一、逆向两点校正测定血清亚铁氧化酶（论文文献综述）
张珂[1]（2020）在《在茶氨酸作用下的铜介导绿茶EGCG氧化的机制研究》文中研究说明绿茶多酚提取物是有美国食品药品监督管理局（Food and Drug Administration,FDA）批准的植物性处方药,其含量最高且主要的活性物质为表没食子儿茶素没食子酸酯（（-）-epigallocatechin-3-gallate,EGCG）。EGCG具有多种益于生物体的效应,如抗氧化,预防癌症、心血管疾病,调节糖脂代谢等作用。研究发现,EGCG的作用发挥与其抗氧化或促氧化性相关,这种特性的表达与剂量及生物环境有关。临床上发现,高剂量口服以EGCG为主的绿茶多酚提取物会出现肝毒性,恶心,腹痛等副作用,而这种副作用归咎于EGCG的自氧化作用。EGCG的自氧化会产生超氧阴离子（superoxide anion,·O2-）、过氧化氢（hydrogen peroxide,H2O2）等活性氧（reactive oxygen species,ROS）;而变价金属离子,如铜、铁离子,能够促进EGCG的自氧化,并与H2O2发生芬顿反应（Fenton Reaction）,产生毒性更强的羟基自由基（hydroxyl radicals,·OH-）。EGCG自氧化会转化为醌,随后攻击蛋白质的半胱氨酸残基上的巯基,并与其共价结合形成醌化蛋白（quinoprotein,QP）。铜是人体第三大微量元素,在肝脏中含量最高,是组成多种辅酶的重要组成部分。铜离子具有氧化还原活力,过多的铜离子会对人体造成损伤,引发机体紊乱,因此游离铜含量是被严格控制在细胞需要的水平,即大约平均每个细胞含有远低于一个铜离子。二硫代氨基甲酸酯（dithiocarbamates,DTC）一族的化合物广泛用于农业,工业及医疗领域,因此在人们日常生活中接触此类化合物几率很高。戒酒硫（disulfiram,DSF）及其代谢产物二乙基二硫代氨基甲酸酯（diethyldithiocarbamate,DEDTC）作为其中的代表,具有强大的金属离子络合能力,能够络合铜离子。DSF或DEDTC进入机体能够络合铜离子,从而显着抑制了含铜酶的活力,如铜/锌-超氧歧化酶（Cu/Zn-superoxide dismutase,SOD）,形成铜复合体（Cu（DEDTC）2）。DEDTC具有脂溶性能自由进出细胞膜,因此可作为铜转运体,携带铜于肝脏中富集。本研究发现Cu（DEDTC）2仍具有氧化还原性。EGCG产生自氧化毒性的靶器官是肝脏,当体内具有清除活性氧的SOD被DEDTC削弱,同时在肝脏中富集大量氧化还原铜,会极大地提高了EGCG的毒性。已有研究报道,在EGCG和DEDTC均为药理剂量,同时腹腔注射于小鼠时会造成严重的伤亡现象,其原因是EGCG的氧化得到显着促进,从而毒性增强。本研究则进一步具体去阐释这种损伤的机制:1.DEDTC抑制血中SOD活力,使得EGCG自氧化水平提高,消耗加快,富集于肝中的氧化还原铜促进EGCG氧化消耗;2.增强的EGCG氧化毒性会显着提高肝细胞中炎症与凋亡相关基因及蛋白的表达;3.产生大量醌化蛋白;4.脂质过氧化。茶氨酸（L-theanine,L-T）是茶树（Camellia Sinensis）中特有的也是含量最高的非蛋白质氨基酸,为茶汤滋味提供鲜味。据报道,茶氨酸具有多种有益功能,主要是对大脑的作用,能够镇定舒缓。由于EGCG大量摄入会引发机体氧化逆境,本研究探索在茶氨酸干预下,EGCG的自氧化,及其对生物体的影响。由于茶氨酸能够有效结合铜,因此通过体外实验发现,茶氨酸保护了由铜离子或一种主要含铜的,具有多酚氧化能力的酶,铜蓝蛋白（ceruloplasmin,Cp）,介导的EGCG促氧化、DNA损伤及醌化蛋白形成等;而在动物实验上,采用亚急性毒性剂量的EGCG（55 mg/kg）腹腔注射一天一次,共5次,造成了小鼠转氨酶升高,肝脏p53相关基因上调,氧化逆境产生,DNA损伤以及肝脏醌化蛋白含量显着提高;而作为抗氧化系统的Nrf2相关基因显着上调;保护组采用茶氨酸与EGCG同时腹腔注射于小鼠,上述损伤皆被抑制,甚至有的指标与正常对照组水平相当,而Nrf2基因并没有明显上调,由此推断,茶氨酸抑制了EGCG的自氧化。这些结果证明了茶氨酸能有效保护EGCG的自氧化引起的毒性,对于儿茶素健康功能的安全利用有重要意义。综上所述,铜能够促进EGCG的氧化,增强其氧化毒性。而DEDTC可通过抑制SOD活力,与运载氧化还原性铜进入肝细胞并富集两种效果共同促进EGCG的自氧化,增强其毒性,降低EGCG等儿茶素类化合物的安全使用阈值。茶氨酸是与EGCG共同出自茶树,茶氨酸对铜的络合效应较强,能有效抑制氧化还原铜,以及含铜多酚氧化酶—铜蓝蛋白对EGCG的促进作用,从而提高EGCG为代表的儿茶素类化合物的安全利用阈值。
杨利昂[2]（2019）在《蓖麻蚕铁蛋白及亚基的分离鉴定与功能分析》文中进行了进一步梳理铁是生物体不可缺少的微量元素,普遍存在于生物体各个组织中。铁蛋白（Ferritin）是一种广泛分布并且在调节铁储存与运输、抗氧化胁迫、细胞循环和抗病原菌等方面发挥关键作用的铁结合蛋白。近年来,昆虫铁蛋白在参与免疫应答调节方面备受关注。本研究对蓖麻蚕铁蛋白及亚基进行功能分析,期望能够对昆虫铁蛋白的研究做出一定程度上的补充。本研究克隆了编码蓖麻蚕铁蛋白重链亚基（ScFerHCH）和轻链亚基（ScFerLCH）基因的cDNA序列;分离出蓖麻蚕铁蛋白复合体及其亚基;获得了ScFerHCH和ScFerLCH的组织表达模式、应答铁离子和病原菌刺激的表达模式。体外构建了重组蓖麻蚕铁蛋白亚基自组装复合体,并确认复合体及各亚基与病原菌的结合。具体研究结果如下:1、蓖麻蚕铁蛋白重链亚基（ScFerHCH）和轻链亚基（ScFerLCH）的生物信息学分析基于蓖麻蚕转录组数据,鉴定并分析了 ScFerHCH和ScFerLCH的cDNA核苷酸序列及编码的氨基酸序列,确定了ScFerHCH和ScFerLCH的信号肽和ORF阅读框的位置。同源性分析表明,蓖麻蚕铁蛋白亚基与家蚕铁蛋白亚基有很高的同源性,并且在三维结构上也十分相似,推测二者具有相似的功能。ScFerHCH和ScFerLCH都具有铁反应原件,但只有ScFerHCH具有铁氧化酶中心。2、蓖麻蚕铁蛋白复合体的提取和亚基的分离鉴定以Native-PAGE的方法从蓖麻蚕幼虫血液中分离出铁蛋白复合体,再以Western-blot和MALDI-TOF/TOF MS证明其由两种不同类型的亚基（ScFerHCH和ScFerLCH）构成。3、ScFerHCH和ScFerLCH的组织表达模式分析以RT-qPCR和Western-blot从转录水平和蛋白水平分析了 ScFerHCH和ScFerLCH的组织表达模式,结果表明ScFerHCH和ScFerLCH广泛存在于蓖麻蚕的各个组织中,且在中肠、脂肪体、血液和丝腺中都有很高的表达量。4、ScFerHCH和ScFerLCH铁离子螯合能力、抗氧化能力和应答铁离子刺激的表达模式分析重组ScFerHCH蛋白可以螯合游离的铁离子,也表现出抗氧化剂H202的能力。但是重组ScFerLCH蛋白并不能螯合游离的铁离子,也没有抗氧化的能力。铁离子刺激后,ScFerHCH和ScFerLCH的表达量在中肠、血液和脂肪体中都出现了明显的上调表达。5、重组ScFerHCH和ScFerLCH蛋白的体外自组装及应答病原菌的能力分析复性后的重组铁蛋白亚基在体外可以自组装形成复合体,该复合体的螯合铁离子的能力显着高于重链亚基。复合体和两类亚基都可以与多种病原菌结合,但是并不能直接抑制病原菌的生长。当S.aureus和P.aeruginosa刺激蓖麻蚕时,ScFerHCH和ScFerLCH的表达量出现了明显的上调。综上所述,本研究首次从蓖麻蚕幼虫血液中提取出铁蛋白复合体并分离了两个组成亚基,并证明了 ScFerHCH具有螯合铁离子和抗氧化的能力,ScFerHCH和ScFerLCH应答铁离子刺激时组在织中表达量都明显上调;研究还证明了铁蛋白亚基能够参与病原菌的免疫刺激;此外,我们还发现重组铁蛋白亚基在体外可以自组装形成复合体,复合体及亚基都可以与病原菌结合,但不能直接抑制病原菌。以上结果为进一步研究蓖麻蚕铁蛋白生物学功能和参与免疫应答分子机制提供了一定的科学依据。
尹侃[3]（2017）在《低强度激光（LLL）对间充质干细胞（MSCs）的生物学效应研究》文中研究说明光生物调节（PBM）通过光线影响内源光感受器的活性,激活线粒体逆行信号传导途径改变细胞增殖和代谢。低水平激光（LLL）是用于光生物调节的常见光源。光谱中这个区域中的光可以穿透组织且不具有致癌性质。低水平激光（LLL）已作为非侵入性物理治疗应用于临床,例如骨质疏松症,通过改变骨髓间充质干细胞的状态来发挥作用。由于光疗法广泛用于医学,干细胞疗法和光疗法的组合似乎是一个更加明智的选择。LLL对人脂肪间充质干细胞（hADSCs）的效应机制仍有待研究。一种可能的机制是线粒体呼吸链中的细胞色素C氧化酶参与光子吸收。微阵列技术发现辐照后涉及能量产生和细胞抗氧化保护途径的基因表达显着上调。在本文的第一部分,我们评估了LLL对细胞活力,迁移,抗凋亡能力的影响以及探讨了相关机制。使用MTS测量细胞增殖,并通过流式细胞术（Flow Cytometry,FCM）检测细胞周期。通过TEM、FCM、QRT-PCR和免疫荧光评价LLL对线粒体生物发生（分裂和融合）和功能（ATP,ROS,NO）的影响。使用transwell、免疫荧光、ELISA和Westernblot评估细胞迁移和细胞骨架改变（肌动蛋白和微管蛋白）。使用流式细胞术、免疫荧光和Westernblot评估细胞凋亡。我们研究了低水平激光（LLL）LLL照射1小时后继续培养6小时或24小时后MSCs上述各项指标的变化。作用机制包括增殖速率增加介导的S期比例上调;通过融合（Mfn1,Mfn2和Opa-1）和分裂（Fis1,Drp-1和MTP18）相关蛋白介导的线粒体生物发生,以及NRF1,TFAM,PGC-1a表达上调和细胞内ROS和NO浓度变化介导的线粒体功能改变;通过ERK1/2和FAK途径以及生长因子如HGF和PDGF的上调引起细胞迁移加速;通过增加Bcl-2和降低Bax蛋白表达量,或者LLL处理的MSC与5-氟尿嘧啶诱导凋亡的MSC之间形成隧道纳米管（TNT）来抵抗凋亡。MSCs在动物模型和临床上获得了良好治疗效果,对于MSCs和基于它的产品在再生医学中的应用将会被持续探讨。MSCs促进组织救援/治疗的机制包括:（1）涉及到蛋白/多肽以及激素分泌的旁分泌作用;（2）通过隧道纳米管或者微囊泡转移线粒体;（3）通过外泌体exosomes转移RNA等分子。MSC被募集到应激或炎症部位以实现其修复功能。MSCs的免疫调节不是自发的,需要“授权”或激活来发挥其免疫抑制作用。MSCs表面表达Toll样受体（TLR）,TLR信号传导参与MSCs的许可。MSC表面表达的TLR3和TLR4可分别被双链RNA如polyl:C和脂多糖LPS所激活。活化TLR4信号后MSCs会释放增强炎症反应的细胞因子（IL-6,IL-8和TGF-b等）从而极化成MSC1型促炎细胞,MSC1型细胞能活化T细胞;相反,激活TLR3信号后,MSCs会产生抑制炎症反应的细胞因子（IDO,PGE-2,IL-4和IL-1RA）极化成MSC2抑炎细胞,MSC2型细胞具有抑制淋巴细胞增殖的能力。在本文的第二部分,我们探讨了 LLL对TLR4诱导因子LPS介导的MSCs炎症反应的抑制作用。通过ELISA试剂盒和QRT-PCR评价炎性因子表达和分泌,用CM-H2DCFDA和DAF-FM试剂盒测量细胞内ROS和NO含量变化,发现LLL降低LPS诱导MSC中IL-1β,IL-6,IL-8,ROS和NO的分泌。免疫荧光检测NF-κ B在LLL照射的MSC中核易位相对于LPS诱导组显着下降。Western blot分析表明,LLL通过调节p65和Iκ Bα的磷酸化抑制NF-κ B的活化。我们将纯化的外周血单核细胞（PBMC）通过植物凝集素（PHA）刺激后与3种方式处理的MSCs共培养发现,LLL处理后的MSC显着降低淋巴细胞激活标记CD25和CD69在PHA刺激的淋巴细胞上的表达。综上所述,我们使用11-16 J/cm2剂量的LLL促进MSCs的增殖,迁移和抗凋亡能力以及加强其抑炎作用。LLL可以作为MSC在移植前预处理手段,以达到基于干细胞治疗的安全和长期功效。
王敏[4]（2016）在《肝豆状核变性脑部铁沉积磁敏感定量成像研究》文中指出1背景肝豆状核变性（hepatolenticular degeneration,HLD）又名Wilson病（Wilsons disease,WD）,是由位于13号染色体上ATP7B酶突变导致铜代谢紊乱及胆汁排泄障碍的一种常染色体单基因隐性遗传疾病。肝豆状核变性患者的铜代谢紊乱已经被大量的临床试验及活体组织病理学所证实,患者体内的铜离子沉积于肝脏、肾脏、角膜及脑内深核团如豆状核、尾状核等区域,临床治疗以金属螯合剂驱铜、排铜治疗为主。但是部分患者经过驱、排铜治疗后,疗效并无好转,少部分甚至出现病情加重的情况,深入研究后发现铜代谢与铁代谢之间存在较为密切的关系,肝豆状核变性患者不仅存在铜代谢紊乱,而且也存在着铁代谢紊乱,临床试验、影像学及活体组织病理学也已相继证实肝豆状核变性患者体内存在铁超载现象。定量磁化率分布图（QSM）是在磁敏感加权成像（SWI）基础上出现的一项全新技术,与SWI一样,它也是利用组织间的磁敏感性不同而成像的,并能够克服SWI的对方位依赖的局限性,达到较精确地定量测定HLD患者脑组织内铁离子含量改变之目的。2目的探讨QSM在HLD患者脑部铁沉积研究的应用价值及HLD患者的磁化率值改变与其年龄、病程、24h尿铜、24h尿铁、铜氧化酶活力之间的关系。3方法对34例符合要求的肝豆状核变性患者及28例年龄、性别相匹配的健康志愿者进行常规MRI的FLAIR序列平扫、3D解剖像及QSM成像技术的ESWAN序列扫描;利用MEDI方法处理得到QSM数据;通过基于体素的形态学全脑自动化测量方法（VBA）,利用AFNI软件,对HLD组与健康对照组的磁化率值数据进行逐体素的组分析（3dttest++）,得出组间分析结果;对HLD组脑内磁化率值与患者年龄、病程、24H尿铜、24h尿铁、铜氧化酶活力之间进行协变量相关分析。4结果组分析结果显示HLD组与对照组相比,脑内多处深核团及大脑灰质皮层区域磁化率值呈显着性改变（p=0.01,α≤0.05,cluster size=176）,其区域依次为:右侧丘脑、左侧丘脑,右侧豆状核、右侧颞叶灰质、左侧顶下小叶、右侧豆状核、右侧岛叶。协变量分析结果显示:肝豆病人的左侧豆状核、右侧楔前叶、左侧楔前叶、右侧后扣带回、右侧楔叶的磁化率值与病人年龄呈正相关。肝豆病人的磁化率值与患者的病程时间、铜氧化反应酶活力、24小时尿铜、尿铁无明显相关性。5结论HLD患者脑内灰质核团及大脑灰质皮层有异常性顺磁性物质沉积,肝豆病人铜代谢紊乱同时可伴发铁代谢紊乱,且铁沉积可能是继发于铜沉积的损伤作用。肝豆病人铜铁的复合沉积可能造成基底节-丘脑-皮层环路损伤,导致锥体外系症状出现。QSM的磁化率值可作为测量和评估HLD患者脑内灰质核团及大脑灰质皮层区域异常性顺磁性物质沉积的有效方法。
邵子杰[5]（2016）在《Wilson病患者铁代谢与认知功能障碍及其相关血清标志物的研究》文中研究说明目的通过检测Wilson病患者、慢性乙型患者和正常人的铁代谢指标和血清α-synuclein、Tau、Aβ的含量,分析不同WD患者铁代谢结果与MMSE量表的相关性及其与血清α-synuclein、Tau、Aβ的相关性,探讨WD认知功能障碍是否与铁代谢异常有关。方法收集安徽中医药大学神经病研究所附属医院住院确诊的WD患者46例为实验组,临床分型为肝型22例,脑型24例;同时收集乙肝患者21例,正常人17例,留取外周血样本检测入组者血清铁代谢指标、铜生化指标、血清标志物指标（α-synuclein、Tau、Aβ）,并通过MMSE量表初步筛查入组患者智能状态,记录其姓名、性别、年龄、病程、首发症状等临床资料。采用统计软件分析各组之间铁代谢异常与WD认知功能障碍及其相关血清生物学指标相关性。结果1.铁代谢结果:乙肝组SI水平高于正常组（p<0.01）;脑型WD组SI水平低于正常组（p<0.05）;肝型WD组SI水平与正常组无明显区别（p>0.05）;乙肝组SI水平均显着高于脑型WD、肝型WD组（p<0.01）;脑型WD组与肝型WD组SI水平无明显区别（p>0.05）;乙肝组TIBC水平显着低于正常组、肝型WD组和脑型WD组（p<0.05）;肝型WD组和脑型WD组TIBC水平与正常组比较无明显区别（p>0.05）。正常组SF值显着低于乙肝组和肝型WD组（p<0.01）,与脑型WD组无明显区别（p>0.05）;脑型WD组和肝型WD组SF水平显着低于乙肝组（p<0.01）;肝型WD组和脑型WD组之间无明显区别。乙肝组TF水平显着低于正常组、脑型WD组和肝型WD组（p<0.01）;脑型wd组、肝型wd组和正常组之间tf水平无明显区别（p>0.05）。乙肝组stfr水平显着高于正常组、脑型wd组和肝型wd组（p<0.01）;正常组与脑型、肝型wd组stfr水平无明显区别（p>0.05）;脑型wd组stfr水平显着低于肝型wd组（p<0.05）。2.脑型wd组mmse评分显着低于其他组（p<0.01）,乙肝组、肝型wd组与正常组比较mmse评分无明显差异（p>0.05）。3.乙肝组aβ水平显着低于其他各组（p<0.01）;tau水平、α-synuclein水平均显着低于正常组与脑型wd组（p<0.01）。脑型wd组血清aβ、tau蛋白水平均显着高于正常组和乙肝组（p<0.01）;α-synuclein水平显着高于乙肝组（p<0.01）,与正常组和肝型wd组无明显区别（p>0.05）。肝型wd组血清aβ、tau蛋白及α-synuclein水平显着高于乙肝组（p<0.01）,与正常组和脑型wd组无明显区别（p>0.05）。4.wd组血清铜和铜蓝蛋白含量较正常组和乙肝组均显着降低（p<0.01）;乙肝组较正常组血清铜含量升高（p<0.05）,铜蓝蛋白含量无明显变化（p>0.05）。5.脑型wd组mmse评分与与tibc含量呈负相关（p<0.01）,与si、tf、sf、stfr含量成正相关（p<0.01）。6.脑型wd组α-synuclein含量与tibc呈正相关（p<0.01）,与tf、si、sf、stfr呈负相关（p<0.01）;tau蛋白与tibc呈正相关（p<0.01）,与tf、si、sf、stfr呈负相关（p<0.01）;aβ蛋白与tibc呈正相关（p<0.01）,与tf、si、sf、stfr呈负相关（p<0.01）。7.脑型wd组mmse评分与α-synuclein、tau、aβ均呈负相关（p<0.01）。8.脑型wd组血清铜蓝蛋白含量与tibc含量呈负相关（p<0.01）,与si、sf、tf、stfr呈正相关（p<0.01）。结论1.本研究中入组的肝型和脑型wd患者均存在不同程度的铁代谢异常。2.脑型wd患者的认知功能障碍可能由与血清α-synuclein、tau蛋白、aβ蛋白含量的变化引起。3.铁代谢异常可能是参与脑型wd的认知功能损伤过程的原因之一。
牛禾[6]（2009）在《梅氏新贝尼登虫卵黄铁蛋白基因的克隆及表达》文中研究指明梅氏新贝尼登虫（Neobenedenia melleni）是引起我国浙江、福建和广东沿海等地区水产养殖病害频繁爆发的寄生虫之一,严重影响我国沿海水产养殖业的发展,造成了极大的经济损失。卵黄铁蛋白具有良好的免疫原性,具有刺激细胞免疫功能的表位,可诱导宿主产生保护性免疫,因而可能在血清学检测及病害防控中发挥作用。本研究首先从cDNA文库中获得了梅氏新贝尼登虫卵黄铁蛋白（NmYF）的编码序列。序列全长739个核苷酸,3’-末端具有polyA尾,单一大开放阅读框编码一个由226个氨基酸组成的分子量为26.1 kDa的蛋白。序列比较表明,NmYF与卫氏并殖吸虫卵黄铁蛋白最相似,氨基酸序列同源性为23.7%。系统进化树分析表明,NmYF、卫氏并殖吸虫卵黄铁蛋白、椎实螺卵黄铁蛋白、华支睾吸虫卵黄铁蛋白和鱊头槽绦虫卵黄铁蛋白形成了一个小的进化簇,而体铁蛋白序列形成了一个大的进化簇,揭示了卵黄铁蛋白和体铁蛋白间的差异以及进化上的相关性。这是梅氏新贝尼登虫卵黄铁蛋白基因序列的首次报道。为了建立NmYF血清学检测技术,我们先构建NmYF基因原核表达重组质粒pET-28a-NmYF,再将其转化大肠杆菌BL21 pLys E菌株。转化后的BL21 pLys E经IPTG诱导表达后,经SDS-PAGE检测表明,目的蛋白大量表达。利用亲和层析纯化的目的蛋白免疫小鼠制得多克隆抗血清。Western bolt检测表明,NmYF抗血清能与原核表达蛋白以及梅氏新贝尼登虫成虫及虫卵裂解物产生特异性反应,而不能与细菌自身蛋白起反应。构建的真核表达重组质粒pPICZa-A-NmYF,转化毕赤酵母X-33后,在MD及MM平板上鉴定为Mut+表型的重组酵母菌株,甲醇诱导24h后检测到与预期目的蛋白大小一致的表达蛋白带。重组蛋白表达量随着诱导时间的延长不断增加,在42h时表达量最高,随后开始下降,84h没有检测到目的蛋白带。Western blot分析表明,诱导24h至72h的重组酵母菌株表达的蛋白可与抗NmYF多克隆抗体发生特异血清学反应。本研究为进一步研究该蛋白的结构和功能创造了条件,也为建立血清学检测方法,快速准确地检测水体中梅氏新贝尼登虫虫卵以及监控该病害的发生奠定基础。
田晓江[7]（2009）在《大黄及治疗糖尿病中药药效的群子理论统计分析研究》文中进行了进一步梳理整个毕业论文分为两部分。第一部分,本实验首先摸索了两条预处理大黄样品的方法,分别用干法硝化和湿法硝化对北京师范大学提供的四川产大黄以及甘肃产大黄进行处理,再测试其中的生命动力元素,并采用第四统计力学群子理论对大黄的生命动力元素的分布规律进行了系统的研究,从生命动力源的分布的角度来探讨大黄的药性、药味。通过实验所获得的相应的群子参数,我们得到如下推测,甘肃大黄的阴性更强,其泻下作用更强,四川大黄的阴性偏阳,药效起作用时间快,其提高免疫力的作用更强。其理论结果还有待实践检验。第二部分是在众多治疗糖尿病的药方中,寻找高频用药的规律,后人可以根据该频度对各种治疗糖尿病的药方进行检测。本文总结的高频度治疗糖尿病的中药都标明了群子参数,之前没有参数的十几味药,作者通过实验将群子参数确定。
张丽娟[8]（2007）在《西农萨能奶山羊泌乳中期和后期乳腺差异表达基因的筛选及gBTN1A1基因功能的研究》文中进行了进一步梳理本研究通过筛选西农萨能奶山羊泌乳中期和泌乳后期的差异表达基因并对差异基因进行克隆和功能研究,为奶山羊乳腺中脂肪和蛋白质代谢分子机理研究等提供理论依据。本研究主要包括以下内容:（1）利用抑制消减杂交技术寻找山羊泌乳中期与后期乳腺组织差异表达基因,结合实时定量PCR方法分析差异表达基因mRNA在不同泌乳阶段的相对含量;（2）利用RT-PCR及RACE技术克隆gBTN1A1基因的cDNA序列,并分析信号肽序列、跨膜结构、二级结构及三级结构;（3）利用实时定量PCR技术对gBTN1A1基因在整个泌乳期（初期、盛期、中期、后期和末期）的表达量进行分析,研究其在MCF-7细胞中的定位;（4）构建gBTN1A1基因的原核表达载体,摸索最适的原核表达条件,利用Western-blot技术检测重组蛋白的表达;（5）构建真核表达载体,转染MCF-7细胞,检测细胞内脂肪酸组分的变化,研究gBTN1A1基因对脂肪酸代谢的影响,检测其对细胞生长的影响;（6）克隆gBTN1A1基因的启动子序列,构建CAT表达载体,并检测启动子的活性,观察催乳素对山羊嗜乳脂蛋白基因启动子活性的影响,利用生物信息学方法分析gBTN1A1基因启动子序列与牛、人及小鼠BTN1A1基因启动子序列的同源性及转录因子结合位点。主要研究结果如下:（1）通过抑制消减杂交试验成功构建M-L（中期Vs后期）和L-M（后期Vs中期）消减文库,消减效率分别为25和210。部分序列测序后发现在M-L文库中的差异表达基因主要包括3类:乳脂肪形成相关基因（BTN1A1、XDH和AFABP）;乳蛋白相关基因（αS2酪蛋白、β酪蛋白、κ酪蛋白和α乳清蛋白）和转录复合体相关基因（核糖体蛋白S27a、核糖体蛋白S12）。L-M文库中的差异表达基因主要包括6类:凋亡相关基因（Ubi-d4、FeHc、血管钙化上调基因、基质细胞延伸因子4）;脂类代谢相关基因（SCD、SAA3）;抗氧化相关基因（MGST）;转录起始相关基因（核糖体蛋白L17和核糖体蛋白L35a）;能量代谢相关基因（泛醇细胞色素C还原酶为呼吸链组分）;细胞骨架形成相关基因（平滑肌肌球蛋白重链）。（2）成功克隆gBTN1A1基因,全基因包括7个外显子和6个内含子,开放读码框由1581个碱基组成,编码526个氨基酸残基,前26个氨基酸为推定的信号肽序列。gBTN1A1基因cDNA序列与牛、人和小鼠的同源性分别为95%、53%和35%,氨基酸序列的同源性分别为96%、84%和70%。通过跨膜结构预测,gBTN1A1属于单跨膜蛋白,跨膜区域位于243-269肽段。gBTN1A1二级结构主要由不规则螺旋、α-螺旋和延伸链组成,主要包括三个功能结构域:IgV、IgC和B30.2。gBTN1A1基因的结构与牛、人及小鼠的相似,推测该基因主要的功能是调控乳脂肪球的分泌。（3）通过分析gBTN1A1基因在整个泌乳期表达水平的变化,发现其从泌乳初期到盛期表达量的增长幅度较大,且在盛期达到最大,从盛期到中期,表达量相对恒定,然后开始缓慢下降,从而进一步证实gBTN1A1基因表达与乳脂肪球分泌之间的相互关系。gBTN1A1基因在泌乳初期的表达量是末期的4.09倍,说明gBTN1A1基因的表达始于妊娠后期,整个泌乳期的变化趋势与泌乳曲线一致,说明gBTN1A1基因可能受到泌乳激素的调节。gBTN1A1基因在MCF-7细胞中被定位到细胞质中,说明其主要在胞质中行发挥生物学功能。（4）构建pET-32a（+）-gBTN1A1原核表达载体, gBTN1A1基因由于内部存在大量的稀有密码子,其在BL21宿主菌中不能表达出完整的gBTN1A1,且表达量非常小。在Rosetta宿主菌中,经过IPTG诱导,能够得到全长基因的表达,Western-blot证实其具有良好的抗原性。实验证明IPTG的浓度对gBTN1A1蛋白的表达影响不大,但其表达量受温度和时间影响,30℃,诱导2 h时的表达量最大,然后开始下降,4.5 h时表达量又开始上升。（5）构建真核表达载体pcDNA 3.1/myc-His（-）A-gBTN1A1,转染MCF-7细胞,利用气相色谱质谱联用仪检测转染细胞中脂肪酸含量的变化,发现gBTN1A1基因转染细胞后,细胞内的C14:0、C18:0、C18:1含量比对照组高,而C16:0和C18:2比对照组低,其中实验组C14:0含量是对照组的1.68倍,C18:0是对照组的1.38倍,C18:1是对照组的1.23倍,而对照组的C16:0是实验组的1.08倍,C18:2是实验组的1.77倍。提示gBTN1A1基因的C-端尾巴在胞质内与脂肪酸合酶（FAS）形成复合体,降低FAS活性,影响内源性脂肪酸的合成,并且gBTN1A1蛋白表面可能存在亚油酸特异的结合位点,能够结合亚油酸从胞质分泌到细胞上清。通过MTT试验检测发现其抑制MCF-7细胞的生长。（ 6）克隆gBTN1A1基因的启动子序列,并构建真核报告基因表达载体pCAT3-Basic-BTNP1和pCAT3-Basic-BTNP2,利用CAT ELISA试剂盒检测启动子活性,发现BTNP1的活性高于BTNP2。利用不同浓度的催乳素处理MCF-7细胞,发现催乳素能使BTNP1启动子活性增强,使其下游CAT报告基因的表达量增加,由此说明,催乳素参与gBTN1A1基因的表达调控,催乳素上调gBTN1A1。通过同源性分析,发现gBTN1A1基因启动子序列与牛、人及小鼠BTN1A1基因启动子序列的同源性分别为65%、36%和19%,这4个物种的BTN1A1启动子区域,不存在Inr、TATA盒、DPE、TFⅡB识别元件（BRE）和CpG岛等非常保守的核心启动子元件,说明BTN1A1基因有其独特的识别元件,四个物种相似区域的转录因子结合位点分析发现山羊和牛的转录因子结合位点比较相似,而小鼠的转录因子结合位点与其他三个物种差异很大。
庞尔国[9]（2006）在《CopC性质的光谱研究》文中研究表明元素铜是从人类到细菌所有生物体得以生存的必须微量元素。由于铜离子特有的化学性质(氧化态Cu2+还原态Cu+)使的铜离子可以在生物体生长发育中作为氧还蛋白辅因子。铜离子参与的反应也产生高活性氧（ROS）包括羟基游离基。它能够使细胞脂膜蛋白过氧化、切割核酸分子而损坏细胞。高度毒性的营养元素铜在细胞的吸收及细胞内的定位是一个准确协调的过程。铜的体内平衡是由多个蛋白协调作用以确保将其运输到特定的细胞器或靶蛋白,此过程中分子伴侣蛋白扮有重要角色。 CopC是假单胞菌体内铜调控蛋白之一。NMR和EXAFS研究表明CopC在溶液中呈现由9股β折叠围成的桶状结构。两个相距约为30（?）的铜（Ⅰ）、铜（Ⅱ）结合部位位于桶状结构的两端。 CopC是否具有分子伴侣的生物学功能?是否只是专一性的结合铜离子?与铜结合有多强?以及疏水性通道是否具有生物功能?有关这些问题均未见文献报道。为了研究解决上述问题,我们做了如下工作: 1 利用分子生物学法、离子交换法表达纯化了大量的纯度较高的apoCopC,并经过聚丙烯酰胺电泳、液相色谱,质谱,紫外光谱加以鉴定。 2 应运荧光、紫外光谱测定了apoCopC与铜（Ⅱ）、汞（Ⅱ）、银（Ⅰ）等离子的相互作用。结果表明apoCopC与铜（Ⅱ）高亲和性结合,荧光光谱显示apoCopC不与锰（Ⅱ）、铁（Ⅱ）、钴（Ⅱ）、镍（Ⅱ）结合,和Hg（Ⅱ）结合较弱,与Ag（Ⅰ）也存在一定的结合。从热力学数据得知,CopC高亲和性、一定程度上专一性结合铜（Ⅰ）、铜（Ⅱ）,生物体内可能具有铜调控功能。 3 按照蛋白质变性的两态机理计算了CopC的结构稳定化能。发现铜（Ⅱ）对CopC的结构具有稳定作用。按照Foster无辐射能量转移原理计算了CuⅡ-CopC中Cu2+与色氨酸残基间的距离r=11.6（?）。 4 以芘丁酸（Py）、盐酸吡哆辛（VB6）为探针研究了apoCopC的超分子性质。结果显示apoCopC可以与一个或多个小分子结合。其条件结合常数大于104mol/L。
张丹英,雷艳霞[10]（2005）在《铁与心脏病的关系》文中研究表明铁是人体必需的微量元素之一,在机体内担当着重要的生理功能。有人提出铁在人体内的储存差异是导致心脏病在男女中流行差异的原因。在芬兰的调查提出了支持证据血清铁蛋白是铁在人体内的生物储存库,中年男性正常范围内偏高的血清铁蛋白,增加了其患急性心肌梗塞的风险。在过去的十几年里,铁与心脏病的关系一直是一个研究热点,并被称之为铁源性心脏病。现简要评述近几年来铁源性心脏病的研究成果。
二、逆向两点校正测定血清亚铁氧化酶（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、逆向两点校正测定血清亚铁氧化酶（论文提纲范文）
（1）在茶氨酸作用下的铜介导绿茶EGCG氧化的机制研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 铜在生物体中的角色 |
| 1.1.1 铜的生物学功能 |
| 1.1.2 铜的毒性 |
| 1.2 二乙基二硫代氨基甲酸酯(DEDTC)和戒酒硫(DSF) |
| 1.2.1 DEDTC和 DSF简介 |
| 1.2.2 DEDTC和 DSF的作用机制 |
| 1.3 绿茶多酚提取物EGCG |
| 1.3.1 EGCG的自氧化 |
| 1.3.2 EGCG激活自适反应转录因子Nrf2 |
| 1.3.3 EGCG的毒性 |
| 1.3.4 EGCG与其他物质联用 |
| 1.4 茶氨酸 |
| 1.4.1 茶氨酸及其性质简介 |
| 1.4.2 茶氨酸的健康作用 |
| 1.5 研究内容、目的和意义 |
| 1.5.1 研究内容和目的 |
| 1.5.2 研究的意义 |
| 第二章 DEDTC与 EGCG联用致肝损伤机制研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 试剂和仪器 |
| 2.2.2 动物实验设计 |
| 2.2.3 样品的采集和制备 |
| 2.2.4 相关生物指标检测 |
| 2.2.5 肝脏中基因提取、反转录及表达测定 |
| 2.2.6 蛋白质印迹法(western blot)评估肝脏中蛋白质表达 |
| 2.2.7 EGCG氧化评估 |
| 2.2.8 EGCG含量的测定 |
| 2.2.9 活性氧检测 |
| 2.2.10 EGCG/GAPDH在体外形成醌化蛋白的模型及评估 |
| 2.2.11 检测肝中醌化蛋白水平 |
| 2.2.12 DNA损伤检测 |
| 2.2.13 肝组织中DNA水平检测 |
| 2.2.14 统计分析 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 EGCG与 DSF联用导致小鼠死亡 |
| 2.3.2 EGCG和 DEDTC联用加剧脂质过氧化和炎症反应 |
| 2.3.3 联用EGCG和 DEDTC导致肝组织DNA损伤及多种凋亡相关蛋白表达 |
| 2.3.4 联用EGCG和 DEDTC诱导肝脏中多种有害基因的转录 |
| 2.3.5 联用EGCG和 DEDTC扰乱肝脏中铜稳态 |
| 2.3.6 体外非酶体系中Cu(DEDTC)2可促进EGCG氧化 |
| 2.3.7 铜离子和Cu(DEDTC)2促EGCG氧化产生醌化蛋白和损伤DNA |
| 2.3.8 DEDTC促进EGCG在血浆及肝组织中氧化消失及肝中醌化蛋白形成 |
| 2.3.9 急性毒性剂量EGCG造成的氧化逆境响应 |
| 2.3.10 DEDTC与不同剂量EGCG联用引发小鼠肝毒性 |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 茶氨酸通过抑制铜促进EGCG氧化预防其肝毒性研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 试剂和仪器 |
| 3.2.2 动物实验设计 |
| 3.2.3 样品的采集和处理 |
| 3.2.4 生物指标的测定 |
| 3.2.5 肝脏的表达测定 |
| 3.2.6 Western blot评估肝脏中蛋白质表达 |
| 3.2.7 体外实验部分 |
| 3.2.8 肝脏中醌化蛋白检测 |
| 3.2.9 统计分析 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 体外非酶体系中茶氨酸抑制铜促EGCG氧化效应 |
| 3.3.2 茶氨酸与铜结合效应 |
| 3.3.3 茶氨酸抑制铜促EGCG氧化产生醌化蛋白和损伤DNA |
| 3.3.4 铜蓝蛋白促EGCG氧化效应 |
| 3.3.5 茶氨酸抑制铜蓝蛋白促EGCG氧化效应 |
| 3.3.6 茶氨酸对铜蓝蛋白经典活力不产生影响 |
| 3.3.7 茶氨酸抑制亚急性毒性剂量的EGCG对小鼠产生的相关损伤指标 |
| 3.3.8 茶氨酸抑制EGCG引起的γH2AX和p53 相关基因的上调 |
| 3.3.9 茶氨酸限制EGCG引起的Nrf2 相关基因的上调 |
| 3.3.10 茶氨酸促进Nrf2 相关蛋白表达以对抗EGCG毒性 |
| 3.3.11 茶氨酸对亚急性毒性剂量的EGCG的早期作用 |
| 3.3.12 茶氨酸无法保护由急性毒性剂量EGCG造成的小鼠肝毒性 |
| 3.3.13 茶氨酸保护由剂量逐渐升高的EGCG造成的小鼠死亡 |
| 3.3.14 茶氨酸不妨碍EGCG调控的糖脂代谢相关基因的转录 |
| 3.4 讨论 |
| 第四章 结论与展望 |
| 4.1 结论与创新点 |
| 4.2 展望 |
| 参考文献 |
| 附录 缩略词清单 |
| 作者简介 |
（2）蓖麻蚕铁蛋白及亚基的分离鉴定与功能分析（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩写词表 |
| 1 文献综述 |
| 1.1 蓖麻蚕的研究进展 |
| 1.2 铁蛋白的简述 |
| 1.2.1 铁蛋白的结构 |
| 1.3 铁蛋白的功能 |
| 1.3.1 铁的吸收和转运 |
| 1.3.2 铁蛋白储存铁离子的功能 |
| 1.3.3 铁蛋白释放铁离子 |
| 1.3.4 铁蛋白抗氧化功能 |
| 1.3.5 铁蛋白的免疫功能 |
| 2 引言 |
| 2.1 研究目的 |
| 2.2 研究意义 |
| 2.3 研究内容 |
| 2.4 技术路线 |
| 3 材料与方法 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 蓖麻蚕、病原菌、载体和菌株 |
| 3.1.2 主要试剂 |
| 3.1.3 主要试剂配方 |
| 3.1.4 主要仪器设备 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 实验样品准备 |
| 3.2.2 蓖麻蚕铁蛋白提取与鉴定 |
| 3.2.3 蓖麻蚕铁蛋白亚基的克隆表达及抗体制备 |
| 3.2.4 RT-qPCR分析蓖麻蚕铁蛋白亚基转录水平的相对表达量 |
| 3.2.5 Western-blot分析蓖麻蚕亚基蛋白水平的相对表达量 |
| 3.2.6 蓖麻蚕铁蛋白亚基抗氧化分析 |
| 3.2.7 蓖麻蚕铁蛋白亚基铁离子螯合分析 |
| 3.2.8 重组铁蛋白亚基的体外自组装 |
| 3.2.9 自组装铁蛋白复合体活性验证 |
| 3.2.10 重组蛋白与病原菌结合 |
| 3.2.11 FITC标记分析铁蛋白菌结合能力 |
| 3.2.12 复合体抑菌能力分析 |
| 4 结果与分析 |
| 4.1 ScFerHCH和ScFerLCH的生物信息学分析 |
| 4.1.1 ScFerHCH的生物信息学分析 |
| 4.1.2 ScFerLCH的生物信息学分析 |
| 4.2 重组蛋白的表达、纯化和多克隆抗体的制备 |
| 4.2.1 重组ScFerHCH的表达纯化及多克隆抗体制备 |
| 4.2.2 重组ScFerLCH的表达纯化及多克隆抗体制备 |
| 4.3 蓖麻蚕铁蛋白的提取、亚基的分离与鉴定 |
| 4.4 ScFerHCH和ScFerLCH组织表达模式分析 |
| 4.5 重组铁蛋白亚基的抗氧化功能分析 |
| 4.5.1 重组ScFerHCH的抗氧化分析 |
| 4.5.2 重组ScFerLCH的抗氧化分析 |
| 4.6 蓖麻蚕铁蛋白亚基应答铁离子刺激的表达模式分析 |
| 4.6.1 ScFerHCH应答铁离子刺激分析 |
| 4.6.2 ScFerLCH应答铁离子刺激分析 |
| 4.7 重组铁蛋白亚基的螯合铁离子功能分析 |
| 4.7.1 重组ScFerHCH螯合铁离子功能分析 |
| 4.7.2 重组ScFerLCH的铁离子整合分析 |
| 4.8 蓖麻蚕铁蛋白应答病原菌刺激的表达模式分析 |
| 4.8.1 ScFerHCH对病原菌的免疫应答分析 |
| 4.8.2 ScFerLCH对病原菌的免疫应答分析 |
| 4.9 重组蓖麻蚕铁蛋白亚基的体外自组装 |
| 4.10 重组蓖麻蚕铁蛋白的病原菌结合分析 |
| 4.10.1 Western-blot分析铁蛋白与病原菌结合 |
| 4.10.2 FITC标记分析铁蛋白与病原菌结合 |
| 4.11 铁蛋白复合体抑菌能力分析 |
| 5 讨论 |
| 6 结论与展望 |
| 6.1 主要结论 |
| 6.2 工作展望 |
| 参考文献 |
| 附录A |
| 附录B |
| 附录C |
| 作者简介 |
（3）低强度激光（LLL）对间充质干细胞（MSCs）的生物学效应研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第1章 低强度激光(LLL)通过影响细胞周期促进间充质干细胞增殖 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果与分析 |
| 讨论 |
| 第2章 低强度激光(LLL)对间充质干细胞线粒体的影响 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果与分析 |
| 讨论 |
| 第3章 低强度激光(LLL)对间充质干细胞迁移能力的影响及其分子机制研究 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果与分析 |
| 讨论 |
| 第4章 低强度激光(LLL)促进间充质干细胞抗凋亡作用 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果与分析 |
| 讨论 |
| 第5章 LLL对TLR4诱导因子LPS介导的MSCs炎症反应的抑制作用 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果与分析 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| Reference |
| 附录: 中英文缩略词表 |
| 致谢 |
（4）肝豆状核变性脑部铁沉积磁敏感定量成像研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 1 引言 |
| 2 资料与方法 |
| 2.1 一般资料 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 检查设备 |
| 2.2.2 数据采集 |
| 2.2.3 数据预处理 |
| 2.2.4 数据配准及分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 组间分析结果 |
| 3.2 HLD组内分析结果 |
| 3.2.1 肝豆组脑铁沉积与病人年龄的协变量分析 |
| 3.2.2 肝豆组脑铁沉积与病人病程的协变量分析 |
| 3.2.3 肝豆组脑铁沉积与病人铜氧化反应酶活力的协变量分析 |
| 3.2.4 肝豆组脑铁沉积与病人 24 小时尿铜的协变量分析 |
| 3.2.5 肝豆组脑铁沉积与病人 24h尿铁的协变量分析 |
| 4 讨论 |
| 4.1 脑铁的生理意义及其分布规律 |
| 4.1.1 铁的生理作用及分类 |
| 4.1.2 脑铁的分布及一般规律 |
| 4.2 HLD铁沉积的好发部位及依据 |
| 4.3 HLD患者脑铁代谢紊乱发生的可能机制 |
| 4.3.1 HLD患者脑铁代谢紊乱的全身机制 |
| 4.3.2 HLD患者脑铁代谢紊乱的脑内机制 |
| 4.4 目前常用的脑铁磁共振研究—SWI及其在HLD中的应用 |
| 4.5 较新、较精确的脑铁磁共振研究—QSM及其临床应用 |
| 4.6 VBA方法介绍 |
| 4.7 本研究的结果讨论 |
| 4.7.1 豆状核 |
| 4.7.2 丘脑 |
| 4.7.3 大脑皮质区域 |
| 4.7.4 岛叶 |
| 4.7.5 铁沉积与年龄的相关性 |
| 5 结论 |
| 6 不足与展望 |
| 6.1 本研究的创新 |
| 6.1.1 国内首次应用QSM成像分析HLD病人脑铁沉积 |
| 6.1.2 VBA方法的创新 |
| 6.2 本研究的不足 |
| 6.3 总结 |
| 参考文献 |
| 综述 定量磁化率成像及其在脑铁定量中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 附录一 知情同意书(肝豆组健康组) |
| 附录二 临床信息采集表 |
| 附录三 临床信息采集表 |
| 个人简介 |
| 攻读学位期间发表论文情况 |
| 致谢 |
（5）Wilson病患者铁代谢与认知功能障碍及其相关血清标志物的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略语表 |
| 第一部分 Wilson病及其认知功能障碍的中西医研究进展 |
| 1. D及其认知功能障碍的病因病机 |
| 2. WD的中医辨证分型及其与认知障碍的关系 |
| 3. WD及其认知障碍的中医辩证论治 |
| 4. WD及其认知障碍中西医结合治疗 |
| 5. 结语 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 1. 前言 |
| 2. 研究对象和方法 |
| 2.1 实验对象 |
| 2.2 实验设备 |
| 2.3 实验试剂 |
| 2.4 实验方法 |
| 2.5 数据统计及处理 |
| 2.6 技术路线图 |
| 3. 结果 |
| 3.1 各组铁代谢水平 |
| 3.2 各组MMSE评分结果 |
| 3.3 各组血清标志物水平 |
| 3.4 各组血清铜生化水平 |
| 3.5 脑型WD组铁代谢指标与MMSE评分的关系 |
| 3.6 脑型WD组铁代谢指标与其血清标志物指标的关系 |
| 3.7 脑型WD组MMSE评分与血清标志物指标的关系 |
| 3.8 脑型WD组铁代谢与铜代谢指标的关系 |
| 4. 讨论 |
| 4.1 WD和铁代谢障碍 |
| 4.2 铁代谢异常与认知功能障碍的关系 |
| 4.3 认知功能障碍的血清标志物研究 |
| 4.4 WD的认知与铁代谢障碍的关系 |
| 5. 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 铁代谢异常与神经变性病认知功能障碍的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（6）梅氏新贝尼登虫卵黄铁蛋白基因的克隆及表达（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 1 文献综述 |
| 1.1 铁蛋白的分子生物学研究进展 |
| 1.1.1 线粒体铁蛋白的结构和功能 |
| 1.1.2 细胞质铁蛋白的分类 |
| 1.1.3 细胞质铁蛋白的结构 |
| 1.1.4 细胞质铁蛋白的分布 |
| 1.1.5 细胞质铁蛋白的Fe 释放机理 |
| 1.1.6 细胞质铁蛋白的调控机理 |
| 1.1.7 铁蛋白相关的免疫学研究 |
| 1.2 卵黄铁蛋白的分子生物学研究进展 |
| 1.3 水产动物梅氏新贝尼登虫病害的研究进展 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 实验材料 |
| 2.1.2 试剂 |
| 2.1.3 仪器 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 分子克隆 |
| 2.2.2 原核表达 |
| 2.2.3 真核表达 |
| 3 梅氏新贝尼登虫卵黄铁蛋白基因的克隆 |
| 3.1 结果与分析 |
| 3.1.1 总RNA 抽提和cDNA 文库构建 |
| 3.1.2 NmYF 基因cDNA 序列 |
| 3.1.3 NmYF 氨基酸序列分析 |
| 3.1.4 NmYF 系统进化树分析 |
| 3.1.5 NmYF 的PCR 扩增结果 |
| 3.1.6 NmYF 克隆载体的构建及酶切鉴定 |
| 3.2 讨论 |
| 4 梅氏新贝尼登虫卵黄铁蛋白的原核表达及抗血清制备 |
| 4.1 结果与分析 |
| 4.1.1 原核表达质粒的构建及鉴定 |
| 4.1.2 NmYF 的原核表达 |
| 4.1.3 重组NmYF 的分离纯化 |
| 4.1.4 抗血清制备及Western blot 检测 |
| 4.2 讨论 |
| 5 梅氏新贝尼登虫卵黄铁蛋白在毕赤酵母中的表达 |
| 5.1 结果与分析 |
| 5.1.1 真核表达质粒的构建及鉴定 |
| 5.1.2 重组酵母菌株的鉴定 |
| 5.1.3 RT-PCR 检测NmYF 在重组酵母菌株中的表达 |
| 5.1.4 筛选Mut+表型重组酵母菌株 |
| 5.1.5 NmYF 的真核表达 |
| 5.1.6 NmYF 真核表达产物的Western blot 分析 |
| 5.2 讨论 |
| 6 结论 |
| 6.1 研究成果 |
| 6.1.1 克隆了梅氏新贝尼登虫卵黄铁蛋白基因 |
| 6.1.2 原核表达NmYF 并制备抗血清 |
| 6.1.3 在毕赤酵母中成功表达NmYF |
| 6.2 展望 |
| 参考文献 |
| 在学研究成果 |
| 资助项目 |
| 致谢 |
（7）大黄及治疗糖尿病中药药效的群子理论统计分析研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 利用群子参数分析治疗糖尿病的中药部分的概述 |
| 1.1.1 中西医对于糖尿病的理解 |
| 1.1.2 糖尿病的确诊与分类 |
| 1.1.3 我国的糖尿病流行病学特点 |
| 1.1.4 糖尿病的并发症 |
| 1.1.5 传统中医治疗糖尿病的方法 |
| 1.1.6 中医治疗糖尿病并发症 |
| 1.1.7 治疗糖尿病的中药存在的问题及发展展望 |
| 1.1.8 本课题的研究目的、主要内容及技术关键 |
| 1.2 大黄的文献综述部分: |
| 1.2.1 中药的道地性 |
| 1.2.2 大黄的重要性极其道地性 |
| 1.2.3 生命动力元素与中药的关系 |
| 第二章 第四统计力学—群子统计理论 |
| 2.1 群子概述 |
| 2.1.1 群子的概念及特性 |
| 2.2 三参数群子统计方程的建立 |
| 2.2.1 第四统计力学关于生物高分子活性中心元素的分布曲线的若干类型 |
| 2.2.2 第四统计力学—群子统计理论方程的建立 |
| 2.2.3 三参数群子统计方程的建立 |
| 2.2.4 群子统计理论方程群子参数的物理意义 |
| 2.2.5 回归k,r_1,r_2的方法 |
| 2.2.6 食物阴阳性的群子参数考察 |
| 2.2.7 实验数据处理方法 |
| 第三章 实验部分 |
| 3.1 糖尿病的部分: |
| 3.1.1 治疗糖尿病的中药药频 |
| 3.1.2 通过实验测得的部分高频药 |
| 3.1.3 治疗糖尿病的高频药的群子参数 |
| 3.2 大黄部分 |
| 3.2.1 北京师范大学所提供大黄的地理环境 |
| 3.2.2 生命相关元素测量结果 |
| 3.2.3 生命动力源含水络合物对数浓度及计算 |
| 3.2.4 具体计算过程极其拟合曲线图 |
| 3.2.5 群子参数与大黄有效成分的关系 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 研究成果及发表的学术论文 |
| 作者简介 |
（8）西农萨能奶山羊泌乳中期和后期乳腺差异表达基因的筛选及gBTN1A1基因功能的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 抑制消减杂交技术及其应用现状 |
| 1.1.1 抑制消减杂交技术 |
| 1.1.2 抑制消减杂交技术应用现状 |
| 1.2 新基因功能预测的理论及方法 |
| 1.2.1 新基因及其功能的预测 |
| 1.2.2 蛋白质结构与功能预测及方法 |
| 1.3 乳脂肪的功能及乳脂肪球的分泌 |
| 1.3.1 乳脂肪的功能及生理活性物质 |
| 1.3.2 乳脂肪球的分泌机制 |
| 1.4 嗜乳脂蛋白基因及其研究进展 |
| 1.4.1 BTN1A1 的结构及物种间相似性 |
| 1.4.2 BTN1A1 基因的研究进展 |
| 1.5 本研究的目的及意义 |
| 第二章 西农萨能奶山羊泌乳中期和后期乳腺组织差异表达基因的筛选及相对定量分析 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 材料 |
| 2.1.2 方法 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.2.1 泌乳中期和后期乳腺组织中RNA 的定量分析 |
| 2.2.2 消减效率分析 |
| 2.2.3 文库质量鉴定 |
| 2.2.4 消减文库的测序和分析 |
| 2.2.5 实时定量PCR 检测差异表达基因 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 关于乳腺退化的分析 |
| 2.3.2 关于M-L 和L-M 消减cDNA 文库中功能基因的分析 |
| 2.3.3 关于实验动物样本数选择的问题 |
| 第三章 GBTN1A1 基因的克隆及生物信息学分析 |
| 3.1 材料和方法 |
| 3.1.1 材料 |
| 3.1.2 方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 山羊乳腺总RNA 的提取 |
| 3.2.2 山羊嗜乳脂蛋白基因（gBTN1A1）CDs 区的克隆 |
| 3.2.3 gBTN1A1 基因3'非翻译区（UTR）和5'非翻译区（UTR）的克隆 |
| 3.2.4 gBTN1A1 基因全长cDNA 序列分析 |
| 3.2.5 gBTN1A1 基因内含子克隆及分析 |
| 3.2.6 gBTN1A1 基因外显子与内含子结构分析 |
| 3.2.7 序列分析 |
| 3.2.8 gBTN1A1 结构预测 |
| 3.3 讨论 |
| 第四章 GBTN1A1 基因的表达量分析及其在MCF-7 细胞内的定位 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 材料 |
| 4.1.2 方法 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 RNA 提取结果 |
| 4.2.2 实时定量PCR |
| 4.2.3 RT-PCR 方法扩增gBTN1A1 基因 |
| 4.2.4 pGEM-T-gBTN1A1 阳性转化子的菌液PCR 筛选与双酶切鉴定 |
| 4.2.5 pEGFP-C1-gBTN1A1 阳性转化子的菌落PCR 筛选与双酶切鉴定 |
| 4.2.6 gBTN1A1 在MCF-7 细胞内的定位 |
| 4.3 讨论 |
| 第五章 GBTN1A1 基因原核表达载体的构建及表达 |
| 5.1 材料和方法 |
| 5.1.1 材料 |
| 5.1.2 方法 |
| 5.2 结果 |
| 5.2.1 gBTN1A1 基因扩增及pGEM-T-gBTN1A1 重组子的构建 |
| 5.2.2 pET-32a(+)-gBTN1A1 重组子的构建及鉴定 |
| 5.2.3 目的蛋白的检测 |
| 5.3 讨论 |
| 5.3.1 关于原核表达系统的问题 |
| 5.3.2 关于稀有密码子的问题 |
| 第六章 GBTN1A1 与脂肪酸合成代谢的关系及其对MCF-7 细胞生长的影响 |
| 6.1 材料与方法 |
| 6.1.1 材料 |
| 6.1.2 方法 |
| 6.2 结果 |
| 6.2.1 RT-PCR 方法扩增gBTN1A1 基因 |
| 6.2.2 pGEM-T-gBTN1A1 阳性转化子的菌液PCR 筛选与双酶切鉴定 |
| 6.2.3 pcDNA3.1 |
| 6.2.4 gBTN1A1 表达及其对MCF-7 细胞肪酸组成的影响 |
| 6.2.5 gBTN1A1 对细胞生长的影响 |
| 6.3 讨论 |
| 6.3.1 关于机体内脂肪酸合成的问题 |
| 6.3.2 关于gBTN1A1 蛋白调控MCF-7 细胞系中脂肪酸代谢的问题 |
| 6.3.3 关于gBTN1A1 影响MCF-7 细胞增殖问题 |
| 第七章 GBTN1A1 基因启动子的克隆及活性分析 |
| 7.1 材料和方法 |
| 7.1.1 材料 |
| 7.1.2 方法 |
| 7.2 结果 |
| 7.2.1 gBTN1A1 基因启动子BTNP1 和PTNP2 的克隆 |
| 7.2.2 pCAT3-Basic-BTNP1、pCAT3-Basic-BTNP2 重组质粒双酶切鉴定 |
| 7.2.3 BTNP1 和BTNP2 活性分析 |
| 7.2.4 PRL 对BTNP1 启动子的调控分析 |
| 7.2.5 BTN1A1 基因5'侧翼区域及5'UTR 序列特征分析 |
| 7.3 讨论 |
| 7.3.1 关于CAT 报告基因灵敏度分析 |
| 7.3.2 关于BTNP1 和BTNP2 启动子活性分析 |
| 7.3.3 关于催乳素对BTNP1 活性的影响 |
| 7.3.4 关于不同物种BTN1A1 基因启动子结构分析 |
| 第八章 结论、创新点及进一步研究计划 |
| 8.1 结论 |
| 8.2 创新点 |
| 8.3 下一步研究计划 |
| 参考文献 |
| 缩略词 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（9）CopC性质的光谱研究（论文提纲范文）
| 第一章 综述 |
| 1.1 生物体对铜的吸收 |
| 1.1.1 细菌及酵母对铜的吸收 |
| 1.1.2 哺乳动物对铜的吸收 |
| 1.2 铜在细胞内的转运及定位 |
| 1.2.1 Atx1转运到高尔基体 |
| 1.2.2 转运到线粒体 |
| 1.2.3 转运到超氧化物歧化酶 |
| 1.3 铜分子伴侣的结构以及金属结合性质 |
| 1.4 CopC的生物功能 |
| 参考文献 |
| 第二章 COPC表达和纯化 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 CopC基因的核苷酸序列以及氨基酸序列 |
| 2.3 CopC的一些参数 |
| 2.3.1 氨基酸组成 |
| 2.3.2 一些特征参数 |
| 2.4 材料与试剂 |
| 2.4.1 菌种与质粒 |
| 2.4.2 主要试剂 |
| 2.4.3 试剂配制 |
| 2.4.4 主要仪器设备 |
| 2.5 方法 |
| 2.5.1 转化 |
| 2.5.2 aopCopC的表达 |
| 2.5.3 aopCopC的纯化 |
| 2.6 结果与讨论 |
| 2.7 结论 |
| 参考文献 |
| 第三章 COPC与金属离子结合的性质 |
| 3.1 材料 |
| 3.1.1 主要试剂 |
| 3.1.2 主要仪器 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 金属离子储备液的配制 |
| 3.2.2 HEDTA溶液配制 |
| 3.2.3 CopC浓度的确定与脱氯处理 |
| 3.2.4 光谱测定 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 蛋白质荧光特性 |
| 3.3.2 与Cu(II)的结合 |
| 3.3.3 与Hg(II)的结合 |
| 3.3.4 与Ag(I)的结合 |
| 3.4 结论 |
| 参考文献 |
| 第四章 COPC和CU~(II)-COPC的稳定性 |
| 4.1 基本原理 |
| 4.1.1 蛋白变性 |
| 4.1.2 F(o|¨)ster无辐射能量转移原理 |
| 4.2 试剂与仪器 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 储备液的配制 |
| 4.4 结果与讨论 |
| 4.4.1 蛋白质的服变性实验 |
| 4.4.2 Cu~(II)-CopC中Cu~(2+)与色氨酸残基间距离的求算 |
| 4.5 结论 |
| 参考文献 |
| 第五章 COPC的超分子性质 |
| 5.1 基本原理 |
| 5.2 试剂与仪器 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.3.1 试剂的配制 |
| 5.3.2 光谱测定 |
| 5.4 结果与讨论 |
| 5.4.1 CopC与芘丁酸相互作用 |
| 5.4.2 CopC与盐酸吡哆辛相互作用 |
| 5.5 结论 |
| 参考文献 |
| 第六章 总结与展望 |
| 6.1 总结 |
| 6.2 展望 |
| 附录: 论文发表情况 |
| 致谢 |
（10）铁与心脏病的关系（论文提纲范文）
| 1 铁源性心脏病的假说 |
| 2 铁—双刃剑 |
| 3 血清铁蛋白:一个不完善的体内铁的储存量度 |
| 4 血清铁蛋白与血清可溶性运铁蛋白受体相关性不能解决炎症难题 |
| 5 血清铁蛋白和氧化应激 |
四、逆向两点校正测定血清亚铁氧化酶（论文参考文献）
- [1]在茶氨酸作用下的铜介导绿茶EGCG氧化的机制研究[D]. 张珂. 安徽农业大学, 2020(03)
- [2]蓖麻蚕铁蛋白及亚基的分离鉴定与功能分析[D]. 杨利昂. 安徽农业大学, 2019(06)
- [3]低强度激光（LLL）对间充质干细胞（MSCs）的生物学效应研究[D]. 尹侃. 北京协和医学院, 2017(11)
- [4]肝豆状核变性脑部铁沉积磁敏感定量成像研究[D]. 王敏. 安徽中医药大学, 2016(03)
- [5]Wilson病患者铁代谢与认知功能障碍及其相关血清标志物的研究[D]. 邵子杰. 安徽中医药大学, 2016(03)
- [6]梅氏新贝尼登虫卵黄铁蛋白基因的克隆及表达[D]. 牛禾. 宁波大学, 2009(03)
- [7]大黄及治疗糖尿病中药药效的群子理论统计分析研究[D]. 田晓江. 北京化工大学, 2009(07)
- [8]西农萨能奶山羊泌乳中期和后期乳腺差异表达基因的筛选及gBTN1A1基因功能的研究[D]. 张丽娟. 西北农林科技大学, 2007(07)
- [9]CopC性质的光谱研究[D]. 庞尔国. 山西大学, 2006(10)
- [10]铁与心脏病的关系[J]. 张丹英,雷艳霞. 国外医学(医学地理分册), 2005(02)