一、Effects of Glucocorticoid on IL-13-induced Muc5ac Expression in Airways of Mice（论文文献综述）
董兵[1]（2021）在《人脐带间充质干细胞来源外泌体治疗严重激素抵抗性哮喘的作用与机制研究》文中研究说明背景:严重激素抵抗性哮喘（Severe steroid-resistant asthma,SSRA）是临床哮喘管理中一个严峻的问题。受影响的患者临床症状严重,生活质量恶化,且对哮喘一线治疗药物类固醇治疗无效,人们迫切需要行而有效的治疗方案。因此深入探讨与了解SSRA的发病机制,将有助于寻找到有效的治疗方案。气道炎症反应是SSRA发病的重要病理表现之一,也是介导疾病发生发展的关键因素。因此减轻气道炎症是控制哮喘症状的核心关键,免疫细胞及其相关的细胞因子在调节气道炎症和气道重塑过程中发挥着重要作用,其中巨噬细胞作为肺组织中最丰富的免疫细胞,参与气道炎症反应的过程。研究显示在不同的条件下,巨噬细胞又可极化为两种类型,即促进炎症反应的M1型,以及主要参与组织损伤修复的M2型。不同极化状态的巨噬细胞将影响气道炎症反应的进展与转归,因此调节巨噬细胞的极化表型可以作为SSRA新的治疗选择。间充质干细胞治疗作为一种可行有效的生物疗法,在免疫调节和组织损伤修复等方面具有显着的作用,其在治疗免疫相关性疾病方向上具有广阔的应用前景。目前研究认为,间充质干细胞的免疫调节作用主要归因于其旁分泌机制。间充质干细胞外泌体（MSC-Exo）作为重要的旁分泌因子,具有其分泌细胞相似的免疫调节功能。并且MSC-Exo比间充质干细胞更适用于临床应用,因为纳米级的外泌体不会出现阻塞肺血管床以及免疫排斥等问题。MSC-Exo通过其强大的免疫调节作用已成为肺部炎性疾病最具有吸引力的治疗候选药物。然而,MSC-Exo如何发挥调节肺部炎症反应的作用,是否可以通过调节巨噬细胞极化从而发挥对SSRA的治疗作用尚不清楚。因此,阐明SSRA的内在免疫病理学机制,并为其临床治疗提供新的医疗策略具有重要的意义。目的:本研究拟探讨MSC-Exo是否能通过调节巨噬细胞极化表型的转变,减轻SSRA肺部炎症反应,并对可能的分子机制进行探究,为其转化应用于临床治疗提供理论支持与实验依据。方法:（1）利用Qiagen exo Easy Maxi Kit从人源脐带间充质干细胞（human umbilical cord mesenchymal stem cell,HUCMSC）培养基上清液中分离出外泌体,并采用透射电镜、纳米颗粒跟踪分析和流式细胞术对其进行鉴定。（2）构建OVA/CFA诱导的SSRA小鼠动物模型,进行支气管原位注射MSC-Exo治疗,通过对SSRA小鼠气道肺功能、肺组织病理学以及巨噬细胞极化相关细胞因子水平的检测,评估MSC-Exo对SSRA的治疗作用。（3）通过腹腔注射氯膦酸盐脂质体系统性清除小鼠体内的巨噬细胞,流式细胞术对清除效果进行鉴定,并进一步评估巨噬细胞清除后,MSC-Exo的治疗作用是否被减弱。（4）建立LPS刺激的RAW 264.7细胞的体外炎症模型,与MSC-Exo进行共培养,采用q RT-PCR、ELISA、Western blot、细胞免疫荧光和流式细胞术对M1和M2型巨噬细胞标志物进行检测,进一步探讨了MSC-Exo对巨噬细胞极化的调控作用及其相关机制。（5）采用串联质谱标签（Tandem Mass Tags,TMT）标记的定量蛋白质组学测序技术,检测MSC-Exo调控巨噬细胞极化过程中的蛋白表达谱的变化。（6）通过Western blot对蛋白质组学测序筛选得到的关键蛋白进行验证,并利用si RNA和过表达质粒转染技术进一步验证MSC-Exo作用的关键蛋白在巨噬细胞极化过程中的作用。结果:（1）成功从HUCMSC中分离得到颗粒直径集中于50-150nm之间,表面高表达特异性标志蛋白CD63和CD81,具有典型外泌体特征的圆形脂质双子层结构的碟状囊泡。（2）通过气管内给予MSC-Exo治疗可以有效改善SSRA小鼠的肺功能,减轻肺组织炎症细胞浸润,抑制气道粘液高分泌以及降低肺组织中炎症因子水平。（3）巨噬细胞的系统性清除削弱了MSC-Exo的治疗效果,提示巨噬细胞可能是MSC-Exo发挥免疫调节作用的靶点。（4）在LPS刺激的RAW264.7细胞的体外炎症模型中,发现MSC-Exo能抑制M1型巨噬细胞极化,促进了M2型巨噬细胞极化。（5）通过TMT标记的定量蛋白质组学测序分析,发现肿瘤坏死因子受体相关因子1（tumor necrosis factor receptor–associated factor 1,TRAF1）可能是MSC-Exo调控巨噬细胞极化的关键蛋白,并在体内体外模型中分别进行了验证,实验结果与蛋白质组学测序结果相一致。（6）在LPS刺激的RAW 264.7细胞的体外炎症模型中,利用TRAF1 si RNA和过表达质粒分别转染RAW 264.7细胞,并对相关蛋白通路进行验证,发现MSC-Exo对调控巨噬细胞极化的NF-κB和PI3K/AKT信号通路的影响依赖于TRAF1。结论:1.MSC-Exo能够减轻OVA/CFA诱导的SSRA小鼠模型的肺部炎症反应。2.MSC-Exo是通过巨噬细胞发挥对OVA/CFA诱导的SSRA小鼠肺部炎症反应的抑制作用。3.MSC-Exo可能通过抑制TRAF1调节NF-κB和PI3K/AKT信号通路抑制巨噬细胞向M1型极化,促进其向M2型极化。创新性:1.本研究首次发现MSC-Exo对OVA/CFA诱导的SSRA小鼠模型的治疗作用,补充了MSC-Exo作为SSRA候选治疗药物的开发价值,为制定新型有效的SSRA治疗策略提供了理论基础。2.本研究首次明确了巨噬细胞在MSC-Exo对OVA/CFA诱导的SSRA小鼠模型治疗过程中的重要作用。3.本研究首次明确了MSC-Exo通过抑制TRAF1调节巨噬细胞极化治疗SSRA的分子机制。
彭林峰[2]（2021）在《补气通窍方调控cAPM-PKA-CREB/NF-kB信号串流防治变应性鼻炎疗效机制的实验研究》文中进行了进一步梳理目的:本项目通过动物实验,完善补气通窍方对大鼠鼻粘膜病理损伤和炎症应激的效应机制;通过加用通路阻滞剂（H89和PDTC）,研究补气通窍方通过调控c AMP-PKA-CREB与NF-κB通路间的串联交流影响下游黏蛋白（MUC5a、MUC5b）表达的作用机制;根据补气通窍方干预变应性鼻炎黏蛋白的表达分子机制,补充补气通窍方防治变应性鼻炎的理论依据,为推广补气通窍方提供科学支撑。方法:采用动物实验的方法,结合使用通路抑制剂（H89、PDTC）,将80只大鼠分为空白组、模型组、中药组、鼻炎康组、H89组、PDTC组、H89+中药组、PDTC+中药组,HE染色观察大鼠鼻粘膜的病理损伤;免疫组化观察NF-κBp65的表达情况;ELISA检测大鼠血清中Ig E变化情况;Western blot技术检测鼻粘膜中NF-κBp65和MUC5a、MUC5b水平;RT-PCR技术检测大鼠鼻粘膜中MUC5a、MUC5b因子水平和通路相关蛋白CREB、p65、CBP的表达情况以验证实验猜想。结果:（1）变应性鼻炎大鼠鼻粘膜HE染色结果:模型组纤毛脱落及倒伏现象,小血管增生扩张明显,以及大量炎性细胞浸润,粘膜下腺体数量明显增加,鼻粘膜脱落严重。而补气通窍方组纤毛和鼻粘膜基本完整,炎症细胞浸润和腺体增生明显减少。（2）使用NF-κB p65作为一抗,免疫组化平均光密度结果显示:空白组NF-κB p65的阳性结果基本不表达,而模型组含量大幅度提高,与空白组相比差异明显P<0.05,差异有统计学意义;后续通过药物治疗后,鼻炎康组和补气通窍方组含量明显下降,与模型组相比差异明显P<0.05,差异有统计学意义;PDTC组和PDTC+中药组含量表达相比P>0.05,差异无统计学意义;H89组和H89+中药组,联用中药后NF-κB p65的阳性光密度明显下降,P<0.05差异有统计学意义。（3）ELISA结果:变应性鼻炎大鼠外周血中出现Ig E含量改变,模型组和空白组相比,含量明显提高,差异明显P<0.05,差异有统计学意义;鼻炎康组和补气通窍方组与模型组相比,含量下降明显P<0.05,差异有统计学意义;PDTC与PDTC+中药组相比,联用中药后含量有所下降P<0.05,差异有统计学意义;H89与H89+中药组相比含量下降,差异明显P<0.05,差异有统计学意义。（4）Western blot结果:WB结果显示变应性鼻炎大鼠鼻粘膜中的p65、MUC5a、MUC5b,模型组与空白组相比含量明显上升P<0.05,差异有统计学意义;鼻炎康和补气通窍方组相较于模型组,含量降低P<0.05,差异有统计学意义;H89组与H89+中药组相比,联用中药后含量下降,差异明显P<0.05,差异有统计学意义;PDTC组和PDTC+中药组相比,联用中药组含量下降,差异明显P<0.05,差异有统计学意义。而CREB蛋白WB结果显示:模型组与空白组相比含量下降P<0.05,差异有统计学意义;鼻炎康和补气通窍方两组干预组与模型组相比,含量明显上升P<0.05,差异有统计学意义;但H89与H89+中药组相比,含量明显提高P<0.05,差异有统计学意义;PDTC组和PDTC+中药组相比P>0.05,差异没有统计学意义。（5）RT-PCR结果:结果显示:变应性鼻炎大鼠鼻粘膜中p65、MUC5a、MUC5b含量变化,模型组相比于空白组各蛋白含量均明显增加,差异明显P<0.05,差异有统计学意义。p65和MUC5a的实验结果显示,PDTC组和PDTC+中药组相比,结果虽然有差异,但P>0.05,差异没有统计学意义;MUC5a组比较结果显示的PDTC组和PDTC+中药组相比差异明显P<0.05,差异有统计学意义。结论:1.补气通窍方可以缓解变应性鼻炎大鼠鼻粘膜处的病理损伤,减少NF-κBp65的表达,降低嗜酸性粒细胞的浸润,抑制腺体增生,修复受损的鼻粘膜。2.补气通窍方可以降低变应性鼻炎大鼠外周血清Ig E的含量,补气通窍方缓解临床症状的效应机制可能与减少血清中Ig E含量有关。3.补气通窍方可以调节变应性鼻炎大鼠紊乱的c AMP-PKA-CREB通路和NF-κB通路两通路间的串联关系,对紊乱两条通路的平衡进行再平衡,缓解变应性鼻炎大鼠黏蛋白表达,起到防治变应性鼻炎的效果。
孙桂丽[3]（2021）在《二陈汤合三子养亲汤治疗AECOPD痰浊阻肺证患者的临床研究及对痰液中MUC5AC的影响》文中提出目的:观察二陈汤合三子养亲汤治疗慢性阻塞性肺疾病急性加重期（AECOPD）痰浊阻肺证患者的临床疗效及其对痰液中MUC5AC水平的影响,探讨二陈汤合三子养亲汤治疗AECOPD的作用机制,为治疗AECOPD拓展新途径,为今后开发和利用二陈汤合三子养亲汤提供科学依据。方法:将来源于广西中医药大学附属瑞康医院呼吸内科住院部84例符合AECOPD（痰浊阻肺证）患者,采用随机数字表法分为治疗组（42例）和对照组（42例）。对照组予西医常规治疗方案（吸氧、抗感染、平喘、祛痰、雾化）,治疗组在对照组常规西医治疗方案上加服二陈汤合三子养亲汤。两组治疗疗程均为2周,2周后比较对照组及治疗组患者临床疗效、中医证候积分、痰量情况、肺功能指标、动脉血气分析指标和痰液中黏蛋白5AC（Mucin5AC,MUC5AC）水平情况。结果:（1）治疗组42例,脱落6例,完成36例;对照组42例,脱落6例,完成36例。（2）临床疗效比较:治疗2周后,对照组临床控制2例、显效12例、有效13例、无效9例,总有效率75.00%,治疗组临床控制4例、显效21例、有效7例、无效4例,总有效率88.90%,治疗组疗效优于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。（3）中医证候积分比较:治疗组、对照组组内比较,两组治疗后的咳嗽、喘息、气短、胸闷、腹胀纳呆积分均较治疗前显着降低,有显着性差异（P<0.01）;治疗组与对照组组间比较,治疗组治疗后的咳嗽、喘息、气短、胸闷积分均较对照组治疗后降低,差异有统计学意义（P<0.05）,但两组在治疗后的腹胀纳呆积分比较,无统计学意义（P>0.05）。（4）痰量积分比较:两组组内比较,两组治疗后的痰量积分均较治疗前下降,差异有统计学意义（P<0.05）;治疗组与对照组组间比较,治疗组治疗后痰量较对照组治疗后显着降低,差异有统计学意义（P<0.01）。（5）肺功能比较:治疗2周后,对照组及治疗组肺功能指标（FVC、FEV1、FEV1/FVC%）较治疗前均显着改善（P<0.01）,且治疗组肺功能指标改善情况优于对照组（P<0.05）。（6）动脉血气分析比较:治疗2周后,对照组及治疗组动脉血气分析指标（Pa O2、Pa CO2）较治疗前均显着改善（P<0.01）,且治疗组肺功能指标改善情况优于对照组（P<0.05）。（7）痰液中黏蛋白5AC（MUC5AC）水平比较:治疗组、对照组组内比较,两组治疗后的痰液中MUC5AC水平均较治疗前下降,差异有统计学意义（P<0.05）;两组组间比较,治疗组治疗后的痰液中MUC5AC水平均较对照组治疗后降低,差异有统计学意义（P<0.01）。结论:（1）二陈汤合三子养亲汤能使AECOPD痰浊阻肺证患者的临床症状得到改善,使痰液生成减少,刺激痰液排出,从而改善患者肺功能情况,提高患者生活质量和依从性。（2）二陈汤合三子养亲汤能够降低AECOPD痰浊阻肺证患者痰液中MUC5AC水平,使气道黏液高分泌状态得到抑制,其作用机制可能与抑制MUC5AC分泌有关。（3）本临床研究过程中根据安全性观察指标监测结果,未出现药物不良反应事件,表明临床使用二陈汤合三子养亲汤安全性较好,未见毒副作用。
孔一卜[4]（2020）在《基于“夙根伏痰”理论探究益气固本胶囊减轻过敏性哮喘气道炎症和气道重塑的作用机制》文中研究说明第一部分益气固本胶囊对过敏性哮喘模型气道炎症和气道重塑的影响目的:通过体内实验探究益气固本胶囊减轻过敏性哮喘气道炎症和气道重塑的作用机制。方法:1.采用OVA联合AL（OH）3致敏、OVA激发的方法制备过敏性哮喘小鼠模型。2.Giemsa染色法检测各组小鼠BALF中炎症细胞分类与计数。3.各组小鼠肺组织进行HE、PAS及Masson染色,分别用来判断肺组织炎症浸润、气道杯状细胞化生和气道上皮下纤维化情况。4.ELISA检测各组小鼠BALF中IgE、IL-4、IL-5、IL-13、Eotaxin、GM-CSF、ECP、TLC4、LTD4、TGF-β1、PDGF、MUC5AC含量。5.免疫组织化学染色观察各组小鼠肺组织中TLR4及α-SMA表达水平。6.RT-PCR检测各组小鼠肺组织中IL-4、IL-5、IL-13、TGF-β1、PDGF、TLR4、MyD88、TRAF6、IκBα、p65的mRNA表达。7.Western Blot检测各组小鼠肺组织中E-cadherin、Vimentin、Fibronectin、α-SMA、IκBα、p65及p-p65的蛋白表达。结果:1.OVA联合AL（OH）3致敏、OVA激发后,过敏性哮喘模型出现呼吸加快、点头呼吸、站立不稳及烦躁不安等哮喘发作时典型症状,BALF中EOS和IgE含量增高,肺组织炎症浸润明显,提示过敏性哮喘模型构建成功。经益气固本胶囊和地塞米松（阳性对照药）干预后,过敏性哮喘模型呼吸加快、点头呼吸、站立不稳及烦躁不安等哮喘发作时典型症状明显减轻,BALF中EOS和IgE含量明显降低,肺组织炎症浸润明显减轻。2.过敏性哮喘模型BALF中IL-4、IL-5、IL-13含量和肺组织中IL-4、IL-5、IL-13的mRNA水平明显升高。经益气固本胶囊和地塞米松（阳性对照药）干预后,过敏性哮喘模型BALF中IL-4、IL-5、IL-13含量和肺组织中IL-4、IL-5、IL-13 mRNA水平明显降低。3.过敏性哮喘模型BALF中Eotaxin、GM-CSF、ECP、TLC4、LTD4含量明显升高。经益气固本胶囊和地塞米松（阳性对照药）干预后,过敏性哮喘模型BALF中Eotaxin、GM-CSF、ECP、TLC4、LTD4中含量明显降低。4.过敏性哮喘模型气道杯状细胞化生程度严重,BALF中MUC5AC含量明显升高。经益气固本胶囊和地塞米松（阳性对照药）干预后,过敏性哮喘模型气道杯状细胞化生程度明显减轻,BALF中MUC5AC含量明显降低。5.过敏性哮喘模型肺组织上皮下纤维化程度严重,BALF中TGF-β1含量和肺组织中TGF-β1 mRNA表达明显升高,肺组织中E-cadherin蛋白表达明显降低,Vimentin、Fibronectin蛋白表达明显升高。经益气固本胶囊和地塞米松（阳性对照药）干预后,过敏性哮喘模型肺组织上皮下纤维化程度明显减轻,BALF中TGF-β1含量和肺组织中TGF-β1 mRNA表达明显降低,肺组织中E-cadherin蛋白表达明显升高,Vimentin、Fibronectin蛋白表达明显降低。6.过敏性哮喘模型BALF中PDGF含量和肺组织中PDGF mRNA表达明显升高,肺组织中α-SMA蛋白表达明显升高。经益气固本胶囊和地塞米松（阳性对照药）干预后,过敏性哮喘模型BALF中PDGF含量和肺组织中PDGF mRNA表达明显降低,肺组织中α-SMA蛋白表达明显降低。7.过敏性哮喘模型肺组织中TLR4、TRAF6及p65的mRNA表达明显升高,IκBα的mRNA和蛋白表达明显降低,p65及p-p65的蛋白表达明显升高。经益气固本胶囊和地塞米松（阳性对照药）干预后,过敏性哮喘模型肺组织中TLR4、TRAF6及p65的mRNA表达明显降低,IκBα的mRNA和蛋白表达明显升高,p65及p-p65的蛋白表达明显降低。结论:1.采用OVA联合AL（OH）3致敏、OVA激发的方法成功构建过敏性哮喘模型。2.益气固本胶囊可以通过调节IL-4、IL-5、IL-13、Eotaxin、GM-CSF、ECP、TLC4、LTD4含量和IL-4、IL-5、IL-13的mRNA表达来减轻过敏性哮喘模型的气道炎症。3.益气固本胶囊可以通过调节TGF-β1、PDGF、MUC5AC含量和TGF-β1、PDGF的mRNA表达及E-cadherin、Vimentin、Fibronectin、α-SMA蛋白表达来减轻过敏性哮喘模型的气道重塑。4.益气固本胶囊减轻过敏性哮喘模型气道炎症和气道重塑的作用机制和调节TLR4/NF-κB信号通路有关。第二部分益气固本胶囊对PDGF-BB诱导气道平滑肌增殖和迁移的影响目的:通过体外实验探究益气固本胶囊对PDGF-BB诱导气道平滑肌增殖和迁移的影响。方法:1.采用PDGF-BB诱导ASMC构建气道平滑肌增殖和迁移模型。2.MTT法检测益气固本胶囊对ASMC药物毒性的影响及其对PDGF-BB诱导ASMC增殖的影响。3.流式细胞术检测益气固本胶囊对PDGF-BB诱导ASMC细胞周期的影响。4.Transwell实验检测益气固本胶囊对PDGF-BB诱导ASMC迁移的影响。5.细胞划痕实验检测益气固本胶囊对PDGF-BB诱导ASMC迁移的影响。6.ELSIA检测ASMC经PDGF-BB诱导后益气固本胶囊对其分泌的IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α及TGF-β1水平的影响。8.RT-PCR检测ASMC经PDGF-BB诱导后益气固本胶囊对其IκBα、p65的m RNA表达水平的影响。9.Western blot检测ASMC经PDGF-BB诱导后益气固本胶囊对其IκBα、p65、p-p65蛋白表达水平的影响。结果:1.0.05mg/m L、0.1mg/m L、0.2mg/m L、0.4mg/m L浓度的益气固本胶囊对ASMC的生存无明显影响,可用于后续实验研究。2.ASMC经PDGF-BB诱导24h、48h、72h后,其增殖能力明显增强。益气固本胶囊干预后,经PDGF-BB诱导的ASMC的增殖能力明显减弱。3.ASMC经PDGF-BB诱导后,其细胞周期中的G0-G1期缩短,G2-M期延长。益气固本胶囊干预后,经PDGF-BB诱导的ASMC的细胞周期中的G0-G1期延长,G2-M期缩短。4.ASMC经PDGF-BB诱导12h、24h后,其划痕修复能力明显增强。益气固本胶囊干预后,经PDGF-BB诱导的ASMC的划痕修复能力明显减弱。5.ASMC经PDGF-BB诱导后,其迁移能力明显增强。益气固本胶囊干预后,经PDGF-BB诱导的ASMC的迁移能力减弱。6.ASMC经PDGF-BB诱导后,其分泌的IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α、TGF-β1数量明显增加。益气固本胶囊干预后,经PDGF-BB诱导的ASMC分泌IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α、TGF-β1的数量减少。7.ASMC经PDGF-BB诱导后,其IκBα的m RNA和蛋白表达降低,p65、p50的m RNA表达升高,p-p65的蛋白表达升高。益气固本胶囊干预后,经PDGF-BB诱导的ASMC的IκBα的m RNA和蛋白表达升高,p65、p50的m RNA表达降低,p-p65的蛋白表达降低。结论:1.采用PDGF-BB诱导ASMC后,ASMC的增殖和迁移能力明显增强,提示ASMC增殖和迁移模型构建成功。2.益气固本胶囊可以抑制PDGF-BB诱导ASMC增殖与迁移。3.益气固本胶囊可以降低PDGF-BB诱导ASMC增殖与迁移过程中分泌IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α、TGF-β1的数量。4.益气固本胶囊抑制PDGF-BB诱导ASMC增殖与迁移的作用机制和调节NF-κB信号通路有关。
姚楠[5]（2020）在《基于IL-13介导STAT6与AQP5“串话”探讨当归干预哮喘气道黏液高分泌的分子机制》文中研究说明目的:研究当归对阴虚哮喘的治疗作用及对黏液高分泌的影响,并从IL-13介导STAT6与AQP5“串话”的角度探讨当归干预阴虚哮喘气道黏液高分泌的分子机制。方法:将小鼠随机分为空白对照组、模型对照组、氨溴索组及当归高、中、低剂量（n=12）,采用卵蛋白与甲状腺片复制哮喘模型,观测当归对小鼠哮喘症状、肺功能、肺脏指数、肺液清除功能及肺组织病理学变化的影响,测定气道黏液总固体及Muc5ac含量、气道杯状细胞增生及肺组织Muc5ac表达水平,测定血清相关活性物质（包括IgE、IL-13、TNF-α等）以及肺组织中STAT6、AQP5及NF-κB的表达水平,研究当归治疗阴虚哮喘、对阴虚哮喘气道黏液高分泌的作用及其分子机制。结果:当归可明显缓解小鼠哮喘症状,改善肺功能,降低肺脏指数及肺组织湿干重比值,缓解肺组织病理学变化;当归能降低阴虚哮喘小鼠BALF中总固体及Muc5ac含量,抑制气道杯状细胞增生,降低肺组织中Muc5ac的表达;当归可降低阴虚哮喘小鼠血清IgE、IL-13及TNF-α的含量,抑制肺组织中STAT6、NF-κB的表达,促进肺组织AQP5的表达;同时,相关性分析显示IL-13与STAT6呈正相关。结论:当归对阴虚哮喘有明显的治疗作用,可抑制气道杯状细胞增生及Muc5ac的表达,缓解阴虚哮喘黏液高分泌,其中当归通过IL-13与STAT6“串话”而抑制STAT6表达、促进AQP5表达是其平喘、缓解阴虚哮喘气道黏液高分泌的作用机制之一。
杨静[6]（2020）在《LncRNA H19在过敏性哮喘中的作用及机制初探》文中认为背景:哮喘是一种异质性过敏性疾病,通常具有气道高反应性、嗜酸性粒细胞性炎症浸润和粘蛋白产生过量的特征。最近,有大量研究报道了在多种疾病中长链非编码RNA（LncRNA）通过多种机制发挥重要的调节作用,但是关于其在哮喘中的作用鲜有报道。因此,阐明LncRNA在哮喘中的作用有助于进一步理解哮喘的发病机制,并从LncRNA的角度为哮喘的治疗提供新的思路。目的:研究LncRNA H19在哮喘中的表达及其作用机制。方法:首先,通过使用卵清蛋白（OVA）致敏和激发BALB/c小鼠成功建立哮喘模型。通过使用肿瘤坏死因子TNFα处理人支气管上皮细胞24h构建体外细胞炎症模型。通过定量PCR（q-PCR）检测H19和Muc5ac的表达。通过在人支气管上皮细胞株16-HBE中分别转染干扰RNA（siRNA）敲低或质粒过表达H19,进一步研究H19在哮喘中的调节作用。通过在16-HBE细胞中转染miR-675-3p mimics或inhibitors研究miR-675-3p对Muc5ac的调节作用。通过使用PI3K抑制剂处理16-HBE细胞检测H19的调节机制。通过Western Blotting检测转录因子p-NF-κB和p-Akt的表达。结果:H19在小鼠哮喘模型的肺组织和TNFα处理的16-HBE细胞中表达下降,Muc5ac表达增高。然而,过表达H19导致Muc5ac表达增高,敲低H19导致Muc5ac表达下降。并且,过表达H19可进一步增加TNFα诱导的Muc5ac的表达,敲低H19可减少TNFα诱导的Muc5ac的表达。Western Blotting结果显示敲低16-HBE细胞中的H19导致p-Akt和p-NF-κB表达下降。使用PI3K抑制剂处理16-HBE细胞后,消除了H19促进Muc5ac mRNA表达的作用。过表达H19可增加miR-675的表达,但miR-675-3p对Muc5ac mRNA的表达没有调节作用。结论:在体外炎症模型中,H19通过调节PI3K/Akt/NF-κB通路正向调节Muc5ac mRNA的表达。但在体外炎症模型中以及在体内小鼠哮喘模型的肺组织中H19表达下降,Muc5ac表达增高。其原因可能是因为哮喘是一种由多种因素调节的复杂疾病,除H19外可能还有其他机制参与Muc5ac的调节,哮喘中降低的H19可能是减轻粘蛋白分泌的保护机制之一。
傅榕冰[7]（2020）在《化痰活血方通过抑制ILC2s干预哮喘的作用及机制研究》文中指出目的:本文通过对化痰活血方及其拆方干预哮喘小鼠气道上皮黏液高分泌的研究,探寻化痰活血方中各药物组方的作用关系,并以肺-肠轴ILC2s迁移途径探讨化痰活血方干预哮喘的作用机制,为其在防治哮喘方面的研究与开发提供依据。方法:1化痰活血方及其拆方对哮喘小鼠气道黏液高分泌的作用研究本研究将64只BALB/c雌性小鼠随机分为8组:正常组、模型组、地塞米松组、化痰活血方组、三子养亲汤组、桃红四物汤组、三子养亲汤+桃仁红花组、三子养亲汤+四物汤组,每组8只。将小鼠于第1、8、15d腹腔注射0.2m L OVA致敏液,第21-27d雾化吸入2%OVA激发液复制哮喘模型;雾化前1h灌胃给药;雾化期间观察小鼠行为学及引喘潜伏期;第28d,取各组小鼠血清、BALF、肺组织。采用快速瑞氏-吉姆萨染色法观察BALF中白细胞总数及各类白细胞数目的变化;采用HE染色法观察肺组织病理学变化;采用PAS染色法观察肺组织杯状细胞增生情况;采用ELISA试剂盒检测血清中总Ig E和OVA-Ig E,BALF中IL-4、IL-9、IL-13、MUC5AC的含量。2化痰活血方干预哮喘小鼠肺-肠轴ILC2s迁移的作用研究哮喘小鼠模型的建立及给药同第1部分。实验第28d取各组小鼠BALF、肺组织、小肠组织及肠系膜淋巴结;采用ELISA试剂盒检测BALF中IL-25、IL-33、TSLP、IL-6、AREG的含量;采用实时荧光定量PCR（RT-q PCR）检测肺组织中mi R-155、mi R-146a、IL-25、Sphk1及小肠组织中IL-25、Sphk1的m RNA表达量;采用流式细胞术检测肺组织中ILC2s、肺及肠系膜淋巴结中n ILC2s及i ILC2s的含量;采用免疫荧光法观察小肠组织中S1PR1及ILC2s（GATA3+EPCAM+IL-17RB）的表达。结果:1化痰活血方及其拆方对哮喘小鼠气道黏液高分泌的作用研究化痰活血方及其拆方均能有效改善由OVA诱导的哮喘小鼠哮喘样行为、延长引喘潜伏期（P<0.01）、减轻肺组织中炎性细胞浸润水平、降低BALF中白细胞总数及各类白细胞数目（P<0.05,P<0.01）以及降低血清中总Ig E、OVA-Ig E的水平（P<0.01）;同时,化痰活血方及其拆方均能减轻哮喘小鼠肺组织中杯状细胞增生情况,能够明显降低BALF中与黏液高分泌相关的炎性因子IL-4、IL-9、IL-13的含量（P<0.05,P<0.01）,并能显着下降黏蛋白的主要成分MUC5AC的水平（P<0.01）,从而抑制哮喘小鼠气道黏液高分泌。另外,这些结果显示,化痰活血方效果均优于各拆方组。2化痰活血方干预哮喘小鼠肺-肠轴ILC2s迁移的作用研究化痰活血方在OVA诱导的哮喘模型中,能够明显降低哮喘小鼠BALF中ILC2s的相关细胞因子IL-25、IL-33、TSLP、IL-6、AREG的含量（P<0.05,P<0.01）及下调肺组织中mi R-155的表达、同时升高mi R-146a的m RNA表达量（P<0.01）;流式细胞术检测肺组织ILC2s结果显示,ILC2s的比例显着下降（P<0.01）。同时,通过对肺-肠轴ILC2s迁移相关指标检测,发现化痰活血方能够降低肺及小肠组织中IL-25 m RNA和Sphk1 m RNA的表达（P<0.01）,免疫荧光结果显示,化痰活血方能够减少小肠组织中S1PR1及ILC2s（GATA3+EPCAM+IL-17RB）的表达,通过流式细胞术对肺及小肠组织中i ILC2s和n ILC2s的检测,发现化痰活血方能够减少小肠组织的i ILC2s和n ILC2s的含量（P<0.01）,同时能够降低肺组织i ILC2s的水平,但对肺组织中nILC2s的生成无明显作用。结论:化痰活血方及其拆方能够通过抑制哮喘小鼠黏液高分泌从而改善气道炎症,其作用机制可能与阻断小肠中i ILC2s迁移至肺中,降低肺组织中ILC2s的含量,从而减轻2型免疫反应相关。
吴银芳[8]（2020）在《气道上皮细胞MTOR-细胞自噬信号通路在哮喘和大气颗粒物诱导的气道炎症中的作用》文中进行了进一步梳理细胞自噬是细胞内物质循环的重要过程,简要来说,来自于内质网、高尔基体或者细胞膜等的双层膜结构包裹损伤的细胞器及蛋白等物质形成自噬体,自噬体与溶酶体融合形成自噬溶酶体,包裹物在溶酶体酸性水解酶的作用下降解后得以循环再利用。通常认为,MTOR是细胞自噬上游最重要的负性调控分子。雷帕霉素靶蛋白（MTOR）是一种非典型的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,属于磷酸肌醇3激酶（Ptd Ins3K）相关的激酶家族。MTOR与不同的蛋白结合形成MTOR复合物1（MTORC1）或者MTORC2,根据对雷帕霉素的敏感性不同,可分为对雷帕霉素敏感的MTORC1和对雷帕霉素不敏感的MTORC2。其中,MTORC1被认为是细胞自噬上游重要负性调控分子。机体和细胞能利用MTOR信号通路感知并整合外界因素如生长因子和营养状况的改变等影响,调控多种生理病理过程,如细胞自噬、基因转录、蛋白质合成、脂质体合成和细胞代谢等,从而调节细胞的生长和代谢,在肿瘤、肥胖、2型糖尿病和衰老等疾病发生发展中发挥重要调控作用。近年来,越来越多的研究已证实MTOR-细胞自噬信号通路在多种呼吸系统疾病中发挥重要作用,包括慢阻肺、急性肺损伤、肺纤维化等。然而目前对MTOR-细胞自噬信号通路在哮喘和大气颗粒物（PM）诱导的气道炎症中的作用仍所知甚少。哮喘是全球发病率增长最快的疾病之一,是一种以嗜酸性粒细胞、肥大细胞和T淋巴细胞等炎症细胞参与,气道粘液高分泌、气道重构和气道高反应性为特征的慢性气道炎症性疾病。现有的临床治疗方案通常能控制哮喘症状,但是很难根治。哮喘的发病机制错综复杂,通常认为主要涉及Th1/Th2细胞免疫失衡。近年来,气道上皮细胞在哮喘中的作用越来越引起重视,被认为在哮喘起始和疾病进展中发挥关键作用,研究指出气道上皮细胞损伤会影响整个呼吸系统的完整性,损伤的气道上皮细胞会释放更多促炎介质如IL25、IL33及Eotaxins等,启动或加重哮喘炎症。虽然气道上皮细胞的损伤在哮喘的发生发展中发挥重要作用,但是目前对哮喘气道上皮细胞损伤的调控机制研究并不多。空气污染是严重危害人类健康的重要因素,其中PM是大气污染的重要组成部分。不同粒径的PM均能携带有毒有害物质通过人类呼吸进入人体,沉积在气道或者进入肺部引起或者加重肺部疾病,且PM粒径越小能传播地越远,可通过血液系统进入其他脏器。流行病学调查发现PM是引起呼吸系统疾病、心血管疾病及癌症发病率上升和死亡率增加的重要因素之一。因此,通过进一步研究哮喘和PM引起气道损伤的发病机制,将有望为这两种疾病的防治提供新的有效策略,为新药物的研发提供理论指导和实验依据。关于MTOR-细胞自噬信号通路是否在哮喘中发挥作用,有研究报道自噬相关基因（ATGs）的基因表达和哮喘存在相关性,并且在哮喘病人的气道上皮细胞和成纤维细胞中发现有自噬体数量的增加。然而,另一个研究发现体内CD11C+细胞中特异性敲除ATG5的小鼠能被HDM诱导发生IL17A依赖性的中性粒细胞性哮喘炎症,提示细胞自噬在哮喘中的作用可能是细胞依赖性的,即不同细胞中的细胞自噬在哮喘中发挥不同的作用。而有一些研究也表明MTOR的抑制剂Rapamycin能够减轻哮喘炎症,然而其他研究却发现当Rapamycin用作肾移植后的免疫抑制剂时,Rapamycin会普遍引起肺损伤,提示可能与细胞自噬一样,MTOR在哮喘中的作用亦因细胞不同而不同。这与既往研究结论是相符的,即MTOR-细胞自噬信号通路在呼吸系统疾病中的作用表现为“双刃剑”,可在不同的细胞和不同的病原体诱导损伤模型中发挥不同的调控作用,既有保护性作用又有损伤性作用。此外,我们团队前期研究已证实在气道上皮细胞中,细胞自噬能介导PM诱导的气道炎症和粘液高分泌的发生,但是目前对于MTOR是否在PM诱导的气道炎症中发挥作用以及是否通过下游细胞自噬起作用等问题尚不清楚。因此,本研究中,我们将在气道上皮细胞中研究MTOR-细胞自噬信号通路在哮喘和PM诱导的气道炎症中的作用及相关分子机制。第一部分气道上皮细胞MTOR抑制细胞自噬介导IL25产生从而减轻哮喘炎症目的:气道上皮细胞是在哮喘发生发展中发挥关键作用的细胞,然而具体机制仍所知不多,因此我们将研究气道上皮细胞MTOR-细胞自噬信号通路在哮喘中的作用,并深入探索相关分子机制。方法:我们检测了哮喘病人、哮喘模型小鼠以及IL13/IL33干预后的气道上皮细胞中MTOR-细胞自噬信号通路相关蛋白的改变,同时我们成功构建了MTOR气道上皮细胞特异性敲除小鼠,利用该小鼠和LC3B敲除小鼠建立OVA或HDM诱导的哮喘模型,观察气道上皮细胞MTOR-细胞自噬信号通路在哮喘中的作用,并且开展了相关机制研究。结果:我们证实哮喘病人和哮喘模型小鼠气道上皮细胞及IL13或IL33诱导的HBE细胞中,MTOR活性下降,细胞自噬水平增加。而且,进一步研究提示上游TSC2活性增加可能引起了MTOR-细胞自噬信号通路的改变。气道上皮细胞MTOR特异性敲除能恶化哮喘炎症,而抑制细胞自噬能减轻哮喘炎症,且MTOR至少部分是依赖其下游的细胞自噬起作用的。更进一步研究还证实气道上皮细胞中MTOR敲除是通过上调,而细胞自噬是通过下调IL25的表达从而分别恶化和缓解哮喘炎症。结论:在气道上皮细胞中,某些过敏性炎症相关因子如早期产生的IL33或者后期产生的IL13等,能够通过促进TSC2活化,从而抑制MTOR活性,诱导细胞自噬。细胞自噬能够促进IL25的产生,加重哮喘炎症。因此,在气道上皮细胞中激活MTOR或者抑制细胞自噬均能作为哮喘炎症的治疗手段。第二部分抑制MTOR活化能促进细胞自噬介导PM诱导气道炎症目的:PM能进入气道和肺泡中破坏气道屏障,诱导氧化应激、细胞自噬、DNA损伤和基因组不稳定性的发生,但是目前对于PM引起气道损伤的机制仍所知甚少,因此我们将研究MTOR-细胞自噬在气道上皮细胞损伤中的作用及其在PM诱导的气道炎症中的作用并深入探索相关分子机制。方法:首先,我们检测了PM诱导的气道炎症小鼠以及PM干预后的气道上皮细胞中MTOR-细胞自噬信号通路相关蛋白的改变。同时在体内实验中,我们成功构建了MTOR和ATG5气道上皮细胞特异性敲除小鼠,利用这2种小鼠建立PM诱导的气道炎症模型,观察气道上皮细胞MTOR-细胞自噬信号通路在PM诱导的气道炎症中的作用。而在体外实验中,我们利用si RNA特异性敲除目的基因和相关抑制剂干预等方法抑制气道上皮细胞MTOR-细胞自噬信号通路活化,从而观察MTOR-细胞自噬信号通路在PM诱导的气道上皮细胞损伤中的作用并深入探索可能的分子机制。结果:我们证实在HBE细胞和小鼠气道上皮细胞中,PM抑制MTOR活化,诱导细胞自噬的发生,同时用体内体外实验共同证明抑制MTOR能恶化PM诱导的气道炎症,而抑制细胞自噬能减轻PM诱导的气道炎症,并且MTOR是依赖其下游的细胞自噬起作用的。进一步研究结果表明PM通过促进TSC2的活化,从而抑制MTOR活化,诱导细胞自噬的发生。PM还能通过TLR4-MYD88信号通路与MTOR-细胞自噬信号通路相互作用共同调控NFKB信号通路的活化,进而调控PM诱导的炎症反应。此外,细胞自噬还能通过上调EPS15的表达促进PM内吞,与TLR4信号通路相互作用共同调控PM诱导的溶酶体损伤。结论:气道上皮细胞MTOR-细胞自噬信号通路在PM诱导的气道炎症发挥重要调控作用,因此,在气道上皮细胞中激活MTOR或者抑制细胞自噬均能减轻PM诱导的气道炎症。
许成云[9]（2020）在《IL4/IL13上调过敏性哮喘气道上皮细胞中SHH表达促进杯状细胞化生》文中进行了进一步梳理支气管哮喘是呼吸系统常见病和多发病,其发病机制至今尚不清楚。由于它的难治性,WHO把哮喘定为终身性疾病。哮喘的病理生理主要表现为气道的炎症反应、气道重塑和气道高反应性。哮喘气道重塑的特征是气道上皮的粘液细胞化生,基底膜纤维化,成纤维细胞和平滑肌细胞肥大和增生,这些都是导致哮喘气道高反应性和和死亡的主要原因。SHH是HH信号通路主要分泌型配体分子之一,其在肺发育过程中呈现高表达现象,并随着肺的发育成熟,表达逐渐降低。目前,在许多肺部疾病,如肺损伤、肺纤维化和哮喘中均发现了SHH异常高表达现象。在哮喘中,SHH异常高表达的诱导因子及其机制,以及SHH对哮喘疾病进展作用尚未有报道。目的:1.确认SHH在哮喘疾病中的表达模式2.探索SHH高表达的诱导因素及其机制3.探索SHH对哮喘疾病进展的作用及其机制方法:1.分别用OVA和HDM诱导小鼠建立哮喘模型,采用免疫荧光或免疫组化的方式检测SHH及下游关键信号分子PTCH1的表达水平及表达部位。2.采用Th2型炎症因子（IL-4、IL-13和IL-5）体外诱导人16HBE细胞系,探索SHH表达的诱导因子及对气道上皮细胞本身HH信号通路的作用。3.相应炎症因子肺部给予小鼠,探索其体内对SHH及其通路的诱导作用。4.OVA诱导的小鼠哮喘模型给予STAT6抑制剂,观察其在疾病模型下对SHH表达的作用,验证信号通路。5.OVA诱导C57小鼠哮喘模型,并雾化吸入SMO抑制剂环巴胺1和6 mg/m L,观察环巴胺对肺部炎症细胞浸润、杯状细胞化生和粘液蛋白Muc5ac表达的影响。6.OVA诱导SMOflox/flox小鼠,气道滴入Cre腺病毒构建气道上皮细胞敲除SMO的小鼠哮喘模型,观察肺部炎症细胞浸润、杯状细胞化生和粘液蛋白Muc5ac表达的变化。7.OVA诱导R26-SMO-M2小鼠,然后利用气道滴入Cre腺病毒构建气道上皮细胞过表达激活形式SMO的哮喘模型,观察肺部炎症细胞浸润、杯状细胞化生和粘液蛋白Muc5ac的表达。8.在16HBE细胞中采用SMO激动剂Purmorphamine与重组N-SHH刺激,观察SHH对粘液蛋白Muc5ac极其关键调控蛋白FOXA2和SPDEF表达的影响;分别利用sh Gli1和sh Gli2慢病毒敲除Gli1和Gli2,观察激活HH信号对粘液蛋白Muc5ac和关键信号分子表达的调控是否依赖转录因子Gli。9.OVA诱导小鼠哮喘模型,肺内滴入SHH中和抗体,观察中和SHH后对肺部炎症细胞浸润、杯状细胞化生和粘液蛋白Muc5ac表达的影响。结果:1.我们在OVA诱导小鼠哮喘模型肺组织中发现了SHH高表达现象,并进一步通过免疫组化染色发现SHH主要集中高表达在气道上皮细胞。在HDM诱导的小鼠哮喘模型中同样发现了SHH高表达于气道上皮细胞。同时,哮喘患者的BALF中SHH含量对比异物吸入组显着增高,免疫荧光染色显示SHH主要表达在以CC10为标记的克拉细胞上。2.IL-4和IL-13能剂量依赖的诱导16HBE细胞中SHH的转录和蛋白表达,并能诱导16HBE细胞的Gli1的表达和Gli转录因子荧光素酶活性上升,然而IL-5对上述的诱导作用均不显着。SHH中和抗体能显着的抑制IL-4诱导Gli1的表达和Gli转录因子荧光素酶的活性上升。进一步发现IL-4/IL-13下游信号分子JAK1/2和STAT6抑制剂能显着的抑制IL-4诱导的SHH表达,且过表达JAK1/2及其激活形式和STAT6均能显着的诱导SHH表达、Gli1的表达和Gli转录因子荧光素酶活性上升。CHIP实验发现STAT6能直接结合在SHH启动子区域来介导SHH转录。这些结果表明IL-4/IL-13主要通过JAK1/2-STAT6信号诱导SHH表达分泌,并且这些SHH可以激活16HBE的HH信号。3.IL-4和IL-13 400 ng/m L肺部滴入能显着诱导小鼠肺气道上皮细胞中SHH的表达和p-STAT6水平。4.STAT6抑制剂AS能显着抑制OVA造模诱导的气道上皮细胞中的SHH高表达现象。5.雾化吸入1和6 mg/m L的环巴胺能剂量依赖的抑制OVA诱导的小鼠哮喘模型肺部炎症、杯状细胞化生和Muc5ac的表达;且环巴胺1 mg/m L并不能抑制肺部炎症产生,但对杯状细胞化生和Muc5ac的表达仍有显着的抑制作用。6.气道上细胞中敲除SMO对OVA诱导的肺部炎症无显着作用,但对杯状细胞化生和Muc5ac的表达具有显着的抑制作用。7.气道上细胞中过表达激活形式SMO对OVA诱导低炎症状态下哮喘模型的肺部炎症无显着作用,但能显着诱导杯状细胞化生和Muc5ac的表达。8.Purmopharmrin、N-SHH以及过表达Gli2和△N-Gli2均能显着的诱导Muc5ac荧光素酶报告基因活性,而敲除Gli1或Gli2能显着抑制Purmopharmrin的诱导作用;同时CHIP实验证实Gli2能直接与Muc5ac启动子区域相结合。Purmopharmrin和N-SHH均能显着抑制FOXA2的蛋白水平,同时诱导SPDEF的表达;敲除Gli1或Gli2或SMO抑制剂环巴胺能显着抑制这种效应。9.SHH中和抗体能显着的抑制OVA诱导的小鼠哮喘模型的肺部炎症、杯状细胞化生和Muc5ac的表达。结论:1.在小鼠哮喘模型和哮喘患者中,气道上皮细胞中SHH呈现异常高表达现象。2.Th2炎症因子IL-4和IL-13是诱导这种SHH高表达的主要诱导因素,二者均通过JAK1/2-STAT6信号诱导气道上皮细胞中SHH的表达,且STAT6可以通过直接结合在SHH启动子区域的方式介导SHH的转录。3.气道上皮细胞中高表达的SHH可以激活自身的HH信号,从而促进哮喘的杯状细胞化生和粘液蛋白分泌。4.激活的HH信号可以通过Gli转录因子直接结合粘液蛋白Muc5ac的启动子区域调控粘液蛋白表达,也可通过上调SPDEF或下调FOXA2的方式调控粘液蛋白Muc5ac的表达。
陶铸[10]（2019）在《银杏中抗气道炎症活性成分及其作用机制研究》文中进行了进一步梳理近几十年来,典型的气道炎症疾病如慢性肺阻塞（Chronic obstructive pulmonary disease,COPD）、哮喘和肺纤维化的患病率急剧上升。常用药物如糖皮质激素（地塞米松）等具有较强的毒副作用。因此,开发具有一定疗效且安全无副作用的中草药或功能食品,将是一条有效的防治呼吸道炎症的途径。本文对具有平喘止咳效果的中草药进行筛选,最终聚焦于银杏。在中国古代,银杏（Ginkgo biloba）的叶和种子就有用于治疗喘咳的记载。其中,《本草纲目》记载,银杏叶主治温肺益气,定喘咳;《中国药典》中记载,银杏敛肺平喘,用于治疗肺虚咳喘等症状,归心、肺经。但现代研究有关银杏对气道炎症作用的报道较少。本研究主要探讨银杏治疗气道疾病的效果及其物质基础,并阐明活性物质的作用机制。首先,比较不同的银杏提取物对卵清蛋白（Ovalbumin,OVA）致敏小鼠的抗气道炎症的效果,再利用HPLC-MS和虚拟筛选技术寻找银杏中潜在的抗气道炎症活性成分;研究探讨了银杏中活性成分如何作用于气道炎症的相关靶点,阐明了活性成分对气道炎症中相关通路的影响;其次,对有效提取物的安全性进行评价,最后对活性成分的制备工艺进行了研究,取得的主要研究结果如下:（1）采用卵清蛋白致敏小鼠,造模后小鼠各炎症因子指标大幅度上升。观察不同银杏提取物（银杏叶乙醇提取物,银杏果乙醇提取物,标准银杏叶提取物,银杏叶乙酸乙酯提取物,银杏黄酮提取物以及银杏内酯提取物）对气道炎症模型小鼠的效果。以肺泡灌洗液（Bronchoalveolar lavage fluid,BALF）中的炎症因子等为参考指标,结果表明,银杏叶乙酸乙酯提取物能明显降低BALF中炎症因子的浓度,在各类提取物中效果最佳。（2）采用HPLC-MS分析发现,银杏叶乙酸乙酯提取物中主要成分为白果黄素、银杏黄素、异银杏黄素和紫杉双黄酮这四种银杏双黄酮。动物试验显示:除去银杏双黄酮后,银杏叶乙酸乙酯提取物的抗气道炎症活性明显下降,说明银杏叶乙酸乙酯提取物中的抗气道炎症的活性成分主要为银杏双黄酮。利用Pharm Mapper预测四种银杏双黄酮在人体内对肺部疾病的潜在作用靶点,发现其可能的作用靶点主要为人中性粒细胞弹性蛋白酶（Human neutrophil elastase,HNE）。粒细胞弹性蛋白酶是一种强力的中性粒细胞趋化剂,能导致炎症细胞在肺部募集与浸润,同时引起气道黏液蛋白的高表达,在气道炎症的发生过程中起着重要的作用。利用Auto Dock进行虚拟对接,结果显示,银杏黄素与HNE自由结合能为-6.69 kcal/mol,目前唯一上市的HNE抑制剂西维来司钠为-5.36 kcal/mol。虚拟筛选结果表明,银杏双黄酮是一种良好的HNE抑制剂。进一步利用荧光色谱和圆二色谱对银杏黄素在体外抑制HNE的活性进行评价,银杏黄素与HNE结合后能导致HNE蛋白荧光淬灭,其IC50为40.8 nmol/L。圆二色谱观测到银杏黄素与HNE蛋白结合后HNE的蛋白构象发生改变。以上实验表明,银杏双黄酮在体外具有抑制HNE的生理活性。（3）采用细胞模型和动物模型对银杏双黄酮抗气道炎症机理进行研究,发现银杏双黄酮能减少由HNE导致的A549细胞中黏液蛋白5AC（Mucin 5AC,MUC5AC）基因的高表达,能抑制HNE处理A549细胞后p38与Akt通路的磷酸化,从而抑制IL-8m RNA的表达。对银杏双黄酮进行纯化,以卵清蛋白致敏小鼠为模型进行灌胃试验。结果显示,随着银杏双黄酮灌胃剂量增加,与中性粒细胞弹性蛋白酶相关的指标IL-8、黏液蛋白（MUC5AC）的表达以及中性粒细胞数目均减少。以上结果表明,银杏双黄酮能抑制中性粒细胞弹性蛋白酶的活性,使气道黏液蛋白分泌减少、炎症因子IL-8降低,从而减轻肺部炎症细胞浸润,达到抑制气道炎症的效果。（4）对银杏叶乙酸乙酯提取物进行安全性评价（50 mg/kg·bw;500 mg/kg·bw;2000 mg/kg·bw）,发现小鼠肝肾相关的指标均正常,LD50大于2000 mg/kg,表明银杏叶乙酸乙酯提取物未发现急性毒性。（5）对标准银杏叶提取物（EGB761）的提取工艺进行研究,发现银杏双黄酮成分在EGB761中被完全剔除,这也解释了中医古籍记载银杏有止咳平喘功效而现代文献却很少报道EGB761具有抗气道炎症作用的原因。因此,本文研发了一条全新的银杏资源高值化利用技术及工艺,该技术在不改变原有标准银杏提取物（EGB761）提取工艺的同时,还能同步提取得到高含量的银杏双黄酮提取物,四种银杏总双黄酮含量为87.31%,总双黄酮的收率为56.92%。综上,本文主要研究发现了银杏中抗气道炎症的活性成分,并阐明其作用机制,同时,还研发了活性成分的制备工艺,为后续进行银杏资源高值化利用,开发防治气道炎症的功能食品和药品提供了重要理论和实验依据。
二、Effects of Glucocorticoid on IL-13-induced Muc5ac Expression in Airways of Mice（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、Effects of Glucocorticoid on IL-13-induced Muc5ac Expression in Airways of Mice（论文提纲范文）
（1）人脐带间充质干细胞来源外泌体治疗严重激素抵抗性哮喘的作用与机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第1章 文献综述 |
| 1.1 严重激素抵抗性哮喘 |
| 1.1.1 严重激素抵抗性哮喘的定义 |
| 1.1.2 严重激素抵抗性哮喘的发病机制 |
| 1.1.3 严重激素抵抗性哮喘发病的分子机制 |
| 1.2 巨噬细胞与严重激素抵抗性哮喘 |
| 1.2.1 巨噬细胞的表型和功能 |
| 1.2.2 巨噬细胞在严重激素抵抗性哮喘中的作用 |
| 1.3 间充质干细胞治疗肺部疾病的作用 |
| 1.3.1 间充质干细胞的功能 |
| 1.3.2 间充质干细胞来源外泌体的生物学特性 |
| 1.3.3 间充质干细胞来源外泌体治疗肺部炎症疾病的研究现状 |
| 第2章 脐带间充质干细胞外泌体的分离与鉴定 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.2.1 实验细胞 |
| 2.2.2 实验试剂 |
| 2.2.3 主要实验仪器 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 脐带间充质干细胞稳定细胞系的建立 |
| 2.3.2 脐带间充质干细胞的鉴定 |
| 2.3.3 脐带间充质干细胞外泌体的分离 |
| 2.3.4 脐带间充质干细胞外泌体的鉴定 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.4.1 脐带间充质干细胞的形态 |
| 2.4.2 脐带间充质干细胞的鉴定 |
| 2.4.3 透射电镜下脐带间充质干细胞外泌体的形态与结构 |
| 2.4.4 NTA粒径分析外泌体颗粒直径 |
| 2.4.5 流式细胞仪鉴定人脐带间充质干细胞外泌体表面标志蛋白 |
| 2.5 讨论 |
| 第3章 MSC-Exo对 OVA/CFA诱导的SSRA小鼠的治疗作用 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.2.1 实验动物 |
| 3.2.2 实验试剂 |
| 3.2.3 主要实验仪器 |
| 3.3 主要实验方法 |
| 3.3.1 严重激素抵抗性哮喘(SSRA)模型的构建与实验分组 |
| 3.3.2 小鼠气道高反应性(AHR)检测 |
| 3.3.3 小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)的采集 |
| 3.3.4 小鼠肺组织的取样与处理 |
| 3.3.5 流式细胞仪检测肺泡灌洗液BALF中性粒细胞比例 |
| 3.3.6 小鼠肺组织HE染色 |
| 3.3.7 小鼠肺组织PAS染色 |
| 3.3.8 小鼠肺组织免疫组化 |
| 3.3.9 小鼠肺组织总RNA提取 |
| 3.3.10 qRT-PCR实验检测肺组织中细胞因子的mRNA表达水平 |
| 3.3.11 ELISA检测小鼠肺组织匀浆上清样本中细胞因子水平 |
| 3.3.12 统计学处理 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.4.1 MSC-Exo对 SSRA小鼠AHR的影响 |
| 3.4.2 MSC-Exo对 SSRA小鼠气道中性粒细胞炎症的影响 |
| 3.4.3 MSC-Exo对 SSRA小鼠肺部炎症的影响 |
| 3.4.4 MSC-Exo对 SSRA小鼠气道粘液高分泌的影响 |
| 3.4.5 MSC-Exo对 SSRA小鼠肺组织中细胞因子表达水平的影响 |
| 3.5 讨论 |
| 第4章 MSC-Exo通过调节巨噬细胞极化治疗SSRA |
| 4.1 前言 |
| 4.2 实验材料 |
| 4.2.1 实验动物 |
| 4.2.2 实验细胞 |
| 4.2.3 实验试剂 |
| 4.2.4 主要试剂的配制 |
| 4.2.5 主要实验仪器 |
| 4.3 主要实验方法 |
| 4.3.1 SSRA小鼠模型的构建、治疗及巨噬细胞清除实验 |
| 4.3.2 小鼠肺组织单细胞悬液的制备 |
| 4.3.3 小鼠腹腔灌洗液的制备 |
| 4.3.4 小鼠脾脏单细胞悬液的制备 |
| 4.3.5 流式细胞术检测小鼠体内巨噬细胞清除效果 |
| 4.3.6 巨噬细胞清除后小鼠AHR的检测 |
| 4.3.7 巨噬细胞清除后小鼠肺组织HE染色 |
| 4.3.8 小鼠肺组织总RNA提取 |
| 4.3.9 RAW264.7 细胞炎症模型的构建与处理 |
| 4.3.10 ELISA检测RAW264.7 细胞炎症模型的细胞因子表达水平 |
| 4.3.11 RAW264.7 细胞总RNA提取 |
| 4.3.12 qRT-PCR检测RAW264.7 细胞因子与极化标志分子mRNA水平 |
| 4.3.13 细胞免疫荧光检测RAW264.7 细胞极化标志物表达情况 |
| 4.3.14 小鼠肺组织与RAW264.7 细胞总蛋白提取 |
| 4.3.15 蛋白浓度测定 |
| 4.3.16 Western blot实验 |
| 4.3.17 统计学处理 |
| 4.4 实验结果 |
| 4.4.1 氯膦酸盐脂质体对小鼠体内巨噬细胞的清除效率 |
| 4.4.2 巨噬细胞细胞清除后MSC-Exo对 SSRA小鼠AHR的影响 |
| 4.4.3 巨噬细胞细胞清除后MSC-Exo对 SSRA小鼠肺部炎症的影响 |
| 4.4.4 MSC-Exo对 SSRA小鼠肺组织中巨噬细胞极化相关分子表达的影响 |
| 4.4.5 MSC-Exo对 RAW264.7 巨噬细胞极化的影响 |
| 4.5 讨论 |
| 第5章 MSC-Exo通过抑制TRAF1 调节巨噬细胞极化及机制研究 |
| 5.1 前言 |
| 5.2 实验材料 |
| 5.2.1 实验动物 |
| 5.2.2 实验细胞 |
| 5.2.3 实验试剂 |
| 5.2.4 主要试剂的配制 |
| 5.2.5 主要实验仪器 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.3.1 RAW264.7 细胞炎症模型的构建与处理 |
| 5.3.2 TMT标记定量蛋白组测序样本的分组与准备 |
| 5.3.3 TMT标记定量蛋白组测序实验 |
| 5.3.4 TMT标记定量蛋白组测序结果分析 |
| 5.3.5 RAW264.7 细胞TRAF1 siRNA转染 |
| 5.3.6 RAW264.7 细胞TRAF1 过表达质粒转染 |
| 5.3.7 RAW264.7 细胞总蛋白提取 |
| 5.3.8 Western blot实验 |
| 5.3.9 统计学处理 |
| 5.4 实验结果 |
| 5.4.1 MSC-Exo对 LPS刺激的RAW264.7 细胞蛋白表达谱的影响 |
| 5.4.2 MSC-Exo通过抑制TRAF1 表达调节巨噬细胞极化 |
| 5.4.3 MSC-Exo通过抑制TRAF1 调控极化相关信号通路NF-κB和PI3K/AKT |
| 5.5 讨论 |
| 第6章 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（2）补气通窍方调控cAPM-PKA-CREB/NF-kB信号串流防治变应性鼻炎疗效机制的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 第一部分 理论研究 |
| 1.变应性鼻炎的研究进展 |
| 1.1 变应性鼻炎的定义 |
| 1.2 变应性鼻炎的流行病学研究 |
| 1.3 变应性鼻炎的分类与诊断 |
| 1.3.1 西医分类 |
| 1.3.2 中医分类 |
| 1.3.3 诊断依据 |
| 1.4 变应性鼻炎的发病机制 |
| 1.4.1 lgE与过敏反应 |
| 1.4.2 变应性鼻炎过敏反应的早期阶段和晚期阶段 |
| 1.4.3 AR发病机制 |
| 1.5 变应性鼻炎的治疗 |
| 1.5.1 变应性鼻炎临床治疗建议和药物种类 |
| 1.5.2 临床用药的注意事项 |
| 2.变应性鼻炎发展过程中的蛋白与通路 |
| 2.1 黏蛋白与变应性鼻炎的关系 |
| 2.2 黏蛋白的结构与在AR中的作用机制 |
| 2.3 NF-κB信号通路激活导致促炎因子释放介导AR炎症机制 |
| 2.4 PKA通路的构成和调控AR的分子机制 |
| 3.变应性鼻炎的中医治疗和导师的观点 |
| 4.补气通窍方的药理学研究 |
| 第二部分 实验研研究 |
| 1.实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验试剂 |
| 1.3 实验仪器 |
| 2.实验方法 |
| 2.1 大鼠造模 |
| 2.1.1 SD大鼠的适应性喂养和分组 |
| 2.1.2 大鼠造模和成模评分标准 |
| 2.2 药物干预和干预结束后取材 |
| 2.3 鼻粘膜组织的石蜡切片HE染色 |
| 2.4 免疫组化检测p65 在鼻粘膜中的激活情况。 |
| 2.5 RT-PCR测定大鼠鼻粘膜中CRP、p65、CREB、MUC5a、MUC5b转录情况 |
| 2.6 WB测定大鼠鼻粘膜中p65、CREB、MUC5a、MUC5b蛋白含量 |
| 2.7 ELISA检测大鼠血清中IgE含量 |
| 2.8 统计方法 |
| 3.结果 |
| 3.1 变应性鼻炎大鼠鼻粘膜HE染色结果 |
| 3.2 免疫组化结果 |
| 3.3 ELISA检测血清中OVAIg E结果 |
| 3.4 WB检测鼻粘膜中p65、CREB、MUC5a、MUC5b蛋白含量的结果 |
| 3.5 RT-PCR检测鼻粘膜中p65、MUC5a、MUC5b转录的结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 缩略词表 |
| 综述 变应性鼻炎中黏蛋白作用机制的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历及攻读学位期间获得的科研成果 |
（3）二陈汤合三子养亲汤治疗AECOPD痰浊阻肺证患者的临床研究及对痰液中MUC5AC的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 第一部分 临床研究 |
| 1 临床资料 |
| 1.1 研究对象来源及分组 |
| 1.2 慢性阻塞性肺疾病西医诊断标准 |
| 1.3 慢性阻塞性肺疾病中医诊断标准 |
| 1.4 病例纳入标准 |
| 1.5 病例排除标准 |
| 1.6 病例脱落标准 |
| 1.7 病例剔除标准 |
| 1.8 伦理原则 |
| 1.9 主要实验仪器及试剂 |
| 2 临床研究方法 |
| 2.1 样本量 |
| 2.2 病例分组 |
| 2.3 治疗方案 |
| 2.4 观察指标 |
| 2.5 统计方法 |
| 3 研究结果 |
| 3.1 治疗前两组一般基线情况比较 |
| 3.1.1 性别构成对比 |
| 3.1.2 年龄及病程构成对比 |
| 3.1.3 治疗前肺功能分级比较 |
| 3.2 治疗前后两组观察指标比较 |
| 3.2.1 两组患者治疗后临床疗效比较 |
| 3.2.2 两组患者中医证候积分比较 |
| 3.2.3 两组患者痰量积分情况比较 |
| 3.2.4 两组患者肺功能比较 |
| 3.2.5 两组患者动脉血气分析指标(PaO_2、PaCO_2)比较 |
| 3.2.6 两组患者痰液中MUC5AC水平比较 |
| 3.3 安全性观察指标 |
| 第二部分 讨论与分析 |
| 1 现代医学对AECOPD的认识 |
| 1.1 流行病学研究调查研究 |
| 1.2 慢性阻塞性肺疾病危险因素 |
| 1.3 慢性阻塞性肺疾病发病机制研究进展 |
| 1.4 现代医学对AECOPD治疗 |
| 2 中医对AECOPD的认识 |
| 2.1 中医对AECOPD的病名追溯 |
| 2.2 中医对AECOPD病因病机的认识 |
| 2.3 中医对AECOPD的治疗 |
| 3 本研究与痰和痰液中黏蛋白5AC(MUC5AC)的相关性 |
| 3.1 痰是AECOPD的病理产物 |
| 3.2 MUC5AC是参与气道黏液高分泌过程的重要炎性因子 |
| 3.3 中医理气化痰法在治疗AECOPD过程中的优势 |
| 4 二陈汤合三子养亲汤的源流和组方分析 |
| 4.1 二陈汤合三子养亲汤的源流 |
| 4.2 二陈汤合三子养亲汤的组方分析 |
| 5 研究结果分析 |
| 5.1 二陈汤合三子养亲汤对AECOPD(痰浊阻肺证)患者临床总有效率的结果分析 |
| 5.2 二陈汤合三子养亲汤对AECOPD（痰浊阻肺证）患者中医证候积分结果分析 |
| 5.3 二陈汤合三子养亲汤对AECOPD(痰浊阻肺证)患者痰量积分情况的结果分析 |
| 5.4 二陈汤合三子养亲汤对AECOPD(痰浊阻肺证)患者肺功能情况的结果分析 |
| 5.5 二陈汤合三子养亲汤对AECOPD(痰浊阻肺证)患者动脉血气分析情况的结果分析 |
| 5.6 二陈汤合三子养亲汤对AECOPD(痰浊阻肺证)患者痰液中MUC5AC水平的结果分析 |
| 结论 |
| 存在问题及展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 主要中英文缩略词表 |
| 综述 中医辨证论治慢性阻塞性肺疾病急性加重期的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历及攻读学位期间获得的科研成果 |
（4）基于“夙根伏痰”理论探究益气固本胶囊减轻过敏性哮喘气道炎症和气道重塑的作用机制（论文提纲范文）
| 摘要 ABSTRACT 英文缩略语 引言 文献综述 |
| 1 哮喘的定义、流行病学及分型 |
| 2 哮喘发病机制 |
| 3 治疗 实验研究 |
| 第一章 益气固本胶囊对过敏性哮喘模型气道炎症和气道重塑的影响 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第二章 益气固本胶囊对PDGF-BB诱导的气道平滑肌增殖和迁移的影响 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 结论 本文创新点 参考文献 致谢 在学期间主要研究成果 个人简介 |
（5）基于IL-13介导STAT6与AQP5“串话”探讨当归干预哮喘气道黏液高分泌的分子机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩写说明 |
| 前言 |
| 技术路线图 |
| 第一章 当归对阴虚哮喘小鼠的治疗作用 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 药品与试剂 |
| 1.3 实验仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 药物的制备 |
| 2.2 动物的分组、造模及给药 |
| 2.3 小鼠哮喘症状的测评 |
| 2.4 阴虚哮喘小鼠肺功能的检测 |
| 2.5 阴虚哮喘小鼠肺脏指数与肺液清除功能的检测 |
| 2.6 阴虚哮喘小鼠肺组织病理学的观察 |
| 2.7 统计学方法 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 当归对小鼠哮喘症状的影响 |
| 3.2 当归对阴虚哮喘小鼠肺功能的影响 |
| 3.3 当归对阴虚哮喘小鼠肺脏指数与肺液清除功能的影响 |
| 3.4 当归对阴虚哮喘小鼠肺组织病理学的影响 |
| 4 讨论 |
| 第二章 当归对阴虚哮喘小鼠气道黏液高分泌的影响 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 药品与试剂 |
| 1.3 实验仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 药物的制备 |
| 2.2 动物模型的复制及给药 |
| 2.3 样本的采集 |
| 2.4 阴虚哮喘小鼠黏液总固体及Muc5ac含量的测定 |
| 2.5 阴虚哮喘小鼠肺组织中Muc5ac含量的测定 |
| 2.6 阴虚哮喘小鼠杯状细胞的测定 |
| 2.7 阴虚哮喘小鼠Muc5ac表达水平的测定 |
| 2.8 统计学方法 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 当归对阴虚哮喘小鼠气道黏液总固体及其中Muc5ac含量的影响 |
| 3.2 当归对阴虚哮喘小鼠肺组织中Muc5ac含量的影响 |
| 3.3 当归对阴虚哮喘小鼠气道杯状细胞的影响 |
| 3.4 当归对阴虚哮喘小鼠肺组织Muc5ac表达免疫组化的影响 |
| 4 讨论 |
| 第三章 当归对小鼠阴虚哮喘相关活性因子及STAT6、AQP5 表达的影响 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 药品与试剂 |
| 1.3 实验仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 药物的制备 |
| 2.2 动物模型的复制及给药 |
| 2.3 样本的采集 |
| 2.4 阴虚哮喘小鼠血清IgE含量的测定 |
| 2.5 阴虚哮喘小鼠血清细胞因子含量的测定 |
| 2.6 阴虚哮喘小鼠肺组织中NF-κB表达水平的测定 |
| 2.7 免疫组化法测定阴虚哮喘小鼠肺组织STAT6 含量 |
| 2.8 免疫组化法测定阴虚哮喘小鼠肺组织AQP5 含量 |
| 2.9 统计学方法 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 当归对阴虚哮喘小鼠血清IgE的影响 |
| 3.2 当归对阴虚哮喘小鼠血清细胞因子的影响 |
| 3.3 当归对阴虚哮喘小鼠肺组织NF-κB表达的影响 |
| 3.4 当归对阴虚哮喘小鼠肺组织STAT6 的影响 |
| 3.5 当归对阴虚哮喘小鼠肺组织AQP5 的影响 |
| 3.6 IL-13与STAT6、AQP5 的相关性分析 |
| 4 讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 综述一 |
| 参考文献 |
| 综述二 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
（6）LncRNA H19在过敏性哮喘中的作用及机制初探（论文提纲范文）
| 英汉缩略语名词对照 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 讨论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士期间发表的文章 |
（7）化痰活血方通过抑制ILC2s干预哮喘的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 主要缩略词中英文对照表 |
| 前言 |
| 第一章 化痰活血方及其拆方对哮喘小鼠气道黏液高分泌的影响 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验药材 |
| 1.2 实验动物 |
| 1.3 主要试剂 |
| 1.4 主要仪器 |
| 1.5 主要实验试剂的配制 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 动物分组 |
| 2.2 哮喘动物模型的建立与给药 |
| 2.3 样品采集 |
| 2.4 指标检测 |
| 2.5 统计学方法 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 化痰活血方及其拆方改善哮喘小鼠行为学及延长引喘潜伏期 |
| 3.2 化痰活血方及其拆方降低哮喘小鼠BALF中各类白细胞的数量 |
| 3.3 化痰活血方及其拆方改善哮喘小鼠肺组织病理学 |
| 3.4 化痰活血方及其拆方抑制哮喘小鼠肺组织杯状细胞增生 |
| 3.5 化痰活血方及其拆方抑制哮喘小鼠血清及BALF中炎性因子的生成 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第二章 化痰活血方干预哮喘小鼠肺-肠轴ILC2s迁移的作用研究 |
| 第一节 化痰活血方对哮喘小鼠肺组织中ILC2s的作用 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验药材 |
| 1.2 实验动物 |
| 1.3 主要实验试剂 |
| 1.4 主要实验仪器 |
| 1.5 主要试剂的配制 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 动物分组 |
| 2.2 哮喘小鼠模型的建立与给药 |
| 2.3 样品采集 |
| 2.4 指标检测 |
| 2.5 统计学方法 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 化痰活血方抑制哮喘小鼠BALF中 ILC2s相关细胞因子的生成 |
| 3.2 化痰活血方调节哮喘小鼠肺组织中ILC2s相关调控基因的表达 |
| 3.3 化痰活血方减少哮喘小鼠肺组织中ILC2s的含量 |
| 第二节 化痰活血方对哮喘小鼠肺-肠轴ILC2s迁移的作用研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验药材 |
| 1.2 实验动物 |
| 1.3 主要实验试剂 |
| 1.4 主要实验仪器 |
| 1.5 主要试剂的配制 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 动物分组 |
| 2.2 哮喘小鼠模型的建立与给药 |
| 2.3 样品采集 |
| 2.4 指标检测 |
| 2.5 统计学方法 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 化痰活血方抑制哮喘小鼠肺及小肠组织中IL-25mRNA的表达 |
| 3.2 化痰活血方抑制哮喘小鼠肺及小肠组织中Sphk1 mRNA的表达 |
| 3.3 化痰活血方抑制哮喘小鼠小肠组织中S1PR1的表达 |
| 3.4 化痰活血方抑制哮喘小鼠小肠组织中ILC2s的表达 |
| 3.5 化痰活血方减少哮喘小鼠肺与小肠组织中iILC2s和 nILC2s的含量 |
| 第三节 本章讨论与结论 |
| 1 讨论 |
| 2 结论 |
| 第三章 总结与展望 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表文章情况 |
（8）气道上皮细胞MTOR-细胞自噬信号通路在哮喘和大气颗粒物诱导的气道炎症中的作用（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略语中英文对照 |
| 第一部分 气道上皮细胞MTOR抑制细胞自噬介导IL25 产生从而减轻哮喘炎症 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 材料和方法 |
| 1.3 结果 |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 小结 |
| 第二部分 抑制MTOR活化能促进细胞自噬介导PM诱导气道炎症 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料和方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 参考文献 |
| MTOR-细胞自噬信号通路在慢性气道炎症性疾病中的作用 |
| 参考文献 |
| 作者简历及在读期间所取得的科研成果 |
（9）IL4/IL13上调过敏性哮喘气道上皮细胞中SHH表达促进杯状细胞化生（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 1 引言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 实验仪器 |
| 2.2 实验材料与试剂 |
| 2.3 实验方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 SHH在小鼠哮喘模型和哮喘患者中的表达 |
| 3.2 Th2 炎症因子对气道上皮细胞16HBE中 SHH表达的诱导作用 |
| 3.3 IL-4 通过JAK1/2-STAT6 信号通路调控SHH表达 |
| 3.4 IL-4和IL-13 对小鼠肺组织中SHH表达的诱导作用 |
| 3.5 STAT6 抑制剂对OVA诱导的小鼠哮喘模型的影响 |
| 3.6 Smo抑制剂环巴胺对OVA诱导的小鼠哮喘模型的影响 |
| 3.7 气道上皮细胞中敲除Smo对 OVA诱导的小鼠哮喘模型的影响 |
| 3.8 SMO激活对OVA诱导的小鼠哮喘模型的影响 |
| 3.9 SHH诱导粘液蛋白Muc5ac表达分泌的机制探索 |
| 3.10 SHH中和抗体对OVA诱导的小鼠哮喘的影响 |
| 3.11 哮喘模型中SHH高表达及其调控杯状细胞化生的作用及机制 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 Sonic Hedgehog 信号在肺发育与肺部疾病中的功能和机制 |
| 参考文献 |
| 作者简历及科研成果 |
（10）银杏中抗气道炎症活性成分及其作用机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 引言 |
| 1.1 气道炎症疾病的研究进展 |
| 1.2 银杏的应用研究进展 |
| 1.3 本论文的研究目的及主要内容 |
| 2 银杏中不同提取物抗气道炎症作用研究 |
| 2.1 试剂与材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.4 本章小结 |
| 3 银杏抗气道炎症活性成分的分析鉴定 |
| 3.1 试剂与材料 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.4 本章小结 |
| 4 银杏双黄酮抗气道炎症的作用靶点研究 |
| 4.1 试剂与材料 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.4 本章小结 |
| 5 银杏双黄酮抗气道炎症的作用机制 |
| 5.1 试剂与材料 |
| 5.2 实验方法 |
| 5.3 实验结果 |
| 5.4 本章小结 |
| 6 银杏叶乙酸乙酯提取物急性毒性评价 |
| 6.1 试剂与材料 |
| 6.2 实验方法 |
| 6.3 实验结果 |
| 6.4 本章小结 |
| 7 银杏双黄酮提取工艺的研究 |
| 7.1 试剂与材料 |
| 7.2 实验方法 |
| 7.3 实验结果 |
| 7.4 本章小结 |
| 8.总结与展望 |
| 8.1 总结 |
| 8.2 本文的主要创新点 |
| 8.3 展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录Ⅰ 攻读博士学位期间发表的论文 |
| 附录Ⅱ 主要缩略词 |
| 附录Ⅲ Pharm Mapper数据库对接结果 |
四、Effects of Glucocorticoid on IL-13-induced Muc5ac Expression in Airways of Mice（论文参考文献）
- [1]人脐带间充质干细胞来源外泌体治疗严重激素抵抗性哮喘的作用与机制研究[D]. 董兵. 吉林大学, 2021(01)
- [2]补气通窍方调控cAPM-PKA-CREB/NF-kB信号串流防治变应性鼻炎疗效机制的实验研究[D]. 彭林峰. 广西中医药大学, 2021(02)
- [3]二陈汤合三子养亲汤治疗AECOPD痰浊阻肺证患者的临床研究及对痰液中MUC5AC的影响[D]. 孙桂丽. 广西中医药大学, 2021(02)
- [4]基于“夙根伏痰”理论探究益气固本胶囊减轻过敏性哮喘气道炎症和气道重塑的作用机制[D]. 孔一卜. 长春中医药大学, 2020(08)
- [5]基于IL-13介导STAT6与AQP5“串话”探讨当归干预哮喘气道黏液高分泌的分子机制[D]. 姚楠. 甘肃中医药大学, 2020(12)
- [6]LncRNA H19在过敏性哮喘中的作用及机制初探[D]. 杨静. 重庆医科大学, 2020(12)
- [7]化痰活血方通过抑制ILC2s干预哮喘的作用及机制研究[D]. 傅榕冰. 云南中医药大学, 2020(01)
- [8]气道上皮细胞MTOR-细胞自噬信号通路在哮喘和大气颗粒物诱导的气道炎症中的作用[D]. 吴银芳. 浙江大学, 2020(01)
- [9]IL4/IL13上调过敏性哮喘气道上皮细胞中SHH表达促进杯状细胞化生[D]. 许成云. 浙江大学, 2020(01)
- [10]银杏中抗气道炎症活性成分及其作用机制研究[D]. 陶铸. 华中科技大学, 2019(01)