的男性作为对照组,利用Mass ARRAY i PLEX GOLD分型检测技术对LHB rs34349826、LHB rs6521、SOD2 rs4880、PON1 rs662以及NQO1rs1800566共4个基因5个位点进行分型,并利用SPSS20.0对分型结果进行logistic回归分析。结果:通过病例组与对照组比较,在年龄、雌二醇以及睾酮这3项水平上无统计学差异,黄体生成素、卵泡刺激素存在有显着的差异（P<0.05）。logistic回归分析结果显示LHB rs34349826以及LHB rs6521与男性不育之间无明显相关性,而在单倍型分析中,A-G（LHB rs34349826-rs6521）单倍型可以降低少精子症组男性不育的发病风险（P=0.004,OR=0.33,95%CI=0.15-0.72）。G-G单倍型基因对男性不育来说是一个保护因素（总病例组中:P=0.000,OR=0.52,95%CI=0.42-0.65,非梗阻性无精子症组中:P=0.001,OR=0.54,95%CI=0.40-0.75,严重少精子症组中:P=0.013,OR=0.70,95%CI=0.53-0.93,轻度少精子症组中:P=0.000,OR=0.22,95%CI=0.13-0.37）。SOD2 rs4880、PON1 rs662、NQO1 rs1800566与男性不育之间无明显相关性,并且基因-基因交互作用与男性不育之间也没有相关性。结论:LHB rs34349826、rs6521与男性不育之间不存在相关性,但单倍型分析发现,G-G单倍型可降低男性不育的发病风险,对男性不育来说是一个保护因素。SOD2 rs4880、PON1 rs662、NQO1 rs1800566与男性不育之间无明显相关性,并且基因-基因交互作用与男性不育之间也无明显相关性。
洪叶挺[8]（2016）在《男子生精功能发生过程中piRNA功能的初步研究及miR-96促进乳腺癌发生机制的研究》文中提出小分子非编码RNA（small non-coding RNA）, 主要包括 tRNA.snRNA. snoRNA.microRNA（miRNA）.siRNA和Piwi-interacting RNA（piRNA）等非编码蛋白质的RNA分子。随着对RNA研究的深入,小分子非编码RNA的研究也日益引起大家的注意和重视,现在已知道它们在基因的转录、转录后调控以及引导染色质修饰复合物中起到了重要的作用。piRNA是从哺乳动物生殖细胞中分离得到的一类长度约为26-31nt的小分子非编码RNA,并且与PIWI蛋白家族成员相结合。目前,尽管已经知道piRNA在精子形成中起着重要的作用,但在男性的精浆中的分布情况尚不完全清晰。在本研究第一节的第一部分中,我们系统地检测男性不育患者和正常对照的精浆中的piRNA差异表达谱,筛选出在不育男性患者中存在表达差异的piRNA.我们一共收集了91例正常对照和211例男性不育患者的精浆样本。选取正常对照17例、弱精症患者24例和无精症患者21例分别混合后提取RNA,然后通过高通量测序技术对RNA进行测序,初步筛选到有61个piRNA在不育患者组和正常对照组之间存在明显地表达差异,然后我们对每一个样本中piRNA进行实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术检测,先使用少量样本量（包括正常对照16例、弱精症患者20例和无精症患者20例）对初筛出61个piRNA进行复筛,复筛结果显示有4种piRNA（piR-31068,piR-31925,piR-43771和piR-43773）在弱精症患者精浆中显着降低；有5种piRNA（iR-31068,piR-31925,piR-43771,piR-43773和piR-30198）在无精组患者精浆中显着降低。然后使用大量样本（包括正常对照58例、弱精症患者74例和无精症患者52例）对复筛出的piRNA进行验证,结果和复筛结果变化趋势一致。在整个过程中我们使用对应piRN A的人工合成标准品构建标准曲线,所以计算出了piRNA的绝对浓度,同时我们使用ROC曲线分析及Riskscore分析显示该5种piRNA的确能够区分出正常对照与不育患者。在本研究第一节第二部分中,我们也通过高通量测序技术对正常对照和弱精症患者精子中的piRNA进行测序,结果显示在弱精症患者精子中piRNA的含量和种类明显减少。精子中蛋白检测发现MitoPLD在弱精症患者的表达量明显下降,这种差异极有可能影响精子中piRNA的形成。通过电镜检测发现精浆中存在大量的Exosome,并发现精浆piRNA大部分存在于Exosome中。miRNA是一类长度约为21 nt的小分子非编码RNA,大量研究表明,miRNA参与调控～30%人类基因,涉及到很多生理过程,包括器官发育、细胞分化、细胞周期和细胞凋亡等,还有1miRNA在癌症的发生和进程中扮演了一个重要的调控者,其中也包括乳腺癌。本研究第二节主要研究miR-96在乳腺癌中的表达情况及在乳腺癌发生过程中所起的生物学功能。本实验通过临床样本发现miR-96在乳腺癌样本中表达量上升,体外实验显示miR-96促进细胞的增殖、迁移和侵袭,动物实验发现miR-96促进肿瘤的生长。我们通过生物信息学预测及实验验证miR-96是通过靶向PTPN9蛋白来促进乳腺癌症的发生及发展,然后我们在乳腺癌细胞中通过下调或上调PTPN9蛋白的表达量,结果显示PTPN9的生物学功能与miR-96的生物学功能成负相关,这也说明miR-96是通过抑制PTPN9蛋白来行使生物学功能。本实验显示了miR-96在乳腺癌的发生发展中扮演了重要角色及通过靶向PTPN9蛋白来发挥生物学功能,同时也为乳腺癌的发生提供了新的分子生物学机制。
杨世坚[9]（2016）在《102例特发性弱畸形精子症患者与中医体质辨识的相关研究》文中研究说明目的：探索特发性弱畸形精子症患者中中医体质辨识的分布规律,并通过临床疗效追踪观察,分析验证其相关性。方法：研究102例来自于2015年9月至2016年4月在广东省中医院泌尿外科、男科、生殖医学科就诊,且符合纳入标准的患者,年龄区间为25-48岁。回收患者所填写之临床观察表（包括一般信息及中医体质调查量表）,记录患者精液常规结果,通过相关统计学处理,分析患者基本信息、中医体质及精液常规结果间的统计学关系,并通过追踪部分患者的临床疗效,验证分析结果。结果：1.102例特发性弱畸形精子症的患者中,共存在352个体质,单一体质类型患者为23例（占23%）,兼夹体质类型患者为79例（占77%）。各体质所占比例分别为湿热质（17%）,气虚质（16%）,气郁质（12%）,阴虚质（11%）,痰湿质（11%）,平和质（10%）,瘀血质（9%）,阳虚质（8%）,特禀质（6%）2.102例特发性弱畸形精子症的患者中,有症状患者为37例（占36%）,无症状患者为65例（占64%）。3.有症状的患者中共存在125个体质,常见体质分别为湿热质（20%）及气虚质（20%）,无症状的患者中共存在227个体质,常见体质分别为湿热质（15%）及气郁质（15%）。4.有症状患者表现为气虚质的比例高于非气虚质（45% VS 26%）,P<0.05；无症状患者表现为气郁质的比例高于非气郁质（75% VS 55%）,P<0.05；症状与湿热质、阴虚质、痰湿质之间的P均>0.05,差异无统计学意义。5.采用秩和检验或T检验后可知,气虚质与精子存活率、精子总活力之间的P均<0.05,湿热质与精子浓度之间的P<0.05,差异均存在统计学意义。而各主要体质与前向运动精子、正常形态精子比例之间的P均>0.05,差异无统计学意义。6.采用Pearson相关分析或Spearman等级相关系数检验后可知,精子存活率与精子总活力、前向运动精子间的P均<0.01,精子浓度与正常形态精子比例间的P<0.01,存在显着正相关关系,而精子浓度与精子总活力、精子存活率间的P均>0.05,精子总活力与正常形态精子比例间的P>0.05,差异均无统计学意义。7.疗效追踪部分纳入样本共50例,其中有症状患者15例,无症状患者35例。主要治法分布为：益气法14例,行气法13例、清热利湿法13例、滋阴法8例、祛痰利湿法3例,其中有疗效患者29例,无疗效患者21例。8.采用卡方检验研究主要治法与疗效后可知,祛湿清热、益气、行气治法在该类患者中的运用与治疗效果之间的差异存在统计学意义（P<0.05）,而在无症状患者中,行气治法的运用与治疗效果之间的差异存在统计学意义（P<0.05）,但在有症状患者中,益气治法的运用与治疗效果之间的差异无统计学意义（P>0.05）。结论：特发性弱畸形精子症患者中湿热质、气虚质及气郁质最为常见,而无症状患者与气郁质之间存在某种关系,故临床上对于特发性弱畸形精子症患者的诊疗,应注重祛湿清热、益气、行气治法的运用,其中对于无症状患者更应注重行气。
张红烨,陆金春,冯瑞祥[10]（2015）在《24种精浆生化指标与精液常规参数的相关性研究》文中研究表明目的:调查24种精浆生化指标与精液常规参数之间的相关性。方法:66例生育力低下男性的精液常规参数包括精液量、精子浓度、精子总数、精子活动率及前向运动精子百分率（PR）按WHO5标准进行分析,相应精浆中的24种生化指标在进行质控的基础上,使用全自动生化分析仪和电解质分析仪进行测定,同时24种精浆生化指标所测结果与各精液常规参数的相关性被分析。结果:精浆中蛋白水平包括总蛋白（TP）、白蛋白（Alb）和球蛋白（Glb）均与精子浓度呈显着正相关,且精浆白蛋白水平与精子总数亦呈显着正相关;精浆谷草转氨酶（AST）活性和乳酸脱氢酶（LDH）活性与精子浓度和精子总数均呈极显着正相关;精浆碱性磷酸酶（AKP）活性与精液量呈显着负相关,而与精子活动率呈显着正相关;精浆α羟丁酸脱氢酶（αHBDH）活性与精子浓度和精子总数呈极显着正相关,相关系数（r）达0.7以上;尿素氮（UN）与精液量呈显着负相关,而肌酐（Cr）与精液量、精子浓度和精子总数均呈显着负相关;精浆葡萄糖（Glu）水平与精子浓度和精子总数均呈显着负相关;精浆甘油三酯（TG）与精液量呈显着正相关,而与精子活动率呈显着负相关;精浆谷丙转氨酶（ALT）、γ谷氨酰转移酶（GGT）、腺苷脱氨酶（ADA）、尿酸（UA）、总胆固醇（TC）、肌酸激酶（CK）及超敏C反应蛋白（hs CRP）未见与上述精液参数相关。精浆钾、钠、氯、钙、镁、磷中只有精浆氯与精液量呈显着负相关,余均无显着相关性。结论:精浆中许多生化指标与精液常规参数均密切相关,提示这些生化组分可能在精子发生、成熟和生理代谢过程中起作用。
二、精浆肌酸激酶活性与男性不育的关系分析（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、精浆肌酸激酶活性与男性不育的关系分析（论文提纲范文）
（1）金龟毓麟方治疗特发性弱精子症（肾虚肝郁型）临床观察及机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 男性不育症中医药诊疗研究进展 |
| 1. 男性不育症中医病名认识 |
| 2. 男性不育症病因病机 |
| 3. 补肾法为主的男性不育症中医药治疗 |
| 4. 补肾法为主治疗男性不育症的相关机制 |
| 参考文献 |
| 综述二 特发性弱精子症现代医学诊治研究进展 |
| 1. 特发性弱精子症流行病学 |
| 2. 特发性弱精子症诊断 |
| 3. 特发性弱精子症可能病因及机制 |
| 3.1 氧化应激损伤 |
| 3.2 线粒体功能障碍 |
| 3.3 表观遗传学作用 |
| 3.4 基因异常 |
| 3.5 精子蛋白组差异 |
| 3.6 翻译后修饰 |
| 3.7 环境因素 |
| 3.8 不良生活方式 |
| 3.9 精神心理因素 |
| 4. 特发性弱精子症的治疗 |
| 4.1 一般治疗 |
| 4.2 药物治疗 |
| 4.3 辅助生殖技术 |
| 参考文献 |
| 第二部分 临床研究 金龟毓麟方治疗特发性弱精子症(肾虚肝郁型)的有效性及安全性临床研究 |
| 前言 |
| 1. 研究伦理 |
| 2. 研究对象 |
| 2.1 病例来源 |
| 2.2 诊断标准 |
| 2.3 纳入标准 |
| 2.4 排除标准 |
| 2.5 中止/退出标准 |
| 2.6 中止/退出病例的处理 |
| 3. 研究方法 |
| 3.1 分组及样本量计算 |
| 3.2 研究用药及疗程 |
| 3.3 观察指标及观察时点 |
| 3.4 精液采集及精液分析 |
| 4. 统计学分析 |
| 5. 研究结果 |
| 5.1 试验入组及完成情况 |
| 5.2 一般资料分析 |
| 5.3 有效性分析 |
| 5.4 安全性分析 |
| 6. 讨论 |
| 7. 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 实验研究 |
| 实验一 金龟毓麟方对奥硝唑诱导弱精子症模型的药效学研究 |
| 前言 |
| 1. 材料与方法 |
| 1.1 动物伦理 |
| 1.2 实验动物 |
| 1.3 主要实验仪器 |
| 1.4 主要实验试剂与药品 |
| 1.5 实验方法 |
| 1.6 实验检测指标 |
| 1.7 统计学分析 |
| 2. 结果 |
| 2.1 大鼠一般情况变化 |
| 2.2 大鼠体重、睾丸、附睾重量变化 |
| 2.3 大鼠睾丸、附睾脏器指数变化 |
| 2.4 大鼠精子浓度变化 |
| 2.5 大鼠精子活力变化 |
| 2.6 大鼠性激素水平变化 |
| 2.7 大鼠睾丸、附睾HE染色变化 |
| 2.8 大鼠肝肾功指标变化 |
| 3. 讨论 |
| 3.1 ORN诱导的弱精子症大鼠模型的构建 |
| 3.2 金龟毓麟方对改善大鼠弱精子症的有效性分析 |
| 3.3 金龟毓麟方对改善大鼠弱精子症的安全性分析 |
| 4. 小结 |
| 实验二 基于Pink1/Parkin信号通路研究金龟毓麟方调控线粒体自噬改善ORN诱导的弱精子症大鼠的作用机制 |
| 前言 |
| 1. 材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要实验仪器 |
| 1.3 主要实验试剂 |
| 1.4 实验方法 |
| 1.5 实验检测指标 |
| 1.6 统计学分析 |
| 2. 结果 |
| 2.1 大鼠精子GSH-Px、SOD及MDA及变化 |
| 2.2 大鼠精子MMP及早期凋亡率变化 |
| 2.3 大鼠精子线粒体ATP变化 |
| 2.4 大鼠Pink1、Parkin、p62和LC3Ⅱ/Ⅰ、TOM20、Beclin 1mRNA及蛋白表达变化 |
| 3. 讨论 |
| 4. 小结 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 不足与展望 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 附件 |
| 附件1 |
| 附件2 |
| 中医药科技查新报告书 |
（2）精液中生殖相关酶的研究进展（论文提纲范文）
| 1 抗氧化酶 |
| 2 功能性酶 |
| 2.1 顶体功能酶 |
| 2.2 其他功能性酶 |
| 3 代谢性酶 |
（3）灵归方对奥硝唑诱导的弱精子症模型大鼠附睾功能影响的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 综述一 中医诊治男性不育症研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 西医诊治男性不育症研究进展 |
| 参考文献 |
| 实验研究 |
| 前言 |
| 第一部分 ORN诱导弱精子症模型大鼠的研究 |
| 1. 材料与方法 |
| 2. 数据分析 |
| 3. 实验结果 |
| 3.1 大鼠一般状态 |
| 3.2 大鼠体重,睾丸、附睾重量 |
| 3.3 大鼠睾丸、附睾脏器系数 |
| 3.4 精子浓度及活动率 |
| 4. 小结 |
| 第二部分 灵归方对ORN诱导的弱精子症模型大鼠附睾功能影响的实验研究 |
| 实验一 灵归方对ORN诱导弱精子症大鼠附睾LC相关通路的影响 |
| 1. 材料与方法 |
| 2. 数据分析 |
| 3. 实验结果 |
| 3.1 精子浓度及活动率 |
| 3.2 附睾LC含量 |
| 3.3 灵归方对附睾OCTN2蛋白表达的影响 |
| 3.4 灵归方对附睾OCTN2 mRNA表达的影响 |
| 实验二 灵归方对弱精子症大鼠血清性激素及附睾氧化应激反应的影响 |
| 1. 材料与方法 |
| 2. 数据分析 |
| 3. 实验结果 |
| 3.1 灵归方对血清性激素水平的影响 |
| 3.2 灵归方对附睾组织GSH-Px、SOD活性,MDA含量的影响 |
| 3.3 灵归方对睾丸、附睾组织结构的影响 |
| 讨论 |
| 1. 选择LC相关通路作为研究的依据 |
| 2. 选择ORN作为造模药物的依据 |
| 3. 灵归方组方分析 |
| 4. 灵归方改善弱精子症大鼠作用机制 |
| 4.1 灵归方增加弱精子症大鼠附睾LC含量 |
| 4.2 灵归方上调OCTN2蛋白及mRNA在附睾中的表达 |
| 4.3 灵归方抗氧化作用 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 不足与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
| 附录 |
（4）精浆维生素D与男性生殖功能指标的临床及基础研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词表 |
| 第一章 绪论 |
| 1. 维生素D的来源及代谢途径 |
| 2. 维生素D缺乏的流行病学研究 |
| 3. 血清维生素D与男性生殖功能的临床研究 |
| 3.1 血清维生素D与精液质量 |
| 3.2 血清维生素D与性激素 |
| 4. 维生素D与男性生殖功能的基础研究 |
| 4.1 维生素D受体及代谢酶 |
| 4.2 维生素D信号通路 |
| 5. 展望 |
| 参考文献 |
| 第二章 精浆维生素D与男性生殖功能指标的临床相关性分析 |
| 1. 引言 |
| 2. 材料与方法 |
| 2.1 主要试验材料、仪器和试剂 |
| 2.2 研究人群 |
| 2.3 纳入排除标准 |
| 2.4 血液样本采集 |
| 2.5 维生素D的检测 |
| 2.6 AMH的检测 |
| 2.7 INHB的检测 |
| 2.8 精液样本采集 |
| 2.9 精液液化 |
| 2.10 精液体积评估 |
| 2.11 精子常规分析 |
| 2.12 精子形态学分析 |
| 2.13 精浆生化分析 |
| 2.14 统计学分析 |
| 3. 结果 |
| 3.1 研究人群基本临床特征 |
| 3.2 血清和精浆维生素D均呈现夏季最高,冬季最低的变化趋势 |
| 3.3 血清及精浆维生素D水平均与精液量正相关 |
| 3.4 血清维生素D水平与精浆果糖及锌水平正相关 |
| 3.5 血清及精浆维生素D水平与AMH,NHB水平不相关 |
| 3.6 精浆维生素D水平与精子运动参数正相关 |
| 4. 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三章 1,25(OH)_2D在体外对精子运动功能的影响及机制研究 |
| 1. 引言 |
| 2. 材料与方法 |
| 2.1 主要生化材料和试剂盒 |
| 2.2 体外实验处理精子 |
| 2.3 精子运动参数的测定 |
| 2.4 精子爬高实验 |
| 2.5 精子ATP浓度检测 |
| 2.6 精子cAMP浓度测定 |
| 2.7 精子PKA活性的测定 |
| 2.8 细胞内钙离子测定 |
| 2.9 精子NADH浓度检测 |
| 2.10 统计学分析 |
| 3. 结果 |
| 3.1 用1,25(OH)_2D孵育精子30分钟时,精子的运动学参数改善最佳 |
| 3.2 用0.1nM 1,25(OH)_2D孵育精子时,精子的运动学参数改善最佳 |
| 3.3 1,25(OH)_2D能够促进精子的爬高高度及ATP含量的增加 |
| 3.4 1,25(OH)_2D在精子细胞中能够作用于cAMP/PKA通路 |
| 3.5 1,25(OH)_2D能够通过cAMP/PKA通路促进精子ATP的产生 |
| 3.6 1,25(OH)_2D可以促进精子胞内内源性钙离子的释放 |
| 3.7 1,25(OH)_2D通过促进内源性钙离子的释放,继而促进NADH及ATP的产生 |
| 3.8 1,25(OH)_2D促进NADH及ATP的产生受线粒体外钙离子浓度低影响 |
| 4. 讨论 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 主要科研成果 |
| 致谢 |
（5）液化2号方对精液不液化（阴虚火旺型）及精子DNA碎片率影响的临床研究（论文提纲范文）
| 英文索引 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一部分 理论研究 |
| 前言 |
| 1.精液不液化症国内外现代医学研究进展 |
| 2.精子DFI水平研究的认识 |
| 3.精液不液化的中医学研究 |
| 第二部分 临床研究 |
| 1 病例选择 |
| 2 结果 |
| 3.讨论 |
| 4.结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 附表 |
| 个人简介 |
| 致谢 |
（6）精液生化指标的全自动检测及临床应用（论文提纲范文）
| 1 精液的组成及作用 |
| 2 精液生化指标检测的发展历程 |
| 3 精液生化指标的全自动检测 |
| 4 精液生化指标的临床应用 |
| 5 展望 |
（7）黄体生成素与抗氧化物通路基因多态性与男性不育相关性研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 绪论 |
| 第一章 黄体生成素基因多态性与汉族男性不育相关性研究 |
| 1.1 前言 |
| 1.2 实验对象与方法 |
| 1.2.1 选择样本 |
| 1.2.2 研究对象的资料收集 |
| 1.2.3 主要实验仪器和试剂 |
| 1.2.4 实验方法 |
| 1.3 实验结果 |
| 1.3.1 临床基本资料结果 |
| 1.3.2 基因组DNA样本检测 |
| 1.3.3 基因位点分型结果 |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 结论 |
| 第二章 抗氧化物通路基因多态性与汉族男性不育相关性研究 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 实验对象与方法 |
| 2.2.1 样本选择 |
| 2.2.2 收集资料 |
| 2.2.3 实验仪器与试剂 |
| 2.2.4 实验方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 参与者的基本资料结果 |
| 2.3.2 基因组DNA样本检测 |
| 2.3.3 MassARRAY iPLEX GOLD结果分析 |
| 2.3.4 抗氧化物通路基因多态性位点分布与男性不育的相关性分析 |
| 2.3.5 抗氧化物通路中基因-基因交互作用与男性不育的相关性分析 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 结论 |
| 全文总结与展望 |
| 参考文献 |
| 在学期间发表的学术论文 |
| 致谢 |
（8）男子生精功能发生过程中piRNA功能的初步研究及miR-96促进乳腺癌发生机制的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 研究背景综述 |
| 第一节 小分子非编码RNA的研究进展 |
| 一、piRNA的研究进展 |
| 1. piRNA的发现 |
| 2. piRNA的分类 |
| 3. piRNA的结构特点 |
| 4. piRNA的生物合成 |
| 5. piRNA的生物功能 |
| 5.1 保护基因组的稳定性 |
| 5.2 piRNA调控mRNA的表达 |
| 6. piRNA与男性不孕不育 |
| 二、microRNA的研究进展 |
| 1. microRNA的发现 |
| 2. microRNA结构特点 |
| 3. microRNA生物合成 |
| 4. microRNA作用机制 |
| 4.1 miRNA介导mRNA特异性切割 |
| 4.2 miRNA抑制mRNA转录后翻译 |
| 5. microRNA与癌症 |
| 6. microRNA与乳腺癌 |
| 三、研究小分子非编码RNA的意义及前景展望 |
| 1. 小分子非编码RNA的生物学意义 |
| 2. 小分子非编码RNA的前景与展望 |
| 参考文献 |
| 第二章 实验研究部分 |
| 第一节 男子生精功能发生过程中piRNA功能的初步研究 |
| 第一部分 piRNA在男性不育精浆中的差异表达 |
| 一、引言 |
| 二、实验材料和方法 |
| 1. 研究对象和样品收集 |
| 1.1 样本收集 |
| 1.2 样本处理 |
| 2. 主要仪器设备和试剂 |
| 2.1 实验仪器设备 |
| 2.2 实验所用试剂 |
| 3. 实验方法 |
| 3.1 RNA提取 |
| 3.2 反应体系的配制 |
| 4. Solexa测序 |
| 5. qRT-PCR检测piRNA的表达 |
| 5.1 piRNA表达量的检测 |
| 5.2 精浆中piRNA的稳定性检测 |
| 5.3 精浆中piRNA可检测性 |
| 5.4 piRNA引物探针扩增的特异性 |
| 6. Northern blotting方法检测精浆中piRNA |
| 7. 数据分析 |
| 三、实验结果 |
| 1. 三组混合精浆测序结果 |
| 1.1 三组混合精浆中小分子RNA |
| 1.2 精浆中小RNA的长度分布 |
| 1.3 三组精浆中piRNA的分布 |
| 1.4 不育患者精浆piRNA表达谱与正常对照的差异 |
| 2. 验证qRT-PCR方法的可靠性与可行性 |
| 2.1 扩增检测piRNA的探针及引物的水背景 |
| 2.2 精浆中piRNA可检测性 |
| 2.3 qRT-PCR扩增的特异性 |
| 2.4 精浆中piRNA的稳定性 |
| 3. Northern blotting法检测精浆中piRNA |
| 4. qRT-PCR法检测精浆中piRNA含量 |
| 4.1 piRNA标准曲线 |
| 4.2 qRT-PCR对Solexa初筛的piRNA进行复筛 |
| 4.3 qRT-PCR对复筛的结果的验证 |
| 4.4 5种piRNA在不育患者与正常对照精浆中的表达量 |
| 5. 不育男性患者特异降低的精浆piRNA的ROC曲线分析 |
| 6. Risk score分析 |
| 四、结论 |
| 五、讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 piRNA在男性不育精子中的差异表达及机制的初步研究 |
| 一、引言 |
| 二、实验材料和方法 |
| 1. 样本收集及处理 |
| 1.1 样本收集 |
| 1.2 样本处理 |
| 2. 主要仪器设备和试剂 |
| 2.1 实验仪器设备 |
| 2.2 实验所用试剂 |
| 3. 实验方法 |
| 3.1 精子的分离及RNA的提取 |
| 3.2 精子中蛋白的提取 |
| 3.3 Western blot检测精子中的蛋白表达 |
| 3.4 精浆中外泌体的提取 |
| 3.5 精浆外泌体鉴定 |
| 3.6 外泌体中RNA的提取、逆转和qRT-PCR |
| 4. 数据分析 |
| 三、实验结果 |
| 1. 精子中Solexa结果 |
| 1.1 精子中piRNA种类及含量 |
| 1.2 精子中piRNA表达谱 |
| 1.3 精浆中表达差异显着的piRNA在精子中的变化 |
| 1.4 qRT-PCR对Solexa初筛的4个piRNA进行验证 |
| 2. MitoPLD蛋白在弱精症精子中表达量下降 |
| 3. 精浆中外泌体的分布 |
| 4. 精浆中piRNA的存在形式 |
| 5. 精浆Exosome中piRNA的差异表达 |
| 四、结论 |
| 五、讨论 |
| 参考文献 |
| 第二节 miR-96在乳腺癌中通过靶向PTPN9蛋白促进癌细胞的增殖、迁移和侵袭 |
| 一、引言 |
| 二、实验材料与方法 |
| 1. 实验样本与材料 |
| 2. 实验方法 |
| 2.1 细胞培养 |
| 2.2 miRNA的过表达和干扰 |
| 2.3 构建含PTPN9 3'-UTR的荧光素酶报告质粒 |
| 2.4 除内毒素质粒的抽提(用于转染细胞) |
| 2.5 荧光素酶实验 |
| 2.6 miRNA及mRNA的qRT-PCR定量检测 |
| 2.7 PTPN9蛋白的过表达和下调表达 |
| 2.8 Western blot检测蛋白表达水平 |
| 2.9 EdU实验-荧光显微镜检测方法 |
| 2.10 细胞周期实验 |
| 2.11 细胞迁移实验 |
| 2.12 细胞侵袭实验 |
| 2.13 数值的统计分析 |
| 三、实验结果 |
| 1. miR-96在人乳腺癌样本中表达成上升趋势 |
| 2. 动物实验显示miR-96促进肿瘤生成 |
| 3. 体外细胞实验显示miR-96促进细胞增殖与侵袭 |
| 3.1 miR-96促进细胞的增殖 |
| 3.2 miR-96促进细胞迁移 |
| 3.3 miR-96促进细胞的侵袭 |
| 3.4 miR-96促进细胞周期进程 |
| 4. PTPN9是miR-96潜在的靶点 |
| 5. PTPN9蛋白在乳腺癌中表达量下降 |
| 6. 细胞实验验证miR-96靶向PTPN9 |
| 7. PTPN9蛋白在乳腺癌细胞系中的生物学功能 |
| 8. 验证miR-96和PTPN9对乳腺癌细胞的生物学功能成负调控模式 |
| 四、结论 |
| 五、讨论 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间发表论文 |
| 致谢 |
（9）102例特发性弱畸形精子症患者与中医体质辨识的相关研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 引言 |
| 第一章 文献研究 |
| 第一节 特发性弱畸形精子症的现代诊疗研究进展 |
| 一、诊断 |
| 二、病因 |
| 三、治疗 |
| 第二节 特发性弱畸形精子症的中医诊疗研究进展 |
| 一、病名 |
| 二、病因病机 |
| 三、治疗 |
| 四、中医体质辨识在不育症方面的研究 |
| 第三节 展望 |
| 第二章 临床研究 |
| 第一节 研究设计 |
| 一、研究目的 |
| 二、研究内容 |
| 三、研究对象 |
| (一) 病例来源 |
| (二) 病例选择 |
| (三) 相关判定标准 |
| 四、研究方法 |
| (一) 调查工具 |
| (二) 调查内容 |
| (三) 统计学方法 |
| 五、技术路线 |
| 第二节 研究结果 |
| 一、样本分布情况 |
| 二、有无症状与主要中医体质类型的关系 |
| 三、体质与主要理化指标关系 |
| 四、相关理化指标间关系 |
| 五、疗效追踪 |
| 第三节 讨论与分析 |
| 第四节 结论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在校期间发表论文情况 |
| 致谢 |
| 统计学审核证明 |
（10）24种精浆生化指标与精液常规参数的相关性研究（论文提纲范文）
| 1 资料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
四、精浆肌酸激酶活性与男性不育的关系分析（论文参考文献）
- [1]金龟毓麟方治疗特发性弱精子症（肾虚肝郁型）临床观察及机制研究[D]. 张继伟. 中国中医科学院, 2021(02)
- [2]精液中生殖相关酶的研究进展[J]. 宫雅雯,崔彤,李圆龙,王树松. 中国计划生育学杂志, 2020(12)
- [3]灵归方对奥硝唑诱导的弱精子症模型大鼠附睾功能影响的实验研究[D]. 晏斌. 中国中医科学院, 2020(01)
- [4]精浆维生素D与男性生殖功能指标的临床及基础研究[D]. 卡迪丽娅·居尔艾特提拜克. 南京大学, 2019(01)
- [5]液化2号方对精液不液化（阴虚火旺型）及精子DNA碎片率影响的临床研究[D]. 杨金坤. 安徽中医药大学, 2019(02)
- [6]精液生化指标的全自动检测及临床应用[J]. 陆金春. 中华男科学杂志, 2018(04)
- [7]黄体生成素与抗氧化物通路基因多态性与男性不育相关性研究[D]. 朱培冉. 江苏大学, 2017(01)
- [8]男子生精功能发生过程中piRNA功能的初步研究及miR-96促进乳腺癌发生机制的研究[D]. 洪叶挺. 南京大学, 2016(03)
- [9]102例特发性弱畸形精子症患者与中医体质辨识的相关研究[D]. 杨世坚. 广州中医药大学, 2016(02)
- [10]24种精浆生化指标与精液常规参数的相关性研究[J]. 张红烨,陆金春,冯瑞祥. 中华男科学杂志, 2015(12)