一、Bax在PPAR-γ激动剂诱导的肺癌细胞凋亡中的表达分析(英文)（论文文献综述）
许宝苹[1]（2021）在《补骨脂定抗ADR心肌损伤的作用及机制研究》文中认为背景:阿霉素（adriamycin,ADR）属于蒽环类广谱抗肿瘤药,是目前疗效显着且应用最广泛的化疗药之一。然而,ADR引起的心肌毒性会成剂量依赖性不断积累,进而发展为不可逆的心肌损伤,临床应用受到限制。目前临床上用于减轻ADR等化疗药引发的心肌损伤的药物主要有美司钠、右雷佐生和氨磷汀等,但存在作用机制不清、价格昂贵、安全性低等问题。此外,许多化学药物如组胺2受体拮抗剂等也可在一定程度上缓解ADR的心肌损伤,但副作用较为明显,并在不同程度上干扰ADR的化疗效果。因此,开发既能减轻ADR的毒副作用、又不影响其抗癌活性的新型药物成为临床上的研究热点和亟待解决的难题。补骨脂定（psoralidin,PSO）是中药补骨脂中的一类天然香豆素,既往研究表明PSO具有抗炎、抗菌、抗病毒、抗骨质疏松等药理活性。我们团队前期还研究了补骨脂的另一种活性成分补骨脂酚（bakuchiol,BAK）具有显着抗ADR心肌细胞损伤的效果,PSO对ADR引起的心肌损伤是否具有类似的保护作用需要进一步研究证实。沉默信息调控因子1（silent information regulator 1,SIRT1）作为Ⅲ型组蛋白去乙酰化酶家族的一员。研究发现,多种天然药物如白藜芦醇、补骨脂酚、姜黄素等都可通过激活SIRT1相关信号通路发挥心脏等脏器保护作用。而SIRT1是否参与到PSO抗ADR心肌损伤过程至今仍未研究。过氧化物酶体增殖物激活受体-γ（peroxisome proliferators-activated receptor-γ,PPAR-γ）是核激素受体超家族的成员,已被证实在高血压、动脉粥样硬化等心血管相关疾病中发挥关键作用。值得注意的是,SIRT1可以通过调控PPAR-γ相关信号通路在脂质代谢、肝脏代谢等方面发挥重要作用。然而,在ADR心肌损伤中,SIRT1能否也通过调控PPAR-γ信号通路发挥作用尚不清楚。因此,我们将在体内外水平,通过一系列实验方法,探讨PSO对ADR心肌损伤是否具有保护作用,并证实SIRT1/PPAR-γ信号通路是PSO发挥抗ADR心肌损伤的关键靶点。研究方法一、动物实验及相关检测:以BALB/c小鼠为研究对象,采用腹腔注射ADR的方法模拟化疗药物的心脏损伤模型。实验分为Control组、ADR组（10 mg/kg）、PSO低、中、高剂量（12.5 mg/kg、25 mg/kg、50 mg/kg）+ADR组;采用血常规检测仪、全自动血生化分析仪、小动物超声检测仪、组织病理学染色、Western blot等仪器和技术进行检测并比较各组相关指标,研究阐明PSO抗小鼠ADR心肌损伤的作用。二、细胞实验及相关检测:以HL-1细胞为研究对象,构建ADR损伤模型,设置Control组、ADR组、不同浓度PSO组（10、20、50、100μM）和PSO（20μM）+ADR组,使用Muse细胞分析仪、荧光显微镜、Western blot等仪器和方法进行检测并比较各组相关指标。通过合成SIRT1的si RNA,并采用PPAR-γ拮抗剂GW9662进一步探讨它们对PSO抗ADR心肌损伤作用的影响,证实SIRT1/PPAR-γ通路在PSO抗ADR心肌损伤过程中发挥关键作用。研究结果一、动物实验（1）与ADR（10 mg/kg）组相比,PSO（12.5 mg/kg、25 mg/kg、50 mg/kg）组小鼠生存率都显着升高（P<0.05）,PSO（25 mg/kg）组生存率最高,作为后续实验的最佳给药剂量;（2）与ADR（10 mg/kg）组相比,PSO（25 mg/kg）组小鼠体重显着上升（P<0.05）;（3）与ADR（10 mg/kg）组相比,PSO（25 mg/kg）组血常规相关指标:白细胞（WBC）、单核细胞（MON）、中性粒细胞（GRA）的数量显着升高（P<0.05）;（4）与ADR（10 mg/kg）组相比,PSO（25 mg/kg）组血生化相关指标:肌酸激酶（CK）、谷草转氨酶（AST）、血尿素氮（BUN）的含量显着降低;白蛋白（ALB）的含量显着升高（P<0.05）;（5）与ADR（10 mg/kg）组相比,PSO（25 mg/kg）组心功能相关指标:小鼠心脏每搏输出量（stroke volume,SV）和心输出量（cardiac output,CO）显着上升（P<0.05）（6）与ADR（10 mg/kg）组相比,PSO（25 mg/kg）组心肌形态得到改善（HE染色）,纤维化程度减轻（masson和天狼星红染色）;（7）与ADR（10 mg/kg）组相比,PSO（25 mg/kg）组心肌组织氧化应激水平显着降低（DHE染色）,以上数据表明,PSO可以显着减轻小鼠ADR心肌损伤。（8）与ADR（10 mg/kg）组相比,PSO（25 mg/kg）组SIRT1、PPAR-γ、PGC-1α、HO-1、Bcl/Bax、Nrf2、SDH5和COXIV、NQO1等蛋白的表达水平显着上调,结果表明,PSO可能通过激活SIRT1信号通路在小鼠ADR心肌损伤中发挥保护作用,我们将在体外水平进一步证明。二、细胞实验（1）与Control组相比,使用2μM的ADR处理12 h后,HL-1细胞活率下降到50%左右,该浓度和处理时间作为后续实验的最佳损伤条件。（2）与Control组相比,不同浓度PSO组的细胞形态和活率均无显着变化,说明在实验浓度范围内,PSO对细胞无毒性作用。（3）与Control组相比,不同浓度PSO组的SIRT1、PPAR-γ、PGC-1α、TFAM、UCP-2、NRF1、Nrf2、HO-1、NQO1、Bcl2/Bax等蛋白的表达水平显着上调（P<0.05）,表明PSO在正常心肌细胞中可以激活SIRT1/PPAR-γ信号通路。（4）与ADR组相比,PSO给药组的细胞形态得到改善、增加了存活率、凋亡率下降、培养液LDH水平下降、ROS水平降低（P<0.05）,表明PSO对HL-1细胞ADR损伤具有显着的保护作用。（5）与ADR组相比,PSO给药组显着上调了SIRT1、PPAR-γ、PGC-1α、NRF1、HO-1、NQO1、TFAM、UCP-2、Bcl2等蛋白的表达水平（P<0.05）,结果表明PSO是通过SIRT1/PPAR-γ通路发挥抗HL-1细胞ADR损伤的作用。（6）与Control组相比,分别采用SIRT1 si RNA1269和PPAR-γ拮抗剂GW9662处理后,细胞活率显着降低（P<0.05）,且SIRT1、PPAR-γ、PGC-1α、Nrf-2、UCP-2等蛋白的表达水平显着降低（P<0.05）,证明抑制SIRT1、PPAR-γ的表达,可逆转PSO抗ADR心肌损伤的作用。研究结论综上,（1）PSO在ADR心肌损伤中具有显着的保护作用;（2）PSO通过激活SIRT1/PPAR-γ相关通路发挥抗ADR心肌损伤的作用;（3）PSO有望成为潜在的缓解ADR心肌损伤的药物。
许潇友[2]（2021）在《单酰基甘油脂肪酶对非小细胞肺癌的作用及调节研究》文中提出单酰基甘油脂肪酶（Monoacylglycerol lipase,MGLL）作为一种丝氨酸水解酶,在催化单酰基甘油酯水解为甘油和脂肪酸作用中起关键作用,MGLL通过调节脂质信号网络影响癌细胞的增殖和侵袭等恶性表型。本文对MGLL在非小细胞肺癌（Non-small-cell carcinoma,NSCLC）中的作用及调节机制进行研究。1.MGLL在NSCLC H460中的表达及作用为探究MGLL在肺癌细胞中的作用,本研究首先利用q RT-PCR和Western blot检测了MGLL在肺癌细胞A549和H460中的表达,结果显示肺癌细胞中MGLL的m RNA和蛋白表达均高于正常肺上皮细胞HBE。siRNA技术沉默MGLL后H460细胞的增殖、迁移、侵袭和克隆形成能力显着抑制,细胞阻滞于G0/G1期,处于S期和G2期的细胞减少,细胞凋亡增加。进一步检测表明敲低MGLL后可降低Bcl-2蛋白表达水平。另外,小鼠体内成瘤实验表明,敲低MGLL后肿瘤细胞成瘤能力受到抑制。利用构建的MGLL-p IRES2-ZsGreen1载体上调MGLL的表达后可促进H460增殖、迁移、侵袭和克隆形成能力,对细胞周期和凋亡没有影响。上述结果表明MGLL在非小细胞肺癌细胞H460中具有癌基因的作用,抑制MGLL后可能通过下调Bcl-2促进细胞凋亡。2.miR-3200-5p与MGLL靶向调节的验证为研究MGLL在肺癌细胞中的调节,利用生物信息学分析表明MGLL3’-UTR与miR-3200-5p具有结合位点。miR-3200-5p在H460和A549中下调,过表达miR-3200-5p显着抑制肺癌细胞增殖、迁移、侵袭和平板克隆形成能力,并且细胞阻滞于G0/G1期,细胞凋亡增加。过表达MGLL可减弱mi R-3200-5p上调对迁移、侵袭和细胞克隆形成的抑制作用,以上结果表明miR-3200-5p与MGLL可能呈负相关调控。为明确二者的调节关系,构建MGLL Wt 3′-UTR和MGLL Mut 3′-UTR的荧光素酶报告载体,经转染后检测结果显示,野生型报告载体的荧光素酶活性受到抑制,而突变型报告载体未受影响,表明miR-3200-5p通过结合MGLL 3′-UTR调节基因表达。综上所述,MGLL在非小细胞肺癌细胞中高表达,MGLL下调后抑制细胞增殖、迁移、侵袭、细胞克隆形成能力和体内成瘤能力。MGLL是miR-3200-5p的靶基因,miR-3200-5p通过结合MGLL 3′-UTR调节MGLL表达,过表达MGLL可减弱miR-3200-5p上调对细胞恶性表型的抑制作用。MGLL与miR-3200-5p可被认为是肺癌诊断和治疗中的潜在靶点。
但彦肜[3]（2021）在《新型抗肿瘤德氮吡格衍生物T-1019的药效学及作用机制研究》文中认为目的本文就新型抗肿瘤德氮吡格衍生物T-1019进行研究,以初步探究其体外抗肿瘤的药效学及可能的作用机制。方法1.采用结晶紫实验、集落形成实验、CCK-8法检测T-1019对人肝癌细胞株Hep G2和人肺癌细胞株A549的增殖抑制作用。2.采用流式细胞术检测T-1019对人肝癌细胞株Hep G2和人肺癌细胞株A549的细胞凋亡影响。3.采用荧光素酶报告基因、时间分辨荧光共振能量转移实验和免疫印迹（WB）实验检测T-1019对PPARγ及其相关信号通路的影响。4.采用油红O染色探究T-1019对肿瘤细胞内脂滴聚集的影响。5.采用结晶紫染色和CCK-8法检测PPARγ拮抗剂T0070907或激动剂罗格列酮对T-1019的抗肿瘤作用的影响。6.采用分子对接预测T-1019与PPARγ的结合模式。结果1.经体外抗肿瘤实验表明,T-1019可抑制人肝癌细胞株Hep G2和人肺癌细胞株A549的增殖,对两种肿瘤细胞株的IC50值分别为0.70μM和0.55μM。2.流式细胞术结果显示,T-1019可引起人肝癌细胞株Hep G2和人肺癌细胞株A549的细胞凋亡。3.WB实验结果表明,T-1019能剂量依赖性上调PPARγ水平,上调抑癌基因PTEN水平且抑制其磷酸化。PTEN下游关键蛋白AKT的磷酸化水平也显着降低。4.油红O染色结果显示,T-1019可使人肝癌细胞株Hep G2的细胞内脂滴聚集。该结果提示,T-1019的抗肿瘤作用可能与干扰肿瘤细胞的脂代谢过程,使肿瘤细胞内的脂质聚集有关。5.CCK-8法和结晶紫染色结果显示,PPARγ拮抗剂T0070907可部分逆转T-1019对肿瘤细胞株的增殖抑制作用。该结果提示T-1019的抗肿瘤作用可能是通过PPARγ介导的。6.荧光素酶报告基因实验和时间分辨荧光共振能量转移实验结果显示,T-1019可与PPARγ结合,对PPARγ有一定的转录激活作用。该结果提示T-1019可能是PPARγ的部分激动剂。7.分子对接结果显示,T-1019与PPARγ-LBD的结合模式与先导化合物TNBG和阳性对照PPARγ部分激动剂GSK1997132B相似。T-1019的母核与PPARγ-LBD中的Arg288产生氢键相互作用,T-1019引入的侧链与Tyr327和Ser289产生了氢键的相互作用。结论本文经研究表明,T-1019对人肝癌细胞株Hep G2和人肺癌细胞株A549具有抗增值作用并诱导肿瘤细胞凋亡。此外,本文还发现T-1019的抗肿瘤作用可能与其引起肿瘤细胞内脂滴聚集有关。作用机制研究表明,T-1019是一个潜在抗肿瘤PPARγ部分激动剂,并通过PPARγ介导的信号通路发挥抗肿瘤作用。
连宁芳[4]（2021）在《过氧化物酶体增殖物激活受体γ在间歇低氧相关血管内皮损伤中的作用及机制研究》文中研究说明目的阻塞性睡眠呼吸暂停（OSA）是一种常见的慢性呼吸道疾病,以慢性间歇低氧（CIH）为主要的病理生理学特征。心血管系统损害是OSA常见的并发症之一,而血管内皮功能损伤是其重要病因。明确CIH相关血管内皮损伤的机制,对OSA相关心血管系统损害的防治有着重要的意义。过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）是重要的转录因子,可以通过调节血管氧化应激及炎症而调节血管功能;较少研究关注PPARγ在CIH诱导的内皮功能障碍中的作用。该研究的目的:（1）运用定量蛋白组学技术寻找CIH相关血管内皮损伤的关键蛋白;（2）研究在间歇低氧（IH）模式下,PPARγ在血管内皮细胞损伤中的作用;（3）研究IH模式下,PPARγ与mi R-130a-3p的相互作用以及mi R-130a-3p在IH条件下对血管内皮损伤的调节作用。（4）研究IH模式下,PPARγ对线粒体功能的作用及IH条件下线粒体功能在血管内皮细胞损伤中的作用。方法1、CIH致大鼠动脉损伤差异表达蛋白的筛选及生物信息学分析:首先构建CIH致动脉损伤的大鼠动物模型,使用串联质谱仪（TMT）标记的定量蛋白组学技术,筛选差异表达的蛋白质,并行GO分析、KEGG分析等生物信息学分析。筛选出的关键蛋白PPARγ后,用Western blot方法验证。2、PPARγ调控IH相关血管内皮细胞损伤的功能研究:分别以大鼠动脉内皮细胞（RAOECs）和人脐静脉内皮细胞为研究对象（HUVECs）,实验分组为常氧对照组（Control组）,间歇低氧组（IH组）和间歇低氧+罗格列酮组（IH+Rosiglitazone组）。Cell Counting Kit-8（CCK-8）实验检测各组细胞活力,RT-q PCR法检测各组PPARγm RNA,Ed U（5-ethynyl-2’-deoxyuridine）-594法检测各组细胞增殖能力,Western blot技术检测各组凋亡相关蛋白的表达水平及PPARγ蛋白水平,FITC+PI双染流式细胞学检测各组细胞凋亡率。3、PPARγ调控IH相关血管内皮细胞损伤的机制研究:首先,运用生物信息学预测及双荧光素酶报告基因试验寻找并证实PPARγ上游的调控mi RNA,验证mi R-130a-3p在IH诱导的HUVECs损伤中的作用及潜在机制。4.通过活性氧、线粒体膜电位水平检测和线粒体分裂融合蛋白检测明确IH对HUVECs线粒体功能的损伤。同时给予线粒体特异性抗氧化剂mito-Tempo及敲减PPARγ,观察IH模式下,HUVECs线粒体功能变化,细胞活力,细胞增殖能力、凋亡率及凋亡蛋白的改变。结果1、本研究比较了CIH组大鼠和常氧对照组大鼠动脉组织的差异表达蛋白,在可定量的3593个蛋白中,以差异倍数为1.5倍（CIH vs.常氧）为界值时,468个差异表达蛋白下调,92个差异表达蛋白上调。GO分析和KEGG分析等结果表明差异表达的蛋白主要富集在能量代谢和脂代谢途径。PPARγ在CIH组大鼠动脉组织中表达显着下调,fold change值为0.132,P=0.002。Western blot检测结果也提示蛋白PPARγ在CIH组大鼠动脉组织中和动脉内皮细胞中表达显着减低（p均<0.05）。2、在RAOECs和HUVECs细胞模型中,与常氧对照组比较,IH组PPARγm RNA和蛋白表达均减少,伴随细胞活力减低,增殖阳性的细胞比例减少,促凋亡蛋白表达增多,抗凋亡蛋白表达减少,细胞凋亡率增高（p均<0.05）;与IH组相比,IH+罗格列酮组PPARγm RNA和蛋白表达增多,细胞活力改善,增殖阳性的细胞比例增多,凋亡率下降,促凋亡蛋白表达减少,抗凋亡蛋白表达增多（p均<0.05）。3、生物信息学预测显示,mi R-130a-3p的种子序列与PPARγ3’UTR的位点完全互补配对,提示PPARγ可能是mi R-130a-3p的下游的靶基因;双荧光素酶报告基因实验结果发现,野生型PPARγ组,转染mi R-130a-3p人工化合物mimics的荧光素酶活力明显低于转染mimics NC组;而在突变型PPARγ组中,转染后荧光素酶活力无明显差异。将mi R-130a-3p抑制剂,PPARγ抑制剂等化合物利用脂质体法瞬时转染到HUVECs中,结果显示,抑制PPARγ的表达可部分逆转mi R-130a-3p对HUVECs的细胞活力,增殖阳性细胞比例和细胞凋亡的影响（p均<0.05）。4、与对照组比较,IH组HUVECs细胞内线粒体膜电位减低,ROS荧光信号增强,线粒体分裂蛋白表达增多（p均<0.05）。将线粒体特异性抗氧化剂,PPARγ抑制剂转染HUVECs,结果显示:抑制PPARγ的表达可调节线粒体功能而影响HUVECs的细胞活力,增殖阳性细胞比例和细胞凋亡（p均<0.05）。结论1、CIH可以引起大鼠动脉内皮损伤,蛋白表达谱改变。能量代谢,脂质代谢和PPAR通路,可能参与CIH相关动脉损伤。蛋白PPARγ在CIH的动脉内皮细胞中表达减少。2、PPARγ激动剂罗格列酮可减轻IH诱导的血管内皮细胞损伤。3、mi R-130a-3p通过靶向调节PPARγ的表达来介导IH诱导的血管内皮细胞损伤。4、PPARγ对IH相关血管内皮细胞损伤的调节与线粒体功能改变相关。
甘淋玲[5]（2020）在《新型抗肿瘤TNBG衍生物的设计合成及构效关系研究》文中指出德氮吡格（Tetrazanbigen,TNBG）是一种原创性新构型的脂毒性抗肿瘤化合物,含有四氢异喹啉和喹喔啉结构,具有良好的体内外抗肿瘤活性,与其他常用抗肿瘤药物无交叉耐药性。经体内外实验显示TNBG能激活肿瘤细胞过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）和SRRBPs加强脂质合成,抑制脂质转运,引起肿瘤细胞内脂质聚集,导致肿瘤细胞“脂毒性”。但是,TNBG水溶性较差,限制了其成药性。目的本文以TNBG为先导化合物,进行结构修饰优化,以期筛选出水溶性良好,抗肿瘤活性强,成药性好的抗肿瘤候选TNBG衍生物。方法1.本文设计并合成四个系列全新结构的TNBG衍生物:即系列I衍生物为在TNBG的A环、E环上引入不同体积、不同电负性基团,考察其对活性的影响;系列II衍生物为在TNBG的C环上引入具有碱性的侧链,有助于改善水溶性,增强活性;系列III衍生物为在TNBG的E环上引入羧基、酰胺以及碱性基团等;系列IV衍生物为在A环和C环,或C环和E环引入具有碱性的双侧链衍生物,考察碱性烷基链数量及其位置对抗肿瘤活性的影响。2.TNBG衍生物的体外抗肿瘤活性筛选选用人肺癌细胞株A549、人结肠癌细胞株LOVO、人肝癌细胞株Hep G2和QGY7701为模型,采用CCK8方法,检测TNBG衍生物的体外抗肿瘤活性(IC50值),并初步探讨TNBG衍生物的构效关系。3.TNBG衍生物的体内药效学研究采用裸鼠肺癌A549移植瘤模型,观察衍生物16g对A549裸鼠移植瘤生长抑制的情况,计算抑瘤率。4.TNBG衍生物初步作用机制研究采用油红O染色观测衍生物16g脂质聚集情况;采用流式细胞术检测衍生物16g对肿瘤细胞的周期阻滞、细胞凋亡情况的影响;采用过氧化物酶体增殖物反应原件PPRE驱动的荧光素酶报告基因检测衍生物16g对Cos-7细胞PPARγ的激活作用;采用Western blotting技术初步探究衍生物16g对相关蛋白表达的影响。5.TNBG衍生物的药效团模型和分子对接采用Discovery Studio（2016）软件中Pharmacophore模块,构建基于分子共同特征的药效团模型,进一步将其与TNBG系列衍生物进行匹配,验证药效团模型的合理性。从蛋白质数据库中选用PPARγ复合物作为对接模型,与衍生物16g进行分子对接,研究其与靶蛋白的作用模式。结果1.以取代苯乙胺为起始原料,经五步合成关键中间体,经环合得到系列I衍生物;TNBG与氯代烷基侧链发生亲核取代反应得到系列II衍生物;TNBG的酯基衍生物经水解、酰化、还原得到系列III化合物;TNBG的双羟基衍生物在氢化钠作用下,与氯代烷基侧链反应得到系列IV衍生物。所有TNBG衍生物经核磁、高分辨质谱确认其结构,并且测定了部分衍生物的熔点、水溶性等物理常数。部分衍生物采用X射线单晶衍射确认了结构。2.体外抗肿瘤活性实验表明,TNBG衍生物对人肺癌细胞株A549和人肝癌细胞株Hep G2细胞较敏感。对相同肿瘤细胞株而言,TNBG衍生物活性排序为系列IV>系列II>系列I或系列III,这就提示在C环引入碱性侧链以及在A环或E环上增加侧链的数量有助于提高活性。尤其是衍生物16d和16g对人肝癌细胞株Hep G2的IC50值分别为0.42和0.54μM,对人肺癌细胞株A549的IC50值分别为0.33和0.47μM,相比TNBG和TNBG-5602,活性提高了10–30倍以上;衍生物16g的水溶性为31.4 mg/m L,是TNBG（4μg/m L）的7850倍。3.建立了人肺癌细胞株A549裸鼠移植瘤模型,经实验显示,衍生物16g在10 mg/kg剂量下能有效抑制肿瘤生长,抑瘤率为62%。4.采用油红O染色实验显示衍生物16g能使人肺癌细胞株A549呈阳性,这提示肿瘤细胞内脂质聚集。5.经初步作用机制研究显示,衍生物16g能诱导人肺癌细胞株A549细胞凋亡,可能与激活PPARγ,上调PPARγ和抑癌基因PTEN蛋白的表达,抑制AKT磷酸化有关。6.采用药效基团模型和分子对接技术进一步解释了衍生物16g发挥较强活性的原因。结果显示在TNBG骨架上引入两个叔胺类型的支链,对提高化合物的细胞活性有明显的帮助,这与前面实验结果一致。分子对接结果显示衍生物16g与PPARγ能够形成较强的氢键相互作用,从而激活其功能。结论本文以TNBG为先导化合物,经修饰优化,得到44个新衍生物,经体外抗肿瘤活性筛选出水溶性好,活性好的衍生物16g。在体内药效学实验中显示,衍生物16g按10 mg/kg剂量给药后,抑瘤率为62%。衍生物16g能使人肺癌细胞株A549的油红O染色呈阳性,这提示肿瘤细胞内脂质聚集,具有肿瘤细胞的“脂毒性”作用。初步作用机制研究表明,衍生物16g诱导人肺癌细胞株A549细胞凋亡,可能与激活PPARγ,引起PTEN上调,抑制PI3K/AKT的信号通路有关。这些结果表明衍生物16g是一种有前途的抗肿瘤化合物,值得进一步研究。
艾星浩[6]（2020）在《贝沙罗汀通过SLC10A2/PPARγ/PTEN/mTOR信号通路抑制非小细胞肺癌的研究》文中认为研究表明维甲酸可以抑制肿瘤细胞增殖,诱导肿瘤细胞分化和促进肿瘤细胞凋亡,因此将维甲酸应用于癌症化学预防和癌症治疗方面受到广泛关注,是癌症研究领域的热点之一。贝沙罗汀是一种新型人工合成的维甲酸,主要选择性地与维甲酸X受体（RXRs）亚型（RXRα、RXRβ和RXRγ）结合,临床上已被广泛应用于治疗多种皮肤疾病包括银屑病、痤疮和角化障碍等,美国食品药品监督管理局（FDA）于2000年批准贝沙罗汀治疗皮肤T细胞淋巴瘤。血浆脂类指标升高是维甲酸治疗常见的毒性反应,但是发生高甘油三酯血症的分子机制尚不明确。此外非常有趣的是,在两项前瞻性国际III期随机对照临床试验（SPIRIT I和SPIRIT II）中,那些发生重度高甘油三酯血症的晚期NSCLC患者一线接受贝沙罗汀联合化疗较单纯化疗延长了总生存;贝沙罗汀单药治疗多线化疗失败的晚期非小细胞肺癌（NSCLC）患者的II期临床试验也观察到高甘油三酯血症和贝沙罗汀疗效之间的相关性。Meglasson等应用Affymetrix 500K全基因组SNP陈列和Sepuenom i PLEXTM陈列比较分析不同级别高甘油三酯血症患者的血浆标本,发现溶质转运蛋白家族10成员2（SLC10A2）基因作为一个重要的候选基因,可能参与了贝沙罗汀诱发的高甘油三酯血症的发生过程,并且是预测贝沙罗汀抗NSCLC效果的分子标记物。有研究表明RXR可以调控SLC10A2基因转录,一种调节脂质代谢的细胞核受体-过氧化物酶体增殖物激活受体（PPAR）也可能参与了此过程,因此我们推测贝沙罗汀可能通过上调SLC10A2基因抑制肺癌细胞增殖。为了验证这一假设以及深入分析涉及贝沙罗汀抗NSCLC作用的细胞内分子信号通路,本研究设计了二部分体外试验。首先我们应用质粒转染成功构建了过表达SLC10A2基因的NSCLC细胞系（A549细胞和H1299细胞）,同时应用RNA干扰抑制SLC10A2基因在细胞中表达,随后在高表达和低表达SLC10A2基因的NSCLC细胞中,以正常A549细胞和H1299细胞作为对照,比较贝沙罗汀抑制肿瘤细胞增殖、侵袭和促进凋亡作用的差异,同时应用RT-PCR分析细胞内凋亡相关基因、抑癌基因和抗凋亡基因表达的变化。体外实验发现贝沙罗汀能够抑制NSCLC细胞增殖、侵袭和诱导NSCLC细胞凋亡,并且引起细胞内凋亡相关基因（caspase 3,caspase 7）、抑癌基因（PTEN,P21,P53,LKB1和TSC2）表达增加和抗凋亡基因（bcl 2,cyclin D1和c-FLIP）表达降低,此效应在高表达SLC10A2基因的细胞中得到明显增强,相反地在低表达SLC10A2基因的细胞中被显着抑制。通过第一部分试验我们证明了SLC10A2基因在贝沙罗汀抑制NSCLC增殖、侵袭和诱导NSCLC凋亡的过程中发挥了重要作用,此过程是由SLC10A2上调凋亡相关基因（caspase 3,caspase 7）、抑癌基因（PTEN,P21,P53,LKB1和TSC2）和下调抗凋亡基因（bcl 2,cyclin D1和c-FLIP）表达而实现。在第二部分实验中,我们应用PPARγ抑制剂GW9662联合贝沙罗汀共同干预正常A549细胞和过表达slc10a2基因的A549细胞,与单用贝沙罗汀进行对照,比较不同干预条件下肿瘤细胞增殖能力和细胞内肿瘤抑制因子表达的差异,发现GW9622可以阻断贝沙罗汀的抑制NSCLC细胞增殖作用,并且抑制细胞凋亡基因（caspase 3,caspase 7）和抑癌基因（PTEN,P21,P53,LKB1和TSC2）表达,而促进抗凋亡基因（bcl 2,cyclin D1和c-FLIP）表达。此外,我们应用免疫印迹和RT-PCR方法在贝沙罗汀干预的正常A549细胞中发现,随着贝沙罗汀浓度从1m M增加到10m M,slc10a2的表达逐渐增强,PPARγ的表达也逐渐增加,SLC10A2介导的细胞内PTEN表达增加和m TOR表达抑制同样被GW9662阻断。通过第二部分试验我们认为贝沙罗汀能够增加SLC10A2表达,然后激活PPARγ,进而调控细胞内相关基因的表达。综合以上两部分试验结果,我们的结论是贝沙罗汀通过SLC10A2/PPARγ/PTEN/m TOR信号通路来抑制NSCLC细胞的活力。本研究结果与Meglasson等研究相互验证,揭示了贝沙罗汀诱发高甘油三酯血症的分子机制,支持临床应用SLC10A2基因作为标志物以筛选贝沙罗汀治疗有效的晚期NSCLC患者的可行性,同时也为通过调节脂质代谢通路开发抗肿瘤治疗药物或者探索新型抗肿瘤联合治疗策略提供了很好的实验室依据和思路。
王训翠[7]（2020）在《黄芪甲苷对Aβ1-42诱发的阿尔茨海默病样表型的改善作用及其机制研究》文中进行了进一步梳理研究背景阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）是一种进行性的神经退行性疾病,以认知障碍和行为损伤为主要临床症状,病理特征主要表现为脑中β-淀粉样蛋白（β-amyloid,Aβ）沉积形成的细胞外老年斑,tau蛋白过度磷酸化形成的细胞内神经原纤维缠结和神经元缺失等。目前最受认可的淀粉样蛋白假说认为,导致AD一系列病理生理改变的中心触发因素为Aβ聚集,可诱发神经元损伤和死亡、突触缺失、神经炎症和tau蛋白过度磷酸化等,这些病理过程反过来又进一步促进Aβ沉积,从而形成一种级联式放大效应,最终导致认知功能障碍。依据AD的发病机制和淀粉样蛋白假说,以Aβ聚集引发的神经毒性反应为目标寻找治疗AD的潜在药物是一个很有前景的研究方向,也是当前的热点和难点。黄芪甲苷是黄芪的主要活性成分,本课题组前期研究证实黄芪甲苷对不同痴呆模型的学习记忆能力具有一定的改善作用,但其作用机制还不完全清楚。过氧化物酶体增殖物激活受体（peroxisome proliferators-activated receptor gamma,PPARγ）是核受体超家族成员之一,主要调控目标基因的转录,参与体内脂代谢、糖稳态、炎症反应、凋亡等多种生理反应。PPARγ表达或激活在神经退行性病变中发挥重要的保护作用,PPARγ激动剂能改善AD患者的记忆和认知能力,PPARγ可能成为AD治疗的新靶点。此外,BDNF已被证实与AD的发病及进展密切相关,其表达受PPARγ的调控,BDNF通过Trk B受体在突触可塑性和学习记忆中发挥重要的调节作用。本课题拟在Aβ1-42诱导的AD样体内外模型中进一步验证黄芪甲苷的神经保护作用,并深入探讨其发挥作用的潜在机制。第一部分黄芪甲苷对Aβ1-42诱导的小鼠AD样行为的改善作用及其机制目的研究AS-Ⅳ对小鼠AD样行为的影响,并从PPARγ-BDNF/Trk B信号通路探讨其作用机制。方法5-6周龄雄性C57BL/6小鼠被随机分为假手术组、Aβ1-42注射组、AS-Ⅳ（10、20、40 mg/kg）给药组、PPARγ抑制剂组和阳性对照组。除假手术组和阳性对照组外,其余各组小鼠每天灌胃给予AS-Ⅳ一次,持续一周后行双侧海马注射Aβ1-42。术后第二天,阳性对照组灌胃给予多奈哌齐5 mg/kg,PPARγ抑制剂组灌胃给予AS-Ⅳ20 mg/kg和腹腔注射给予GW9662 1 mg/kg,AS-Ⅳ低、中、高剂量组如前分别灌胃给予AS-Ⅳ10、20和40 mg/kg,假手术组和Aβ1-42注射组灌胃等体积生理盐水,每天给药一次,持续四周。给药完毕后评估小鼠认知功能和AD样表型的病理学改变。小鼠认知功能相关的行为学测试分别为:Morris水迷宫检测小鼠空间学习和记忆,新物体识别实验观察小鼠的辨识记忆,条件化恐惧记忆实验评价小鼠的恐惧记忆;行为学测试结束后,分离小鼠海马组织,尼氏染色观察海马神经元的损伤程度;酶联免疫吸附法（Enzyme Linked Immunoserbent Assay,ELISA）检测内源性Aβ1-42水平和IL-1β、IL-6和TNF-α的含量;免疫组化检测BDNF和PPARγ蛋白的阳性表达;Golgi-Cox染色测定神经元树突棘密度;透射电镜观察突触超微结构和海马神经元凋亡情况;RT-q PCR检测BDNF和PPARγ的m RNA水平;免疫荧光检测PPARγ和BDNF,SYN和MAP-2,PPARγ和GFAP的共表达以及PSD95、SYN和GAP43蛋白的阳性表达;Western blotting检测t-tau、p-tau、BDNF、t-Trk B、p-Trk B、PPARγ、GFAP、Cleaved caspase-3蛋白和突触相关蛋白PSD95、SYN、GAP43、Arc的表达;TUNEL染色检测海马神经元凋亡程度。结果1.AS-Ⅳ改善Aβ1-42诱导的小鼠认知功能障碍Morris水迷宫实验结果显示注射Aβ1-42使小鼠的空间学习和记忆显着下降;新物体识别实验结果显示注射Aβ1-42使小鼠的辨识记忆显着下降;条件化恐惧记忆实验结果显示注射Aβ1-42使小鼠的线索性恐惧记忆和情景性恐惧记忆均显着下降。小鼠经AS-Ⅳ给药后,Morris水迷宫定位航行试验结果显示AS-Ⅳ（10、20、40 mg/kg）能剂量依赖性地逆转Aβ1-42注射的小鼠寻找平台的潜伏期;空间探索试验结果显示AS-Ⅳ（10、20、40 mg/kg）能剂量依赖性地增加Aβ1-42注射的小鼠在目标象限的停留时间及游泳距离,改善Aβ1-42注射的小鼠空间学习和记忆;新物体识别实验结果显示AS-Ⅳ（10、20、40 mg/kg）在一定程度上能提高Aβ1-42注射的小鼠辨识记忆,但差异无统计学意义。条件化恐惧记忆实验结果显示AS-Ⅳ（10、20、40 mg/kg）能剂量依赖性地逆转Aβ1-42注射的小鼠僵立时间,恢复情景性恐惧记忆和线索性恐惧记忆。2.AS-Ⅳ减轻Aβ1-42诱导的海马区病理改变尼氏染色结果显示,相较Aβ1-42注射组,AS-Ⅳ给药组小鼠海马神经细胞数量增多,形态规则,排列相对整齐,且尼氏小体数量明显增多,神经元损伤程度减轻;Aβ1-42注射没有导致小鼠海马内源性Aβ1-42含量的显着性增加,但能引起tau蛋白磷酸化水平显着上升;而AS-Ⅳ能显着逆转Aβ1-42注射导致的小鼠tau蛋白磷酸化水平增加。3.AS-Ⅳ减轻Aβ1-42诱导的海马区突触毒性免疫荧光和Western blotting检测结果显示与假手术组相比,Aβ1-42注射组小鼠海马区突触特异性蛋白PSD95、SYN、GAP43的表达均显着下降,AS-Ⅳ显着增加Aβ1-42注射的小鼠海马PSD95、SYN和GAP43蛋白的表达;但Arc蛋白的表达在各组小鼠间没有显着性差异。MAP-2和SYN免疫荧光共标结果显示与假手术组相比,Aβ1-42注射组小鼠海马神经元MAP-2阳性细胞数明显减少,神经突起破坏明显,树突排列紊乱,突起长度明显缩短,同时伴有SYN蛋白的阳性表达明显减少;AS-Ⅳ能明显增加Aβ1-42注射的小鼠海马MAP-2蛋白表达的同时伴有SYN蛋白的表达也明显上升。Golgi-Cox染色结果显示Aβ1-42注射组小鼠海马神经元树突棘密度显着降低;AS-Ⅳ能显着增加Aβ1-42注射的小鼠海马神经元树突棘密度。透射电镜观察结果显示Aβ1-42注射组小鼠海马区显微结构模糊,突触数量明显较少,突触间隙融合不清,突触囊泡减少;AS-Ⅳ能改善Aβ1-42注射的小鼠海马区突触结构损伤,减轻突触毒性。4.AS-Ⅳ促进海马神经元PPARγ表达,抑制Aβ1-42诱导的BDNF水平下降RT-q PCR、Western blotting和免疫组化检测结果显示Aβ1-42注射组小鼠海马BDNF和PPARγm RNA和蛋白水平均显着下降;AS-Ⅳ能显着增加Aβ1-42注射的小鼠海马PPARγ和BDNF m RNA和蛋白表达,同时上调Trk B蛋白的磷酸化水平。此外,PPARγ和BDNF免疫荧光共标观察结果显示Aβ1-42注射的小鼠海马PPARγ表达下降的同时伴有BDNF的表达也明显下降;AS-Ⅳ能明显增加Aβ1-42注射的小鼠海马区PPARγ表达的同时伴有BDNF表达的增加。此外,在Aβ1-42注射的小鼠中,PPARγ抑制剂GW9662和AS-Ⅳ联合给药不但阻断了AS-Ⅳ对PPARγ表达的影响,同时也阻断了AS-Ⅳ对BDNF表达的影响。上述结果表明AS-Ⅳ通过促进海马神经元PPARγ表达,继而抑制Aβ1-42诱导的BDNF水平下降并激活BDNF/Trk B信号通路。5.AS-Ⅳ促进海马神经元PPARγ表达,抑制Aβ1-42诱导的神经炎症ELISA检测结果显示Aβ1-42注射的小鼠海马IL-1β、IL-6和TNF-α的含量显着升高;AS-Ⅳ能显着抑制Aβ1-42诱导的小鼠海马IL-1β、IL-6和TNF-α的含量增加;PPARγ和GFAP免疫荧光共标及Western blotting检测结果显示Aβ1-42注射的小鼠海马PPARγ表达显着减少的同时伴有GFAP表达的显着增加;AS-Ⅳ上调Aβ1-42诱导的小鼠海马PPARγ表达的同时伴有GFAP表达显着下降;PPARγ抑制剂GW9662与AS-Ⅳ联合用药则能阻断AS-Ⅳ对Aβ1-42诱导的小鼠海马IL-1β、IL-6、TNF-α、PPARγ和GFAP表达的影响。上述结果表明AS-Ⅳ通过促进海马PPARγ表达,继而抑制海马区胶质细胞的增生,降低促炎因子的表达,减轻Aβ1-42诱导的神经炎症。6.AS-Ⅳ抑制Aβ1-42诱导的海马神经元凋亡TUNEL染色、透射电镜和Western blotting检测结果显示Aβ1-42注射的小鼠海马区神经元凋亡形态明显,Cleaved caspase-3蛋白表达显着上升;AS-Ⅳ能显着下调Aβ1-42诱导的小鼠海马神经元Cleaved caspase-3蛋白的表达,抑制神经元凋亡。本章小结AS-Ⅳ通过促进PPARγ表达,进而上调BDNF水平并激活BDNF/Trk B信号通路,修复突触损伤,抑制海马区胶质细胞的活化,降低促炎因子的表达,减轻神经炎症反应,阻止海马神经元凋亡,改善Aβ1-42诱导的小鼠认知功能障碍。第二部分黄芪甲苷对Aβ1-42诱导的HT-22细胞的保护作用及其机制目的研究AS-Ⅳ对Aβ1-42诱导的HT-22细胞的影响及其机制。方法以10μM Aβ1-42损伤HT-22细胞48 h建立AD样细胞模型。采用MTT法检测细胞存活率;LDH法检测细胞损伤度;台盼蓝染料排斥实验检测细胞死亡率;RT-q PCR检测BDNF和PPARγm RNA水平;采用PPARγRNAi技术和PPARγ特异性抑制剂（GW9662）处理,Western blotting检测BDNF、t-Trk B、p-Trk B、PPARγ和Cleaved caspase-3蛋白的表达;ELISA检测IL-1β、IL-6和TNF-α的含量;流式细胞术检测细胞内活性氧的水平;DAPI染色荧光显微镜和Annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡程度。结果1.AS-Ⅳ抑制Aβ1-42诱导的HT-22细胞毒性MTT检测结果表明AS-Ⅳ在5-100μM浓度范围内能显着增加Aβ1-42诱导的细胞存活率,且呈量效依赖性。当AS-Ⅳ浓度达到500μM时,与Aβ1-42处理组比较,细胞存活率差异不显着。LDH法检测结果表明Aβ1-42处理后细胞损伤程度显着增加;AS-Ⅳ（25、50、100μM）预处理后细胞损伤程度显着减轻;台盼蓝染色后镜下可见Aβ1-42处理组细胞死亡率显着增加,AS-Ⅳ能显着抑制Aβ1-42诱导的细胞损伤和死亡。2.AS-Ⅳ抑制Aβ1-42诱导的HT-22细胞BDNF水平下降RT-q PCR及Western blotting检测结果显示HT-22细胞经10μM Aβ1-42作用后,BDNF m RNA和蛋白表达及Trk B的磷酸化水平均显着降低;与外源性BDNF作用效应一致,AS-Ⅳ能显着上调Aβ1-42诱导的BDNF m RNA和蛋白表达及Trk B的磷酸化水平,且呈浓度依赖性;此外,单用AS-Ⅳ也能显着促进正常HT-22细胞(未加Aβ1-42处理)中BDNF蛋白的表达。上述结果表明AS-Ⅳ能抑制Aβ1-42诱导的BDNF水平下降并激活BDNF/Trk B信号通路。3.AS-Ⅳ促进HT-22细胞PPARγ表达,抑制Aβ1-42诱导的BDNF水平下降Western blotting检测结果发现在正常HT-22细胞中干扰PPARγ,阻断其表达后,BDNF蛋白水平亦显着下降;在Aβ1-42诱导的HT-22细胞中,干扰PPARγ或使用PPARγ抑制剂GW9662阻断其表达后均能显着逆转AS-Ⅳ对BDNF蛋白表达的影响;此外,HT-22细胞经Aβ1-42损伤后PPARγm RNA和蛋白水平均显着下降;AS-Ⅳ能显着上调Aβ1-42诱导的PPARγm RNA和蛋白水平;同时,单用AS-Ⅳ也能促进正常HT-22细胞(未加Aβ1-42处理)中PPARγ蛋白的表达。上述结果表明AS-Ⅳ通过促进PPARγ表达,进而抑制Aβ1-42诱导的BDNF水平下降。4.AS-Ⅳ促进HT-22细胞PPARγ表达,抑制Aβ1-42诱导的炎症反应ELISA检测结果显示HT-22细胞经10μM Aβ1-42作用后,IL-1β、IL-6和TNF-α的含量均显着升高;AS-Ⅳ能显着降低Aβ1-42诱导的IL-1β、IL-6和TNF-α的含量,呈浓度依赖性;PPARγ抑制剂GW9662能显着逆转AS-Ⅳ这一效应。上述结果表明AS-Ⅳ通过促进PPARγ表达,继而降低促炎因子表达,抑制Aβ1-42诱导的炎症反应。5.AS-Ⅳ抑制Aβ1-42诱导的HT-22细胞氧化性损伤和凋亡流式细胞仪检测结果显示Aβ1-42诱导了HT-22细胞内活性氧水平的显着升高;与NAC作用效应一致,AS-Ⅳ能显着抑制Aβ1-42所致的HT-22细胞氧化性损伤;此外,与AS-Ⅳ作用效应一致,外源性BDNF也能显着减轻Aβ1-42诱导的神经毒性;而PPARγ抑制剂GW9662显着逆转AS-Ⅳ对Aβ1-42诱导的HT-22细胞存活率的促进作用。DAPI染色、Annexin V-FITC/PI双染和Western blotting检测结果进一步表明Aβ1-42诱导了HT-22细胞的凋亡;与外源性BDNF作用效应一致,AS-Ⅳ能显着下调Aβ1-42诱导的Cleaved caspase-3蛋白的表达,抑制细胞凋亡;而PPARγ抑制剂GW9662显着逆转AS-Ⅳ的抗凋亡效应。上述结果表明AS-Ⅳ通过促进PPARγ表达,抑制Aβ1-42诱导的细胞凋亡。本章小结AS-Ⅳ能显着抑制Aβ1-42诱导的HT-22细胞损伤、炎症反应和凋亡,该作用可能与其促进PPARγ表达,进而上调BDNF水平并激活BDNF/Trk B信号通路有关。结论在Aβ1-42处理的小鼠海马神经细胞HT-22和C57BL/6小鼠中,AS-Ⅳ通过促进PPARγ表达,进而上调BDNF水平并激活BDNF/Trk B信号通路,修复突触损伤,减轻神经炎症,抑制海马神经元损伤和凋亡,从而改善认知功能障碍,发挥神经保护作用。
郭雨萱[8]（2020）在《PHLDA1在H2O2诱导的H9c2心肌细胞损伤和心肌缺血再灌注损伤中的机制研究》文中研究说明目的:在心血管疾病中,由于心肌缺血再灌注造成的死亡占很大比例。其中,在再灌注过程中,会观察到氧化应激损伤的产生。在缺血/再灌注模型中观察到,当系统无法在氧化剂分子的生产和利用之间建立平衡时,会产生氧化应激。氧化应激过程中活性氧（reactive oxygen species,ROS）的过量产生导致蛋白质,DNA和脂质损伤,引起细胞损伤。PHLDA1首先在T细胞受体激活诱导的细胞凋亡中被鉴定出来,目前的研究表明PHLDA1在不同的细胞种类和刺激下起到不同的作用,目前关于PHLDA1在氧化应激诱导的心肌细胞（H9c2）损伤和心肌缺血再灌注损伤中的作用尚未报道。本研究主要探究PHLDA1在氧化应激诱导的心肌细胞损伤和心肌缺血再灌注损伤中的作用,以及PHLDA1通过结合Bax在氧化应激诱导的心肌细胞损伤中的作用机制。研究方法:1、培养H9c2心肌细胞,分别用不同浓度的H2O2处理细胞。CCK8实验观察细胞活力、流式细胞术检测细胞凋亡。用Western blot检测PHLDA1蛋白和凋亡相关蛋白caspase 3,PARP1的表达水平。筛选合适药物浓度用于后续试验。300μM H2O2处理H9c2不同时间。Western blot检测PHLDA1蛋白的表达水平。筛选合适药物刺激时间用于后续试验。2、在H9c2细胞中转染Flag-PHLDA1质粒和对照组质粒,转染46h后300μM H2O2处理或者不处理H9c2 90min,CCK8实验观察细胞活力变化,流式细胞术检测细胞凋亡变化,Western blot检测Flag-PHLDA1蛋白和凋亡相关蛋白caspase 3、PARP1的表达水平,JC-1检测试剂盒检测线粒体膜电位的改变,ROS检测试剂盒检测细胞内ROS的改变。3、在H9c2心肌细胞中转染对照siRNA和PHLDA1 siRNA,300μM H2O2处理或者不处理H9c2 90min,CCK8实验观察细胞活力变化,流式细胞术检测细胞凋亡变化,Western blot检测PHLDA1蛋白和凋亡相关蛋白caspase 3、PARP1的表达水平,JC-1检测试剂盒检测线粒体膜电位的改变,ROS检测试剂盒检测细胞内ROS的改变。4、对SD雄性大鼠进行尾静脉注射对照shRNA和PHLDA1 shRNA腺病毒,注射3周后分别进行单纯灌流（对照组）和缺血再灌注（IR）处理,HE染色检测心肌形态变化,TTC检测心肌梗死面积变化,TUNEL染色检测心肌凋亡率变化,Western blot检测PHLDA1和PARP1的表达水平,免疫组化检测caspase 3的表达水平。5、内外源免疫共沉淀实验检测PHLDA1与Bax结合,并在H2O2刺激下结合变化。在H9c2心肌细胞中过表达、敲减PHLDA1后,心肌敲除PHLDA1后,Western blot检测Bax的表达水平。6、Western blot检测PHLDA1影响Bax的表达水平的途径。结果:1、不同浓度H2O2刺激H9c2心肌细胞,随着刺激浓度的增加,细胞活性下降、凋亡率逐渐上升,凋亡相关蛋白和PHLDA1的表达增加。随着刺激时间的延长,PHLDA1的表达增加。2、H9c2心肌细胞中过表达PHLDA1,与转染空载组相比,过表达PHLDA1并给予H2O2刺激后,细胞活性,凋亡率下降,凋亡相关蛋白的表达增加,线粒体膜电位降低更明显,活性氧的产生更多。3、H9c2心肌细胞中敲减PHLDA1,与转染NC组相比,敲减PHLDA1并给予H2O2刺激后,细胞活性,凋亡率上升,凋亡相关蛋白的表达减少,线粒体膜电位降低得到抑制,活性氧的产生减少。4、心肌组织中敲低PHLDA1,与注射NC组相比,敲减PHLDA1并给予缺血再灌注损伤,心肌形态得到维持,心肌梗死面积减少,凋亡蛋白的表达减少,凋亡率减少。5、免疫共沉淀实验验证Bax与PHLDA1结合,并在氧化应激条件下结合增强。6、MG132消除了PHLDA1对Bax蛋白的降解,CHX抑制蛋白质转录,敲低PHLDA1使Bax降解更快。结论:1、氧化应激引起的H9c2心肌细胞损伤和心肌缺血再灌注损伤中,PHLDA1表达增加。2、PHLDA1在氧化应激诱导的H9c2心肌细胞损伤和心肌缺血再灌注损伤中起到促进作用。3、PHLDA1与Bax结合参与氧化应激诱导的H9c2心肌细胞损伤。同时PHLDA1通过蛋白酶体途径引起Bax的变化。
曹曦月[9]（2019）在《神经珠蛋白真核表达载体的构建及其在胶质瘤细胞氧化防御中的作用》文中提出神经珠蛋白（NGB）主要分布在脊椎动物的神经系统中,是一种会被缺氧和缺血诱导表达的氧结合蛋白,具有抗氧化的功能。近年研究表明,NGB与多种神经退行性疾病和癌症相关,但有关其转录调控机制与确切生理功能的研究较少,尚待进一步探究。氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）是一种在癌症中广泛表达的配体依赖性转录调控因子,我们发现其在神经胶质瘤的发展中表达受到抑制,而NGB的表达在胶质瘤组织中随着胶质瘤级别的发展呈渐进式上调。为明确这一现象的生理意义及调控机制,我们在体外实验中,分别利用PPARγ的激动剂和抑制剂改变U-87 MG细胞的PPARγ活性,发现在胶质瘤细胞中PPARγ的活性与NGB的表达呈负相关,其激动剂降低了胶质瘤细胞中的NGB蛋白水平,而抑制剂则增强了NGB的表达。进一步,我们发现NGB表达的增强有助于缓解胶质瘤细胞中的ROS积累,避免胶质瘤因氧化损伤而凋亡,且能一定程度抵抗PPARγ激动剂所诱导的氧化应激及胶质瘤细胞凋亡。此外,我们的研究证明NGB能参与调节胶质瘤细胞中AKT的磷酸化,这可能有助于胶质瘤细胞的生存、增殖和转移。这些结果初步阐述了NGB在胶质瘤进展中的转录调控机制及其生理功能,展示了NGB作为胶质瘤治疗靶点的潜力。
洪跃辉[10]（2014）在《PPARγ介导WIN对BEL-7402肝癌细胞增殖、凋亡的影响及分子机制研究》文中研究指明近年来的研究表明大麻素具有抗肿瘤作用。人工合成的大麻素WIN55,212-2（WIN）可以降低HepG2肝癌细胞的活力以及诱导其凋亡，过氧化物酶体增殖物激活受体γ（peroxisome proliferator activated receptor γ, PPARγ）在这些效应中起了重要作用，但是目前还没有相关报道指出WIN是否会对其他的肝癌细胞（例如BEL-7402细胞）产生类似的作用，而且WIN抗肿瘤的机制还没有被完全阐明。另外，目前关于PPARγ在肿瘤中的作用仍然存在着争论。目的探讨大麻素WIN对BEL-7402细胞的增殖和凋亡的影响，并且对其机制进行初步研究。方法使用CCK-8试剂盒和台盼蓝染色检测BEL-7402细胞的活力。碘化丙啶（propidium iodide,PI）单染色法分析BEL-7402细胞的细胞周期变化。DAPI染色和Hoechst33258染色分析BEL-7402细胞的核形态变化。使用线粒体膜电位检测试剂盒（JC-1）和罗丹明123染色试剂盒检测BEL-7402细胞的线粒体膜电位。AnnexinV-FITC/PI双染法检测BEL-7402细胞的凋亡率。分光光度法检测BEL-7402细胞中caspase-3、caspase-8和caspase-9的活性。荧光定量PCR检测BEL-7402细胞中PPARγ、Bax和Bcl-2的mRNA表达水平。Western blot检测相关蛋白的表达。结果WIN处理后，BEL-7402细胞的活力降低，细胞增殖受到抑制，而且细胞发生凋亡，凋亡率增加。 Western blot结果显示，WIN处理后，BEL-7402细胞中出现聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶（poly ADP-ribose polymerase, PARP）和caspase-3的切割带，PPARγ蛋白和Bax蛋白的表达水平升高，Bcl-2蛋白的表达水平下降。WIN处理BEL-7402细胞后，caspase-3、caspase-8和caspase-9的活性升高，PPARγ和Bax的mRNA表达水平升高，Bcl-2的mRNA表达水平下降。PPARγ拮抗剂GW9662减弱了WIN引起的细胞增殖抑制效应和凋亡效应。PPARγ激动剂15-脱氧-△12,14-前列腺素J2（15-deoxy-Δ12,14-Prostaglandin J2,15d-PGJ2）能够诱导BEL-7402细胞发生凋亡。15d-PGJ2能够降低BEL-7402细胞的活力。当WIN与15d-PGJ2联合作用于BEL-7402细胞时，细胞增殖抑制效应更加显着。PPARγ拮抗剂GW9662能够减弱WIN引起的c-myc表达抑制效应。大麻素受体2（cannabinoid receptor2, CB2）选择性拮抗剂AM630减弱了WIN引起的细胞增殖抑制效应和凋亡效应。AM630减弱了WIN诱导的PPARγ表达上调效应。结论大麻素WIN能够抑制BEL-7402细胞增殖和诱导其凋亡，PPARγ在这些效应中起了重要作用。CB2受体在WIN引起的PPARγ表达上调、细胞增殖抑制以及细胞凋亡中起了重要作用。PPARγ在WIN引起的c-myc表达抑制效应中发挥着一定的作用。
二、Bax在PPAR-γ激动剂诱导的肺癌细胞凋亡中的表达分析(英文)（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、Bax在PPAR-γ激动剂诱导的肺癌细胞凋亡中的表达分析(英文)（论文提纲范文）
（1）补骨脂定抗ADR心肌损伤的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 ADR心肌损伤的研究背景 |
| 1.1.1 ADR心肌损伤的研究现状 |
| 1.1.2 ADR心肌损伤的机制 |
| 1.1.3 ADR心肌损伤的临床治疗策略 |
| 1.2 补骨脂药理作用的研究进展 |
| 1.2.1 补骨脂的化学成分 |
| 1.2.2 PSO的药理作用 |
| 1.3 SIRT1/PPAR-γ信号通路的研究进展 |
| 1.3.1 SIRT1/PPAR-γ信号通路概况 |
| 1.3.2 SIRT1/PPAR-γ信号通路研究进展 |
| 1.4 研究意义 |
| 第二章 PSO对 ADR诱导小鼠心肌损伤的影响 |
| 2.1 实验材料及试剂 |
| 2.1.1 补骨脂药材来源 |
| 2.1.2 PSO的制备 |
| 2.1.3 实验动物 |
| 2.1.4 实验试剂 |
| 2.1.5 实验仪器 |
| 2.1.6 实验试剂配制 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 实验分组 |
| 2.2.2 建立小鼠ADR心肌损伤模型 |
| 2.2.3 标本收取 |
| 2.3 检测方法 |
| 2.3.1 超声心动图评价 |
| 2.3.2 血常规和血生化指标检测 |
| 2.3.3 Western blot检测步骤 |
| 2.3.4 苏木精-伊红(hematoxylin-eosin staining,HE)染色 |
| 2.3.5 免疫组织化学染色 |
| 2.3.6 Masson染色 |
| 2.3.7 天狼星红染色 |
| 2.3.8 组织DHE染色 |
| 2.4 统计学分析 |
| 2.5 实验结果 |
| 2.5.1 PSO处理对ADR损伤小鼠体重和生存率的影响 |
| 2.5.2 PSO处理对ADR损伤小鼠血常规和血生化的影响 |
| 2.5.3 PSO处理对ADR损伤小鼠心脏功能的影响 |
| 2.5.4 PSO处理对ADR损伤小鼠心肌形态的影响 |
| 2.5.5 PSO处理对ADR损伤小鼠心肌纤维化程度的影响 |
| 2.5.6 PSO处理对ADR损伤小鼠心肌氧化应激的影响 |
| 2.5.7 PSO处理后对ADR损伤小鼠SIRT1/PPAR-γ、线粒体功能、氧化应激等相关信号通路的影响 |
| 第三章 PSO对小鼠心肌细胞ADR损伤的保护作用 |
| 3.1 实验材料及试剂 |
| 3.1.1 实验细胞株 |
| 3.1.2 实验试剂 |
| 3.1.3 实验仪器 |
| 3.1.4 实验试剂配制 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 细胞培养 |
| 3.2.2 实验分组与模型建立 |
| 3.2.3 检测方法 |
| 3.2.4 统计分析 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 建立HL-1细胞ADR损伤模型 |
| 3.3.2 PSO对HL-1细胞的毒性实验 |
| 3.3.3 PSO预处理对正常HL-1细胞SIRT1/PPAR-γ、线粒体功能、氧化应激等相关信号通路的影响 |
| 3.3.4 PSO对ADR损伤后HL-1细胞形态与活力的影响 |
| 3.3.5 PSO对ADR诱导的HL-1细胞凋亡的影响 |
| 3.3.6 PSO对ADR诱导的HL-1细胞LDH释放的影响 |
| 3.3.7 PSO对ADR诱导的HL-1细胞ROS水平的影响 |
| 3.3.8 PSO对HL-1细胞ADR损伤后SIRT1/PPAR-γ、线粒体功能、氧化应激等相关信号通路的影响 |
| 第四章 SIRT1SIRNA1269对PSO抗ADR心肌细胞损伤作用的影响 |
| 4.1 实验材料及试剂 |
| 4.1.1 实验细胞株 |
| 4.1.2 实验药物和试剂 |
| 4.1.3 实验仪器 |
| 4.1.4 实验试剂配制 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 细胞培养 |
| 4.2.2 实验分组 |
| 4.3 检测方法 |
| 4.3.1 细胞活力检测: |
| 4.3.2 实时荧光定量PCR |
| 4.3.3 SIRT1siRNA细胞转染 |
| 4.3.4 Western blot检测 |
| 4.4 统计分析 |
| 4.5 SIRT1 SIRNA实验结果 |
| 4.5.1 SIRT1 siRNA对HL-1细胞的毒性检测 |
| 4.5.2 SIRT1 siRNA干扰片段的鉴定 |
| 4.5.3 SIRT1 siRNA对PSO抗HL-1细胞ADR损伤作用的影响 |
| 4.5.4 SIRT1 siRNA对PSO抗HL-1细胞ADR损伤过程中SIRT1/PPAR-γ、线粒体功能、氧化应激等相关信号通路的影响 |
| 第五章 GW9662处理对PSO抗ADR心肌损伤作用的影响 |
| 5.1 实验材料及试剂 |
| 5.1.1 实验细胞株 |
| 5.1.2 实验药物和试剂 |
| 5.1.3 实验仪器 |
| 5.1.4 实验试剂配制 |
| 5.2 实验方法 |
| 5.2.1 细胞培养 |
| 5.2.2 实验分组 |
| 5.3 检测方法 |
| 5.4 统计分析 |
| 5.5 实验结果 |
| 5.5.1 GW处理对HL-1细胞毒性作用 |
| 5.5.2 GW处理时间的PCR筛选 |
| 5.5.3 GW9662处理对PSO抗HL-1细胞ADR损伤后细胞形态和活力的影响 |
| 5.5.4 GW处理对PSO抗HL-1细胞ADR损伤过程中SIRT1/PPAR-γ、线粒体功能、氧化应激相关信号通路的影响 |
| 第六章 讨论与结论 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间取得的科研成果 |
| 致谢 |
（2）单酰基甘油脂肪酶对非小细胞肺癌的作用及调节研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACTS |
| 缩略词表 |
| 第一章 脂质代谢与肺癌的发生发展 |
| 1.1 肺癌的诱发因素与临床治疗 |
| 1.1.1 肺癌的诱因 |
| 1.1.2 肺癌的临床治疗 |
| 1.2 脂肪酸在癌症中的作用 |
| 1.2.1 脂肪酸合成及调节 |
| 1.2.2 脂肪酸氧化分解 |
| 1.2.3 脂肪酸在脂滴中的贮存 |
| 1.2.4 脂肪酸从脂滴中释放 |
| 1.3 MGLL在多种疾病中的研究进展 |
| 1.3.1 MGLL的结构和生化特性 |
| 1.3.2 MGLL与疾病 |
| 第二章 MGLL在非小细胞肺癌细胞系H460 中的作用 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料和方法 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.2 实验方法 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 MGLL在非小细胞肺癌细胞系和正常肺上皮细胞中的表达及定位 |
| 2.3.2 MGLL过表达载体构建及表达效率检测 |
| 2.3.3 过表达MGLL对 NSCLC H460 恶性表型的影响 |
| 2.3.4 敲低MGLL对 NSCLC H460 的影响 |
| 2.3.5 MGLL靶向抑制剂JZL184对NSCLC H460 的影响 |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 MGLL在非小细胞肺癌细胞系H460 的调节 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料和方法 |
| 3.2.1 实验材料 |
| 3.2.2 实验方法 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 MGLL与 mi R-3200-5p的靶向关系预测与验证 |
| 3.3.2 mi R-3200-5p对 NSCLC H460 的影响 |
| 3.3.3 MGLL与 mi R-3200-5p的相互作用对NSCLC H460 的影响 |
| 3.4 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（3）新型抗肿瘤德氮吡格衍生物T-1019的药效学及作用机制研究（论文提纲范文）
| 英汉缩略语名词对照 |
| 符号说明 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 1 实验材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 化合物与试剂配制 |
| 1.3 实验方法 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 T-10 单晶测定与结构分析 |
| 2.2 T-1019 对肿瘤细胞增殖的影响 |
| 2.3 T-1019 对肿瘤细胞凋亡的影响 |
| 2.4 T-1019 对人肝癌细胞株Hep G2中PPARγ相关信号通路的影响 |
| 2.5 T-1019 引起人肝癌细胞株Hep G2 中脂滴聚集 |
| 2.6 PPARγ拮抗剂部分逆转T-1019 对肿瘤细胞的增殖抑制作用 |
| 2.7 T-1019对PPARγ的激动作用 |
| 2.8 分子对接预测 T-1019 与 PPARγ-LBD 的结合模式 |
| 3 讨论与小结 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 附表 |
| 文献综述 过氧化物酶体增殖激活受体γ在肿瘤治疗方面的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 硕士期间发表的学术论文 |
（4）过氧化物酶体增殖物激活受体γ在间歇低氧相关血管内皮损伤中的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 缩略表 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分:间歇低氧致大鼠动脉损伤差异表达的蛋白质筛选及生物信息学分析 |
| 1、引言 |
| 2、材料与方法 |
| 3、结果 |
| 4、讨论 |
| 5、小结 |
| 第二部分:PPARγ调控间歇低氧相关血管内皮细胞损伤的功能研究 |
| 1、引言 |
| 2、材料 |
| 3、研究方法 |
| 4、研究结果 |
| 5、讨论 |
| 6、小结 |
| 第三部分:PPARγ调控间歇低氧相关血管内皮细胞损伤的机制研究 |
| 1、前言 |
| 2 材料与方法 |
| 3、研究结果 |
| 4、讨论 |
| 5、小结 |
| 参考文献 |
| 综述1 过氧化物酶体增殖物激活受体γ与心血管疾病 |
| 参考文献 |
| 综述2 非编码RNA在阻塞性睡眠呼吸暂停靶器官损害中的作用机制研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间获得的学术成果 |
| 致谢 |
（5）新型抗肿瘤TNBG衍生物的设计合成及构效关系研究（论文提纲范文）
| 英汉缩略语名词对照 |
| 摘要 |
| abstract |
| 前言 |
| 第一部分 先导化合物TNBG的结构优化与目标分子设计 |
| 1.1 系列I衍生物的设计 |
| 1.2 系列II衍生物的设计 |
| 1.3 系列III衍生物的设计 |
| 1.4 系列IV衍生物的设计 |
| 第二部分 TNBG衍生物的合成及其结构确证 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验仪器 |
| 1.2 试剂 |
| 2 合成路线的设计 |
| 2.1 系列I衍生物的合成路线 |
| 2.2 系列II衍生物的合成路线 |
| 2.3 系列III衍生物的合成路线 |
| 2.4 系列IV衍生物的合成路线 |
| 3 结果与讨论 |
| 3.1 合成路线分析 |
| 3.2 结构分析 |
| 4 合成实验 |
| 5 小结 |
| 第三部分 TNBG衍生物的体外抗增殖活性及构效关系研究 |
| 1 抗增殖活性测试 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 抗增殖活性结果及构效关系分析 |
| 2 水溶性实验 |
| 2.1 实验仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.3 实验结果 |
| 3 小结 |
| 第四部分 TNBG衍生物的体内药效学研究 |
| 1 实验材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验药物与试剂配制 |
| 1.3 实验方法 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 急性毒性试验结果 |
| 2.2 体内抗肿瘤实验结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第五部分 TNBG衍生物的初步作用机制研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验仪器 |
| 1.2 试剂 |
| 1.3 实验细胞 |
| 1.4 实验药品 |
| 1.5 油红O染液的配制 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 油红O染色 |
| 2.2 细胞周期检测 |
| 2.3 细胞凋亡检测 |
| 2.4 PPARγ细胞转录活性检测 |
| 2.5 Western Bloting实验 |
| 2.6 统计学处理 |
| 3 结果与讨论 |
| 3.1 油红O染色检测结果 |
| 3.2 细胞周期阻滞检测结果 |
| 3.3 细胞凋亡检测结果 |
| 3.4 PPARγ转录激活实验结果 |
| 3.5 衍生物16g对 PPARγ及其相关信号通路蛋白表达结果 |
| 4 小结 |
| 第六部分 TNBG衍生物的药效团模型和分子对接 |
| 1 TNBG系列衍生物的药效基团模型 |
| 1.1 药效基团模型构建的方法 |
| 1.2 构建药效基团模型的TNBG衍生物的选择 |
| 1.3 药效基团特征元素的选取 |
| 1.4 分子共同特征的药效基团模型的构建 |
| 1.5 基于分子共同特征的药效基团模型的验证 |
| 1.6 小结 |
| 2 分子对接 |
| 2.1 分子对接实验简介 |
| 2.2 衍生物16g的准备 |
| 2.3 受体靶蛋白1NYX的准备 |
| 2.4 分子对接 |
| 2.5 结果分析 |
| 3 小结 |
| 全文总结 |
| 本文创新点 |
| 思考与展望 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 1 波谱数据和高分辨质谱附图 |
| 2 晶体数据附表 |
| 文献综述 抗肿瘤 PPARγ激动剂的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读博士期间发表的论文 |
（6）贝沙罗汀通过SLC10A2/PPARγ/PTEN/mTOR信号通路抑制非小细胞肺癌的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 中英文缩略词 |
| 前言 |
| 课题设计 |
| 材料和方法 |
| 一、主要试剂 |
| 二、主要实验仪器设备 |
| 实验结果 |
| 一、slc10a2 过表达和低表达NSCLC细胞的构建 |
| 二、Slc10a2 在贝沙罗汀抑制NSCLC细胞增殖中发挥重要作用 |
| 三、Slc10a2 在贝沙罗汀抑制NSCLC细胞侵袭中发挥重要作用 |
| 四、Slc10a2 在贝沙罗汀引起NSCLC细胞凋亡中发挥重要作用 |
| 五、Slc10a2 通过调控肿瘤增殖和凋亡相关基因在贝沙罗汀抗NSCLC过程中发挥重要作用 |
| 六、Slc10a2 通过PPARγ在贝沙罗汀抑制NSCLC细胞增殖中发挥重要作 |
| 七、Slc10a2 通过PPARγ调控肿瘤增殖和凋亡相关基因在贝沙罗汀抗NSCLC过程中发挥重要作用 |
| 八、贝沙罗汀通过slc10a2/PPARγ/PTEN/ m TOR信号通路抑制NSCLC细胞的活力 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 综述 mTOR信号通路在NSCLC治疗中作用及机制 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表论文和参加科研工作情况说明 |
| 致谢 |
（7）黄芪甲苷对Aβ1-42诱发的阿尔茨海默病样表型的改善作用及其机制研究（论文提纲范文）
| 英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 第一部分 黄芪甲苷对Aβ_(1-42)诱导的小鼠AD样行为的改善作用及其机制 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 药品与试剂 |
| 1.2 实验动物 |
| 1.3 主要仪器与设备 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 小鼠脑立体定位注射 |
| 2.2 动物分组与给药 |
| 2.3 行为学测试 |
| 2.4 尼氏染色 |
| 2.5 免疫组织化学 |
| 2.6 免疫荧光 |
| 2.7 Golgi-Cox染色 |
| 2.8 透射电镜观察 |
| 2.9 RT-qPCR |
| 2.10 Western blot |
| 2.11 ELISA |
| 2.12 TUNEL染色 |
| 2.13 统计学处理 |
| 3 结果 |
| 3.1 AS-Ⅳ改善Aβ_(1-42)诱导的小鼠认知功能障碍 |
| 3.2 AS-Ⅳ减轻Aβ_(1-42)诱导的海马神经元损伤和病理改变 |
| 3.3 AS-Ⅳ减轻Aβ_(1-42)诱导的海马区突触毒性 |
| 3.4 AS-Ⅳ促进海马神经元PPARγ表达,抑制Aβ_(1-42)诱导的BDNF水平下降 |
| 3.5 AS-Ⅳ促进海马神经元PPARγ表达,抑制Aβ_(1-42)诱导的神经炎症 |
| 3.6 AS-Ⅳ抑制Aβ_(1-42)诱导的海马神经元凋亡 |
| 4 本章小结 |
| 第二部分 黄芪甲苷对Aβ_(1-42)诱导的HT-22细胞的保护作用及其机制 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 药品与试剂 |
| 1.2 细胞株 |
| 1.3 主要仪器与设备 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 主要试剂的配制 |
| 2.2 细胞培养 |
| 2.3 实验分组及药物处理 |
| 2.4 MTT法 |
| 2.5 台盼蓝染料排斥实验 |
| 2.6 LDH法 |
| 2.7 DAPI染色 |
| 2.8 流式细胞术 |
| 2.9 Annexin V-FITC/PI双染 |
| 2.10 细胞转染实验 |
| 2.11 RT-qPCR |
| 2.12 Western blot |
| 2.13 ELISA |
| 2.14 统计学处理 |
| 3 结果 |
| 3.1 AS-Ⅳ抑制Aβ_(1-42)诱导的HT-22 细胞毒性 |
| 3.2 AS-Ⅳ抑制Aβ_(1-42)诱导的HT-22 细胞BDNF水平下降 |
| 3.3 AS-Ⅳ促进HT-22 细胞PPARγ表达,抑制Aβ_(1-42)诱导的BDNF水平下降 |
| 3.4 AS-Ⅳ促进HT-22 细胞PPARγ表达,抑制Aβ_(1-42)诱导的炎症反应 |
| 3.5 AS-Ⅳ抑制Aβ_(1-42)诱导的HT-22 细胞氧化性损伤 |
| 3.6 AS-Ⅳ抑制Aβ_(1-42)诱导的HT-22 细胞凋亡 |
| 4 本章小结 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录一 个人简历 |
| 附录二 致谢 |
| 综述 PPARγ 与 BDNF 在阿尔茨海默病中相关性的研究进展 |
| 参考文献 |
（8）PHLDA1在H2O2诱导的H9c2心肌细胞损伤和心肌缺血再灌注损伤中的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 1前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 细胞系 |
| 2.1.2 实验动物和饲料 |
| 2.1.3 主要试剂 |
| 2.1.4 主要仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 细胞传代与培养 |
| 2.2.2 细胞转染 |
| 2.2.3 细胞计数 |
| 2.2.4 细胞分组 |
| 2.2.5 CCK8测定H9c2心肌细胞存活率 |
| 2.2.6 流式测定H9c2心肌细胞凋亡率 |
| 2.2.7 JC-1测定H9c2心肌细胞线粒体膜电位 |
| 2.2.8 ROS测定细胞内ROS |
| 2.2.9 RT-q PCR测定小干扰RNA敲减效率 |
| 2.2.10 大鼠尾静脉注射及离体心脏造模 |
| 2.2.11 TTC染色测定心肌梗死面积 |
| 2.2.12 HE染色测定心肌组织形态 |
| 2.2.13 Tunel测定心肌组织凋亡率 |
| 2.2.14 IHC测定Cleaved-caspase3表达量 |
| 2.2.15 WB检测蛋白量的多少 |
| 2.2.16 免疫共沉淀测定蛋白互作 |
| 2.2.17 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 H_2O_2 刺激H9c2 心肌细胞可以引起PHLDA1 表达增加 |
| 3.2 过表达PHLDA1 加重氧化应激诱导的H9c2 心肌细胞损伤 |
| 3.3 敲减PHLDA1 减轻氧化应激诱导的H9c2 心肌细胞损伤 |
| 3.4 敲减PHLDA1减轻离体心脏缺血再灌注损伤 |
| 3.5 Bax被鉴定为PHLDA1 新的结合蛋白并且在氧化应激情况下结合增强 |
| 3.6 PHLDA1 通过蛋白酶体途径调节Bax稳定性 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 本文创新性自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（9）神经珠蛋白真核表达载体的构建及其在胶质瘤细胞氧化防御中的作用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 符号说明 |
| 1 研究背景 |
| 1.1 神经胶质瘤 |
| 1.1.1 概述 |
| 1.1.2 神经胶质瘤与氧化应激 |
| 1.1.3 PPARγ与神经胶质瘤 |
| 1.2 神经珠蛋白 |
| 2 研究目的 |
| 3 材料 |
| 3.1 细胞株 |
| 3.2 病料 |
| 3.3 主要试剂 |
| 3.4 主要器材 |
| 3.5 部分溶液和培养基的配制 |
| 4 方法 |
| 4.1 荧光定量PCR |
| 4.2 免疫组织化学染色 |
| 4.3 NADPH/NADP比值测定 |
| 4.4 细胞培养 |
| 4.5 质粒的转化 |
| 4.6 质粒提取 |
| 4.7 质粒的转染 |
| 4.8 免疫印迹法 |
| 4.9 细胞活性测定 |
| 4.10 NGB的 CDS序列获取 |
| 4.11 酶切 |
| 4.12 连接 |
| 4.13 细胞活性氧测定 |
| 4.14 Hoechst33342 染色 |
| 4.15 数据处理 |
| 5 实验结果 |
| 5.1 NGB真核表达载体的构建 |
| 5.2 在神经胶质瘤中,NGB、PPARγ两者的表达量呈负相关 |
| 5.3 PPARγ的活性调控NGB的表达 |
| 5.4 NGB促进AKT的磷酸化 |
| 5.5 NGB保护胶质瘤细胞抵抗氧化应激 |
| 5.6 NGB清除PPARγ激活所产生的ROS,保护U-87 MG细胞 |
| 6 分析与讨论 |
| 7 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（10）PPARγ介导WIN对BEL-7402肝癌细胞增殖、凋亡的影响及分子机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
四、Bax在PPAR-γ激动剂诱导的肺癌细胞凋亡中的表达分析(英文)（论文参考文献）
- [1]补骨脂定抗ADR心肌损伤的作用及机制研究[D]. 许宝苹. 西北大学, 2021(12)
- [2]单酰基甘油脂肪酶对非小细胞肺癌的作用及调节研究[D]. 许潇友. 内蒙古大学, 2021(12)
- [3]新型抗肿瘤德氮吡格衍生物T-1019的药效学及作用机制研究[D]. 但彦肜. 重庆医科大学, 2021(01)
- [4]过氧化物酶体增殖物激活受体γ在间歇低氧相关血管内皮损伤中的作用及机制研究[D]. 连宁芳. 福建医科大学, 2021(02)
- [5]新型抗肿瘤TNBG衍生物的设计合成及构效关系研究[D]. 甘淋玲. 重庆医科大学, 2020(01)
- [6]贝沙罗汀通过SLC10A2/PPARγ/PTEN/mTOR信号通路抑制非小细胞肺癌的研究[D]. 艾星浩. 中国人民解放军海军军医大学, 2020(02)
- [7]黄芪甲苷对Aβ1-42诱发的阿尔茨海默病样表型的改善作用及其机制研究[D]. 王训翠. 安徽医科大学, 2020(04)
- [8]PHLDA1在H2O2诱导的H9c2心肌细胞损伤和心肌缺血再灌注损伤中的机制研究[D]. 郭雨萱. 中国医科大学, 2020(01)
- [9]神经珠蛋白真核表达载体的构建及其在胶质瘤细胞氧化防御中的作用[D]. 曹曦月. 四川农业大学, 2019(01)
- [10]PPARγ介导WIN对BEL-7402肝癌细胞增殖、凋亡的影响及分子机制研究[D]. 洪跃辉. 广州医科大学, 2014(01)