一、卒中后降温可能有助于防止再灌注损伤（论文文献综述）
其布日[1]（2021）在《额尔敦-乌日勒的活性成分分析及其对小胶质细胞基因调控作用的研究》文中指出脑卒中是我国第一大死亡原因,是全球仅次于缺血性心脏病的第二大死亡原因。因此,研发新型抗脑卒中药物意义重大。额尔敦-乌日勒（EW）是蒙医治疗神经系统疾病的经典方剂,具有良好的神经保护作用,对脑卒中引起的半身不遂等症状疗效显着,因而得到广泛的临床应用。然而,EW化学成分复杂,作用机制不明确。因此,必需明确EW的生物活性成分,并阐明其神经保护作用机制。本论文中分析了EW的部分有效成分,并发现了EW对大脑中动脉阻塞/再灌注损伤（MCAO/R）模型大鼠脑内小胶质细胞的基因调控作用、极化作用以及从抗神经性炎症作用。【研究目的】（1）验证EW对MCAO/R模型大鼠病变部位组织内基因表达的调控作用,并分析EW中所含有的神经活性化合物;（2）确定EW在脑卒中恢复期间通过调节小胶质细胞极化来抑制神经炎症的主要化合物;（3）确定EW的分级分离组分中的关键抗炎分子及作用机理以及对神经细胞保护及突触生长的影响;（4）EW中关键活性分子的协同作用对小胶质细胞基因表达谱的影响。【研究方法】（1）建立大鼠MCAO/R模型,连续给药两周。第15天,提取大鼠大脑皮质病变区组织的总RNA,并进行转录组测序（RNA-seq）分析。筛选未处理组、MCAO模型组和EW给药组之间显着差异表达的基因,并分析各个基因的功能以及在缺血性脑卒中恢复过程中的可能作用。（2）根据文献报道收集EW药材中与神经相关的生物活性化学分子信息,采用Chem Draw软件画出结构式并建立数据库,命名为“EW神经活性化合物数据库”;其次,采用五种不同溶剂提取EW可溶解组分,并使用UPLC-QTof-MS分析其活性化合物。（3）以调控小鼠小胶质细胞（BV2细胞株）M1表型表达的细胞因子Cxcl10为筛选标准,利用RT-q PCR法对EW的5种溶剂提物进行快速筛选,选出了调控作用最为显着的提取物,通过两次HPLC半制备分离,得到优化的生物活性小分子组,并利用UPLC-QTof-MS鉴定了其生物活性分子。（4）采用UPLC-QTof-MS鉴定EW的分离组分（命名为F4-6）的关键抗炎分子;利用蛋白免疫印迹分析了F4-6对脂多糖（LPS）刺激的BV2小胶质细胞NF-κB信号通路相关蛋白水平的影响;以及分析F4-6处理的小胶质细胞培养液对神经元（N2a细胞）的增值和突触生长的影响。（5）利用RNA-seq分析讨论EW所含关键活性分子土木香内酯（Ala）和去氢二异丁香酚（Deh）单分子以及混合物对LPS刺激的BV2小胶质细胞基因表达谱（Gene expression pattern profile）的影响,并采用RT-q PCR法对RNA-seq结果进行了验证。【研究结果】（1）Bederson评分显示,给药14天后,EW给药组MCAO/R模型大鼠的评分从治疗前的2.07降至治疗后的0.21（P<0.01）,说明EW显着降低了神经系统损伤。与NT组相比,MCAO模型组大鼠大脑皮质区病变组织内有63个差异表达的基因;而与MCAO模型组相比,EW治疗后有186个差异表达的基因;其中生长因子（Igf1、Igf2和Tgfβ）和颗粒蛋白编码基因Grn等的表达在EW治疗后显着上调（P<0.05）;同时也检测到小胶质细胞标记物的表达大幅增强,以及补成分和分泌蛋白酶的表达。（2）五种不同溶剂提取的EW组分的UPLC-QTof-MS分析发现,在我们建库的11种蒙药的32个小分子化合物中,除决明子外其他10种蒙药（红花、肉豆蔻、甘草、草果、川楝子、栀子、土木香、木香、荜茇和黑种草等）中已报道的16个神经活性相关小分子化合物分别出现在五种溶剂提取物中。（3）快速筛选结果表明,EW石油醚提取物（命名为EW-5）对Cxcl10基因表达的抑制作用最强（P<0.05）。采用HPLC半制备法,对EW进行2次分级分离后最终得到12个组分。其中,组分F4-6对促炎细胞因子（Cxcl10、Tnfα、Il1β和Nos2）表达的抑制作用最显着（P<0.05）。通过UPLC-QTof-MS对F4-6进行了分析,共鉴定出20种化合物,其中包括木香烃内酯、肉豆蔻醚、土木香内酯和亚麻酸;这些小分子在LPS刺激的BV2细胞和小鼠原代小胶质细胞中,显着下调关键促炎细胞因子的表达。（4）土木香内酯（Ala）和去氢二异丁香酚（Deh）是F4-6的关键抗炎活性分子。F4-6、Ala和Deh均下调LPS刺激的小胶质细胞中Ccl2、Cox2和Il6等促炎基因的表达;同时上调Hmox1、Tgfβ、Igf1和Creb1等抗炎基因的表达。此外,F4-6处理的小胶质细胞条件培养液能显着促进N2a细胞的增殖,并可能通过上调Nefh和Dlg4来促进突起的生长。从机理上讲,F4-6显着降低了NF-κB p65蛋白的表达,同时抑制了p65的核转位,导致NF-κB启动的促炎基因转录受到抑制。（5）RNA-seq发现,Ala、Deh和Mix均下调促炎基因和上调抗氧化基因。Mix组的作用比Ala组和Deh组的作用更显着（P<0.05）,其作用不仅仅是简单的Ala和Deh作用的加和。【研究结论】综上所示,本论文首次利用RNA-seq技术,系统的分析了蒙药EW对MCAO/R模型大鼠脑卒中病变区周围细胞的基因表达的调控作用,发现EW显着改善缺血性脑卒中后神经损伤的恢复,并促使小胶质细胞从M1表型极化至M2表型;同时利用UPLC-QTof-MS系统的分析了EW中神经炎症及神经保护等相关的生物活性化合物,发现EW中多种活性化合物组分的协同作用可能是平衡小胶质细胞极化和缺血性脑卒中后的恢复,也验证了EW治疗白脉病（神经系统疾病）的传统功效,为进一步研究EW甚至其他传统药物的治疗机理提供了重要的证据。
张伟[2]（2021）在《参附汤对脑缺血后血脑屏障保护的协同增效作用以及机制研究》文中研究指明背景:脑卒中在中医学上又称为中风,是全球首要致残因素,也是我国首位致死因素,其中缺血性脑卒中的发病率占卒中总数的86%。针对如此高发病率和高死亡率的疾病,目前国际公认的治疗方法是静脉溶栓和/或血管内治疗,但是其只有3-4.5小时的治疗时间窗,限制了疾病的治疗。研究证明,血脑屏障（Blood-brainbarrier,BBB）作为脑组织和血液之间的屏障,通过维持其结构和功能的完整性,对缺血性脑卒中的治疗有着重要作用。参附汤作为益气温阳固脱的代表方剂,在中国古代就有用参附汤治疗中风的记载,《冯氏锦囊·杂症》中记载:证见中风,手撒口开,遗尿,参附汤用之。目前有研究显示人参和附子中的活性单体对脑缺血后的BBB有保护作用,但是参附汤相比人参和附子单味中药对BBB的保护是否有协同增效作用,是否可以通过脂肪酸氧化（Fatty acid oxidation,FAO）机制发挥作用,目前有一定的研究空间。目的:为探讨参附汤对脑缺血后BBB的保护是否有协同增效作用,本课题首先通过体内实验从小鼠BBB渗透性和紧密连接蛋白的表达方面进行验证;然后通过体外实验,构建体外BBB模型,进一步观察参附汤含药血清对氧糖剥夺再复氧（OGD/R）后BBB渗透的影响;最后通过体内实验初步从FAO过程的限速酶肉碱棕榈油转移酶IA（CPT1A）表达方面研究参附汤的作用机制。本课题基于古方的临床运用基础,通过实验探索益气温阳方剂参附汤对脑缺血再灌注损伤后BBB的保护是否有协同增效作用,以及具体的作用机制。方法:（1）建立小鼠大脑中动脉阻塞缺血再灌注[MCAO（I/R）]模型和分组:建模在显微镜辅助下进行,分离小鼠颈部肌肉后,将线栓从颈外动脉插入,经颈内动脉进入大脑前动脉,阻断来自栓塞一侧的大脑前动脉的血供,同时阻塞接受后交通动脉血供的颈内动脉颅内段,缺血1小时后拔栓再灌注。将所有小鼠分为5组:SHAM组、MCAO组、MCAO+红参组（HS组）、MCAO+附子组（FZ组）和MCAO+参附组（SF组）。（2）体内实验探索红参和附子单味中药对脑缺血再灌注损伤后的BBB通透性和紧密连接蛋白的影响,以及红参和附子配伍后的参附汤与各单味药比较是否具有协同增效作用:对MCAO造模后15分钟的小鼠,进行对应药物灌胃处理,即HS组进行单味红参灌胃,FZ组进行单味附子灌胃,SF组进行参附汤灌胃。通过免疫荧光法检测免疫球蛋白（IgG）、微管相关蛋白2（MAP2）和闭合蛋白-5（Claudin-5）表达;蛋白质印迹法（Western Blot,WB）检测紧密连接蛋白Claudin-5、咬合蛋白（Occludin）和闭合小环蛋白1（ZO-1）的表达。（3）体外实验进一步确认参附汤对BBB通透性的影响:用脑微血管内皮细胞（bEnd.3）建立体外BBB单层培养模型。用从动物体内提取且经过灭菌处理的参附汤含药血清,于造模第三天对模型进行预处理,将造模完成的BBB模型放入低氧仓进行1小时的氧糖剥夺（OGD）,再经过2小时复氧处理,模拟脑缺血再灌注损伤,复氧时用参附汤含药血清对损伤的体外BBB模型进行干预治疗。用异硫氰酸荧光素标记的葡聚糖（FITC-dextran）作为荧光探针,检测BBB的通透性。（4）研究FAO机制在参附汤保护缺血性中风后BBB中的作用:具体造模、分组和给药方式与体内实验同,用免疫荧光技术和蛋白印迹技术检测FAO的速率控制酶CPT1A的表达,通过CPT1A表达分析给药组和模型组,以及不同给药组之间的表达差别。判断参附汤在FAO过程中是否有协同增效作用。结果:（1）建立小鼠MCAO（I/R）模型和分组:建模以后用激光散斑成像技术和Longa评分法评价建模成功与否,最终纳入实验组的所有MCAO模型均符合标准,证明动物造模成功。分组为SHAM组、MCAO组、MCAO+红参组（HS组）、MCAO+附子组（FZ组）和MCAO+参附组（SF组）共五组,每组10只。（2）体内实验探索红参和附子单味中药对脑缺血再灌注损伤后的BBB通透性和紧密连接蛋白的影响,以及参附汤的协同增效作用:与SHAM组相比,其余四组均有较明显的IgG表达,说明造模后存在BBB通透性增加现象。与MCAO组相比,给药组（HS组、FZ组和SF组）的IgG渗透明显降低（P<0.01）,且差异具有统计学意义。但是就目前数据而言,无法确定参附汤干预治疗的脑缺血后BBB保护作用是否优于单独的红参或附子用药,需要进一步检测。下面从紧密连接蛋白Claudin-5的荧光表达上进一步分析差异,结果显示所有经过MCAO（I/R）方式造模的组别中Claudin-5表达水平均低于SHAM组,说明造模后出现BBB的损伤。与MCAO组相比较,所有给药组（HS组、FZ组和SF组）的Claudin-5的表达水平均有较大程度提高（P<0.01）,差异具有统计学意义。进一步通过分析SF组与HS组、FZ组的差异,发现参附汤用药对紧密连接蛋白Claudin-5的表达高于红参和附子单独用药的表达（P<0.01）,差异具有统计学意义。进一步通过WB技术检测紧密蛋白Occludin、ZO-1和Claudin-5的表达。实验结果显示,HS组和FZ组的Occludin表达与MCAO组的差异无统计学意义,但是SF组Occludin的表达明显高于MCAO组,效果较突出（P<0.01）,差异具有统计学意义。在Claudin-5的表达上,HS组与FZ组与MCAO模型组的差异无统计学意义,但SF组的表达比MCAO组强（P<0.05）,且差异具有统计学意义。SF组的ZO-1表达明显高于MCAO组（P<0.01）,差异具有统计学意义。与Occludin和Claudin-5表达相同,HS组和FZ组与MCAO组相比无明显差异。（3）体外实验进一步确认参附汤对BBB通透性的影响:实验发现BBB的跨膜电阻大约在建模的第三天增加明显,建模的第5-6天达到最高峰,提示建模成功。在电阻达到峰值时,进一步通过4h渗漏实验发现,4h后小室内外液面下降小于0.1 mm,进一步证实体外BBB模型建成。进一步检测FITC-dextran急性期的渗漏情况,结果显示参附汤含药血清干预对OGD/R造成的BBB损伤有所降低,提示参附汤的BBB保护作用。进一步论证发现,参附汤血清干预的各组均比OGD模型组的FITC-dextran 的渗透率低（P<0.05）,且差异具有统计学意义,其中以 20%高剂量参附汤血清组的作用最显着（P<0.01）,统计学差异明显。进一步分析不同浓度参附汤血清组之间的差异,发现5%参附汤血清组和10%参附汤血清组与20%参附汤血清组相比无明显区别,差异无统计学意义。但是20%参附汤血清组的渗透率比5%参附汤血清组和10%参附汤血清组的低（P<0.05）,差异有统计学意义。判断20%浓度的参附汤对OGD处理的体外BBB保护作用更强。但鉴于附子有一定毒副作用,参附汤含药血清的浓度与BBB保护程度之间的关系有待进一步商榷。（4）研究FAO机制在参附汤保护缺血性中风后BBB中的作用:免疫荧光检测结果显示,HS组、FZ组和SF组的CPT1A表达均高于MCAO组（P<0.01）,差异具有统计学意义。进一步论证给药组之间是否有差异,将HS组和FZ组分别与SF组进行比较,发现SF组的CPT1A表达明显高于其他两组（P<0.01）,差异具有统计学意义。证明在FAO的过程中,红参与附子协同作用的效果优于其单独作用的效果。WB结果显示,通过MCAO造模后,血管内皮细胞的FAO水平降低,除SHAM组以外,各组的CPT1A表达均有所降低。但是与MCAO组相比,给药处理的HS组、FZ组和SF组的CPT1A表达水平有所提升（P<0.05）,差异具有统计学意义。结论:1、研究发现参附汤对脑缺血再灌注损伤后的BBB具有保护作用,参附汤与方中各个单味药相比具有协同增效作用。2、初步作用机制的研究结果显示,SF组能够增加FAO限速酶CPT1A的表达,且与各个单味药比较具有协同增效作用,说明参附汤对BBB的保护可能是通过FAO机制,但是具体上下游通路有待进一步探究。
高强[3]（2021）在《星蒌承气汤治疗急性缺血性卒中痰热腑实证机制研究》文中指出急性缺血性脑卒中（Acute Ischemic Stroke,AIS）,即急性脑梗死,中医称缺血性中风,是脑组织因局部的血流循环障碍缺血、缺氧而发生的软化、坏死。目前溶栓是治疗缺血性卒中急性期最快、最有效的方法,但由于适应证严格、时间窗短、出血和再灌注损伤风险高,其临床效果受到限制。基础与临床研究证实,中医药治疗中风独具优势。中医认为痰热腑实证是缺血性中风急性期最为常见的证型,而化痰通腑法代表方星蒌承气汤是治疗中风急性期痰热腑实证的代表性方剂。星蒌承气汤“脑病治肠”、“上病治下”的中医理论与现代医学提出的“菌-肠-脑轴”具有异曲同工之妙。诸多临床试验及系统性综述已证实星蒌承气汤治疗缺血性卒中的确切临床疗效与神经保护作用,但是其效应机制研究尚且不足。因此本文基于网络药理学及肠道微生态理论,深入探讨缺血性中风的肠道微生态机制及化痰通腑法代表方星蒌承气汤治疗中风痰热腑实证的效应机理。目的:基于中医“上病治下”理论与现代医学“菌-肠-脑轴”理论,（1）通过中药网络药理学与分子对接技术全面探讨星蒌承气汤治疗缺血性卒中的多组分、多靶点、多通路机制;（2）明确具有“化痰通腑”作用的星蒌承气汤对急性缺血性中风痰热腑实证小鼠模型的神经保护作用,并验证网络药理学研究的关键靶点与通路;（3）探讨星蒌承气汤对急性缺血性中风痰热腑实证小鼠模型肠道菌群的影响,探讨其治疗中风痰热腑实证“通腑”与“通便”差异的肠道微生态机制;（4）观察星蒌承气汤对伪无菌小鼠急性缺血性中风模型菌-肠-脑轴的影响,验证星蒌承气汤通过直接影响肠道菌群而改善脑卒中预后的假说。方法:（1）借助TCMSP、BATMAN-TCM、ETCM及TCMID等数据库收集星蒌承气汤活性成分及作用靶点,并应用STITCH等对未找到靶点的化合物进行靶点预测。通过6个数据库挖掘缺血性卒中的靶点。通过GO和KEGG富集对交集靶点进行高级功能分析,并用cytoscape3.6.0构建PPI、化合物-靶点及药物-靶点-通路网络。最后进行分子对接验证。（2）雄性C57BL/6小鼠随机分为:假手术（Sham）组、模型（MCAO）组、星蒌承气汤（XCD）组、尼莫地平（Nim）组及舒泰清（PGE）组,通过制备高脂低纤维饮食复合线栓法的小鼠急性缺血性中风痰热腑实证模型,采用神经功能评分、除胶实验、TTC和TUNNEL染色,综合评价星蒌承气汤的神经保护作用,并运用ELISA、W estern blot等技术验证网药关键靶点与通路;（3）雄性C57BL/6小鼠随机分为:Sham组、MCAO组、XCD组、Nim组与PG E组,通过制备高脂低纤维饮食复合线栓法的小鼠急性缺血性中风痰热腑实证模型,采用高通量16srDNA基因测序、代谢组学技术、免疫组化、免疫荧光、ELISA及流式多因子技术分别对肠道菌群、短链脂肪酸（SCFAs）及其受体GPR43、神经-内分泌-免疫途径相关指标（NE及TH、血清MTL、脑IBA-1及GFAP、血清炎症因子）进行分析;（4）雄性C57BL/6小鼠在术前14天服用多种抗生素剔除肠道菌群后,随机分为:伪无菌假手术（ABX-Sham）组、伪无菌模型（ABX-MCAO）组以及伪无菌中药（ABX-XCD）组,通过神经功能评分、除胶实验、TTC染色以及高通量16srDNA基因测序、代谢组学技术、免疫组化、免疫荧光、ELISA及流式多因子技术,观察中药对伪无菌小鼠菌-肠-脑轴相关指标的影响。结果:（1）网络药理学及分子对接结果表明,星蒌承气汤包含51个活性成分及44个治疗缺血性卒中的交集靶点。高级功能分析显示星蒌承气汤抗缺血性卒中的机制与脂多糖介导的信号通路、凋亡过程的调控、炎症反应、内皮屏障的建立以及对脂肪酸的反应有关。星蒌承气汤发挥作用的有10条关键KEGG信号通路。PPI网络分析得到AKT 1,PTGS2,TNF,TP53,CASP3,IL1B等关键靶点。分子对接验证了星蒌承气汤活性成分与关键靶点具有良好的对接能力。（2）星蒌承气汤神经保护作用及对网络药理学关键靶点及通路的影响:①神经功能评分:与MCAO组相比,XCD组及Nim组术后48h及72h Longa评分降低（P<0.05）,PGE组未见变化（P>0.05）。②除胶实验:XCD组和Nim组术后48和72h的接触和去除胶带时间缩短（P<0.05）,PGE组未见变化（P>0.05）。③TTC染色:XCD组梗死面积下降（P<0.05）,Nim组及PGE组未见变化。④TUNNEL:MCAO组梗死区细胞凋亡明显增加,XCD组和Nim组TUNEL阳性染色减少（P<0.05）。⑤网络药理学验证:XCD组及Nim组TNF-α含量具有下降趋势（P>0.05）;XCD组p-AKT、PI3K及NF-κB蛋白表达具有升高趋势。AKT蛋白表达组间未见明显变化（P>0.05）。（3）星蒌承气汤对中风急性期痰热腑实证小鼠菌-肠-脑轴影响:①肠道菌群:与MCAO组相比,XCD组α多样性有升高趋势,Nim组及PGE组无显着变化。β多样性显示MCAO组与Sham组PCoA曲线有显着差异（P<0.05）。MCAO组拟杆与变形杆菌门显着增加,厚壁菌门显着减少;XCD组拟杆菌比例显着降低,疣微菌门显着增加,Nim组变形菌门显着增加,厚壁菌门进一步降低,PGE组菌群组成与MCAO相似,变形杆菌略降低。此外,XCD组Akkermansia比率增加,Nim组Klebsiella增加最为显着,而 PGE 组 Parabacteroides 和Escherichia/Shigella增加较为显着。②SCFAs 及GPR43:MCAO组的SCFAs含量显着降低（P<0.05）,XCD组丁酸含量增加（P<0.05）。XCD组及Nim组GPR43表达显着降低（P<0.05）。③自主神经途径:XCD组NE有下降趋势,PGE组NE有上升趋势（P>0.05）。MCAO组及PGE组TH蛋白表达上升（P<0.05）,XCD组及Nim组TH表达未见显着变化趋势（P>0.05）。④神经内分泌途径:MCAO组MTL显着升高（P<0.05）,PGE组有升高趋势（P>0.05）,XCD组及Nim组MTL显着下降（P<0.05）。⑤免疫途径:MCAO组星形胶质细胞增生、肥大,显着活化,小胶质细胞迅速从“静息态”转变为“激活态”,从梗死周边区域向病变部位募集,而XCD组星形胶质细胞及小胶质细胞活化较MCAO组降低。MCAO 组 TNF-α、IL-17A、IL-22 升高（P<0.05）,而 XCD 和 Nim 组的 IL-10显着升高（P<0.05）,TNF-α、IL-17A 和 IL-22 降低。（4）星蒌承气汤对中风急性期痰热腑实证伪无菌小鼠菌-肠-脑轴影响:①神经保护作用:与ABX-MCAO组相比,ABX-XCD组在Longa评分、除胶实验及TTC染色等方面未见显着变化（P>0.05）。②肠道菌群:ABX-MCAO和ABX-XCD组的α多样性低于ABX-Sham,PCoA分析显示ABX-XCD组肠道菌群的β多样性和组成与AB X-MCAO组相似。相对丰度结果显示,在ABX组中,小鼠的微生物区系均以变形杆菌为特征,这与正常小鼠有显着差异。LEfSe分析显示MCAO组富集了更多的病原体或机会性病原体,包括Bacteroidetes,EscherichiaShigella与Helicobacter,而 XCD富集了Verrucomicrobia和Akkermansia等有益菌群。条件致病菌如Streptococcus,Lact ococcus,Morganella,Klebsiella,Proteobacteria,Enterobacteriaceae 等在 ABX-XCD组富集显着增多。PGE组富集菌群主要有oSelenomonadales、cNegativicutes、gRomboutsia及fPeptostreptococcaceae。③SCFAs 及 GPR43:ABX-XCD 的丙酸显着下降（P<0.05）。ABX-MCAO 组 GPR43 表达显着上调（P<0.05）,ABX-XCD 组 G PR43表达显着降低（P<0.05）。④自主神经途径:ABX-XCD组NE含量未见显着变化（P>0.05）,TH蛋白表达未见显着变化（P>0.05）。⑤神经内分泌途径:ABX-MCAO组MTL升高趋势（P>0.05）,ABX-XCD组MTL未见显着变化（P>0.05）。⑥免疫途径:ABX-XCD组IL-22显着升高（P<0.05）,IL-17A有降低趋势（P>0.05）,余未见显着变化趋势（P>0.05）。ABX-MCAO组星形胶质细胞表达显着升高,小胶质细胞显着活化,ABX-XCD组星形胶质细胞及小胶质细胞活化较ABX-MCAO组有降低趋势。结论:星蒌承气汤对急性缺血性中风痰热腑实证小鼠具有一定神经保护作用,其效应机制具有多成分、多靶点、多通路特点。其对伪无菌小鼠中风模型则未发现确切的脑保护效应,说明其脑保护的部分机制是通过改善肠道微生态实现的。其具体机制包括提高肠道短链脂肪酸,尤其是丁酸含量,增强肠道短链脂肪酸受体GPR43表达,增加血液IL10、减少TNF-α等炎性因子及MTL水平,最终减少梗死区域胶质细胞活化和神经细胞凋亡,从而达到中风脑保护的作用。本研究成果对中风病的临床治疗具有重要的指导意义——对于中风后便秘患者,仅仅“通便”治疗是不够的,需要结合患者的证候特点进行中医药“化痰通腑”治疗,才能取得好的临床效果。
周东蕊[4]（2021）在《血塞通对MCAO大鼠和OGD/R损伤SH-SY5Y细胞LINGO-1，EGFR，PI3K/AKT通路以及PTEN和GSK-3β的研究》文中认为研究目的:1.观察血塞通注射液对大鼠大脑中脉闭塞（MCAO）28天神经功能的影响,探究血塞通对损伤皮层LINGO-1,EGFR,PI3K/AKT通路以及PTEN和GSK-3β的调节作用。2.观察血塞通注射液对体外培养SH-SY5Y细胞氧糖剥夺再灌注（OGD/R）损伤的保护作用,验证血塞通注射液对OGD/R损伤的SH-SY5Y细胞PI3K/AKT通路以及PTEN和GSK-3β的调节作用。研究方法:1.采用改良的Longa法对SD大鼠进行MCAO模型的制备,假手术组大鼠只进行皮肤切开以及钝性分离血管和神经,不插入栓线。大鼠MCAO模型的成功建立评价方法选用TTC染色法。2.根据术后Longa评分将手术组大鼠随机分为模型组,血塞通小剂量组,血塞通大剂量组和尼莫地平组（即阳性药物组）。假手术组和模型组注射同等剂量的生理盐水,其余组别给与相对应的药物治疗。术后1-28天,每日清晨给药前对大鼠进行称重,根据mNSS神经功能评分表进行评分。评价血塞通对大鼠MCAO术后不同时间点（7天,14天和28天）神经功能和体重恢复的疗效。MCAO术后28天,将所有大鼠麻醉后断头取脑,采用HE染色观察大鼠大脑皮层的病理变化,采用Western blot法检测皮层梗死侧的SYN和PSD-95的蛋白表达变化,探索血塞通注射液对皮层梗死区的神经保护作用。采用qRT-PCR、免疫组织化学（IHC）和Western Blot检测MCAO术后28天大鼠大脑皮层LINGO-1,EGFR以及PI3K/AKT的mRNA和蛋白表达,探索血塞通的神经保护机制。3.采用qRT-PCR和Western Blot检测MCAO术后28天大鼠大脑皮层PTEN和GSK-3β的mRNA和蛋白表达,进一步探索血塞通的神经保护机制。4.体外培养SH-SY5Y细胞,CCK-8法确定最佳缺氧时间,建立OGD/R损伤SH-SY5Y细胞模型,CCK-8法确定血塞通和bpV的最适药物浓度。将SH-SY5Y细胞随机分为正常组,模型组,血塞通组,bpV组以及血塞通+bpV组等5个组别,按照不同组别给与相对应的药物,正常组给与无血清的EBSS液,模型组给与无糖的Earle’s液。镜下观察血塞通对OGD/R损伤SHSY-5Y细胞生长状态的影响。采用qRT-PCR和Western Blot检测OGD/R损伤SH-SY5Y细胞的PI3K/AKT以及PTEN和GSK-3β的mRNA和蛋白表达对体内实验进一步验证,观察当使用bpV时,PTEN及其下游的PI3K/AKT通路、GSK-3β mRNA和蛋白的表达情况。研究结果:1.TTC染色显示:假手术组大鼠右脑为均一的红色,表明脑组织并未损伤;手术组大鼠由于大脑右侧被梗塞而出现广泛的白色,表明MCAO可诱导大鼠右侧脑组织梗死。研究结果证明大鼠MCAO模型成功建立。2.各组大鼠的体重在造模前未见显着的差异（P>0.05）;在MCAO术后第7天和第14天,各组大鼠体重均明显低于假手术组（P<0.05或者P<0.01）;术后第28天,除模型组外,各药物治疗组大鼠的体重与假手术组没有明显差异（P>0.05）。术后第14天的假手术组大鼠的体重高于第7天假手术组的体重,余组别两个时间点比较未见明显差异（P>0.05）;而第28天各组大鼠的体重均显着高于第14天相同组别的大鼠（P<0.01）。手术组各组大鼠苏醒后EZ-Longa评分组间未见明显差异（P>0.05）。在第7天的mNSS评分中,血塞通大剂量组明显低于模型组（P<0.05）。药物治疗后14天,血塞通治疗组（包括小剂量和大剂量）和尼莫地平组大鼠的mNSS评分与模型组相比显着降低（P<0.05）。而药物治疗后28天,血塞通治疗组大鼠的mNSS评分与模型组相比明显降低（P<0.05或P<0.01）;血塞通大剂量组在降低大鼠的mNSS评分方面显着优于血塞通小剂量组和尼莫地平组（P<0.05）。这说明血塞通治疗可长期缓解MCAO大鼠的神经功能障碍,且具有剂量依赖性。MCAO术后相同组别的mNSS评分在不同时间点的比较显示:第7天和第14天同一组别的mNSS评分无显着差异（P>0.05）;除尼莫地平组外,第28天的mNSS评分显着高于同一组别第14天的mNSS评分（P<0.05）。MCAO术后28天,HE染色结果显示:假手术组大鼠的脑组织形态和细胞结构完整。模型组大鼠脑组织呈大面积损伤,组织着色较浅,神经细胞坏死、核固缩、深染;治疗组大鼠的脑组织也出现一定的损伤,但是和模型组相比,损伤程度较轻,神经细胞的数量也多;与血塞通小剂量组和尼莫地平组相比,血塞通大剂量组的脑组织结构更完整,神经细胞数量亦明显增多。MCAO术后28天,与模型组相比较,各治疗大鼠的PSD-95蛋白表达显着升高（P<0.01）;对各治疗进行比较发现,血塞通大剂量组在提高PSD-95表达方面显着优于血塞通小剂量组和尼莫地平组（P<0.05或P<0.01）。与模型组相比,血塞通大剂量组和尼莫地平组可显着提高大鼠大脑皮层SYN蛋白的表达（P<0.05或P<0.01）;与血塞通小剂量组相比,血塞通大剂量组在提高SYN蛋白表达方面具有显着的优势（P<0.05）。MCAO术后28天,qRT-PCR结果显示:各组LINGO-1,EGFR,PI3K以及AKT mRNA表达无显着变化（P>0.05）。IHC结果显示:LINGO-1的阳性颜色为深棕色,假手术组大鼠脑组织LINGO-1的阳性表达较少;各治疗组大鼠脑组织LINGO-1的阳性表达显着低于模型组的阳性表达（P<0.01）;而对各治疗组之间皮层LINGO-1的阳性表达进行比较发现,组间未见显着差异（P>0.05）。各组大鼠脑组织P-EGFR,P-PI3K以及P-AKT的阳性颜色均为深棕色,假手术组大鼠脑组织P-EGFR,P-PI3K以及P-AKT呈低表达;各治疗组大鼠大脑皮层P-EGFR,P-PI3K以及P-AKT的表达显着高于模型组（P<0.01）;对各治疗组之间的P-EGFR,P-PI3K以及P-AKT的表达进行比较发现,组间未见显着差异（P>0.05）。Western blotting结果显示:各治疗组大鼠的Lingo-1蛋白的相对表达相较于模型组显着下降（P<0.01）,接近正常水平;而各治疗组之间进行比较,Lingo-1的表达未见明显差异（P>0.05）。各治疗组的P-EGFR,P-PI3K以及P-AKT高于模型组（有趋势,或P<0.05,或P<0.01）;治疗组之间比较无明显差异（P>0.05）。3.MCAO术后28天,qRT-PCR结果显示:除血塞通大剂量组的大鼠脑组织的PTEN mRNA表达明显高于假手术组的mRNA（P<0.05）,其余各组大鼠脑组织的PTEN mRNA表达组间比较未见显着差异（P>0.05）;各组大鼠脑组织的GSK-3β mRNA表达组间亦未见显着差异（P>0.05）。Western blotting结果显示:与模型组相比,各治疗组的P-PTEN和P-GSK3β相对蛋白表达水平显着升高（P<0.05或P<0.01）;而各治疗组之间的P-PTEN和P-GSK3β相对蛋白水平无明显差异（P>0.05）。4.CCK-8法检测SH-SY5Y细胞的最佳缺氧时间为7 h;血塞通和bpV对OGD/R损伤的SH-SY5Y细胞的最适药物浓度分别为20μg/ml和1μmol/L。通过镜下观察血塞通,bpV以及血塞通+bpV对OGD 7 h/R 24 h培养的SH-SY5Y细胞生长状态的影响发现,血塞通组、bpV组以及血塞通+bpV组的贴壁细胞数量较模型组多,大部分细胞呈多边形或梭形,部分细胞突触缩短,但大部分细胞突触仍存在,各治疗组之间的细胞形态未见明显的差异。SH-SY5Y细胞OGD 7h/R24 h培养后,qRT-PCR结果显示:正常组,模型组,血塞通组,bpV组以及血塞通+bpV组细胞的PI3K,AKT,PTEN和GSK-3β mRNA的水平未见显着差异（P>0.05）。Western blotting检测结果显示,与模型组相比,各治疗组大鼠大脑皮层的 P-PI3K/PI3K,P-AKT/AKT,P-PTEN/PTEN 以及 P-GSK-3β/GSK-3β蛋白水平显着升高（P<0.05,或P<0.01）;各治疗组之间的P-PI3K/PI3K,P-AKT/AKT,P-PTEN/PTEN以及P-GSK-3β/GSK-3β蛋白水平比较未见明显差异（P>0.05）。研究结论:1.血塞通可以长期缓解MCAO大鼠的脑组织损伤并促进神经重塑和再生从而增加MCAO术后大鼠的体重,改善MCAO大鼠的神经功能。2.血塞通发挥的神经保护作用机制包括抑制LINGO-1表达,激活EGFR和PI3K/AKT信号通路,抑制PTEN的表达进一步激活PI3K/AKT通路,从而抑制下游GSK-3β的活性,长期促进突触的重塑和再生。3.血塞通可以缓解OGD/R诱导的SH-SY5Y细胞损伤,通过抑制PTEN的活性,激活其下游PI3K/AKT/GSK-3β信号通路,发挥长期的神经保护作用。
马岱朝[5]（2021）在《丹参多酚酸通过小胶质细胞P2X7/NLRP3/GSDMD通路减轻实验性脑缺血再灌注损伤研究》文中进行了进一步梳理目的:大量研究表明丹参多酚酸可以改善缺血性脑卒中的预后结局,并通过多种药理作用及机制发挥神经保护作用,但其潜在的作用机制有待进一步阐明。小胶质细胞参与脑梗死后的炎症反应,而小胶质细胞中由NLRP3炎症小体及其上游的P2X7受体和下游的GSDMD分子构成的P2X7/NLRP3/GSDMD通路介导脑梗死后的炎症级联反应。本研究建立大鼠大脑中动脉闭塞/再通（MCAO/R）模型和大鼠原代神经元与原代小胶质细胞共培养缺氧缺糖/复氧复糖（OGD/R）模型,通过观察丹参多酚酸的注射剂型注射用丹参多酚酸盐（SAFI）对MCAO/R模型神经功能评分、梗死体积、神经元凋亡、炎症因子表达及OGD/R模型中神经元细胞活力与凋亡的影响,并且观察SAFI对MCAO/R模型脑皮质及OGD/R模型中小胶质细胞中P2X7/NLRP3/GSDMD通路中相关分子的表达的影响,旨在探讨SAFI通过抑制小胶质细胞P2X7/NLRP3/GSDMD通路对实验性脑缺血再灌注（I/R）损伤的神经保护作用及分子机制。材料与方法:1.SAFI对MCAO/R模型大鼠神经保护作用（1）将58只SD大鼠随机分为2部分,第一部分大鼠随机分2组:I/R组（MCAO/R+生理盐水）,I/R+SAFI组（MCAO/R+SAFI）,于术后第1至第7天每天进行一次神经功能评分,于术后第7天获取脑组织测量梗死体积。实验第二部分动物随机分为四组:Control组（假手术+生理盐水）,SAFI组（假手术+SAFI）,I/R组（MCAO/R+生理盐水）,I/R+SAFI组（MCAO/R+SAFI）,该部分大鼠3天后取脑用于组织学（HE、免疫组化、TUNEL、荧光染色）检测及RT-PCR及western blot检测。（2）使用尼龙线由颈外动脉插入至大脑中动脉（MCA）阻断MCA血供引起供血区域缺血损伤,封堵120分钟后拔出尼龙线恢复血流,建立MCAO/R模型。通过观察MCAO/R模型大鼠梗死体积、神经功能评分、HE染色组织病理,免疫组织化学检测炎症因子表达、TUNEL检测神经细胞凋亡情况,评估SAFI对大鼠缺血再灌注损伤的神经保护作用。2.SAFI对经OGD/R处理的神经元细胞活力与凋亡影响的研究（1）取新生SD乳鼠分离提取原代神经元细胞及原代小胶质细胞,免疫荧光检测神经元标记物MAP2的表达鉴定神经元,免疫荧光检测小胶质细胞标记物CD11-b的表达鉴定小胶质细胞。MTT法检测不同浓度SAFI对OGD处理的大鼠原代神经元细胞和原代小胶质细胞的细胞活性筛选SAFI最佳药物浓度。（2）根据细胞类型,分为单纯神经元培养组与小胶质细胞+神经元共培养组。单纯神经元培养组分为三个亚组:Neuron组（神经元正常条件下培养）,Neuron+OGD/R组（神经元行OGD/R处理）,Neuron+OGD/R+SAFI组(神经元行OGD/R及SAFI处理。处理方法:在Neuron+OGD/R+SAFI组,将原代神经元接种于培养板中,给予SAFI预处理24 h,将培养换至无葡萄糖的DMEM于95%N2+5%CO2环境中（培养液含同浓度SAFI）培养3h,接着将细胞于正常培养条件下继续培养24h后收集细胞用于检测;Neuron+OGD/R组不加SAFI,培养条件同前;Neuron组不加SAFI于正常培养条件下培养。小胶质细胞+神经元共培养组分为三个亚组:Neuron+Microglia组（神经元与小胶质细胞正常条件下共培养）,Neuron+Microglia+OGD/R组（神经元与小胶质细胞共培养并行OGD/R处理）,Neuron+Microglia+OGD/R+SAFI组（神经元与小胶质细胞共培养并行OGD/R及SAFI处理）。处理方法:在Neuron+Microglia+OGD/R+SAFI组,将原代小胶质细胞和原代神经元细胞利用Transwell共培养体系培养。神经元细胞接种于下室,小胶质细胞接种于上室,用SAFI于正常培养条件下预处理24 h后,将细胞换至无葡萄糖的DMEM（含相同浓度的SAFI）于95%N2及5%CO2环境中,37℃培养3 h构建OGD模型,于正常培养条件下继续培养24 h后,收集神经元细胞及培养基用于检测;Neuron+Microglia+OGD/R组不加SAFI,培养条件同前;Neuron+Microglia组不加SAFI于正常培养条件下培养。（3）经OGD/R处理细胞,通过检测培养基中LDH水平反映细胞受损程度,通过CCK-8法检测各组神经元细胞的活力,采用流式细胞术检测神经元细胞的凋亡等方法,来观察SAFI对单纯培养及与小胶质细胞共培养的神经元的保护作用。3.SAFI对MCAO/R模型及OGD/R模型小胶质细胞NLRP3炎症小体激活与焦亡相关蛋白GSDMD影响的研究（1）动物造模及分组同上。将共培养细胞分为4组:分别为Control组（神经元与小胶质细胞正常条件下共培养）,SAFI组（神经元与小胶质细胞正常条件下共培养并加入SAFI）,OGD/R组（神经元与小胶质细胞共培养并行OGD/R处理）,OGD/R+SAFI组（神经元与小胶质细胞共培养并行OGD/R处理且加入SAFI干预）。（2）将体外培养的原代小胶质细胞和体外培养的大鼠原代神经元细胞利用Transwell共培养体系培养,神经元细胞种于下室,小胶质细胞接种于上室,用50ug/ml浓度的SAFI于正常培养条件下预处理24 h,后将细胞换至无葡萄糖的DMEM（含相同浓度的SAFI）于95%N2+5%CO2环境中,37℃培养3 h构建OGD模型,于正常培养条件下继续培养24 h后收集神小胶质细胞。OGD/R组不加SAFI,培养条件同前。SAFI组加SAFI于正常培养条件下培养。Control组不加SAFI于正常培养条件下培养。（3）构建MCAO/R模型及小胶质细胞OGD/R模型后,采用免疫荧光法观察皮质小胶质细胞NLRP3的表达情况,采用western blot法检测脑组织中及培养的小胶质细胞中NLRP3炎症小体激活与焦亡相关蛋白GSDMD表达及裂解的水平,采用RT-PCR检测脑组织中及培养的小胶质细胞中NLRP3炎症小体相关的m RNA表达和GSDMD的m RNA表达水平。（4）采用尼日利亚菌素和尿酸单钠作NLRP3炎症小体激活剂,在培养小胶质细胞后加入脂多糖激惹细胞,用PBS洗脱脂多糖后以SAFI处理细胞,然后以尼日利亚菌素或尿酸单钠在无血清培养基中处理细胞,然后裂解细胞后进行western blot检测。4.SAFI对MCAO/R模型及OGD/R模型NLRP3炎症小体激活上游的膜离子通道P2X7表达的影响及SAFI组分与P2X7的分子对接（1）MCAO/R造模及OGD/R模型制备及分组同上。（2）采用RT-PCR、Western blot及免疫荧光方法,观察SAFI对大鼠MCAO/R脑皮质及OGD/R模型中与神经元共培养的小胶质细胞中P2X7表达的影响。（3）采用计算机分子对接方法,从RCSB数据库下载大鼠P2X7的X-ray晶体三维结构文件,通过文献报道获取该蛋白与ATP通过氢键与离子相互作用结合口袋的主要氨基酸残基,运用Discovery Studio4.2软件对蛋白质删除配体处理,利用Auto Dock 4.2.6软件进行加氢、计算电荷、转化格式等处理。从TCMSP数据库、ZINC数据库、Pub Chem数据库获取SAFI主要成分的分子结构。利用Auto Dock软件进行半柔性对接。采用Discovery Studio4.2软件对对接结果进行可视化分析,观察SAFI的主要成分丹酚酸B、丹酚酸D、丹酚酸Y、紫草酸及迷迭香酸与P2X7结合的能力。结果:1.SAFI可改善大鼠脑MCAO/R模型神经功能缺损并减小脑梗死体积,并可减轻MCAO/R模型脑组织病理损伤。2.SAFI可减少大鼠脑MCAO/R模型脑皮质炎症因子ICAM-1、IL-1β、IL-18、TNF-α的表达水平,并减少MCAO/R模型皮质神经细胞凋亡。3.SAFI对OGD/R处理的单纯培养及与小胶质细胞共培养神经元的细胞损伤有减轻作用,并可改善细胞活力,且能降低凋亡率。4.在共培养条件下经OGD/R处理,小胶质细胞对神经元有细胞毒性作用,而SAFI可能具有减轻小胶质细胞对神经元的细胞毒性的作用。5.SAFI可以降低大鼠脑I/R损伤后小胶质细胞中NLRP3表达,并可抑制脑I/R损伤后IL-1β及IL-18等促炎性因子的表达。6.SAFI可抑制脑I/R损伤后皮质及与神经元共培养并经OGD/R处理的小胶质细胞中NLRP3炎症小体的激活。7.SAFI可以抑制脑I/R损伤后脑皮质及与神经元共培养并经OGD/R处理的小胶质细胞的焦亡相关蛋白GSDMD的裂解。8.SAFI可以降低脑I/R损伤后皮质及OGD/R处理后的小胶质细胞中NLRP3、ASC、caspase1、IL-1βm RNA的表达水平。9.SAFI可降低MCAO/R模型大鼠脑皮质Iba1及P2X7双标阳性的小胶质细胞的数量,并可降低MCAO/R模型大鼠脑皮质及与神经元共培养并经OGD/R处理的小胶质细胞中P2X7蛋白及m RNA表达。10.SAFI中的丹酚酸D、丹酚酸Y、紫草酸等活性成分可能与P2X7受体具有较好的结合能力。结论:1.抑制炎症反应及减轻神经元凋亡是SAFI治疗缺血性脑卒中发挥神经保护作用的部分药理学基础,抑制炎症反应可能是体现SAFI活血化瘀功效的一个方面。2.SAFI对OGD/R处理的神经元具有直接的和可能通过拮抗小胶质细胞对神经细胞毒性而产生间接的神经保护作用。3.SAFI中的丹酚酸D、丹酚酸Y、紫草酸等活性成分可能有拮抗P2X7受体激活的作用。4.SFAI对脑缺血再灌注损伤具有神经保护作用,部分原因可能是SAFI可抑制小胶质细胞NLRP3炎症小体激活及细胞焦亡。5.SAFI可能通过小胶质细胞P2X7/NLRP3/GSDMD通路抑制NLRP3炎症的激活及细胞焦亡,缓解下游炎症级联瀑布扩大,从而对实验性脑缺血再灌注损伤发挥神经保护作用。
刘璐[6]（2021）在《远隔缺血后处理对脑梗死急性期外周血消退素D1和白三烯B4的影响》文中进行了进一步梳理目的:本研究以急性期脑梗死患者为观察对象,旨在明确以下问题:（1）检测炎症消散因子消退素D1（Resolvin D1,Rv D1）、促炎因子白三烯B4（Leukotriene B4,LTB4）等脂质介质在急性脑梗死患者外周血中随时间及治疗方式变化的表达;（2）探讨远隔缺血后处理（Remote ischemic postconditioning,RIPost C）在急性期脑梗死中是否通过影响炎症消散因子（Specialized pro-resolving mediators,SPMs）而发挥脑保护作用;（3）多种脑卒中危险因素是否影响Rv D1、LTB4、Rv D1/LTB4比值在急性期脑梗死患者外周血中的表达。方法:（1）根据入组标准和排除标准筛选吉林大学第一医院神经内科住院的、发病72h内的急性脑梗死患者,根据患者意愿将其分别纳入常规治疗组与RIPost C组;将同期招募年龄、性别相匹配且无脑梗死及其他炎症相关病史的志愿者纳入对照组。截至2020年11月,共收集常规治疗组68例,RIPost C组38例,对照组20例。对于常规治疗组及RIPost C组均予脑梗死常规治疗方案,即阿司匹林、他汀类降脂药、营养神经及改善循环等药物治疗,RIPost C组在此基础上使用缺血适应仪对双上肢加压,使其血流完全中断,设置缺血5min/再灌注5min为1个循环,5个循环计为一次处理,每天2次,连续7天。记录患者一般资料及治疗前、治疗后1天和7天外周血中性粒细胞（neutrophil count,NE#）与淋巴细胞计数（lymphocyte count,LY#）并计算中性粒细胞与淋巴细胞比值（NLR）。对RIPost C组和常规治疗组患者分别在治疗前及治疗后7天行NIHSS评分以及ADL评分以评估神经功能缺损情况。（2）采集RIPost C组处理前、处理后1天及7天的清晨空腹外周血标本,常规治疗组也在相同时间点采血,对照组仅采空腹血。2小时内处理血样,分离外周血清。使用Elisa法检测外周血清中Rv D1、LTB4的表达,计算Rv D1/LTB4比值,并分析发病时间、治疗前后NIHSS评分、ΔNIHSS、血糖异常、血脂异常等因素对上述指标的影响。（3）使用SPSS 22.0和Graph Pad Prism 7软件进行数据分析和图表制作。结果:（1）RIPost C组患者治疗前后NIHSS评分的改变程度与常规治疗组相比更加显着（P<0.05）。（2）急性脑梗死患者与对照组相比外周血Rv D1升高而LTB4明显降低,均有显着性差异（P<0.05）。RIPost C组患者外周血Rv D1、LTB4浓度较常规治疗组升高,LTB4升高具有统计学意义（P<0.05）。（3）Rv D1、LTB4浓度随脑梗死发病时间而改变。患者在发病第8天的血清Rv D1、LTB4浓度较发病第2-3天升高,尚无显着性差异（P>0.05）。患者在发病第2、3、8天各时间点测得的LTB4浓度差异具有统计学意义（P<0.05）。（4）对于常规治疗组患者:按照治疗前后NIHSS评分将患者分为不同亚组。根据治疗前NIHSS评分,轻度缺血性卒中患者的Rv D1/LTB4比值在治疗后7天高于治疗前、治疗后1天（P<0.05）。治疗前为轻度缺血性卒中患者与中度缺血性卒中患者相比在各时间点测量的Rv D1、Rv D1/LTB4比值浓度均较高,LTB4浓度均较低（P<0.05）。根据治疗后NIHSS评分,治疗后为轻度缺血性卒中患者与中度缺血性卒中患者相比LTB4浓度较低,Rv D1/LTB4值则较高（P<0.05）。患者血糖水平与治疗前后的Rv D1水平呈正相关,治疗前WBC、NE%、NE#、NLR同LTB4浓度呈正相关,治疗前NE%、NE#、NLR同Rv D1/LTB4呈负相关,结果均具有统计学意义（P<0.05）。（5）对于RIPost C组患者:是否在急性脑梗死发病1天内应用RIPost C会影响外周Rv D1、LTB4浓度随时间的改变以及相应的Rv D1/LTB4比值。按照治疗前后NIHSS评分及ΔNIHSS将患者分为不同亚组。根据治疗前NIHSS评分,治疗前为轻度缺血性卒中患者在治疗后7天测定的Rv D1、LTB4比中度缺血性卒中患者高（P<0.05）。根据治疗后NIHSS评分,24分组的缺血性卒中患者的Rv D1、LTB4浓度和Rv D1/LTB4比值高于其余组（P<0.05）。ΔNIHSS 03分组的Rv D1浓度、Rv D1/LTB4比值高于ΔNIHSS 48分组（P<0.05）。RIPost C组中的糖尿病或血脂异常患者的血清Rv D1比血糖、血脂正常患者高,差异均具有统计学意义（P<0.05）。治疗前Rv D1浓度与同型半胱氨酸呈正相关（r=0.356,P=0.028）,治疗后NLR与Rv D1呈负相关（r=-0.345,P=0.034）。结论:（1）远隔肢体缺血后处理有利于急性脑梗死患者的神经功能恢复。（2）Rv D1/LTB4可作为反映急性脑梗死后外周炎症改变的指标之一。（3）远隔肢体缺血后处理改变急性脑梗死患者外周血清中炎症消散相关介质Rv D1、LTB4表达可能是其脑保护作用机制之一。（4）影响急性脑梗死患者外周血清中Rv D1、LTB4浓度改变的因素包括发病时间、治疗前神经功能缺损情况、血糖异常等。（5）影响远隔肢体缺血后处理改变Rv D1、LTB4浓度的因素包括治疗启动时间、处理前神经功能缺损情况、糖尿病、血脂异常、同型半胱氨酸等。
王钟秀[7]（2021）在《缺血性卒中患者静脉溶栓后脑血流自动调节功能变化及影响因素研究》文中进行了进一步梳理第一部分缺血性卒中患者静脉溶栓后脑血流自动调节功能变化特征的研究背景与目的:急性缺血性脑卒中发生后,局部脑组织由于缺血、缺氧,会产生一系列的病理生理变化,包括血管结构和功能的破坏以及修复,而脑血管内皮细胞结构和功能的完整与动态脑血流自动调节（Dynamic cerebral autoregulation,dCA）功能的稳定密切相关,已有研究表明急性缺血性卒中发生后,dCA显着受损,但对于接受静脉溶栓的患者,发病后dCA受损的变化情况目前尚不明确,本部分研究旨在明确静脉溶栓患者dCA的变化特点,为dCA的临床应用奠定基础。方法:本研究为一项前瞻性的临床研究,连续纳入符合条件的诊断为急性缺血性脑卒中并接受急诊静脉溶栓治疗的患者为研究对象,在卒中发病后3个不同时间点（发病后1-2天、3-4天、7-8天）通过经颅多普勒超声监测脑血流速率,无创连续指尖血压监测仪监测动脉血压,采用传递函数分析模型评估dCA功能,同时选取与急性缺血性脑卒中患者年龄、性别相匹配的健康成年人,进行dCA监测,作为对照组数据,探讨不同时间点dCA随时间的变化情况,并进一步分析不同缺血性卒中亚型之间,以及健侧、患侧dCA变化的差异。结果:最终本研究纳入223例缺血性卒中静脉溶栓患者（年龄58.57±10.29岁,男性187例[83.9%]）,其中大动脉粥样硬化型79例（35.4%）,小动脉闭塞型126例（56.5%）,不明原因型18例（8.1%）,110例健康对照组（年龄59.32±11.14岁,男性92例[83.6%]）。发病后1-2天大动脉粥样硬化组患者相位差（Phase difference,PD）健侧（27.83±12.41度）和患侧（26.64±14.80度）dCA显着低于小动脉闭塞组（健侧36.82±10.75度,患侧36.06±11.08度）,其他时间点差异无统计学意义;对于不同的梗死类型,不同时间点健侧、患侧dCA均受损;缺血性卒中静脉溶栓患者发病后1-2天（健侧32.97±20.08度,患侧31.85±20.73度）、3-4天（健侧31.63±18.99度,患侧30.79±20.05度）、7-8天（健侧33.47±18.97度,患侧32.62±21.72度）健侧、患侧dCA不随时间变化而波动,且持续显着低于健康对照组（50.31±15.46度）。结论:缺血性卒中静脉溶栓患者急性期dCA功能显着受损,且受损程度在急性期不随时间变化而波动;不同卒中亚型的缺血性卒中患者静脉溶栓后健侧、患侧dCA功能均有不同程度受损,且大动脉粥样硬化型患者dCA受损最明显。第二部分缺血性卒中患者静脉溶栓后脑血流自动调节功能与临床预后关系的研究背景与目的:在第一部分中,我们明确了缺血性卒中患者静脉溶栓后dCA功能在发病后7-8天内持续受损,既往已有较多研究表明,急性缺血性脑卒中患者dCA功能与临床预后密切相关,但对于接受静脉溶栓的患者,由于超急性期接受了重组组织型纤溶酶原激活剂（Recombinant tissue plasminogen activator,rt-PA）静脉溶栓治疗,rt-PA可能对dCA存在一定程度的影响,rt-PA治疗后,dCA与预后的关系是否发生改变,目前尚不明确。方法:本部分研究以第一部分研究中纳入的诊断为急性缺血性脑卒中并接受急诊静脉溶栓的患者及健康对照组为研究对象,于发病90天由专门的随访人员进行门诊及电话随访,评估改良的Rankin量表（modified Rankin Scale,m RS）,将m RS评分≤2分定义为良好预后,>2分定义为不良预后。比较良好预后组与不良预后组发病后1-2天、3-4天、7-8天组间dCA功能的差异;分别将dCA作为连续变量和二分类变量,采用多因素二元Logistic回归模型分析dCA参数与临床预后间的关系。结果:最终研究共纳入223例接受静脉溶栓的急性缺血性脑卒中患者,良好预后组150例（67.3%）,不良预后组73例（32.7%）,组间比较结果显示,良好预后组与不良预后组发病1-2天、3-4天、7-8天健侧和患侧dCA均低于健康对照组,其中发病1-2天健侧和患侧dCA良好预后组高于不良预后组,发病3-4天、7-8天差异无统计学意义;dCA作为连续变量时,发病1-2天健侧、患侧dCA与临床预后相关（健侧相对危险度[Oddratios,OR]0.965,95%置信区间0.946-0.985,p<0.001;患侧OR 0.959,95%置信区间0.939-0.980,p<0.001）,而发病3-4天、7-8天健侧、患侧dCA与临床预后无明显关联;dCA作为二分类变量时,发病1-2天健侧PD≥30.55度（OR 0.476,95%置信区间0.238-0.952,p=0.036）、患侧PD≥29.51度（OR 0.275,95%置信区间0.130-0.584,p<0.001）是预后良好的独立预测因素,发病3-4天健侧PD≥32.20度（OR 0.390,95%置信区间0.198-0.768,p=0.006）是预后良好的独立预测因素。结论:缺血性卒中患者静脉溶栓后良好预后组与不良预后组在发病1-2天、3-4天、7-8天dCA功能均显着受损,其中发病1-2天的dCA良好预后组优于不良预后组;发病1-2天健侧、患侧dCA与临床预后独立相关,发病1-2天健侧PD≥30.55度、患侧PD≥29.51度是预后良好的独立预测因素。第三部分缺血性卒中患者静脉溶栓后脑血流自动调节功能影响因素的研究背景与目的:DCA是机体内多种神经体液调节因素综合作用的结果,如前所述,脑卒中后dCA受损已得到广泛证实,神经调控是其中的重要组成部分,但截至目前,在动物和临床实验中,交感神经与dCA调控的相关研究结论并不统一,因此二者之间是否存在联系尚不清楚,在本部分研究中,我们将通过研究dCA的神经源性学说及与dCA具有密切关系的临床因素,探讨缺血性卒中患者静脉溶栓后dCA受损的影响因素。方法:以第一部分研究中纳入的诊断为急性缺血性脑卒中并接受急诊静脉溶栓的患者及年龄、性别相匹配的健康成年人（对照组）为研究对象,由于第二部分研究发现发病1-2天dCA与临床预后相关,因此本部分研究重点关注发病1-2天dCA变化的影响因素。于发病24小时内,即入院后次日晨起采集患者静脉血,测量糖化血红蛋白、甘油三酯、胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、肌酐、尿酸、超敏C反应蛋白、同型半胱氨酸等实验室检查指标,在静脉溶栓后48小时内监测心率变异性（Heartratevariability,HRV）,在低频（Low frequency,LF,0.04-0.15HZ）和高频（High frequency,HF,0.15-0.4HZ）范围内计算频域指标:校正的LF（nu.）、校正的HF（nu.）及LF/HF,反映交感神经及副交感神经相对活性的高低及交感神经与副交感神经之间的平衡。采用线性回归模型分析影响发病1-2天健侧及患侧dCA的临床因素及HRV指标,探讨dCA变化的影响因素。结果:排除8例伴有严重心律不齐、12例异位搏动大于20%的患者,最终纳入203例患者,与对照组相比,静脉溶栓患者LF（un.）及LF/HF增大,HF（un.）减小,差异具有显着性,表明缺血性卒中患者静脉溶栓后交感神经活性增高、副交感神经活性减弱,且交感-副交感平衡被打破;单因素线性回归分析结果显示,年龄、糖尿病与dCA呈负相关,HF（un.）与患侧PD呈负相关（β=-0.148,p=0.036）,LF（un.）与患侧PD呈正相关（β=0.148,p=0.036）;多因素线性回归结果提示年龄与健侧、患侧dCA呈负相关,而LF（nu.）与患侧dCA正相关（β=0.144,p=0.030）,表明自主神经可能参与了dCA的调控。结论:缺血性卒中患者静脉溶栓后年龄与dCA呈负相关;自主神经活性异常可能是缺血性卒中患者静脉溶栓后dCA受损的影响因素。
金法[8]（2021）在《全转录组分析鉴定长非编码RNA-Neat1在小鼠缺血脑卒中的炎症作用》文中认为背景:缺血性脑卒中后神经炎症主导脑损伤的病理过程,同时也是影响卒中预后的主要因素。长非编码RNA（lncRNA）在各种疾病中均发挥着调控作用,但在缺血性脑卒中后的炎症调节及其的潜在机制仍不清楚。鉴定缺血性脑卒中后参与调控神经炎症的lncRNA可发掘潜在的治疗靶点。方法:生信实验中,我们从GEO下载C57BL/6N雄性小鼠大脑中动脉梗塞（MCAO）模型不同时段的全基因组测序原始数据（GSE112348）通过转录组分析筛选出差异的mRNAs及lncRNAs。对不同时段的差异基因取交集进行基因本体论（GO）术语富集、KEGG通路富集分析、免疫细胞浸润反卷积计算和共表达网络分析,筛选出激活小胶质细胞的关键分子lncRNANeat1。在细胞实验中对生信结果进行初步验证,通过培养小鼠BV-2小胶质细胞株,予反义寡核苷酸（ASO）进行Neat1的敲减,随后行氧糖剥夺（OGD）实验观察细胞形态学变化,并检测细胞CCK-8、LDH水平以及炎症因子分泌的变化。动物实验部分,我们建立小鼠MCAO模型,建模前通过立体定向脑室内注射ASO敲减中枢神经系统中Neat1转录水平,于MCAO 24小时后qPCR检测缺血皮层中Neat1的表达水平,对小鼠行为学评分和测量脑梗塞体积、脑水肿含量以及记录生存率的变化。ELISA法检测梗塞半球炎症因子的表达水平,HE染色、尼氏染色观察形态学改变,免疫组化和荧光免疫染色用于观察小胶质细胞的活化比例、梗塞灶细胞凋亡数量。最后,通过蛋白质印迹法检测HMGB1蛋白、凋亡相关蛋白及JAK/STAT通路磷酸化的水平变化。结果:生物信息学分析和实验证实,Neat1在缺血性脑卒中的病理过程中促进小胶质细胞的活化并促进炎症反应。敲低Neat1可显着抑制小胶质细胞的激活,明显降低小胶质细胞促炎因子IL-1β、IL-6、TNF-α的释放,升高抗炎因子IL-4、IL-10的水平,减弱凋亡通路蛋白的表达、减少神经元细胞凋亡的数量。此外,敲除Neat1还可以抑制下游与炎症密切相关JAK-STAT通路的活性和HMGB1的上调表达。结论:lncRNA-Neat1在MCAO中异常上调,其发挥激活小胶质细胞并起到促炎作用,敲减Neat1可改善缺血性卒中后的炎症反应、减少神经元凋亡并改善神经功能。
周欣[9]（2021）在《CKLF1在脑卒中后神经元—小胶质细胞交互中的生物学作用》文中提出脑卒中是一种突发性的脑血管疾病,具有极高的死亡率和致残率。目前缺血性脑卒中患者占卒中患者总数的80%以上。缺血性脑卒中发生后,位于梗死核心区的细胞在短时间内发生死亡,毗邻梗死核心区的区域被称为半暗带区。由于处于缺血缺氧环境中,位于半暗带区域的细胞不再具有电生理活性,但仍保持代谢活性,因此提升半暗带区细胞存活率对神经功能的恢复及预后有着至关重要的意义。小胶质细胞第一时间响应脑缺血损伤,发挥免疫作用。激活的小胶质细胞会极化为发挥促炎作用的Ml型和抗炎的M2型。小胶质细胞在半暗带区域首先极化为M2型,通过吞噬损伤神经元,清理细胞碎片,释放修复因子来发挥保护作用。随着缺血缺氧的时间延长,梗死核心区向半暗带区域扩散,小胶质细胞转变为促炎的M1型,释放促炎介质产生炎症级联反应,吞噬正常神经元造成神经元丢失。调节小胶质细胞的不同极化状态被认为是一种有效的脑缺血治疗策略,因此解析小胶质细胞在脑缺血后的调控机制,将有助于以小胶质细胞为导向的神经保护剂的开发。早期的理论认为,脑缺血后神经元是小胶质细胞的靶向细胞,随着研究发现,神经元可能对小胶质细胞具有调控作用。Biker等在2007年提出了神经元通过“on”,“off”信号来调控小胶质细胞。在后续的研究中发现,脑缺血后神将元通过释趋化因子、谷氨酸、ATP等调节小胶质细胞的激活和极化。而目前研究发现神经元可以分泌多种趋化因子,趋化因子不仅分子量小,且多种趋化因子受体表达于小胶质细胞中。因此,趋化因子是一种理想的神经元-小胶质细胞交互作用的信使。趋化素样因子-1（chemokine like factor-1,CKLF1）是我国科学家首次报道的一种趋化因子。本课题组的前期研究中发现,CKLF1在健康脑组织无表达,仅在脑缺血后发生高表达。抑制或敲除CKLF1后,能够有效改善脑缺血引起的神经行为学损伤,减小梗死面积,降低脑水肿。在前期研究中发现,我们发现CKLF1仅与神经元具有共定位,且外源性给予CKLF1的活性肽段C27能够促进小胶质细胞M1型极化,但缺血后CKLF1的表达调控及其对小胶质细胞表型变化的分子机制均尚未阐明,严重阻碍了其作为新型抗脑卒中治疗靶点的研究。为观察缺血对CKLF1表达调控的影响,我们分别对各类原代细胞进行糖氧剥夺再灌注（Oxygen and glucose deprivation/reperfusin,OGD/R）造模后检测发现仅有神经元中CKLF1 mRNA及蛋白表达显着增加。体内研究发现,大鼠缺血侧皮层内发现神经元和CKLF1具有共定位。在确定神经元是脑卒中后CKLF1的主要来源细胞后,我们对CKLF1在神经元的转录调控进行了探索。我们通过数据库预测了 CKLF1的转录因子,基于预测结果,我们对原代神经元细胞进行OGD造模后给予NF-κB抑制剂,实验结果发现抑制NF-κB活性后能显着降低CKLF1 mRNA及蛋白的表达。为进一步研究NF-κB是否直接调控CKLF1的转录,我们通过染色质共沉淀实验发现NF-κB与CKLF1启动子有直接结合,且在脑卒中后结合增加。通过双荧光素酶报告基因实验发现,NF-κB能够直接促进CKLF1的转录,其结合位点为-249至-238bp的碱基对。在如上实验的基础上,我们分别用体内和体外实验探究了 CKLF1是否介导了神经元-小胶质细胞间的交互作用。体外实验中,我们采用神经元上清转移实验,结果发现阻断CKLF1活性或是抑制NF-κB的活性均可显着降低条件培养基对小胶质细胞极化状态的影响。在体内实验我们成功制备了缺血脑区神经元CKLF1敲除大鼠。对大鼠进行MCAO造模,发现特异性敲除神经元中的CKLF1后,小胶质细胞向M1型极化显着降低,而向M2型极化显着增加。确定CKLF1介导神经元-小胶质细胞间的交互作用后,我们对CKLF1促进小胶质细胞向M1型极化的机制做了初步的探索。发现CKLF1能够促进小胶质细胞p38和JNK磷酸化,对ERK无影响。本实验通过对BV2小胶质细胞外源性给予CKLF1活性肽段C27后,发现TREM-2在C27的作用下表达降低,并与C27呈现出剂量依赖,且特异性敲除神经元CKLF1能够促进小胶质细胞中TREM-2的表达。进一步研究发现C27可能是通过自噬溶酶体途径降解TREM-2蛋白。本研究报道了一种介导脑卒中后神经元-小胶质细胞交互作用的分子—CKLF1,为神经元在脑卒中后的细胞功能做了进一步的解释。本课题组已经报道抑制CKLF1能有效改善脑卒中,而在本实验中进一步研究了 CKLF1加重脑卒中损伤的机制,从而为以CKLF1为靶点的药物开发提供了相关依据。本文通过相关技术手段确定了 CKLF1的细胞来源,并在此基础上解析了 CKLF1的转录调,这将有利于未来关于CKLF1的基础研究。
化涵毅[10]（2021）在《芫根对局灶性脑缺血缺氧损伤的保护作用及其机制研究》文中研究指明芫根（Brassica rapa L.,Turnip）,十字花科芸薹属植物,是一类生长在青藏高原的食、药、饲多用途植物。据藏医药领域公认的经典名着《医方四续》中记载,芫根具有味甘性温、清热解毒和滋补增氧之功效。现代科技的进步和生活水平的提高延长了人类的平均寿命,但却没有改善脑卒中引起的致死率和致残率,人口的增长和老龄化反而跃升为全球脑卒中病人增加的主要原因。由于一直缺乏有效的脑卒中治疗措施,目前认为预防是最好的保护办法,因此各类膳食指南或功能性食品应运而生,旨在降低脑卒中的发生率。本文以芫根抗缺氧为研究依据,建立体内大脑中动脉栓塞再灌注模型（Middle cerebral artery occlusion/reperfusion,MCAO/R）和体外糖氧剥夺再灌注模型（Oxygen and glucose deprivation/reperfusion,OGD/R）,初探芫根对缺血缺氧损伤的保护作用,通过逐级分离,首次获得一种功能性单体,并对其糖氧剥夺损伤的保护能力及作用机理进行了系统性研究。研究结果如下:1.利用小鼠MCAO/R模型,初步证实芫根有助于恢复脑损伤小鼠的行为学能力,并有效减少脑萎缩体积;进一步通过体外实验证明,芫根显着提高神经元OGD/R损伤后的细胞活力,有效抑制乳酸脱氢酶（LDH）和活性氧（ROS）的表达,同时增强内源性抗氧化酶超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）和过氧化氢酶（CAT）的酶活力。2.为有效识别芫根中抗缺血缺氧功能性成分,利用四种极性不同的有机试剂,依次对芫根进行逐级萃取,共获得石油醚（萃取）相、氯仿（萃取）相、乙酸乙酯（萃取）相、正丁醇（萃取）相和水相（正丁醇萃余相）。通过OGD/R模型,以细胞活力、LDH、ROS和内源性抗氧化酶等为评价指标,分别验证五种萃取物对神经元细胞的保护能力,发现芫根水相对糖氧剥夺损伤具有最佳抗氧化效果。3.利用小鼠MCAO/R模型和OGD/R模型,进一步验证芫根水相对缺血缺氧损伤的保护能力及作用机理。结果显示,芫根水相预处理可有效提高小鼠行为学的恢复能力,并减小脑萎缩体积;同时显着恢复细胞色素c氧化酶IV亚型（COXIV）的表达,提高呼吸链的功能状态以及细胞的能量生成;此外,芫根水相预处理可调控OGD/R损伤时信号转导因子胞内磷脂酰肌醇激酶（Phosphoinositide 3-kinase,PI3K）的表达,继而进一步引起蛋白激酶B（Protein kinase B,Akt）以及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（Mammalian target of rapamycin,m TOR）的激活,抑制神经元细胞的死亡。4.在明确芫根水相对缺血缺氧损伤的保护效果及可能的作用机理后,进一步缩小研究范围,利用MCI分离柱、HW-40分离柱、ODS-A和ODS-AQ分离柱,借助薄层层析法和细胞ROS检测,对芫根水相进行逐级分离,新发现一种功能性单体（AET-1）,利用1H-NMR、13C-NMR和135DEPT-NMR检测方法,以此解析其化学结构为（2-甲氧基-5-甲基-1,4二氧六环）乙酸甲酯。5.利用体外OGD/R模型发现,AET-1可增强OGD/R损伤后神经元细胞的抗氧化应激能力、提高COXIV的表达活力,并通过激活PI3K/Akt/m TOR信号通路降低糖氧剥夺对神经元细胞的进一步损伤,促进抗凋亡因子/抑制促凋亡因子的表达。综上所述,芫根具有良好的抗缺血缺氧保护作用。本论文为芫根的综合开发和利用提供了科学依据和理论支撑,无论是依托芫根水相开发为功能性产品,或是利用芫根单体AET-1作为联合疗法的添加成分之一,都可提高芫根的经济价值和药用价值。未来的研究须继续阐明AET-1与PI3K、Akt和m TOR在神经系统以及细胞凋亡过程中的作用,才能成功地将功能性单体和激酶靶点转化为神经退行性疾病中有效且安全的预防/治疗策略。
二、卒中后降温可能有助于防止再灌注损伤（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、卒中后降温可能有助于防止再灌注损伤（论文提纲范文）
（1）额尔敦-乌日勒的活性成分分析及其对小胶质细胞基因调控作用的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 额尔敦-乌日勒的简介 |
| 1.1.1 额尔敦-乌日勒历史沿革 |
| 1.1.2 额尔敦-乌日勒研究进展 |
| 1.1.3 额尔敦-乌日勒所含单药化学成分的国内外研究进展 |
| 1.2 脑卒中简介 |
| 1.2.1 脑卒中分类及病因 |
| 1.2.2 缺血性脑卒中的主要病理生理机制 |
| 1.2.3 治疗脑卒中的策略 |
| 1.3 小胶质细胞简介 |
| 1.3.1 小胶质细胞简介 |
| 1.3.2 小胶质细胞的极化 |
| 1.3.3 小胶质细胞极化与信号通路 |
| 1.3.4 小胶质细胞与其它神经细胞的相互作用 |
| 1.3.5 作用于小胶质细胞的药物 |
| 1.4 中草药的研究方法及进展 |
| 1.5 立题依据及主要研究内容 |
| 1.5.1 立题依据 |
| 1.5.2 主要研究内容 |
| 1.5.3 创新性 |
| 第二章 额尔敦-乌日勒对大鼠大脑中基因表达调控作用及其活性成分的分析 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.2.1 实验动物 |
| 2.2.2 主要试剂与耗材 |
| 2.2.3 主要仪器 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 动物饲养 |
| 2.3.2 MCAO模型 |
| 2.3.3 治疗组 |
| 2.3.4 收集样品,提取RNA和 RNA-seq |
| 2.3.5 序列过滤、比对和组装(Assembly) |
| 2.3.6 差异表达分析 |
| 2.3.7 EW的提取方法 |
| 2.3.8 建立数据库 |
| 2.3.9 UPLC-QTof-MS分析 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.4.1 治疗后MCAO/R模型大鼠的神经功能评估 |
| 2.4.2 Illumina测序和参考基因组比对 |
| 2.4.3 EW处理后差异基因表达 |
| 2.4.4 EW-1 中神经活性成分分析 |
| 2.4.5 EW-2 中神经活性成分分析 |
| 2.4.6 EW-3 中神经活性成分分析 |
| 2.4.7 EW-4 中神经活性成分分析 |
| 2.4.8 EW-5 中神经活性成分分析 |
| 2.5 讨论 |
| 2.6 小结 |
| 第三章 额尔敦-乌日勒中活性小分子对小胶质细胞分泌的促炎型细胞因子的转录调控作用 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.2.1 实验动物 |
| 3.2.2 细胞品系 |
| 3.2.3 主要试剂耗材 |
| 3.2.4 仪器设备 |
| 3.2.5 引物 |
| 3.2.6 主要试剂的配制 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 样品的提取制备 |
| 3.3.2 HPLC半制备分离 |
| 3.3.3 UPLC-QTof-MS分析 |
| 3.3.4 小鼠原代小胶质细胞的分离及培养 |
| 3.3.5 BV2 小胶质细胞培养 |
| 3.3.6 EW对小胶质细胞表达的促炎因子的影响 |
| 3.3.7 实时荧光定量PCR |
| 3.3.8 统计学分析 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.4.1 EW不同溶剂提取物对Cxcl10 表达的下调作用 |
| 3.4.2 EW-5 半制备馏分的UPLC分析及其对促炎因子表达的下调作用 |
| 3.4.3 F4 半制备馏分的UPLC分析及其对促炎因子表达的下调作用 |
| 3.4.4 F4-6 中生物活性化学物质的分析及鉴定 |
| 3.4.5 木香烃内酯对小胶质细胞释放的促炎因子表达的影响 |
| 3.4.6 肉豆蔻醚对小胶质细胞释放的促炎因子表达的影响 |
| 3.4.7 土木香内酯对小胶质细胞中促炎因子表达的影响 |
| 3.4.8 亚麻酸对小胶质细胞中促炎因子表达的影响 |
| 3.5 讨论 |
| 3.6 小结 |
| 第四章 额尔敦-乌日勒中活性小分子土木香内酯和去氢二异丁香酚抑制小胶质细胞NF-κB信号通路 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料 |
| 4.2.1 细胞品系 |
| 4.2.2 主要试剂与耗材 |
| 4.2.3 主要仪器 |
| 4.2.4 引物 |
| 4.2.5 抗体 |
| 4.2.6 主要试剂的配置 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 样品的提取制备 |
| 4.3.2 UPLC-QTof-MS法对F4-6 定性分析 |
| 4.3.3 UPLC-QTof-MS法对F4-6中Ala和 Deh进行定量分析 |
| 4.3.4 细胞培养 |
| 4.3.5 细胞毒性测定 |
| 4.3.6 N2a细胞的细胞增值活力和神经突触生长测定 |
| 4.3.7 提取总RNA和 RT-q PCR |
| 4.3.8 蛋白免疫印迹(Western blot) |
| 4.3.9 统计学分析 |
| 4.4 实验结果 |
| 4.4.1 EW提取物中活性分子的Ala和 Deh的定性 |
| 4.4.2 F4-6 抑制LPS刺激的BV2 细胞促炎因子的表达 |
| 4.4.3 F4-6 促进BV2 细胞LPS刺激后抗炎基因表达 |
| 4.4.4 F4-6 的神经保护作用 |
| 4.4.5 F4-6对LPS诱导的BV2 细胞中NF-κB信号通路激活的影响 |
| 4.5 讨论 |
| 4.6 小结 |
| 第五章 天然产物小分子土木香内酯和去氢二异丁香酚对小胶质细胞基因表达的联合调控作用 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验材料 |
| 5.2.1 细胞品系 |
| 5.2.2 主要试剂与耗材 |
| 5.2.3 主要仪器 |
| 5.2.4 引物 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.3.1 细胞培养 |
| 5.3.2 提取RNA和文库构建 |
| 5.3.3 序列过滤、比对和组装 |
| 5.3.4 差异表达分析 |
| 5.3.5 差异表达基因的GO和 KEGG富集分析 |
| 5.3.6 实时荧光定量PCR |
| 5.3.7 统计学分析 |
| 5.4 实验结果 |
| 5.4.1 Illumina测序和参考基因组比对 |
| 5.4.2 Ala、Deh和 Mix处理后的差异表达基因 |
| 5.4.3 DEG的GO富集分析 |
| 5.4.4 DEG的 KEGG代谢通路富集分析 |
| 5.4.5 通过RT-qPCR验证DEG数据 |
| 5.5 讨论 |
| 5.6 小结 |
| 第六章 总结与展望 |
| 参考文献 |
| 附录一 |
| 致谢 |
| 攻读博士期间发表的学术论文 |
（2）参附汤对脑缺血后血脑屏障保护的协同增效作用以及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 文献综述 中医药对缺血性中风后血脑屏障保护作用的研究进展 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第一部分 参附汤对缺血性中风后血脑屏障保护的协同增效作用研究 |
| 一 通过体内实验探讨参附汤协同增效作用 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 小结 |
| 5. 讨论 |
| 二 体外实验验证参附汤的血脑屏障保护作用 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 小结 |
| 5. 讨论 |
| 第二部分 FAO机制在参附汤保护缺血性中风后血脑屏障中的作用研究 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 小结 |
| 5. 讨论 |
| 结果与讨论 |
| 参考文献 |
| 展望 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
（3）星蒌承气汤治疗急性缺血性卒中痰热腑实证机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 第一章 星蒌承气汤药效物质基础及对缺血性卒中神经保护机制研究进展 |
| 1 大黄 |
| 1.1 中医认识 |
| 1.2 化学成分及神经保护作用 |
| 2 胆南星 |
| 2.1 中医认识 |
| 2.2 化学成分及神经保护作用 |
| 3 瓜蒌 |
| 3.1 中医认识 |
| 3.2 化学成分及神经保护作用 |
| 4 羌活 |
| 4.1 中医认识 |
| 4.2 化学成分及神经保护作用 |
| 5 芒硝 |
| 参考文献 |
| 第二章 基于肠道微生态理论的缺血性卒中病因与发病机制研究进展 |
| 1 肠道微生态与肠道微生态失调 |
| 2 菌-肠-脑轴 |
| 3 从肠到脑的上行通路 |
| 4 从脑到肠的下行通路 |
| 5 脑卒中相关危险因素与肠道菌群 |
| 6 卒中并发症的肠道微生态机制 |
| 7 结论 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第二部分 基于网络药理学与分子对接的星蒌承气汤治疗缺血性卒中的机制研究 |
| 1 研究资料 |
| 2 研究方法 |
| 2.1 星蒌承气汤化学活性成分的检索与筛选 |
| 2.2 星蒌承气汤化学成分及缺血性卒中靶点筛选 |
| 2.3 交集基因蛋白互作网络(PPI)分析 |
| 2.4 基因本体论(Gene ontology,GO)功能富集和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析 |
| 2.5 可视化网络构建与分析 |
| 2.6 分子对接 |
| 3 研究结果 |
| 3.1 星蒌承气汤潜在化学活性成分的检索与筛选结果 |
| 3.2 星蒌承气汤活性成分靶点及缺血性卒中靶点预测结果 |
| 3.3 GO富集分析及KEGG代谢通路富集分析结果 |
| 3.4 可视化网络构建与分析 |
| 3.5 分子对接 |
| 4 讨论 |
| 4.1 网络药理学在中医药现代化研究中的应用 |
| 4.2 基于网络药理学方法探讨星蒌承气汤活性成分 |
| 4.3 基于网络药理学方法探讨星蒌承气汤效应机制 |
| 5 小结 |
| 第三部分 实验研究 |
| 实验一 星蒌承气汤对中风急性期痰热腑实证小鼠神经保护作用及网络药理学关键靶点及通路实验验证 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验对象 |
| 1.2 实验试剂 |
| 1.3 实验仪器设备与耗材 |
| 1.4 实验药物的配置 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 分组与给药 |
| 2.2 模型制备 |
| 2.3 神经功能评分 |
| 2.4 除胶实验 |
| 2.5 TTC染色 |
| 2.6 取材及处理 |
| 2.7 TUNEL法检测皮层梗死周围细胞凋亡情况 |
| 2.8 脑组织ELISA |
| 2.9 脑组织Western blot |
| 2.10 统计分析 |
| 3 研究结果 |
| 3.1 神经功能评分 |
| 3.2 除胶实验 |
| 3.3 脑梗死体积评价 |
| 3.4 对缺血侧脑组织细胞凋亡的影响 |
| 3.5 星蒌承气汤对缺血侧脑组织TNF-α的影响 |
| 3.6 星蒌承气汤对缺血侧脑组织AKT、p-AKt、PI3K及NF-κB蛋白表达的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 星萎承气汤是治疗中风病急性期痰热腑实证的具有确切临床疗效的代表方剂 |
| 4.2 化痰通腑法代表方星蒌承气汤脑保护作用及中医理论探讨 |
| 4.3 卒中模型神经功能评分探讨 |
| 4.4 卒中模型行为学选择 |
| 4.5 星蒌承气汤与细胞凋亡 |
| 4.6 网络药理学关键靼点及通路实验验证 |
| 5 小结 |
| 实验二 星蒌承气汤对中风急性期痰热腑实证小鼠菌-肠-脑轴影响 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验对象 |
| 1.2 实验试剂 |
| 1.3 实验仪器设备与耗材 |
| 1.4 实验药物的配置 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 分组与给药 |
| 2.2 模型制备 |
| 2.3 取材及处理 |
| 2.4 免疫组化 |
| 2.5 免疫荧光 |
| 2.6 ELISA检测 |
| 2.8 肠道菌群分析 |
| 2.9 盲肠内容物短链脂肪酸(SCFAs)检测 |
| 2.10 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 星蒌承气汤对中风痰热腑实证小鼠肠道菌群的影响 |
| 3.2 星蒌承气汤对中风痰热腑实证小鼠肠道菌群代谢产物短链脂肪酸及短链脂肪酸受体的影响 |
| 3.3 星蒌承气对菌-肠-脑轴神经-内分泌-免疫途径相关指标影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 基于脑肠互动理论探讨化痰通腑法治疗中风病的理论基础 |
| 4.2 星蒌承气汤对短链脂肪酸影响 |
| 4.3 星萎承气汤对菌-肠-脑轴自主神经途径影响 |
| 4.4 星蒌承气汤对菌-肠-脑轴神经内分泌途径影响 |
| 4.5 星萎承气汤对菌-肠-脑轴免疫途径影响 |
| 5 小结 |
| 实验三 星萎承气汤对中风急性期痰热腑实证伪无菌小鼠菌-肠-脑轴影响 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验对象 |
| 1.2 实验试剂 |
| 1.3 实验仪器设备与耗材 |
| 1.4 实验药物的配置 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 分组与给药 |
| 2.2 模型制备 |
| 2.3 神经功能评分 |
| 2.4 除胶实验 |
| 2.5 TTC染色 |
| 2.6 取材及处理 |
| 2.7 免疫组化、免疫荧光 |
| 2.8 ELISA检测 |
| 2.9 肠道菌群分析 |
| 2.10 盲肠内容物SCFAs分析 |
| 2.11 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 神经功能评分 |
| 3.2 除胶实验 |
| 3.3 脑梗死体积评价 |
| 3.4 肠道菌群 |
| 3.5 短链脂肪酸 |
| 3.6 星蒌承气汤对伪无菌小鼠菌-肠-脑轴神经-内分泌-免疫途径相关指标影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 伪无菌模型建立及评价 |
| 4.2 肠道菌群是星蒌承气汤发挥作用的重要靶点 |
| 4.3 星蒌承气汤治疗急性期缺血性卒中机制的初步探讨 |
| 5 小结 |
| 结语 |
| 创新点 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
（4）血塞通对MCAO大鼠和OGD/R损伤SH-SY5Y细胞LINGO-1，EGFR，PI3K/AKT通路以及PTEN和GSK-3β的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 三七、三七总皂苷各成分对脑卒中的研究进展 |
| 1 中药三七和其成分的研究 |
| 2 三七总皂苷及其各成分对脑卒中的研究进展 |
| 3 小结 |
| 参考文献 |
| 综述二 LINGO-1及其下游信号通路在缺血性脑卒中后神经再生的机制研究 |
| 1 LINGO-1 |
| 2 EGFR |
| 3 PI3K//AKT |
| 4 PTEN |
| 5 GSK-3β |
| 6 PTE、AKT以及GSK-3β的关系 |
| 7 小结 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第二部分 动物实验研究 |
| 实验一 大鼠MCAO模型的建立和评价 |
| 1 实验材料与方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验二 血塞通对MCAO大鼠术后28天LINGO-1,EGFR以及下游PI3K/AKT通路的作用 |
| 1 实验材料与方法 |
| 2 统计分析 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验三 血塞通对MCAO大鼠术后28天PTEN和GSK-3β的作用 |
| 1 实验材料与方法 |
| 2 统计分析 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 细胞实验研究 |
| 实验四 血塞通对SH-SY5Y细胞氧糖剥夺/再灌注损伤的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 统计分析 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 致谢 |
| 附录 mNSS神经功能评分表 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 个人简历 |
（5）丹参多酚酸通过小胶质细胞P2X7/NLRP3/GSDMD通路减轻实验性脑缺血再灌注损伤研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 论文一 注射用丹参多酚酸盐(SAFI)对MCAO/R模型大鼠神经保护作用 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 论文二 SAFI对经OGD/R处理的神经元细胞活力与凋亡影响的研究 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 论文三 SAFI对MCAO/R模型及OGD/R模型小胶质细胞NLRP3炎症小体激活与GSDMD影响的研究 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 论文四 SAFI对MCAO/R模型及OGD/R模型NLRP3炎症小体激活上游的膜通道P2X7表达的影响及SAFI组分与P2X7的分子对接 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 综述一 脑梗死后的免疫反应 |
| 参考文献 |
| 综述二 注射用丹参多酚酸盐治疗脑梗死的研究进展 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 在学期间科研成绩 |
| 致谢 |
（6）远隔缺血后处理对脑梗死急性期外周血消退素D1和白三烯B4的影响（论文提纲范文）
| 前言 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词对照表 |
| 第1章 文献综述 |
| 1.1 脑梗死与外周免疫炎症激活 |
| 1.1.1 脑梗死后外周免疫细胞招募及浸润 |
| 1.1.2 脑梗死后脑源性抗原激活的外周免疫 |
| 1.2 脑梗死与外周免疫炎症消散 |
| 1.2.1 细胞极化及抗炎因子 |
| 1.2.2 炎症消散因子 |
| 1.3 脑梗死与远隔缺血后处理 |
| 1.3.1 远隔缺血后处理与抗炎机制 |
| 1.3.2 影响远隔缺血后处理临床应用的因素 |
| 第2章 材料与方法 |
| 2.1 研究对象 |
| 2.1.1 入组标准 |
| 2.1.2 排除标准 |
| 2.2 分组与治疗 |
| 2.2.1 分组 |
| 2.2.2 治疗 |
| 2.3 研究方法 |
| 2.3.1 样本采集 |
| 2.3.2 分离血清 |
| 2.3.3 主要试剂及实验仪器 |
| 2.3.4 Resolvin D1检测步骤 |
| 2.3.5 Leukotriene B_4检测步骤 |
| 2.4 统计学方法 |
| 第3章 结果 |
| 3.1 三组患者治疗前临床基线比较 |
| 3.2 RIPostC组和常规治疗组治疗前后神经功能缺损程度改善情况 |
| 3.3 三组间血清RVD1、LTB_4水平及RVD1/LTB_4比较 |
| 3.3.1 常规治疗组与对照组间RvD1、LTB_4表达比较 |
| 3.3.2 RIPostC组与常规治疗组间RvD1、LTB_4表达比较 |
| 3.4 急性脑梗死患者RVD1、LTB_4随发病时间的变化情况 |
| 3.5 影响急性脑梗死患者RVD1、LTB_4水平的因素 |
| 3.5.1 治疗前NIHSS评分对急性脑梗死患者RvD1、LTB_4的影响 |
| 3.5.2 治疗后NIHSS评分与急性脑梗死患者RvD1、LTB_4的相关性 |
| 3.5.3 血糖异常对急性脑梗死患者RvD1、LTB_4的影响 |
| 3.5.4 其他指标与急性脑梗死患者Rv D1、LTB_4的相关性分析 |
| 3.6 RIPostC组患者RVD1、LTB_4水平的影响因素 |
| 3.6.1 RIPostC应用的时间对Rv D1、LTB_4的影响 |
| 3.6.2 治疗前NIHSS评分对RIPostC组患者Rv D1、LTB_4的影响 |
| 3.6.3 治疗后NIHSS评分与RIPostC组患者Rv D1、LTB_4的相关性分析 |
| 3.6.4 NIHSS变化与RIPostC组患者RvD1、LTB_4的相关性分析 |
| 3.6.5 糖尿病对RIPostC组患者RvD1、LTB_4的影响 |
| 3.6.6 血脂异常对RIPostC组患者RvD1、LTB_4的影响 |
| 3.6.7 同型半胱氨酸对RIPostC组患者RvD1、LTB_4的影响 |
| 3.6.8 其他指标与RIPostC组患者RvD1、LTB_4相关性分析 |
| 第4章 讨论 |
| 4.1 急性脑梗死患者外周血炎症消散相关因子的变化、意义及影响因素 |
| 4.2 远隔缺血后处理对急性脑梗死患者外周血炎症消散相关因子的调节及影响因素 |
| 4.3 总结与展望 |
| 第5章 结论 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在读期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（7）缺血性卒中患者静脉溶栓后脑血流自动调节功能变化及影响因素研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 英文缩略词表 |
| 第1章 绪论 |
| 第2章 综述 脑卒中患者脑血流自动调节功能相关研究进展 |
| 2.1 脑血流自动调节定义及发展 |
| 2.2 脑血流自动调节机制 |
| 2.3 脑血流自动调节检测方法 |
| 2.4 CA与神经系统疾病 |
| 2.4.1 不同类型脑梗死的CA表现 |
| 2.4.2 脑血管狭窄对CA的影响 |
| 2.4.3 急性脑梗死再灌注治疗患者CA功能及其临床意义 |
| 2.4.4 CA功能与脑梗死出血转化及脑水肿的关系 |
| 2.4.5 卒中后认知功能障碍患者的CA |
| 2.4.6 CA与出血性脑卒中 |
| 第3章 研究内容 |
| 3.1 第一部分:缺血性卒中患者静脉溶栓后脑血流自动调节功能变化特征的研究 |
| 3.1.1 前言 |
| 3.1.2 对象与方法 |
| 3.1.3 结果 |
| 3.1.4 讨论 |
| 3.1.5 结论 |
| 3.2 第二部分缺血性卒中患者静脉溶栓后脑血流自动调节功能与临床预后关系的研究 |
| 3.2.1 前言 |
| 3.2.2 对象与方法 |
| 3.2.3 结果 |
| 3.2.4 讨论 |
| 3.2.5 结论 |
| 3.3 第三部分缺血性卒中患者静脉溶栓后脑血流自动调节功能影响因素的研究 |
| 3.3.1 前言 |
| 3.3.2 对象与方法 |
| 3.3.3 结果 |
| 3.3.4 讨论 |
| 3.3.5 结论 |
| 第4章 结论与创新 |
| 4.1 结论 |
| 4.2 特色与创新 |
| 第5章 本研究的不足与展望 |
| 5.1 本研究的不足 |
| 5.2 展望 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（8）全转录组分析鉴定长非编码RNA-Neat1在小鼠缺血脑卒中的炎症作用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 非编码RNA |
| 1.3 lncRNA |
| 1.4 lncRNA在缺血性脑卒中的表达 |
| 1.5 小胶质细胞与神经炎症 |
| 1.6 lncRNA与缺血脑卒中后神经炎症 |
| 1.7 lncRNA与脑卒中后神经修复 |
| 1.8 缺血性脑卒中与炎症相关的通路 |
| 1.9 本文研究的目标及研究流程 |
| 1.10 小结 |
| 第二章 生信分析鉴定小鼠MCAO的炎症相关lncRNA |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.2 实验方法 |
| 2.2.3 统计学分析 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 全转录组序列数据和差异基因结果 |
| 2.3.2 GO富集和KEGG通路分析 |
| 2.3.3 共表达分析与炎症相关的lncRNA |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 鉴定炎症相关的lncRNA |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料和方法 |
| 3.2.1 生信分析部分材料同第一章 |
| 3.2.2 细胞实验材料 |
| 3.2.3 细胞实验 |
| 3.2.4 qPCR检测 |
| 3.2.5 CCK-8活性检测及LDH毒性检测 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 验证小胶质细胞活化相关的lncRNA |
| 3.3.2 Neat1在器官组织中的分布 |
| 3.3.3 OGD后BV-2的Neat1表达升高 |
| 3.3.4 敲低lncRNA-Neat1减少OGD后BV-2细胞的毒性 |
| 3.3.5 ASO-Neat1抑制OGD后BV-2小胶质细胞激活 |
| 3.3.6 敲低Neat1对BV-2 HMGB1表达影响 |
| 3.4 讨论 |
| 第四章 敲减Neat1抑制MCAO后的炎症反应 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.2.1 材料 |
| 4.2.2 侧脑室给药方法 |
| 4.2.3 小鼠tMCAO/R模型制作 |
| 4.2.4 tMCAO/R术后小鼠行为学评分 |
| 4.2.5 记录生存时间 |
| 4.2.6 小鼠灌注取脑组织 |
| 4.2.7 蛋白免疫印迹(Western blot) |
| 4.2.8 TTC染色 |
| 4.2.9 HE染色 |
| 4.2.10 免疫组化染色 |
| 4.2.11 新鲜冰冻组织免疫荧光切片 |
| 4.2.12 TUNEL染色 |
| 4.2.13 ELISA |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 在动物模型验证小胶质激活相关的IncRNA表达水平 |
| 4.3.2 敲低Neat1的表达水平可减少MCAO导致的脑损伤 |
| 4.3.3 敲低Neat1对缺血性脑卒中后脑组织形态学上的改变 |
| 4.3.4 Neat1敲低后减少小胶质细胞的促炎症因子释放 |
| 4.3.5 敲低Neat1对MCAO神经元有保护作用 |
| 4.3.6 敲低Neat1对JAK/STAT通路及HMGB1的影响 |
| 4.4 讨论 |
| 参考文献 |
| 读博期间参与的课题 |
| 学习期间发表论文 |
| 致谢 |
（9）CKLF1在脑卒中后神经元—小胶质细胞交互中的生物学作用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 神经元是脑卒中后CKLF1的细胞来源 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 卒中后CKLF1来源于神经元 |
| 3.2 脑缺血后CKLF1和神经元有共定位 |
| 3.3 OGD后不同复氧时间下CKLF1的表达 |
| 3.4 NF-κB参与脑卒中后CKLF1的表达调控 |
| 3.5 NF-κB直接参与CKLF1的转录调控 |
| 3.6 NF-κB和CKLF1启动子的结合区域 |
| 3.7 NF-κB与CKLF1启动子结合位点 |
| 4 小结与讨论 |
| 第二部分 神经元CKLF1在卒中后的生物学作用 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 CKLF1参与神经元小胶质细胞交互作用 |
| 3.2 理论半暗带中特异性敲除神经元CKLF1大鼠的构建 |
| 3.3 特异性敲除神经元CKLF1减轻大鼠MCAO后神经元损伤 |
| 3.4 特异性敲除神经元CKLF1可抑制脑缺血后小胶质细胞M1型极化 |
| 3.5 特异性敲除神经元CKLF1降低脑缺血后M1型极化产物iNOS的表达 |
| 3.6 特异性敲除CKLF1促进脑缺血后胶质细胞向M2型极化 |
| 3.7 特异性敲除神经元CKLF1增加脑缺血后M2型产物IL-10的表达 |
| 4 小结与讨论 |
| 第三部分 CKLF1诱导小胶质细胞Ml型极化的机制初探 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 C27上调BV2小胶质细胞JNK及p38磷酸化水平 |
| 3.2 CKLF1激活MAPK通路的在不同时间点的变化 |
| 3.3 特异性敲除神经元CKLF1后降低小胶质细胞MAPK磷酸化 |
| 4 小结与讨论 |
| 第四部分 CKLF1诱导小胶质M1细胞型极化的机制探索 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 C27可下调BV2小胶质细胞TREM-2表达 |
| 3.2 特异性敲除神经元CKLF1增加脑卒中后TREM-2的表达 |
| 3.3 C27导致TREM-2蛋白下调的机制探索 |
| 3.4 C27通过自噬促进TREM-2蛋白降解 |
| 4 小结与讨论 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 文献综述 趋化因子在脑卒中后的神经修复中的作用 |
| 参考文献 |
| 附录(一) 溶液配制 |
| 附录(二) 缩略词表 |
| 个人简历 |
| 致谢 |
（10）芫根对局灶性脑缺血缺氧损伤的保护作用及其机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词对照表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 脑卒中 |
| 1.1.1 脑卒中概述 |
| 1.1.2 脑卒中发病机制 |
| 1.1.3 缺血性脑卒中的治疗现状 |
| 1.1.4 缺血性脑卒中的膳食预防 |
| 1.2 芫根 |
| 1.2.1 芫根概述 |
| 1.2.2 芫根的药理功效 |
| 1.3 研究目的及意义 |
| 1.4 研究框架及内容 |
| 1.4.1 研究框架 |
| 1.4.2 研究内容 |
| 第二章 芫根对脑缺血小鼠的神经保护作用初探 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与仪器 |
| 2.2.1 实验动物 |
| 2.2.2 试剂与材料 |
| 2.2.3 主要仪器 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 芫根液的提取 |
| 2.3.2 MCAO/R模型 |
| 2.3.3 行为学测试 |
| 2.3.4 脑损伤评估 |
| 2.3.5 细胞培养 |
| 2.3.6 糖氧剥夺/再灌注模型 |
| 2.3.7 细胞存活率测定 |
| 2.3.8 乳酸脱氢酶测定和活性氧测定 |
| 2.3.9 抗氧化酶活性检测 |
| 2.3.10 统计分析 |
| 2.4 结果与讨论 |
| 2.4.1 TET干预对MCAO/R小鼠行为学的影响 |
| 2.4.2 TET干预对MCAO/R小鼠脑萎缩体积的影响 |
| 2.4.3 OGD不同时间对HT22 细胞活性的影响 |
| 2.4.4 TET干预抑制OGD/R诱导的氧化损伤 |
| 2.5 本章小结 |
| 第三章 芫根各萃取相对神经元细胞糖氧剥夺损伤的保护作用 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与仪器 |
| 3.2.1 试剂与材料 |
| 3.2.2 主要仪器 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 芫根各萃取相的分离 |
| 3.3.2 细胞培养 |
| 3.3.3 糖氧剥夺/再灌注模型 |
| 3.3.4 细胞存活率测定 |
| 3.3.5 乳酸脱氢酶测定和活性氧测定 |
| 3.3.6 抗氧化酶活性检测 |
| 3.3.7 统计分析 |
| 3.4 结果与讨论 |
| 3.4.1 TET不同萃取相对正常HT22 细胞活力的影响 |
| 3.4.2 TET不同萃取相对OGD/R细胞活力的影响 |
| 3.4.3 TET不同萃取相对OGD/R细胞LDH水平的影响 |
| 3.4.4 TET不同萃取相对OGD/R细胞ROS水平的影响 |
| 3.4.5 TET不同萃取相对OGD/R细胞氧化应激损伤的影响 |
| 3.5 本章小结 |
| 第四章 芫根水相对缺血缺氧损伤的保护作用 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与仪器 |
| 4.2.1 实验动物 |
| 4.2.2 试剂与材料 |
| 4.2.3 主要仪器 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 芫根水相的提取 |
| 4.3.2 MCAO/R模型 |
| 4.3.3 行为学测试 |
| 4.3.4 脑损伤评估 |
| 4.3.5 细胞培养 |
| 4.3.6 糖氧剥夺/再灌注模型 |
| 4.3.7 细胞存活率测定 |
| 4.3.8 乳酸脱氢酶测定和活性氧测定 |
| 4.3.9 免疫荧光 |
| 4.3.10 蛋白质印迹法 |
| 4.3.11 统计分析 |
| 4.4 结果与讨论 |
| 4.4.1 AET干预对MCAO/R小鼠行为学的影响 |
| 4.4.2 AET干预对MCAO/R小鼠脑萎缩体积的影响 |
| 4.4.3 AET干预对OGD/R细胞线粒体的影响 |
| 4.4.4 AET干预对PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响 |
| 4.4.5 LY294002 逆转AET对 OGD/R细胞的保护作用 |
| 4.5 本章小结 |
| 第五章 芫根水相的分离纯化与鉴定 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 材料与仪器 |
| 5.2.2 试剂与材料 |
| 5.2.3 主要仪器 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.3.1 芫根水相的逐级分离 |
| 5.3.2 细胞培养 |
| 5.3.3 糖氧剥夺/再灌注模型 |
| 5.3.4 活性氧测定 |
| 5.3.5 核磁分析 |
| 5.3.6 统计分析 |
| 5.4 结果与讨论 |
| 5.4.1 AET中 part1-part3对OGD/R细胞中 ROS的影响 |
| 5.4.2 Part2中part(1)-part(4)的分离结果及对OGD/R细胞中ROS的影响 |
| 5.4.3 Part(1)中 part A-part D的分离结果及对OGD/R细胞中 ROS的影响. |
| 5.4.4 Part A中 part E-part G的分离结果及对OGD/R细胞中 ROS的影响 |
| 5.4.5 AET-1 的分离纯化与鉴定 |
| 5.5 本章小结 |
| 第六章 芫根水相中有效单体AET-1 对缺血缺氧损伤的保护作用 |
| 6.1 引言 |
| 6.2 材料与仪器 |
| 6.2.1 试剂与材料 |
| 6.2.2 主要仪器 |
| 6.3 实验方法 |
| 6.3.1 芫根单体AET-1 的制备 |
| 6.3.2 细胞培养 |
| 6.3.3 糖氧剥夺/再灌注模型 |
| 6.3.4 细胞存活率测定 |
| 6.3.5 乳酸脱氢酶测定和活性氧测定 |
| 6.3.6 抗氧化酶活性检测 |
| 6.3.7 免疫荧光 |
| 6.3.8 蛋白质印迹法 |
| 6.3.9 统计分析 |
| 6.4 结果与讨论 |
| 6.4.1 AET-1 干预抑制OGD/R诱导的氧化损伤 |
| 6.4.2 AET-1 干预对OGD/R细胞线粒体的影响 |
| 6.4.3 AET-1 干预对PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响 |
| 6.4.4 LY294002 逆转AET-1对OGD/R细胞的保护作用 |
| 6.4.5 AET-1 干预抑制OGD/R诱导的神经元凋亡 |
| 6.5 本章小结 |
| 主要结论与展望 |
| 主要结论 |
| 展望 |
| 论文主要创新点 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录:作者在攻读博士学位期间发表的论文 |
四、卒中后降温可能有助于防止再灌注损伤（论文参考文献）
- [1]额尔敦-乌日勒的活性成分分析及其对小胶质细胞基因调控作用的研究[D]. 其布日. 内蒙古大学, 2021(11)
- [2]参附汤对脑缺血后血脑屏障保护的协同增效作用以及机制研究[D]. 张伟. 北京中医药大学, 2021(08)
- [3]星蒌承气汤治疗急性缺血性卒中痰热腑实证机制研究[D]. 高强. 北京中医药大学, 2021(01)
- [4]血塞通对MCAO大鼠和OGD/R损伤SH-SY5Y细胞LINGO-1，EGFR，PI3K/AKT通路以及PTEN和GSK-3β的研究[D]. 周东蕊. 北京中医药大学, 2021(01)
- [5]丹参多酚酸通过小胶质细胞P2X7/NLRP3/GSDMD通路减轻实验性脑缺血再灌注损伤研究[D]. 马岱朝. 辽宁中医药大学, 2021(02)
- [6]远隔缺血后处理对脑梗死急性期外周血消退素D1和白三烯B4的影响[D]. 刘璐. 吉林大学, 2021(01)
- [7]缺血性卒中患者静脉溶栓后脑血流自动调节功能变化及影响因素研究[D]. 王钟秀. 吉林大学, 2021(01)
- [8]全转录组分析鉴定长非编码RNA-Neat1在小鼠缺血脑卒中的炎症作用[D]. 金法. 南方医科大学, 2021(02)
- [9]CKLF1在脑卒中后神经元—小胶质细胞交互中的生物学作用[D]. 周欣. 北京协和医学院, 2021(02)
- [10]芫根对局灶性脑缺血缺氧损伤的保护作用及其机制研究[D]. 化涵毅. 江南大学, 2021(01)