一、鸡瘦蛋白基因克隆中的若干问题研究（论文文献综述）
王丹丹,李艳敏,蒋瑞瑞,康相涛,刘小军[1]（2015）在《鸟类Leptin及其受体的研究进展》文中研究说明自1998年首次报道从鸡的肝组织中克隆获得"鸡Leptin基因"以来,鸡Leptin基因序列的正确性以及Leptin在家禽中的存在性就一直备受争议。虽然家禽Leptin受体的存在被广泛证实,但对其功能的研究也由于内源性Leptin的缺乏而受到限制。随着后基因组学研究时代的到来,使得在更大范围、更深层次上探寻鸟类Leptin基因的存在与否成为可能。2014年,3个独立的实验室先后报道了部分野生鸟类Leptin基因的克隆和功能验证,将鸟类Leptin及其受体的研究又推向了新的高潮。本文综述了鸟类Leptin及其受体基因的结构特征、起源进化、组织分布及"生理功能"的最新研究进展。
苏兰利,赵茹茜[2]（2013）在《禽类“Leptin”及其对尿囊膜血管生成的影响》文中研究表明哺乳动物leptin的基因序列已被确认并成功克隆。尽管禽类"leptin cDNA"序列还未得到一致承认,但鸡leptin受体基因确实存在并已成功克隆,从另一方面证明了在禽类体内确实存在着与哺乳动物leptin结构和功能相似的分子。本文综述了禽类"leptin"发现及存在的争议,leptin受体结构以及哺乳动物leptin对禽类尿囊膜血管生成的影响。
班谦[3]（2013）在《鸡Leptin受体基因调控途径及功能研究》文中认为Leptin基因序列于1994年首次在小鼠和人类上被报道以来，其在哺乳动物生理功能的研究已经取得了显着的进展，具有调节能量和脂肪代谢，影响采食量，调节繁殖性状，影响免疫等多种生物学功能，尤其是其作为调节能量、脂肪、采食的启动基因之一，具有极高的应用价值。而家禽Leptin基因的研究相对进展缓慢，最大的制约因素是禽源Leptin是否存在未有定论。有多个报道声称其成功克隆到Leptin基因序列；但同时也有多个实验室在相同条件下不能重复前者的实验。质疑者的主要依据是克隆到的Leptin序列同哺乳类相似度极高，甚至超过了哺乳动物之间Leptin基因序列的相似度；而且自鸡的基因组测序工作完成以来，也一直无法在基因组中检索到已报道的Leptin基因序列。而鸡Leptin受体基因（cLEPR）序列和基因表达是肯定存在的。目前已经发现了其两种异构体存在，LEPR在哺乳动物上，作为Leptin基因的受体基因，对Leptin功能的发挥起到至关重要的作用，参与了多个代谢通路的调控。如果在鸡的基因组中不存在Leptin基因，一切有关鸡Leptin功能的研究除证明鸡Leptin受体的存在外，没有任何生理上的重要意义。因此cLEPR是否是孤儿受体？如果不是孤儿受体，其生理功能是什么？就成了当前研究亟待回答的问题。本研究将从已经肯定的鸡cLEPR入手，探讨其生理功能，分析其调控路径，试图从另一个侧面对Leptin基因的争议提供受体方面的证据，为进一步将cLEPR基因应用于家禽生产和分子育种打下基础。本研究采用了RNAi、荧光定量PCR、转基因等技术对家鸡Leptin受体（cLEPR）基因及其调控通路进行了深入分析，在分子、细胞和个体水平上对cLEPR的调控途径和生理功能进行了研究，获得结果如下：1.重复鸡Leptin序列扩增，不能获得目的片段：选择42日龄艾维茵肉鸡为研究对象，采集了肌肉、脂肪、脑、肝脏、血液样本，参考相关克隆到鸡Leptin基因的文献所报道引物，并自行设计一对引物对Leptin基因在转录和基因组水平上进行了扩增，均不能扩增到鸡Leptin序列。2.对42日龄艾维茵肉鸡LEPR基因表达量进行了荧光定量PCR检测：LEPR基因在肌肉、脂肪、脑、肝脏四类组织中均有表达，其中肝脏组织表达量最高，脑组织、脂肪组织次之，最后是肌肉组织，表达量个体差异较小，相对表达稳定，但基因整体表达丰度均不高。3.在细胞上证实了cLEPR抑制能激活STAT3/SOCS3通路：构建了艾维茵肉鸡前脂肪细胞体外培养体系，设计了4个shLEPR干扰片段对LEPR基因进行了干扰，分析LEPR、JAK2、STAT3、SOCS3、AdipoR2、CPT-1、STK11基因表达变化，结果显示，合成的4个shLEPR干扰片段干扰效果均较好，其中以shLEPR-1片段最佳，干扰效率超过99%。干扰后，发现JAK/STAT代谢通路中STAT3/SOCS3信号转导途径因LEPR表达下调而被激活，STAT3、SOCS3基因表达均明显提升；研究所涉及的其余基因及通路变化则不明显，且由于CPT-1等基因的稳定性表达，各组间细胞增殖速度也未见差异。4.在个体上发现CPT-1、AdipoR2、NPY的调控存在非Leptin依赖途径：采用禁食方式处理实验用艾维茵肉鸡20只，分别于17、23、28、33日龄采集各5只样本，设立对照组，分析相关基因表达量，结果显示：禁食时间设置为3天效果良好，禁食组体重出现下降。LEPR、CPT-1、STAT3、AdipoR2、NPY基因在17-33天饲养期间均未出现随时间变化而出现显着的差异表达变化，CPT-1、AdipoR2、NPY基因表达量持续平稳，STAT3、LEPR基因忽高忽低，无趋势可循。同时，STAT3、LEPR在组内均出现较大的个体差异，而禁食组和正常饲喂组组间比较说明，CPT-1、AdipoR2、NPY基因禁食组表达量均全面高于正常饲喂组，但其中AdipoR2、NPY部分时间点差异不显着。5.初步证实cLEPR具有生物学功能，但同哺乳动物调控通路上存在不一致：首次构建了shLEPR转基因鸡体系，获得转基因阳性个体3只，经冰冻切片、基因组DNA和Western-blot检测后，初步判定3只均为嵌合体，分别命名为shLEPR-chicken1、shLEPR-chicken2和shLEPR-chicken3。表型检测表明shLEPR转基因个体体重和腹脂重明显高于非转基因个体。基因通路的分析结果显示，LEPR基因在转基因个体中低于对照组，NPY、CPT-1、STAT3、SOCS3等基因或差异不显着，或个体差异过大，表现不出可循的规律性。综合分析以上结果提示：cLEPR应当具备一定的生物学功能，能够在细胞上激活STAT3/SOCS3通路，在shLEPR转基因个体上能对体重等表型性状产生显着影响，但是其调控通路和哺乳动物不一致，表现在禁食后NPY、CPT-1、AdipoR2基因表达量出现一致性变化，而cLEPR与之不存在关联，同时转基因个体中NPY、CPT-1基因表达量则无差异。推论至少cLEPR在调控摄食、能量代谢、脂肪沉积等方面，其调控通路可能通过NPY、CPT-1、AdipoR2等基因的非依赖途径完成。即cLEPR具备生物学功能，但其调控途径和哺乳动物不完全一致。
苏兰利[4]（2012）在《leptin对鸡胚尿囊膜血管生成的影响及其机理》文中提出哺乳动物的胎盘是连接胎儿和母体的重要器官,胎盘上含有丰富的血管,确保胎儿生长发育所需的氧和营养物质的供应。以往的研究表明,哺乳动物leptin能够促进血管生成,但也有关于leptin抑制血管生成报道。Leptin对血管生成效应的不一致性是否与剂量有关目前还不清楚。母体血清中leptin水平影响胎儿发育,可能与胎盘血管生成有关。鸡胚尿囊膜是禽类胚胎进行物质交换的场所,其功能类似于哺乳动物的胎盘。将含有leptin的载体放在发育的鸡胚尿囊膜上,血管生成增加。我们的前期研究发现,蛋清和蛋黄内都含有leptin样免疫活性物质,蛋清内注射leptin显着降低鸡胚尿囊膜血管面积和出雏重,并有性别依赖性和品种差异。蛋黄内注射leptin是否影响鸡胚尿囊膜血管生成和胚胎发育还不清楚。目前也没有关于蛋内注射leptin影响鸡胚尿囊膜血管生成机理的相关报道。本试验以生长速度慢的温氏N414土鸡为模型,研究不同剂量leptin对尿囊膜血管生成的影响；通过蛋清和蛋黄内注射重组鼠leptin,研究leptin对尿囊膜血管生成和鸡胚发育的影响,并进一步从体内和体外研究leptin影响尿囊膜血管生成的机理。1leptin对鸡胚尿囊膜血管生成的影响选200枚温氏N414土鸡种蛋进行孵化,7胚龄时开窗,8胚龄时在尿囊膜上放置含有0ng、10ng、100ng、1000ng、5000ng leptin的明胶海绵,48小时后固定尿囊膜,计算血管的数量,研究不同剂量leptin对血管生成的影响。结果显示,10ng、00ng.1000ng、5000ng leptin对尿囊膜大血管和中血管的数量没有影响（P>0.05）.10ng leptin显着减少鸡胚尿囊膜小血管的数量（P<0.05）,100ng leptin对小血管的数量没有影响（P>0.05）,1000ng和5000ng leptin显着增加小血管的数量（P<0.05）。Leptin对小血管数量影响的剂量效应仅表现在雌性,对雄性没有影响。选取温氏N414土鸡种蛋500枚,随机分为五组,蛋清注射组于入孵前在蛋清内注射0μg或0.5μg重组鼠leptin。蛋黄注射组于入孵前在蛋黄内注射0μg、0.5μg或1μg重组鼠leptin。孵化到12胚龄时,在蛋壳上开窗,用甲醇和丙酮混合液固定尿囊膜血管,进行观察、拍照,分析血管的面积和数量,同时称胚重、测量胚长,辨别性别。出雏当天（0日龄）称重。结果显示,蛋清内注射0.5μg leptin显着降低鸡胚尿囊膜血管总面积和小血管的数量（P<0.05）,这种抑制效应和胚重及出雏重的降低是一致的（P<0.05）；蛋黄内注射0.5μg leptin对鸡胚尿囊膜血管面积和血管数量没有影响（P>0.05）,对胚重和出雏重也没影响（P>0.05）；蛋黄内注射1μg leptin显着降低尿囊膜血管总面积和小血管数量（P<0.05）,对胚重和出雏重没有影响（P>0.05）。Leptin对尿囊膜血管生成和胚胎发育的抑制效应仅表现在雌性,对雄性没有影响。以上结果提示,Leptin对鸡胚尿囊膜血管生成的影响与剂量有关,低剂量leptin抑制血管生成,高剂量leptin促进血管生成。蛋清内注射0.5μg leptin显着抑制尿囊膜血管生成和胚胎发育,蛋黄内注射0.5μg leptin对尿囊膜血管生成和鸡胚发育没有影响,蛋黄内注射1μg leptin显着抑制尿囊膜血管的生成,对胚胎发育没有影响。2蛋清和蛋黄内注射leptin影响鸡胚尿囊膜血管生成的机理为了探讨蛋清内注射0.5μg leptin和蛋黄内注射1μg leptin对鸡胚发育造成的不同影响,本试验研究了leptin影响尿囊膜血管生成的分子机理。在前一章的基础上,采集12胚龄鸡胚尿囊膜用于]mRNA表达和蛋白含量检测,采集尿囊液用于一氧化氮（nitric oxide, NO）含量测定。结果显示,蛋清内注射0.5μg leptin显着降低鸡胚尿囊膜血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF） mRNA的表达和蛋白含量（P<0.05）,显着下调上皮型和诱导型一氧化氮合成酶（endothelial and inducible nitric oxide synthase, eNOS和iNOS） mRNA表达和活性,抑制TNOS活性,从而减少了下游因子尿囊液中NO的含量（P<0.05）。leptin抑制尿囊膜VEGF表达和NO合成仅表现在雌性。尽管蛋清内注射0.5μg leptin对雄性鸡胚尿囊膜VEGF mRNA的表达有降低趋势（P=0.08）,但对eNOS和iNOS mRNA表达和活性以及尿囊液中NO的含量没有影响（P>0.05）。蛋清内注射0.5μg leptin对鸡胚尿囊膜碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor2, FGF-2） mRNA表达和蛋白含量（P>0.05）均无显着影响。蛋黄内注射1μg leptin不影响鸡胚尿囊膜VEGF mRNA表达和蛋白含量（P>0.05）,也不影响eNOS和iNOS mRNA表达和活性以及尿囊液中NO含量（P>0.05）。蛋黄内注射1μg leptin显着降低雌性鸡胚尿囊膜FGF-2mRNA表达和蛋白含量（P<0.05）,对雄性胚没有影响。在哺乳动物,leptin与受体（leptin receptor, LepR）结合后,通过增强下游因子信号转导和转录激活因子-3（signal transducer and activator of transcription3, STAT3）与VEGF启动子的结合,上调VEGF mRNA的表达。尽管蛋清内注射0.5μg leptin对鸡胚尿囊膜LepR mRNA表述和蛋白含量没有影响（P>0.05）,但显着降低了雌性鸡胚尿囊膜STAT3mRNA表达（P<0.05）,对STAT3蛋白含量有降低趋势（P=0.06）。染色质免疫共沉淀（CHIP）分析结果显示,蛋清内注射0.5μg leptin显着降低雌性鸡胚尿囊膜STAT3与VEGF启动子的结合（P<0.05）,从而抑制VEGF基因的表达。以上结果提示：蛋清内注射0.5μg leptin是通过改变STAT3介导的VEGF-NO信号通路来影响尿囊膜血管的生成。蛋黄内注射1μg leptin是通过影响尿囊膜上FGF-2基因表达和蛋白合成来影响尿囊膜血管生成的。3Leptin处理对尿囊膜细胞STAT3介导的VEGF-NO通路的影响本试验培养12胚龄鸡胚尿囊膜细胞,用不同剂量leptin处理细胞,研究leptin对尿囊膜细胞STAT3介导的VEGF-NO信号通路的影响。结果显示,leptin处理24h和48h后,尿囊膜细胞的相对活力显着下降（P<0.05）.1ng/mL leptin显着上调尿囊膜细胞LepR mRNA表达和蛋白含量（P<0.05）,10ng/mL leptin对LepR mRNA表达和蛋白含量有上调趋势（P=0.058和P=0.063）。1ng/mL和10ng/mL leptin上调尿囊膜细胞STAT3mRNA表达和蛋白合成,促进VEGF mRNA表达和蛋白分泌,同时增加TNOS活性（P=0.07和P=0.06）,促进下游因子NO合成（P<0.05）。NO的合成是通过增加eNOS mRNA表达和活性来实现的（P<0.05）,leptin处理对iNOS mRNA表达和活性没有影响（P>0.05）。1ng/mL和10ng/mL leptin还显着上调尿囊膜细胞另一血管生长因子FGF2mRNA表达和蛋白分泌（P<0.05）。100ng/mL leptin对尿囊膜细胞LepR和STAT3mRNA表达和蛋白含量无显着影响,不改变VEGF mRNA表达和蛋白分泌,其下游因子eNOS和iNOS mRNA表达和活性以及NO的合成也没有受到影响（P>0.05）;100ng/mL leptin对FGF-2mRNA表达和蛋白分泌没有影响。以上结果提示：1ng/mL和10ng/mL leptin激活了尿囊膜细胞STAT3介导的VEGF-NO信号通路；并增加FGF2mRNA表达和蛋白分泌。在体试验和体外试验都证明了leptin通过影响STAT3介导的VEGF-NO信号通路来影响血管生成；也可以通过改变FGF2来影响血管生成。Leptin对血管生成的效应在体外和体内结果正好相反,推测可能与尿囊膜细胞所处的生理状态和leptin剂量有关,也可能由体内其它激素引起。
徐绍华[5]（2012）在《能量水平与糖皮质激素在肉仔鸡采食调控中的作用》文中研究说明为探讨糖皮质激素和胰岛素对肉仔鸡采食调控的影响，本研究以活体入手，用外源导入胰岛素及糖皮质激素配合日粮能量水平差异的方法，观察肉仔鸡的采食行为及体脂变化，同时分析下丘脑内食欲相关基因表达情况，为分析肉仔鸡的能量食欲调控机制提供一定的理论依据。首先，本研究通过外源导入胰岛素的方法，考察胰岛素对肉仔鸡采食量的影响。分两个试验，试验一，胰岛素注射对肉仔鸡采食量的影响。选择体重相近的雄性AA肉仔鸡72只，6日龄时即分为A、B两个组，每组36只鸡、六个处理：生理盐水、1IU/kg BW胰岛素、3IU/kg BW胰岛素、5IU/kg BW胰岛素、10IU/kg BW胰岛素、20IU/kg BW胰岛素，每个处理6个重复，每个重复1只鸡，8日龄早8:00皮下注射，A组注射前一直采用自由采食的饲喂状态，B组在注射前禁饲3h，分别在0.5h、1h、2h、3h、4h测采食量，4h后采血。试验二，急性胰岛素注射对食欲基因的影响。8日龄雄性AA肉仔鸡60只，设A对照组（saline）; B处理组（10IU insulin），禁饲3h后，早8：00对照组皮下注射saline，处理组按10IU/kg注射insulin，分别在2h;4h每个处理随机取8只鸡采血、取下丘脑。试验主要结果显示，胰岛素皮下注射对自由采食及注射前禁饲3h的肉仔鸡累积采食量均无显着性影响，对注射2h、4h后肉仔鸡下丘脑内食欲调控基因以及胰岛素受体mRNA表达也无显着性影响。而后本研究通过给予不同能量水平的日粮考察了肉仔鸡的采食量等生产性能以及能量感受基因。试验一，日粮能量水平对饲喂状态下肉仔鸡摄食、脂肪沉积的影响。0日龄AA肉仔鸡200只，自开食日龄起即分为两组进行饲喂。一组饲喂高能日粮，另一组则饲喂低能日粮。每组4个重复，每个重复25只鸡，每周记录采食量、体重。35日龄早8:00每个处理取8只鸡，采血，取下丘脑、肝脏、肾脏、脂肪（腹脂垫）；所有脂肪（腹脂、颈脂、腿脂）称重。试验主要结果表明，高能日粮使肉仔鸡的生产性能提高（耗料量及料重比降低，日增重升高）、采食量降低、脂肪沉积增加，下丘脑内AGRP表达量的下降可能是引起高能日粮饲喂肉仔鸡采食量降低的主要原因。试验二，日粮能量水平对肉仔鸡糖耐量的影响。0日龄AA肉仔鸡20只，分为为2组，采用高能/低能日粮喂至35日龄，空腹12h后，每只鸡于灌服前采血、然后灌服GLU（2.5ml/Kg BW，0.8g/ml），于0.5h、1h和2h采血。试验结果表明，高能日粮能够使肉仔鸡的糖耐量降低。试验三，空腹及再饲喂状态下不同能量日粮对肉仔鸡摄食及脂肪沉积的影响。0日龄AA肉仔鸡180只，自开食日龄起即分为两组进行饲喂。一组饲喂高能日粮，另一组则饲喂低能日粮。30日龄时每组分为8个重复，每个重复5只鸡，34日龄早8:00开始，空腹24小时，35日龄早8:00每个处理取8只鸡（每个重复1只），采血，取下丘脑、肝脏、肾脏、脂肪（腹脂垫）；所有脂肪（腹脂、颈脂、腿脂）称重，剩下的鸡分四个组（1高能的再饲喂高能；2高能的再饲喂低能3低能的再饲喂低能4低能的再饲喂高能）再饲喂3小时，11:00每个处理取10只鸡，取样同试验一。结果显示，1，空腹状态，脂肪比率、血液及基因表达同自由采食状态下的结果，进一步证明了高能日粮能够造成肉仔鸡肥胖，对血液指标无影响，但高能日粮能够降低下丘脑食欲基因AGRP的表达。2.禁饲后再饲喂不同日粮的采食量结果表明，肉仔鸡具有采食记忆性，再饲喂后的血液指标表明GLU、UA、TG、VLDL、IGF-1以及TNF-a在能量的感受中发挥一定的作用，并且高能日粮能够缓解再饲喂引起的血液指标的变化，肝脏合成能力在短期能量改变的食欲感受中发挥着重要的作用，再饲喂相同及不同能量日粮的基因表达结果共同显示下丘脑内NPY、CRH、AGRP、LEPR，肝脏内INS、11HSD，肾脏内的INSR、11HSD以及脂肪内的LEPR的表达在感受能量状态变化，调节摄食中发挥作用，并且不同能量日粮饲喂的肉仔鸡其感受能量变化的基因及反馈机制可能不同。最后本研究在日粮处理的基础上结合DEX注射的方法进一步探讨了肉仔鸡的食欲调控基因及日粮能量水平对糖皮质激素导致的食欲基因改变的作用。试验一，长期糖皮质激素处理对家禽采食选择性的影响。0日龄AA肉仔鸡80只,采用高/低能日粮喂至35日龄，然后高低能各个组都给予两种日粮，并注射DEX，即分为4个组（高能DEX高低能选择组；高能SALINE高低能选择组；低能DEX高低能选择组；低能SALINE高低能选择组）每组4个重复，每个重复5只鸡，处理时间为4天，每天记录采食量，42日龄早8:00，每个组（饲喂状态和禁饲12h两种状态下）取8只鸡，静脉窦采血，3000rpm离心10min后取血浆，冷冻保存待测。试验结果表明，在肉仔鸡中糖皮质激素可能具有促进恢复采食记忆的效应，当给予两种日粮自由选择时，主要或仅采食原本日粮，并且高能日粮能够加强这种记忆效应，高能日粮的摄入能够缓解糖皮质激素造成的血液指标的变化。试验二，急性糖皮质激素处理及日粮能量水平对肉仔鸡下丘脑食欲调节基因的影响。AA肉仔鸡64只,采用高/低能日粮饲喂至35日龄，分为4个组（高能DEX；高能SALINE；低能DEX；低能SALINE），每组16只鸡，35日龄早8:00注射，同时移走料槽，晚8:00再注射，第二天早8:00每个组取8只鸡，采血、所有脂肪称重（腹脂、颈脂、腿脂），取下丘脑。剩下的鸡再注射，并且再饲喂3h（定量饲喂），然后采血，取下丘脑、（肝脏、肾脏、脂肪）样品。试验结果表明，糖皮质激素对下丘脑内糖皮质激素受体以及抑食欲基因特别是CRH的刺激可能是导致肉仔鸡总采食量降低的主要原因，高能日粮能够缓解糖皮质激素引起的基因的改变。
何君贤[6]（2010）在《梅山、大白猪FIT1基因真核表达载体的构建及其转染研究》文中认为脂肪诱导转录物基因FIT1 （Fat-inducing transcript 1）能够加快甘油三脂被打包形成脂肪滴的速度,并且能够促进脂肪滴在细胞中的蓄积。我们先前对FIT1基因所作的多态性和性状关联性分析表明FIT1基因与诸多脂肪相关性状,如肥肉率、肥瘦肉比率等具有极显着或者显着的相关性。进一步分析发现大白猪和梅山猪FIT1基因在序列上存在着明显的差异,预示着来自大白猪和梅山猪的FIT1基因在功能上可能存在较大差异。为了在细胞水平上对FIT1基因的功能进行深入研究,我们在此构建了大白猪和梅山猪FIT1基因的多个真核表达载体,同时利用这些载体进行了初步的转染试验,取得了如下结果：a.扩增获得了大白猪和梅山猪FIT1基因的基因组全序列,序列分析发现大白猪和梅山猪FIT1基因在编码最后一个蛋白结构域的区域存在多处序列差异；b.将大白猪和梅山猪的FIT1基因片段连入pcDNA3.1载体成功构建了大白猪和梅山猪FIT1基因的真核超表达载体；c.将大白猪和梅山猪的FIT1基因连入pEGFP-N1载体,成功构建了FIT1基因的绿色荧光蛋白融合表达载体；d.将连入pEGFP-N1的FIT1基因片段连同EGFP基因片段一起切下来,连入pcDNA3.1载体,成功构建了pcDNA3.1-FIT1-EGFP载体；e.将大白FIT1基因连入phc-Red-N1载体成功构建了融合了红色荧光蛋白的phc-Red-dbFIT1载体；f.比较了Attractene Reagent和Lipo2000两种转染试剂在细胞毒性、转染效率、稳定性等方面的问题,发现Attractene Reagent试剂在本实验条件下的细胞毒性要小于Lipo2000,两种转染试剂在一定的转染体系下都可以获得满意的转染效率,但是Attractene Reagent试剂转染的稳定性相对于Lipo2000的转染稳定性来说有所欠缺；g.用不同质粒在同一个转染体系下转染PK-15细胞,发现即使是在同一个转染体系下,不同质粒导致的转染效率也存在明显的差异；h.用相同的质粒、相同的转染体系同时转染PK-15细胞和C2C12细胞,发现细胞系的不同也可以导致明显的转染效率差异；i.分别用pEGFP-msFIT1、pEGFP-dbFIT1、pcDNA3.1-msFITl-EGFP和pcDNA3.1-dbFITl-EGFP质粒转染PK-15细胞然后作荧光共聚焦观察,发现梅山猪和大白猪FIT1蛋白都分布在细胞质中,分布特征没有明显差异。FIT1基因能够加快甘油三脂的打包速度和FIT1基因与诸多脂肪性状显着相关的事实预示着该基因对脂肪性状具有重要作用。细胞水平的研究将为推动该基因功能方面的研究打下坚实的基础。为了获得更可靠的证据,利用我们所构建的这些载体在细胞水平上做进一步检测将是有意义的。鉴于梅山猪FIT1基因和大白猪FIT1基因在序列上存在的明显差异,这些检测应该着重于研究大白FIT1基因和梅山FIT1基因在脂肪代谢方面的功能差异,如此也可为将来在个体水平上研究FIT1基因的功能并最终将FIT1基因推向实践应用提供更加充分的理论依据。
刘朝阳[7]（2010）在《鹌鹑OBR基因多态性对饲料消化率及生长屠体性能影响的初步研究》文中研究指明鹌鹑作为一种重要的经济动物,具有很高的营养价值、药用价值和实验价值。本试验以沙维马特肉用鹌鹑为试验对象,进行单笼饲养,自由采食、饮水和24小时光照,饲养期内采取人工投料,舍内温度、湿度、光照依常规要求而定。饲养期间每周记录耗料量和体重,计算平均采食量、日增重和料重比。并在试验的26-28天收集粪便,测定育成期粗脂肪、粗蛋白的消化利用率。常规免疫程序和免疫监控,卫生学指标符合鹌鹑的卫生要求。试验期为5周,试验结束,测定其生产性能、屠宰性能等指标。本研究选择瘦素受体基因（OBR）作为候选基因,以沙维马特肉用鹌鹑为试验对象,采用克隆测序结合单链构象多态性（PCR-SSCP）、人工创造酶切位点（PCR-CRS）的方法,检测了该基因部分片段的SNPs,并分析了突变位点导致的多态性与饲料消化率、生长及体组成性状之间的相关性。主要研究结果如下:1.克隆了鹌鹑OBR基因第4外显子序列,片段大小为204bp,已发布到GenBank（Accession No:GQ867177）,与鸟纲中鸡形目中的原鸡（Gallus gallus）的同源性为100%,与火鸡（Meleagris gallopavo）的同源性为91%;克隆OBR基因第16内含子部分序列,片段大小为172bp,与原鸡的同源性为100%,与火鸡的同源性为97%;克隆了OBR基因第20外显子部分序列,片段大小为690bp,与原鸡的OBR基因的同源性达到91%;与火鸡OBR基因同源性为91%。2.在鹌鹑OBR基因不同区域共发现3个SNPs,分别是:第4外显子区域的C98T;第16内含子区域的C1038T;第20外显子区域的A260G。3. OBR基因第4外显子OBR4引物所扩片段多态位点C98T的3种基因型对该鹌鹑群体屠体率、心脏重有显着影响（P<0.05）,AA型个体心脏重显着高于AB型和BB型个体（P<0.05）,AA型个体屠体率显着高于BB型,BB型显着高于AB型（P<0.05）。OBR基因第16内含子引物OBR17所扩片段多态位点C1038T的3种基因型对该鹌鹑群体粗脂肪消化率有显着影响（P<0.05）,对粗蛋白消化率有极显着影响（P<0.01）;对21日龄体重、屠体重、屠体率、半净膛重、全净膛重、全净膛率、胸肌重、胸肌率肝脏重有一定影响（P<0.2）。CC型、CD型个体的、粗脂肪消化率、粗蛋白消化率显着高于DD型个体（P<0.05）。OBR基因第20外显子引物CRS所扩片段多态位点A260G的3种基因型对该鹌鹑群体21日龄体重、半净膛率有显着影响（P<0.05）;对初生重、腹脂重、腹脂率、肝脏重有一定影响（P<0.2）。EE型、EF型个体21日龄体重显着高于FF型个体（P<0.05）,FF型个体半净膛率显着高于EE型个体,EE型个体显着高于EF性个体（P<0.05）。
宋海峰[8]（2009）在《牦牛黑素皮质素受体-4（MC4R）基因的克隆测序及其多态性分析》文中认为黑素皮质素受体-4（MC4R）是下丘脑腹内侧核（VMH）分泌的一类肽类物质,为黑素皮质素家族5个成员之一。MC4R属于G-蛋白耦联受体（GPCRS）超级家族,为跨膜神经受体,是一个调节能量平衡与能量动态平衡的重要的信号分子。本研究以大通牦牛、野牦牛和犏牛为研究对象,对MC4R基因的编码区进行PCR扩增和克隆测序,在对牦牛MC4R基因进行序列分析的基础上,与GenBank中其它物种相应基因核苷酸序列、氨基酸序列进行了比对分析,并构建了牦牛与其它物种间系统进化树。得到以下结论:①克隆得到的牦牛MC4R基因全长1434bp,其中编码区为999bp,编码332个氨基酸。②大通牦牛、野牦牛、犏牛和普通牛（Bos Taurus,AF265221）的MC4R基因在编码区内,共发现6处碱基差异,大通牦牛与普通牛在40bp（G/A）、69bp（T/C）、865bp（G/C）、918bp（G/C）、945bp（T/C）5个位点上分别发生碱基转换或颠换;大通牦牛与野牦牛在69bp（T/C）、945bp（T/C）2个位点上分别发生碱基的转换;大通牦牛与犏牛在69bp（T/C）、865bp（G/C）、945bp（T/C）、949bp（A/G）4个位点上分别发生碱基转换或颠换。而大通牦牛、野牦牛和犏牛三种牛与普通牛分别有5、3、3次碱基差异。③大通牦牛、野牦牛、犏牛和普通牛MC4R的氨基酸序列比较结果表明,4种牛之间共有3处氨基酸存在差异,其中在第11位大通牦牛、野牦牛和犏牛均为Ala（A）,而普通牛为Thr（T）;在286位大通牦牛和野牦牛为Val（V）,而犏牛和普通牛为Leu（L）;在314位大通牦牛、野牦牛和普通牛为Lys（K）,而犏牛为Glu（E）。④通过PCR-SSCP分析发现,在大通牦牛MC4R基因扩增片段中,引物2和引物6存在多态性,其余4对引物均未发现多态性。引物2存在3种基因型（AA、BB、AB）,引物6存在2种基因型（CC、CD）。经χ2适合性检验,两对引物的突变位点均不符合Hardy-Weinberg平衡状态。测序发现引物2的AA型与BB型相比在该片段的第138bp处有一个G→A的单碱基突变,该突变导致氨基酸的改变:由Ala（A）转变为Thr（T）;引物6的CC型和DD型相比在该片段的第21bp处有一个C→G的单碱基突变,该突变没有导致氨基酸的改变。上述结果在牦牛中均为首次报道,为今后开展MC4R基因与牦牛肥胖性状的研究,以及基因定位、表达调控和牦牛育种提供了必要的理论基础。
宋岳强[9]（2008）在《家鸭leptin受体cDNA的克隆分析及外源leptin对家鸭生殖机能的影响》文中进行了进一步梳理瘦素（leptin）是由白色脂肪组织分泌的一种重要的摄食调控和能量代谢调节因子,不仅参与维持能量代谢的平衡,对动物生长发育、繁殖等生理过程也起着重要的作用。与哺乳动物中的研究相比,leptin在禽类中的研究相对滞后。本文以金定鸭为研究对象,克隆了家鸭leptin受体（leptin receptor,LEPR）2种亚型基因,同时进行了组织器官定位分析;进行了外源leptin对禁食后恢复期家鸭受损卵巢恢复调控的初步探索及可能机制研究。取得了如下结果:（1）以家鸭卵巢cDNA为模板,利用反转录PCR（RT-PCR）和cDNA末端快速扩增（RACE）技术首次克隆了家鸭LEPR两种选择性剪切体LEPR-a和LEPR-b,获得了编码区全部序列,并进行了功能区分析。家鸭的LEPR-b编码区全长3468bp,编码1155个氨基酸,与鸡的LEPR-b蛋白序列同源性达81.7%,与人和鼠的LEPR-b蛋白序列同源性分别为51.9%和50.1%。家鸭的LEPR-b具有哺乳动物LEPR-b中可以激活JAK-STAT信号途径的所有功能区。家鸭LEPR-a是禽类中首次发现的一种LEPR的选择性剪切体,其中编码区全长2670bp,编码889个氨基酸。家鸭LEPR-a与哺乳动物的LEPR-a类似,胞质区只有一个JAK2结合区box,能否激活JAK-STAT途径有待进一步研究。（2）以成年家鸭垂体、性腺、肺、脂肪等14个组织器官样品为研究材料,利用半定量RT-PCR的方法分析了LEPR-a和LEPR-b在家鸭组织器官中的表达特异性,结果表明:LEPR-b在各组织器官中均有表达,其中在垂体,性腺,肺、肾脏、肌肉、脂肪中有高表达;LEPR-a各组织器官中的表达量一般低于LEPR-b,仅在睾丸、小脑和垂体中有大量表达。（3） 2天禁食引起了家鸭卵巢的受损,3天恢复期也不能很好地恢复卵巢状态,表现为卵巢形态的萎缩,组织学上的病变。这些可能与禁食引起的血清E2和P4激素水平的降低,同卵巢中雌激素受体β（estrogen receptor-β,ER-β）、卵泡刺激素受体（follicle stimulating hormone receptor,FSHR）、促黄体生成素受体（luteinizing hormone receptor,LHR）、1型促性腺激素释放激素（gonadotrophin hormone-releasing hormone-Ⅰ,GnRH-Ⅰ）、生长激素受体（growth hormone receptor,GHR）和LEPR-b等生殖相关基因mRNA水平表达的降低有关。适当浓度的外源leptin（250μg/kg体重/d）可以促进家鸭受损卵巢的恢复,可能与leptin处理后血清E2水平的上升有关,同卵巢中ER-β、FSHR、LHR、GnRH、GHR、LEPR-b等生殖相关基因mRNA水平表达的增加有关。而同时我们发现高浓度的外源leptin（1000μg/kg体重/d）可能对卵巢恢复有抑制作用,对禁食后恢复期中受损卵巢的恢复不利,与血清E2的降低,卵巢中ER-β、FSHR、LHR、GnRH、GHR、LEPR-b等生殖相关基因mRNA水平表达的降低有关。（4）禁食可以显着抑制家鸭卵巢LEPR-b mRNA的表达,同时外源leptin可以促进卵巢LEPR-b mRNA的表达,并可能直接与其作用来调控家鸭卵巢功能的恢复。而受损卵巢中LEPR-a mRNA的表达量增加,推测卵巢LEPR-a可能作为LEPR-b信号传导过程中的调节因子。
罗锦标[10]（2008）在《鹅PPAR基因组织表达特性与肥肝关系的研究》文中认为肝脏是家禽脂肪合成的主要场所。正常生理情况下,肝脏脂肪合成与分解处于平衡,肝细胞内脂肪含量不会增加,发挥正常的生理功能。畜牧生产中人们对成年鹅人工强制填饲玉米,破坏体内脂类代谢平衡,使肝脏积贮大量脂肪,形成鹅肥肝。鹅肥肝形成是极为复杂的生理生化过程,人们对脂类代谢的候选基因在其形成中的作用的研究很少。过氧化物酶体增值剂激活受体（PPAR）调控几乎脂类代谢的全部途径,包括脂肪酸吸收转运、细胞吸收、细胞内脂肪酸结合以及分解（β氧化和ω氧化）和贮存;参与脂肪细胞的生成和转化,在调节肝脏脂肪生成和肝外脂肪沉积中起重要作用,是近几年畜牧业和医学上比较公认的影响脂类代谢的候选基因。本文通过对填饲前后鹅PPAR基因组织表达特性,表达量与肥肝重和腹脂重的关系的研究,旨在从分子水平上了解肥肝形成中脂类代谢的调控规律,探讨PPAR基因对肥肝形成的重要意义,为今后研究PPAR与鹅脂类代谢的关系提供参考。为了探讨PPAR基因在鹅肥肝形成中的表达模式,试验通过测定填饲前和填饲后朗德鹅的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肌胃、十二指肠、全脑、胸肌、腿肌和腹脂中PPAR的RT-PCR产物量,比较其填饲前后的变化差异,来分析该基因的表达量对肥肝重和腹脂重的影响。采用半定量RT-PCR检测PPAR在组织中表达的相对量。同时对屠宰性能与血液指标、PPAR基因表达量与血液指标、血液指标之间进行相关性分析,得到以下结果:填饲前鹅组织中PPAR-α表达量普遍较高;填饲后PPAR-α表达量在肺脏中显着增加,在腹脂中也出现表达,在其他组织中表达量均下降。填饲前鹅组织中PPAR-γ表达量在肝脏、脾脏、肺脏、十二指肠和腹脂中较高,在其他组织中较低;填饲后PPAR-γ表达量在心脏、脾脏、肺脏、肌胃、肾脏中升高,在腹脂中下降,在其他组织中基本持平。PPAR的表达具有组织特异性;而且,PPAR-α和PPAR-γ变化不一致;这可能与不同组织中PPAR亚型的功能差异性相适应的。PPAR-α基因在鹅肥肝和腹部脂肪中存在个体差异性,且在腹部脂肪中的表达呈现两条带型,推测该基因在腹部脂肪中转录出存在结构差异的mRNA。PPAR-γ基因肥肝中的表达存在个体差异性,与个体的肝脏功能受损程度有关;受损程度大,该基因表达量少。PPAR-γ基因在全部个体的腹部脂肪中均呈高度表达,正好说明其在脂肪沉积中的重要作用。PPAR基因的表达量和肥肝重与腹脂重,与血液指标没有显着的相关性;填饲前的鹅体重与填饲后的屠体重和全净膛重呈正相关（R=0.45和0.41）,屠体越重,全净膛越重（R=0.84）。TCHO是血液中各种脂蛋白所含胆固醇的总和,大部分来源于肝脏的合成,本实验证实肥肝重与TCHO呈正相关（R=0.40）。VLDL是由肝脏合成运输甘油三脂到脂肪组织沉积的主要形式,因此VLDL与TG呈强正相关（R=0.86）,且VLDL浓度与腹部脂肪重量存在正相关（R=0.41）。在填饲后期,TCHO主要用于形成脂蛋白,其中主要的形式是VLDL（R=0.45）,且TCHO与TG呈强正相关（R=0.66）。脂蛋白加强向肝外组织运输TG以缓解肝脏的负荷,降低肝脏细胞的进一步受损。HDL能将血管壁多余的胆固醇运送回肝脏进行代谢,因此HDL-C与VLDL和TG都呈负相关（R=-0.65和-0.43）。本研究认为PPAR在鹅肥肝形成过程中起重要作用,其在鹅的组织表达规律同啮齿动物和人类基本一致,但也有自身的特殊性。填饲前后鹅PPAR基因的组织表达规律表明不同亚型的PPAR基因在不同组织中发挥不同的作用,其表达量的变化是与生理状况相适应的。
二、鸡瘦蛋白基因克隆中的若干问题研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、鸡瘦蛋白基因克隆中的若干问题研究（论文提纲范文）
（1）鸟类Leptin及其受体的研究进展（论文提纲范文）
| 1 鸟类Leptin/LEPR基因的分子克隆及结构特点 |
| 1.1 鸟类Leptin基因的分子克隆及结构特点 |
| 1.2 鸟类LEPR基因的分子克隆及结构特点 |
| 2 鸟类Leptin/LEPR的起源进化 |
| 3 鸟类Leptin/LEPR独特的组织表达模式 |
| 4 鸟类“Leptin/LEPR的生理功能” |
| 4.1 采食与能量调控 |
| 4.2 生长发育 |
| 4.3 繁殖调控 |
| 5 小结 |
（2）禽类“Leptin”及其对尿囊膜血管生成的影响（论文提纲范文）
| 1 禽类“leptin” |
| 1.1 禽类“leptin”性质 |
| 1.2 禽类“leptin”存在的争议 |
| 2 禽类Leptin受体及其介导的信号转导通路 |
| 2.1 禽类leptin受体 |
| 2.2 leptin受体介导的JAK-STAT信号通路 |
| 3 哺乳动物leptin对禽类尿囊膜血管生成的影响 |
（3）鸡Leptin受体基因调控途径及功能研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 目录 |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 第一章 文献综述 |
| 1.Leptin及其受体基因的发现及相关研究 |
| 1.1 Leptin基因的发现 |
| 1.2 Leptin受体基因的发现 |
| 1.3 Leptin及其受体分子调控通路研究 |
| 1.3.1 Leptin及其受体介导的的JAK/STAT信号通路研究进展 |
| 1.3.2 Leptin及其受体介导的SOCS3信号通路研究进展 |
| 1.3.3 Leptin及其受体介导的AMPK信号转导途径 |
| 1.3.4 Leptin主要代谢通路研究小结 |
| 1.4 Leptin及其受体的生物学功能研究相关进展 |
| 1.4.1 Leptin及其受体与生长发育 |
| 1.4.2 Leptin对生殖相关激素的影响 |
| 1.4.3 Leptin与青春期启动的关联 |
| 1.4.4 Leptin对妊娠的调控作用 |
| 1.4.5 Leptin与免疫之间的关系 |
| 1.4.6 Leptin及其受体其它生物学功能小结 |
| 2.家禽Leptin及受体相关研究进展 |
| 2.1 家禽Leptin基因研究与争议 |
| 2.1.1 家禽Leptin争议的由来 |
| 2.1.2 外源Leptin对家禽的影响 |
| 2.2 家禽Leptin受体基因功能研究 |
| 2.3 家禽Leptin及其受体研究综述小结 |
| 3.转基因鸡研究进展 |
| 3.1 转基因鸡制备技术进展 |
| 3.1.1 显微注射法 |
| 3.1.2 逆转录病毒载体法 |
| 3.1.3 胚胎干细胞法 |
| 3.1.4 原生殖细胞(PGCs)转染法 |
| 3.1.5 雄性生殖细胞载体法 |
| 3.2 RNAi技术在转基因家禽上的应用 |
| 3.2.1 RNAi技术同转基因技术的结合过程 |
| 3.2.2 RNAi技术应用于转基因家禽 |
| 第二章 鸡Leptin序列克隆的验证及LEPR组织表达谱分析 |
| 1.材料和方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 实验主要仪器 |
| 1.1.3 主要试剂及配方 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 基因组DNA提取 |
| 1.2.2 组织RNA提取 |
| 1.2.3 PCR引物设计 |
| 1.2.4 PCR扩增程序 |
| 1.2.5 PCR引物设计与扩增 |
| 1.2.6 实时定量PCR数据分析 |
| 2.结果与分析 |
| 2.1 DNA及组织RNA提取结果 |
| 2.2 Leptin基因PCR扩增结果 |
| 2.3 LEPR荧光定量结果 |
| 3.讨论 |
| 3.1 鸡Leptin基因存在的争议 |
| 3.2 鸡LEPR基因的组织表达谱分析 |
| 第三章 RNAi验证LEPR在鸡前脂肪细胞中的功能及代谢通路变化 |
| 1.材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 实验仪器 |
| 1.1.3 主要试剂、抗体及配方 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 细胞的分离与培养 |
| 1.2.2 细胞的冻存复苏 |
| 1.2.3 shRNA干扰片段设计 |
| 1.2.4 载体PLLU2G-shLEPR的构建 |
| 1.2.5 质粒提取 |
| 1.2.6 脂质体转染鸡前脂肪细胞 |
| 1.2.7 细胞RNA的提取、反转录 |
| 1.2.8 荧光定量PCR分析 |
| 1.2.9 鸡前脂肪细胞的诱导分化 |
| 2.结果与分析 |
| 2.1 鸡前体脂肪细胞培养结果 |
| 2.2 RNAi质粒载体的构建 |
| 2.2.1 用XhoⅠ和HpaⅠ酶切PLLU2G骨架载体 |
| 2.2.2 菌落PCR鉴定PLLU2G-shLEPR图谱 |
| 2.2.3 载体测序结果 |
| 2.3 shLEPR质粒转染鸡前脂肪细胞的荧光检测结果 |
| 2.4 质粒干扰效率检测 |
| 2.4.1 转染后细胞RNA提取结果 |
| 2.4.2 反转录后内参基因检测 |
| 2.4.3 待测基因的PCR扩增结果琼脂糖凝胶电泳检测 |
| 2.4.4 荧光定量溶解曲线检测 |
| 2.4.5 荧光定量PCR的干扰效率检测结果 |
| 2.5 RNAi处理后各基因表达量分析 |
| 2.5.1 RNAi处理后基因表达量初步统计 |
| 2.5.2 RNAi处理基因表达量分析 |
| 2.6 RNAi处理后对细胞增殖速度的影响 |
| 3.讨论 |
| 3.1 鸡前脂肪细胞培养与诱导分化 |
| 3.1.1 鸡前脂肪细胞培养及诱导分化体系的建立 |
| 3.1.2 不同shLEPR组别细胞增殖结果 |
| 3.2 RNAi干扰后各基因表达量变化 |
| 3.2.1 shLERR干扰效率分析 |
| 3.2.2 shLEPR干扰后相关基因表达分析 |
| 3.3 shLEPR干扰前脂肪细胞研究小结 |
| 第四章 不同饲养条件下LEPR及其代谢通路基因表达变化分析 |
| 1.材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 实验仪器 |
| 1.1.3 实验试剂及配置 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 实验用鸡的饲养分组与饲养方式 |
| 1.2.2 组织RNA的提取及反转录 |
| 1.2.3 荧光定量检测基因表达量 |
| 2.结果与分析 |
| 2.1 体重测定结果 |
| 2.2 禁食及正常饲喂组荧光定量差异分析实验结果 |
| 2.2.1 荧光定量数据 |
| 2.2.2 各基因表达柱状图分析 |
| 3.讨论 |
| 3.1 禁食3天对体重增加的调整 |
| 3.2 禁食及正常饲喂组荧光定量差异分析 |
| 3.2.1 STAT3和NPY基因表达变化 |
| 3.2.2 AdipoR2基因和CPT-1基因表达变化 |
| 3.2.3 LEPR基因表达变化综合分析 |
| 3.3 禁食对LEPR等基因影响研究小结 |
| 第五章 shLEPR转基因鸡的构建及相关检测 |
| 1.材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 实验仪器 |
| 1.1.3 实验试剂及配置 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 shLEPR转染用种蛋的处理 |
| 1.2.2 转基因个体绿色荧光蛋白观测 |
| 1.2.3 转基因个体基因组PCR检测 |
| 1.2.4 转基因个体Western-blot鉴定 |
| 1.2.5 转基因个体体重、体尺测量及相关器官重量测量 |
| 1.2.6 转基因个体相关基因表达量检测 |
| 2.结果及分析 |
| 2.1 shLEPR转基因测定 |
| 2.1.1 孵化率统计 |
| 2.1.2 荧光信号检测 |
| 2.1.3 转基因结果分子检测 |
| 2.2 shLEPR转基因结果分析 |
| 2.2.1 转基因个体表型性状结果与分析 |
| 2.2.2 转基因个体相关通路基因表达变化 |
| 3.讨论 |
| 3.1 shLEPR转基因效果讨论 |
| 3.1.1 胚盘下腔注射效果分析 |
| 3.1.2 转基因结果检测与分析 |
| 3.2 LEPR干扰后个体表型及基因通路变化分析 |
| 3.2.1 LEPR基因表达及表型分析 |
| 3.2.2 相关基因表达量分析 |
| 3.3 shLEPR转基因讨论小结 |
| 全文结论及创新点 |
| 全文结论 |
| 创新点 |
| 参考文献 |
| 附表 |
| 附表1 干扰质粒载体测序结果 |
| 作者简介 |
| 致谢 |
| 导师评阅表 |
（4）leptin对鸡胚尿囊膜血管生成的影响及其机理（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略语 |
| 引言 |
| 第一篇 文献综述 |
| 第一章 哺乳动物胎盘和禽类尿囊膜的血管生成 |
| 1 血管生成的概念和方式 |
| 2 哺乳动物胎盘的血管生成 |
| 3 禽类尿囊膜的血管发生和生成 |
| 4 鸡胚尿囊膜在血管生成研究中的应用 |
| 第二章 LEPTIN的信号转导与血管生成 |
| 1 LEPTIN的性质 |
| 2 LEPTIN受体结构及信号转导通路 |
| 3 LEPTIN对血管生成的影响 |
| 第三章 血管生长因子与血管生成 |
| 1 VEGF与血管生成 |
| 2 NO介导的VEGF血管生成效应 |
| 3 FGF2与血管生成 |
| 第二篇 试验研究 |
| 第四章 LEPTIN对鸡胚尿囊膜血管生成的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果与分析 |
| 3 讨论 |
| 第五章 蛋清和蛋黄内注射LEPTIN对尿囊膜上血管生长因子的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果与分析 |
| 3 讨论 |
| 第六章 蛋清内注射LEPTIN对尿囊膜STA3-VEGF信号通路的影响·· |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果与分析 |
| 3 讨论 |
| 第七章 LEPTIN对尿囊膜细胞STAT3介导的VEGF-NO通路的影响 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果与分析 |
| 3 讨论 |
| 总体讨论 |
| 结论 |
| 本文创新点 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读博士期间发表论文情况 |
（5）能量水平与糖皮质激素在肉仔鸡采食调控中的作用（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 1 引言 |
| 1.1 能量食欲的神经内分泌调控 |
| 1.2 胰岛素对食欲的调控作用 |
| 1.2.1 胰岛素的存在及分布 |
| 1.2.3 胰岛素的中枢调控 |
| 1.3 糖皮质激素对能量食欲的影响 |
| 1.3.1 应激 |
| 1.3.2 应激对采食量的影响 |
| 1.3.3 糖皮质激素与胰岛素及能量之间的关系 |
| 1.3.4 糖皮质激素活化酶 |
| 1.4 肥胖相关的脂肪代谢及胰岛素抵抗 |
| 1.4.1 瘦素与食欲及肥胖症的关系 |
| 1.4.2 肥胖信号（insulin/leptin）及肥胖的发生 |
| 1.4.3 TNF-α与肥胖引起的胰岛素抵抗有关 |
| 1.5 选题的目的和意义 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 试验动物 |
| 2.2 试验日粮 |
| 2.3 试验试剂、耗材与仪器 |
| 2.4 试验设计 |
| 2.4.1 外源胰岛素注射对肉仔鸡摄食的影响 |
| 2.4.2 日粮能量水平对饲喂状态下肉仔鸡摄食以及糖耐量的影响 |
| 2.4.3 日粮能量水平对空腹及再饲喂状态下肉仔鸡摄食的影响 |
| 2.4.4 糖皮质激素对肉仔鸡采食选择性的影响 |
| 2.4.5 糖皮质激素及日粮能量水平对肉仔鸡下丘脑食欲调节基因的影响 |
| 2.5 样品采集与测定 |
| 2.5.1 血液样品采集与测定 |
| 2.5.2 组织样品采集与基因表达分析 |
| 2.6 数据处理 |
| 3 结果分析 |
| 3.1 外源胰岛素注射对家禽摄食的影响 |
| 3.1.1 胰岛素梯度注射对肉仔鸡采食量及血液生化指标的影响 |
| 3.1.2 胰岛素注射对食欲基因的影响 |
| 3.2 日粮能量水平对饲喂状态下肉仔鸡摄食的影响 |
| 3.2.1 日粮能量水平对饲喂状态下肉仔鸡采食量、体增重及料重比的影响 |
| 3.2.2 不同日粮能量水平对肉仔鸡脂肪沉积的影响 |
| 3.2.3 不同日粮能量水平对肉仔鸡血液生化指标的影响 |
| 3.2.4 不同日粮能量水平对肉仔鸡食欲调控基因及肥胖相关基因相对表达量的影响 |
| 3.2.5 日粮能量水平对肉仔鸡糖耐量的影响 |
| 3.3 日粮能量水平对空腹及再饲喂状态下肉仔鸡摄食的影响 |
| 3.3.1 日粮能量水平对空腹及再饲喂状态下肉仔鸡脂肪沉积的影响 |
| 3.3.2 日粮能量水平对空腹后再饲喂状态下肉仔鸡采食量的影响 |
| 3.3.3 日粮能量水平对空腹及再饲喂状态下肉仔鸡血液生化指标的影响 |
| 3.3.4 日粮能量水平对空腹及再饲喂状态下肉仔鸡食欲调控基因及肥胖相关基因相对表达量的影响 |
| 3.4 试验四长期糖皮质激素处理及日粮能量水平对肉仔鸡采食选择性的影响 |
| 3.4.1 长期糖皮质激素处理及日粮能量水平对肉仔鸡体增重的影响 |
| 3.4.2 长期糖皮质激素处理及日粮能量水平对肉仔鸡采食选择性的影响 |
| 3.4.3 糖皮质激素及日粮能量水平对家禽脂肪比率的影响 |
| 3.4.4 糖皮质激素及日粮能量水平对家禽血液生化指标的影响 |
| 3.5 糖皮质激素处理对不同能量日粮饲喂肉仔鸡食欲调节基因的影响 |
| 3.5.1 糖皮质激素处理对不同能量日粮饲喂肉仔鸡脂肪沉积的影响 |
| 3.5.2 糖皮质激素处理对不同能量日粮饲喂肉仔鸡血液生化指标的影响 |
| 3.5.3 糖皮质激素处理对不同能量日粮饲喂肉仔鸡下丘脑食欲调节基因的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 外源胰岛素注射对肉仔鸡摄食的影响 |
| 4.2 日粮能量水平对肉仔鸡摄食的影响 |
| 4.2.1 日粮能量水平对肉仔鸡生产性能、脂肪沉积及血液生化指标的影响 |
| 4.2.2 日粮能量水平对肉仔鸡食欲调控基因及肥胖相关基因相对表达量的影响 |
| 4.2.3 日粮能量水平对肉仔鸡糖耐量的影响 |
| 4.3 日粮能量水平对再饲喂状态下肉仔鸡摄食的影响 |
| 4.3.1 禁饲后再饲喂不同能量状态日粮对肉仔鸡采食量的影响 |
| 4.3.2 禁饲后再饲喂不同能量状态日粮对肉仔鸡血液生化指标的影响 |
| 4.3.3 再饲喂的日粮能量水平对肉仔鸡食欲调控基因及肥胖相关基因相对表达量的影响 |
| 4.4 长期糖皮质激素处理及日粮能量水平对肉仔鸡采食选择性的影响 |
| 4.4.1 长期糖皮质激素处理及日粮能量水平对肉仔鸡体增重及采食选择性的影响 |
| 4.4.2 长期糖皮质激素处理及日粮能量水平对肉仔鸡脂肪沉积的影响 |
| 4.4.3 长期糖皮质激素处理及日粮能量水平对肉仔鸡血液生化指标的影响 |
| 4.5 糖皮质激素处理对不同能量日粮饲喂肉仔鸡能量及食欲调节基因的影响 |
| 4.5.1 糖皮质激素处理对不同能量日粮饲喂肉仔鸡脂肪沉积的影响 |
| 4.5.2 糖皮质激素处理及对不同能量日粮饲喂肉仔鸡血液生化指标的影响 |
| 4.5.3 糖皮质激素处理对不同能量日粮饲喂肉仔鸡下丘脑食欲调节基因的影响 |
| 5 总体结论与研究展望 |
| 5.1 总体结论 |
| 5.2 创新点及研究展望 |
| 5.2.1 创新点 |
| 5.2.2 研究展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（6）梅山、大白猪FIT1基因真核表达载体的构建及其转染研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分:梅山猪和大白猪FIT1基因真核表达载体的构建 |
| 1. 研究目的 |
| 2. 材料和方法 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.1.1 实验样品 |
| 2.1.2 主要试剂和试剂盒 |
| 2.1.3 常用缓冲液及其配制 |
| 2.1.4 主要的仪器设备和耗材 |
| 2.1.5 主要的生物学网站和生物学分析工具 |
| 2.1.6 所用到的载体 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 猪基因组DNA的提取 |
| 2.2.2 梅山和大白猪FIT1基因全长的获取 |
| 2.3 梅山猪和大白猪FIT1基因真核表达载体的构建 |
| 2.3.1 荧光蛋白融合超表达载体的构建 |
| 2.3.2 pcDNA3.1(+)-msFIT1和pcDNA3.1(+)-dbFIT1真核超表达载体的构建 |
| 2.3.3 phc-Red-N1-dbFIT1表达载体的构建 |
| 3. 结果与分析 |
| 3.1 FIT1基因的扩增结果 |
| 3.1.1 基因组DNA的提取结果 |
| 3.1.2 从基因组中扩增FIT1全长的结果 |
| 3.1.3 阳性克隆子的鉴定结果 |
| 3.2 pcDNA3.1-msFIT1-EGFP和pcDNA3.1-dbFIT1荧光融合超表达载体的构建结果 |
| 3.2.1 提取质粒的双酶切结果 |
| 3.2.2 pEGFP-msFIT1和pEGFP-dbFIT1的克隆检测结果 |
| 3.2.3 pEGFP-dbFIT1a/b和pEGFP-msFIT1a/b双重双酶切的结果 |
| 3.2.4 载体连接作克隆检测结果 |
| 3.2.5 pcDNA3.1-msFIT1-EGFP和pcDNA3.1-msFIT1-EGFP质粒酶切结果 |
| 3.3 pcDAN3.1-msFIT1和pcDNA3.1-dbFIT1真核超表达载体的构建结果 |
| 3.3.1 T-pc-msFIT1、T-pc-dbFIT1和pcDNA3.1(+)质粒提取的结果 |
| 3.3.2 质粒酶切结果 |
| 3.3.3 pcDNA3.1-msFIT1和pcDNA3.1-dbFIT1超表达载体的克隆检测和质粒酶切结果 |
| 3.4 phc-Red-dbFIT1质粒的构建 |
| 3.4.1 质粒的双酶切结果 |
| 3.4.2 phc-Red-dbFIT1克隆阳性检测结果 |
| 3.4.3 phc-Red-dbFIT1质粒双酶切结果 |
| 4. 小结讨论 |
| 第二部分:FIT1基因梅山型和大白型真核表达载体对PK-15细胞的转染 |
| 1. 研究目的 |
| 2. 材料、试剂和方法 |
| 2.1 实验材料及准备 |
| 2.1.1 玻璃器皿的准备 |
| 2.1.2 金属器皿的准备 |
| 2.1.3 塑料用品的准备 |
| 2.1.4 胶塞的处理 |
| 2.1.5 细胞培养板、培养瓶、塑料移液管的准备 |
| 2.1.6 细胞染色用盖玻片的准备 |
| 2.1.7 其它耗材的准备 |
| 2.2 消毒和灭菌 |
| 2.2.1 消毒 |
| 2.2.2 灭菌 |
| 2.3 试验所需试剂的准备 |
| 2.4 实验方法 |
| 2.4.1 PK-15细胞培养特性探索 |
| 2.4.2 两种转染试剂转染效果的比较 |
| 2.4.3 确定所构建的质粒能否成功表达荧光 |
| 2.4.4 同一转染体系对不同细胞进行转染时转染效率比较 |
| 2.4.5 对PK-15细胞的转染及荧光共聚焦观察 |
| 3. 结果与分析 |
| 3.1 PK-15细胞常规培养结果 |
| 3.2 两种转染试剂的对比结果 |
| 3.3 各种质粒的转染结果 |
| 3.4 同一转染体系对PK-15细胞和C2C12细胞转染效果的比较 |
| 3.5 荧光共聚焦观察结果 |
| 4. 小结讨论 |
| 第三部分:全文讨论总结 |
| 1. 讨论 |
| 2. 下一步工作 |
| 3. 总结 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
（7）鹌鹑OBR基因多态性对饲料消化率及生长屠体性能影响的初步研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 1 引言 |
| 1.1 研究背景与科学意义 |
| 1.1.1 鹌鹑的概述及生物学特性 |
| 1.1.2 鹌鹑的经济价值 |
| 1.1.3 国内外发展概况 |
| 1.2 遗传标记概述 |
| 1.2.1 PCR-SSCP 标记 |
| 1.2.2 PCR-RFLP 标记 |
| 1.2.3 CRS-PCR 标记 |
| 1.3 瘦素受体基因（OBR）概述 |
| 1.3.1 瘦素（leptin）及其生物学功能 |
| 1.3.2 瘦素受体基因OBR 基因的概述 |
| 1.3.3 OBR 基因的结构 |
| 1.3.4 OBR 基因的信号转导 |
| 1.3.5 OBR 基因的分布 |
| 1.4 本研究的目标和内容 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 饲养试验 |
| 2.1.1 试验动物及试验设计 |
| 2.1.2 饲养管理 |
| 2.1.3 试验日粮 |
| 2.1.4 粪样的收集 |
| 2.1.5 生长性能指标的测定 |
| 2.1.6 屠宰性能指标的测定 |
| 2.1.7 营养物质代谢率的测定 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.2.1 菌株和克隆载体 |
| 2.2.2 主要仪器设备 |
| 2.2.3 工具酶及试剂盒 |
| 2.2.4 主要药品及试剂 |
| 2.2.5 缓冲液与常用试剂的配制 |
| 2.2.6 主要分子生物学软件 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 样品的采集及血液DNA 提取 |
| 2.3.2 DNA 的浓度测定和质量检测 |
| 2.3.3 鹌鹑OBR 基因的克隆 |
| 2.3.4 PCR 产物的克隆测序 |
| 2.3.5 PCR-SSCP 检测 |
| 2.3.6 CRS- PCR 检测 |
| 2.3.7 统计模型的建立 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 OBR 基因单核苷酸多态性的检测及基因型分析 |
| 3.1.1 基因组提取结果 |
| 3.1.2 OBR 基因 exon4 区域扩增结果与分析 |
| 3.1.3 OBR 基因 intron16 区域扩增结果与分析 |
| 3.1.4 OBR 基因 exon20 区域扩增结果与分析 |
| 3.2 OBR 基因多态性检测结果的分析 |
| 3.2.1 OBR 基因多态位点的基因型频率和等位基因频率 |
| 3.2.2 OBR 基因多态性与饲料消化率及生长屠体性能的相关分析 |
| 3.2.3 OBR 基因合并基因型分析 |
| 4 讨论 |
| 4.1 饲养试验对实验结果的影响 |
| 4.1.1 单笼饲养的影响 |
| 4.1.2 消化代谢实验方法的影响 |
| 4.2 OBR 基因的多态性与鹌鹑生长性状及营养代谢的相关性 |
| 4.2.1 OBR 基因的克隆 |
| 4.2.2 OBR 基因与鹌鹑营养代谢及生长屠体性状的相关性 |
| 5 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 |
（8）牦牛黑素皮质素受体-4（MC4R）基因的克隆测序及其多态性分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 牦牛的生态生理特性 |
| 1.1 牦牛生存的自然环境 |
| 1.2 牦牛的体形外貌 |
| 1.3 牦牛的生活习性 |
| 1.4 牦牛对高原寒冷的适应 |
| 1.5 牦牛对高原缺氧的适应 |
| 1.6 本研究的三种牛 |
| 第二章 黑素皮质素受体-4（MC4R）基因研究进展 |
| 2.1 黑素皮质素受体-4（MC4R）的结构与功能研究 |
| 2.2 黑素皮质素受体-4（MC4R）的调控机制 |
| 2.3 与黑素皮质素受体-4（MC4R）有关的体重调节体制 |
| 2.4 黑素皮质素受体-4（MC4R）基因的结构 |
| 2.5 各物种黑素皮质素受体-4（MC4R）基因的研究进展 |
| 2.6 本研究的目的和意义 |
| 第三章 PCR-SSCP 的研究进展 |
| 3.1 PCR-SSCP 的建立与发展 |
| 3.2 PCR-SSCP 方法的原理 |
| 3.3 PCR-SSCP 的特点 |
| 3.4 PCR-SSCP 技术的改进和完善 |
| 3.5 PCR-SSCP 的应用 |
| 第四章 牦牛MC4R 基因的克隆测序及其分析 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.3 讨论 |
| 第五章 牦牛MC4R 基因的PCR-SSCP 多态性研究 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.2 结果与分析 |
| 5.3 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（9）家鸭leptin受体cDNA的克隆分析及外源leptin对家鸭生殖机能的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第1章 前言 |
| 1.1 Leptin概述及禽类leptin |
| 1.1.1 Leptin概述 |
| 1.1.2 禽类leptin概述 |
| 1.2 LEPR概述与禽类LEPR |
| 1.2.1 LEPR概述 |
| 1.2.2 禽类LEPR概述 |
| 1.3 Leptin与能量平衡 |
| 1.3.1 Leptin对摄食的影响 |
| 1.3.2 Leptin对能量消耗的影响 |
| 1.3.3 Leptin与禽类能量平衡 |
| 1.4 Leptin与生长发育 |
| 1.4.1 Leptin对生长发育的影响 |
| 1.4.2 Leptin与禽类生长发育 |
| 1.5 Leptin与繁殖 |
| 1.5.1 Leptin对生殖相关激素的影响 |
| 1.5.2 Leptin与青春期启动 |
| 1.5.3 Leptin对妊娠的影响 |
| 1.5.4 Leptin对哺乳的影响 |
| 1.5.5 Leptin与禽类繁殖 |
| 1.6 Leptin与免疫 |
| 1.6.1 Leptin对免疫的作用 |
| 1.6.2 Leptin对禽类免疫的影响 |
| 1.7 Leptin的其他生物学功能 |
| 1.7.1 Leptin与心血管系统 |
| 1.7.2 Leptin与癌症的发生 |
| 1.7.3 Leptin与学习记忆 |
| 1.8 Leptin抵抗 |
| 1.8.1 外周性leptin抵抗 |
| 1.8.2 中枢性leptin抵抗 |
| 1.8.3 Leptin抵抗的治疗 |
| 1.9 本研究的目的和科学意义 |
| 第2章 材料和方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 菌株与质粒 |
| 2.1.3 药品与试剂 |
| 2.1.4 实验仪器 |
| 2.1.5 常用溶液及培养基 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 家鸭LEPR基因的克隆及后续实验 |
| 2.2.2 重组小鼠leptin对家鸭卵巢功能的影响 |
| 第3章 结果和分析 |
| 3.1 家鸭LEPR基因的克隆及后续研究 |
| 3.1.1 卵巢RNA的提取 |
| 3.1.2 家鸭LEPR基因的分段扩增 |
| 3.1.3 家鸭LEPR3'RACE和5'RACE扩增 |
| 3.1.4 家鸭LEPR基因序列拼接及分析 |
| 3.1.5 家鸭LEPR-b蛋白序列的系统分析 |
| 3.1.6 家鸭与其他物种LEPR-b的蛋白序列同源性分析 |
| 3.1.7 家鸭、鸡、小鼠和人的LEPR序列的蛋白序列结构比较 |
| 3.1.8 家鸭内参基因β-actin的扩增 |
| 3.1.9 家鸭体内LEPR基因表达的组织器官定位分析 |
| 3.1.10 家鸭LEPR片段的蛋白表达及切胶电洗脱纯化 |
| 3.1.11 家鸭LEPR多克隆抗体的制备及鉴定 |
| 3.2 重组小鼠leptin对禁食后恢复期家鸭卵巢功能的影响及其机制初步研究 |
| 3.2.1 重组小鼠leptin对禁食后恢复期家鸭的体重变化的影响 |
| 3.2.2 重组小鼠leptin对禁食后恢复期家鸭产蛋率的影响 |
| 3.2.3 重组小鼠leptin对禁食后恢复期家鸭卵巢解剖形态学变化的影响 |
| 3.2.4 重组小鼠leptin对禁食后恢复期家鸭卵巢影响的组织学研究 |
| 3.2.5 重组小鼠leptin对家鸭血清生殖相关激素的影响 |
| 3.2.6 家鸭各生殖相关蛋白基因的克隆及鉴定 |
| 3.2.7 重组小鼠leptin对禁食后恢复期家鸭卵巢生殖相关基因mRNA水平的影响 |
| 3.2.8 重组小鼠leptin对禁食后恢复期家鸭卵巢ER—B蛋白表达的影响 |
| 3.2.9 重组小鼠leptin对禁食后恢复期家鸭卵巢LEPR-b和LEPR-a表达的影响 |
| 第4章 讨论 |
| 4.1 家鸭LEPR长短亚型的克隆及组织器官定位分析 |
| 4.2 重组小鼠leptin对禁食后恢复期家鸭生殖调控的影响 |
| 4.2.1 重组小鼠leptin对禁食后恢复期家鸭体重的影响 |
| 4.2.2 重组小鼠leptin对禁食后恢复期家鸭卵巢恢复的影响 |
| 4.2.3 重组小鼠leptin对禁食后恢复期家鸭生殖相关激素的影响 |
| 4.2.4 重组小鼠leptin对禁食后恢复期家鸭卵巢生殖相关基因表达的影响 |
| 4.2.5 重组小鼠leptin对禁食后恢复期家鸭卵巢LEPR-b和LEPR-a mRNA水平的影响 |
| 4.2.6 重组小鼠leptin调控禁食后恢复期家鸭卵巢功能恢复的可能机制 |
| 第5章 结论与创新点 |
| 5.1 结论 |
| 5.2 创新点 |
| 参考文献 |
| 缩略词对照表 |
| 在学期间的成果 |
| 致谢 |
（10）鹅PPAR基因组织表达特性与肥肝关系的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号及缩略语等的说明 |
| 第一章 文献综述 |
| 1.鹅的生物学分类与特点 |
| 1.1 鹅的种质特点 |
| 1.2 中国鹅种与朗德鹅的差异 |
| 2.鹅肥肝介绍 |
| 2.1 鹅肥肝的生产历史 |
| 2.2 玉米的营养价值及其在鹅肥肝形成中的作用 |
| 2.3 鹅肥肝的形成机理 |
| 2.4 鹅肥肝的组成与营养价值 |
| 2.5 我国鹅肥肝的发展前景 |
| 3.鹅脂类代谢特点 |
| 3.1 鹅肝脏中的脂类代谢 |
| 3.2 鹅脂肪组织中的脂类代谢 |
| 3.3 鹅脂类代谢及肥肝形成的影响因素 |
| 4.PPAR基因研究进展概述 |
| 4.1 影响脂肪代谢和沉积的候选基因 |
| 4.2 PPAR的发现与结构特点 |
| 4.3 PPAR在脂类代谢中的作用 |
| 4.4 国内外畜禽上PPAR基因的研究进展 |
| 5.本研究的目的、意义与主要内容 |
| 第二章 材料与方法 |
| 1.材料来源与测定 |
| 1.1 时间与场地 |
| 1.2 鹅的饲养管理与填饲操作 |
| 1.3 样品采集 |
| 2.仪器设备和试剂药品 |
| 2.1 主要仪器设备 |
| 2.2 药品试剂与试剂盒 |
| 3.实验方法 |
| 3.1 总RNA的提取 |
| 3.2 RNA质量与浓度检测 |
| 3.3 反转录一cDNA的合成(RT) |
| 3.4 RT产物的PCR |
| 3.5 血清生化指标的测定 |
| 4.实验数据的统计分析 |
| 第三章 结果与分析 |
| 1.RNA提取的质量 |
| 2.引物的温度梯度PCR结果 |
| 3.填饲前后各组织PPAR-α基因RT-PCR分析 |
| 4.填饲前后各组织PPAR-γ基因RT-PCR分析 |
| 5.PPAR基因在不同个体肥肝中RT-PCR检测 |
| 6.PPAR基因在不同个体腹部脂肪中RT-PCR检测 |
| 7.PPAR基因表达量与血清指标之间的线性关系 |
| 8.PPAR基因表达量与血液指标的相关分析 |
| 9.屠宰性能与血清指标之间的线性关系 |
| 10.血清指标之间的线性关系 |
| 第四章 讨论 |
| 1.填饲前后PPARs基因的组织表达差异性 |
| 2.填饲前后的鹅PPAR-α组织表达的比较分析 |
| 3.填饲前后的鹅PPAR-γ组织表达的比较分析 |
| 4.PPAR-α基因在肥肝与腹脂形成中的作用 |
| 5.PPAR-γ基因在肥肝与腹脂形成中的作用 |
| 6.相关性分析 |
| 第五章 结论 |
| 参考文献 |
| 个人简介及发表文章 |
| 致谢 |
四、鸡瘦蛋白基因克隆中的若干问题研究（论文参考文献）
- [1]鸟类Leptin及其受体的研究进展[J]. 王丹丹,李艳敏,蒋瑞瑞,康相涛,刘小军. 畜牧兽医学报, 2015(11)
- [2]禽类“Leptin”及其对尿囊膜血管生成的影响[J]. 苏兰利,赵茹茜. 中国家禽, 2013(18)
- [3]鸡Leptin受体基因调控途径及功能研究[D]. 班谦. 石河子大学, 2013(03)
- [4]leptin对鸡胚尿囊膜血管生成的影响及其机理[D]. 苏兰利. 南京农业大学, 2012(12)
- [5]能量水平与糖皮质激素在肉仔鸡采食调控中的作用[D]. 徐绍华. 山东农业大学, 2012(02)
- [6]梅山、大白猪FIT1基因真核表达载体的构建及其转染研究[D]. 何君贤. 华中农业大学, 2010(06)
- [7]鹌鹑OBR基因多态性对饲料消化率及生长屠体性能影响的初步研究[D]. 刘朝阳. 东北农业大学, 2010(05)
- [8]牦牛黑素皮质素受体-4（MC4R）基因的克隆测序及其多态性分析[D]. 宋海峰. 青海大学, 2009(S2)
- [9]家鸭leptin受体cDNA的克隆分析及外源leptin对家鸭生殖机能的影响[D]. 宋岳强. 厦门大学, 2008(08)
- [10]鹅PPAR基因组织表达特性与肥肝关系的研究[D]. 罗锦标. 南京农业大学, 2008(08)