一、米非司酮对体外培养大鼠睾丸间质细胞分泌睾酮的影响（论文文献综述）
奚婷[1]（2021）在《培元补肾安胎方治疗RSA的临床研究及基于内膜衰老的药物机制研究》文中认为目的1 探究培元补肾安胎方治疗黄体功能不足（LPD）型复发性流产（RSA）的临床疗效和安全性。2 通过网络药理学和分子对接学探讨培元补肾安胎方治疗RSA的作用机制。3 探究孕酮诱导“种植窗期”子宫内膜急性衰老对胚胎着床的影响。4 以“种植窗期”子宫内膜急性衰老为切入点,探究培元补肾安胎方治疗RSA的分子机制,并对上述网络药理学预测机制进行验证。方法1 采用临床随机对照研究方法,收集脾肾两虚型LPD型RSA患者60例,随机分为两组:治疗组30例和对照组30例。治疗组予培元补肾安胎方和西药地屈孕酮片治疗,对照组予西药地屈孕酮片治疗。观察对比两组患者的一般情况、孕12周妊娠结局、治疗前后中医证候积分、血清E2、P和β-HCG、盆腔B超,及治疗前后肝肾功、血常规等安全性指标。2 采用网络药理学方法对培元补肾安胎方治疗RSA的作用机制进行分析,并运用分子对接学对结果进行初步验证,具体方法如下:通过检索TCM、TCMSP数据库得到培元补肾安胎方的化合物;通过TCMSP、Pubchem、CHEMBL得到化合物对应的靶点;利用Genecards和OMIM数据库收集RSA相关基因;利用R语言得到培元补肾安胎方治疗RSA的潜在靶点;string数据库构建PPI网络图;应用clusterProfiler包对共同靶点完成GO和KEGG富集分析;最后采用MOE软件分子对接评估培元补肾安胎方重要活性成分与关键靶点的结合活性。3 采用体内和体外实验相结合方法,体内实验:将ICR雌鼠随机分为PD0-PD9组、除衰组、对照组①、米非司酮（RU486）组、对照组②。PD0-PD9组分别于PD0-9天下午取材,除衰组、对照组①、RU486组、对照组②分别于PD5和PD9下午取材,观察对比胚胎着床数目,应用SA-β-gal染色、IHC、WB检测子宫内膜组织衰老标志物（SA-β-gal活性、P16蛋白）的表达。体外实验:不同浓度、时间点的甲羟孕酮（MPA）对2BS细胞进行干预,应用WB检测各组2BS衰老标志蛋白P53、P21、P16表达量,SA-β-gal染色检测2BS SA-β-al活性,光学显微镜观察2BS形态的改变,EdU检测2BS增殖功能,RT-PCR检测2BS SASP、PRL mRNA表达量。收集MPA诱导2BS的衰老上清液与HTR-8/SVneo共培养,应用CCK8、EdU、划痕及Transwell实验分别检测HTR-8/SVneo的增殖、迁移和侵袭功能。4采用Clark经典复发性流产模型鼠造模方法造模,将CBA/J雌鼠随机分为12组。正常组B、模型组B、西药组B、中药低剂量组B、中药中剂量组B、中药高剂量组B在PD14取材计算胚胎丢失率;正常组A、模型组A、西药组A、中药低剂量组A、中药中剂量组A、中药高剂量组A在PD5下午取材,应用HE染色观察小鼠卵巢黄体面积,Elisa检测血清P水平,SA-β-gal染色检测内膜的SA-β-gal活性,WB和RT-PCR检测子宫内膜P16、P53、P21蛋白和mRNA表达,IHC检测子宫P16蛋白定位分布及表达。结果1培元补肾安胎方对LPD型RSA临床疗效1.1保胎结局:治疗组保胎成功率93.33%高于对照组70%（p<0.05）。1.2中医证候疗效:治疗组总有效率96.67%高于对照组60.00%（p<0.01）。1.3中医证候积分:治疗后两组患者脾肾两虚型中医证候总积分均明显低于治疗前（p<0.01）。治疗组改善LPD型RSA患者脾肾两虚型证候优于对照组（p<0.05）。1.4止血时间:治疗组平均止血时间4.29±0.46天短于对照组6.48±0.54天（p<0.05）。1.5腹痛消失时间:治疗组平均腹痛消失时间5.48±0.35天短于对照组8.63±0.84天（p<0.05）。1.6血清激素水平:治疗组在孕9、11、12周血清E2值高于对照组（p<0.05）;治疗组孕6、7、9、11、12周血清P值高于对照组（p<0.05）;治疗组孕8、9、10、11、12周血清β-HCG值高于对照组（p<0.01）。1.7 B超检查:治疗组胚胎发育与孕周相符22例,小于孕周6例,胎停育2例;对照组胚胎发育与孕周相符14例,小于孕周7例,停育9例。1.8不良反应:治疗组肝功异常1例,对照组肝功异常3例、皮疹1例,两组在安全性方面无差异（p>0.05）。2网络药理学和分子对接探讨培元补肾安胎方治疗复发性流产的作用机制2.1培元补肾安胎方潜在化合物及作用靶点:潜在化合物186个,作用靶点136个。2.2 RSA疾病靶点:经过筛选去重共得到RSA靶点1658个。2.3共同靶点筛选及互作网络构建:共同靶标65个,潜在靶点分别至少与两个化合物相连接。2.4 PPI网络的构建和关键靶点的提取:PPI网络中有65个节点,其中VEGFA、IL6、EGFR、MPAK8、ESR1等是关键靶点。2.5 GO和KEGG富集:GO主要涉及转录因子活性、单加氧酶活性等。KEGG主要涉及 PI3K-Akt、MPAK、P53 等。2.6分子对接:核心化合物和潜在靶点分子对接得分均≤-5.0 kcal/mol。3孕酮诱导“种植窗期”内膜细胞衰老在胚胎着床中的作用研究3.1“种植窗期”内膜存在急性衰老的生理表现:IHC结果显示,P16蛋白在子宫内膜间质成纤维细胞、上皮细胞胞核呈阳性表达,PD0-PD5组随着怀孕天数的增加P16蛋白表达量逐渐增多,于PD5达到最大值,PD6-PD9组P16表达量逐渐减少。WB和β-gal染色也得出相同结果。3.2“种植窗期”内膜衰老有利于胚胎着床:清除衰老细胞后胚胎着床数目、SA-β-gal活性、内膜P16蛋白表达量少于对照组（p<0.01）。3.3孕酮可诱导成纤维细胞衰老:与空白组相比,各组MPA干预后2BS细胞SA-β-gal活性和衰老标志蛋白P16、P21、P53表达量增多（p<0.01）,细胞形态不规则、细胞核增大,其中MPA（8μM）作用16天,各指标变化显着（p<0.01）。EDU结果显示MPA干预后2BS增殖减慢（;p<0.01）。RT-PCR实验结果显示,MPA组CXCL-2、CXCL-1 等 SASP、PRL mRNA 表达高于空白组（p<0.01）。3.4孕酮诱导细胞衰老是胚胎着床的重要条件:RU486阻断孕酮作用后胚胎着床数目、内膜P16蛋白表达量及SA-β-gal活性小于对照组（p<0.01）。3.5孕酮诱导形成的衰老微环境有利于滋养细胞功能:Senescent CM共培养的HTR-8/SVneo细胞水平和垂直迁移、侵袭功能强于Young CM组（p<0.01）。4基于“种植窗期”内膜衰老探讨培元补肾安胎方治疗RSA的作用研究4.1胚胎丢失率:模型组胚胎丢失率高于正常组（p<0.01）,提示造模成功。中药各剂量组和西药组均低于模型组（p<0.05）。4.2血清P水平:模型组血清P水平低于正常组（p<0.05）。中药中剂量组和西药组血清P水平高于模型组（p<0.05）。4.3卵巢黄体面积:模型组黄体面积少于正常组（p<0.05）。中药中剂量组和西药组卵巢黄体面积多于模型组（p<0.05）。4.4 SA-β-gal染色:模型组内膜SA-β-gal活性少于正常组（p<0.01）。中药中、高剂量组和西药组内膜组织SA-β-gal活性多于模型组（p<0.01）。4.5内膜组织P16、P53、P21蛋白和mRNA表达:模型组P16、P53、P21蛋白和mRNA表达低于正常组（p<0.05）。中药低、中剂量组、西药组P16、P53、P21蛋白和mRNA表达高于模型组（p<0.05）。4.6免疫组化:P16蛋白在内膜成纤维细胞、上皮细胞的胞核中呈阳性表达,模型组内膜P16蛋白表达量低于正常组（p<0.01）,中药低、中剂量组、西药组内膜P16蛋白表达量高于模型组（p<0.01）。结论1培元补肾安胎方能明显改善脾肾两虚证候,减轻阴道流血、腹痛症状,提高血清E2、P、β-HCG水平,促进胚胎发育,提高LPD型RSA的保胎成功率。2通过网络药理学初步明确培元补肾安胎方治疗RSA的分子机制可能是通过调控P53信号通路,调节细胞衰老,从而治疗RSA。3“种植窗期”内膜急性衰老是胚胎着床的必要条件之一,其中足量足时间的孕酮是诱导内膜衰老的重要因素。4 P不足、“种植窗期”内膜急性衰老不足可能是LPD型RSA发病机制。培元补肾安胎方可能通过提高血清P和卵巢黄体面积,增加“种植窗期”内膜P53、P21、P16表达,促进“种植窗期”内膜衰老从而发挥保胎作用。
邹鹏[2]（2019）在《慢性心理应激致男（雄）性生殖损伤的流行病学调查和相关机制研究》文中研究指明研究背景:二十世纪90年代以来发表的一系列回顾性分析显示,全球许多国家和地区的男性精液质量在过去数十年间呈现显着下降趋势。因此,探明人类精液质量下降的危险因素有助于提出和制定相关预防和治疗措施,对维护男性生殖健康具有重要的意义。精液质量受到遗传、环境、社会-心理-行为等多种因素的共同影响。随着中国经济社会的发展、城镇化进程的推进以及生活方式的转变,人们生活节奏日益紧凑,心理压力增加呈普遍趋势,心理疾病的发病率也与日俱增。大量流行病学证据表明,心理应激（如抑郁症、创伤后应激障碍）与男性精液质量呈负相关。动物实验也证明心理应激可诱导雄性大（小）鼠血清睾酮水平下降和生精细胞凋亡。然而,以上研究还存在两个方面的不足:大部分流行病学研究招募的志愿者为不孕不育或罹患严重心理疾病（如抑郁症）的人群,其心理和生殖健康状况与普通人群有较大差异,因此这类研究可能存在志愿者选择偏倚;心理应激动物模型多为单一因素刺激,不能真实反映人们在社会生活中面临的多样的、长期的弱刺激以及由此导致的慢性心理应激状态。糖皮质激素水平的升高是机体对外界刺激的应激反应,可通过升高血糖水平使机体适应外界环境的变化,因此糖皮质激素也被称为“应激激素”。然而,慢性心理应激导致糖皮质激素水平的持续升高却被证明有明确的生殖毒性。糖皮质激素可通过作用于睾丸间质细胞上的糖皮质激素受体（Glucocorticoid receptor,GR）诱导抑制睾酮的合成。GR不仅仅存在于睾丸间质细胞,也表达在处于早期阶段的生精细胞（精原细胞和精母细胞）。那么,慢性心理应激所诱导的糖皮质激素升高是否通过GR介导早期生精细胞的损伤尚不明确。因此,本课题主要分为三部分:第一部分为慢性心理应激致男（雄）性生殖损伤的人群流行病学调查。分别在两个重庆市普通人群中研究慢性心理应激与精液质量参数的关联。第二部分为动物模型的研究。在成功构建的大鼠不可预知慢性温和应激（Unpredictable chronic mild stress,uCMS）模型的基础上研究慢性心理应激对大鼠睾丸的损伤效应,并探讨GR在介导损伤中的作用。第三部分为细胞模型的效应和机制研究。以皮质酮（corticosterone,CORT）为受试物,以小鼠精原细胞系（GC-1）为研究对象,探究糖皮质激素诱导的亮氨酸拉链蛋白（Glucocorticoid-induced leucine zipper,GILZ）在CORT诱导GC-1小鼠精原细胞周期阻滞中的作用,并探讨相关的分子调控机制。研究内容:1.大学生抑郁症状与精液参数的关联分析:MARHCS研究本课题组于20132015年建立了“重庆市大学生男性生殖健康（Male Reproductive Health in Chongqing College Student,MARHCS）”队列人群,旨在研究社会-心理-行为和环境有害因素对男性生殖健康的影响。本研究选择2013年MARHCS队列研究中完成心理问卷量表的587名志愿者作为研究对象。采用汉化版的抑郁自评量表（Self-rated Depression Scale,SDS）检测志愿者的抑郁症状。同时记录志愿者的年龄、种族、禁欲时间、体育运动量、吸烟和饮酒等协变量信息。根据《WHO人类精液检验与处理实验手册》（第五版）指导原则收集研究对象精液样本,检测精液体积、精子活力、精子密度和精子总数。采集研究对象的外周静脉血,并采用核放射免疫法检测血清性激素水平。采用多元线性回归的方法分析大学生抑郁状态与精液参数的关联,并进一步分析了抑郁与体育运动对精子密度和精子总数影响的交互作用。2.工人工作压力与精液参数的关联分析:重庆市两区县人群研究本研究选择20142015年在重庆市两区县（璧山县和丰都县）招募的384名社区男性职工作为研究对象。采用简化的工作压力问卷（Job Content Questionnaire,JCQ-22）评测研究对象工作压力的情况。JCQ-22含有22个条目,包括3个模块,分别为工作自主（Decision latitude,含9个条目）、工作需求（Psychological job demands,含5个条目）和社会支持（Social support,含8个条目）。其它调查信息包括年龄、禁欲时间、体育运动量、吸烟、饮酒等协变量信息。根据《WHO人类精液检验与处理实验手册》（第五版）指导原则,收集研究对象精液样本,检测精液体积、精子活力、精子密度和精子总数。采用多元logistics回归的方法分析工作压力与精液参数的关联,并探讨社会支持对该关联的调节作用（Moderating effect）。3.糖皮质激素受体在慢性心理应激诱导大鼠生精损伤中的作用研究采用大鼠建立为期42天的uCMS动物模型。uCMS造模结束后,利用旷场实验（Open-field test,OFT）、强迫游泳实验（Forced swimming test,FST）及糖水偏好实验（Sucrose preference test,SPT）三个经典的行为学实验评判动物模型是否构建成功。uCMS造模的同时用糖皮质受体（Glucocorticoid receptor,GR）拮抗剂RU486（1mg/kg/day）处理大鼠,以研究GR在慢性心理应激诱导生精损伤中的作用。实验共分为4组:对照组、RU486组、uCMS组和uCMS+RU486干预组。处理结束后,采集大鼠附睾、睾丸及血液样本,检测各组大鼠血清睾酮和皮质酮水平、附睾精子浓度、睾丸病理结构变化及睾丸GR表达水平,以评价慢性心理应激的睾丸毒性以及GR在介导损伤中的作用。此外,计数各组大鼠睾丸曲细精管中支持细胞、精原细胞、精母细胞和精子细胞的数量与比例,采用TUNEL法和流式细胞仪分别检测睾丸细胞凋亡水和生精细胞DNA含量,采用Western blot检测细胞凋亡和细胞周期阻滞相关蛋白的表达,以评价慢性应激对生精细胞凋亡和细胞周期进展的影响,明确慢性心理应激诱导生精上皮损伤的毒性特征。4.GILZ在糖皮质激素诱导的GC-1小鼠精原细胞周期进展阻滞中的作用机制研究采用小鼠精原细胞株（GC-1）,给予内源性糖皮质激素皮质酮（Corticosterone,CORT）处理,建立体外染毒细胞模型。采用CCK8、Annexin V/FITC染色及流式细胞仪分析等方法检测细胞增殖、凋亡及周期进展的改变,确定CORT的细胞毒性效应;同时采用GR拮抗剂RU486及GILZ基因的shRNA处理细胞,明确GR及其下游基因GILZ在CORT诱导的生精细胞增殖抑制和细胞周期阻滞中的作用;采用免疫共沉淀联合蛋白质谱的方法,检测与GILZ蛋白相结合的蛋白谱,明确GRP94为GILZ下游靶蛋白;采用BEP-NVP800抑制GRP94功能,以明确GRP94在CORT诱导的细胞G0/G1期阻滞中的作用;此外,检测GRP94的mRNA及蛋白水平变化,并采用蛋白酶体抑制剂MG132和蛋白合成抑制剂放线菌酮处理细胞,观察CORT对GRP94蛋白合成、降解以及泛素化水平的影响;进一步联合GILZ的shRNA处理细胞,确定GILZ在CORT诱导GRP94蛋白泛素化降解中的作用。研究结果:1.大学生抑郁症状与精液参数的关联分析:MARHCS研究根据SDS量表计分规则及研究对象SDS得分,63名大学生被评定为抑郁状态（SDS评分≥53）,占总体的10.7%;524名大学生被评定为正常,占总体的89.3%。单因素分析显示:抑郁状态大学生的精子密度（66.9 vs.72.6×106/ml,P=0.043）和精子总数（241.6vs.257.0×106,P=0.024）显着低于正常组大学生。血清6项性激素水平在抑郁状态和正常大学生之间无显着差异（P>0.05）。校正混杂因素后,多元线性回归分析结果显示:与正常大学生比较,抑郁状态的大学生精子密度和精子总数分别下降18.90%（95%[CI]1.14%;33.47%,P=0.038）和21.84%（95%[CI]3.39%;36.90%,P=0.022）。进一步研究发现,抑郁和体育运动对精子密度的影响存在交互作用（P=0.033）,而对精子总数的影响没有交互作用（P=0.200）。上述结果证实:抑郁与精液质量负相关,且抑郁与体育运动对精子密度的影响存在交互作用。2.工人工作压力与精液参数的关联分析:重庆市两区县人群研究根据JCQ-22量表的计分规则,判定为有工作压力的为88人,占总体的22.9%;判定为无工作压力的为296人,占总体的77.1%。单因素分析结果显示:有工作压力的工人精子密度（36.2±43.0 vs.42.2±47.8[106/ml],P=0.03）和精子总数（133.4±192.3 vs.154.2±205.2[106],P=0.03）显着低于无工作压力的工人。校正混杂因素后,logistics回归分析结果显示,有工作压力的工人精子密度和精子总数不合格的的概率分别是无工作压力工人的2.14倍（95%CI 1.24-3.68,P=0.006）和1.95倍（95%CI 1.13-3.36,P=0.02）。进一步分析发现社会支持可以调节工作压力对精液质量的影响:在社会支持较低的工人中,工作压力较大的工人精子密度和精子总数不合格的概率分别是无工作压力工人的3.46倍（95%CI 1.62-7.36,P=0.001）和2.18倍（95%CI 1.04-4.59,P=0.04）;在社会支持较高的工人中,我们并未发现工作压力与精液参数之间有统计学上的关联（P>0.05）。上述结果证实:工作压力与精液质量负相关,且高水平的社会支持可以缓解工作压力对精液质量的负面影响。3.糖皮质激素受体在慢性心理应激诱导大鼠生精损伤中的作用研究OFT、FST及SPT结果显示,uCMS组大鼠呈现明显的抑郁样行为,证实uCMS模型建立成功。我们发现uCMS组大鼠的附睾精子密度显着减少,睾丸组织生精上皮发生明显病理学改变,提示慢性心理应激导致大鼠生精损伤。进一步分析发现uCMS组大鼠生精上皮中的精子细胞（Spermatids,SPT）数目显着减少、精子细胞凋亡增加,并且精原细胞（Spermatogonia,SP）发生明显的G0/G1期细胞周期阻滞,同时观察到睾丸组织中细胞凋亡和周期进展相关蛋白表达的异常。GR拮抗剂RU486处理可显着改善uCMS组大鼠睾丸病理形态学的异常,提高精子细胞数量并拮抗精子细胞凋亡,降低凋亡相关蛋白的表达。同时也观察到RU486处理显着改善慢性应激所致的精原细胞G0/G1期细胞周期阻滞,提高周期进展相关蛋白的表达。此外,研究发现uCMS组大鼠血清皮质酮水平及睾丸组织GR蛋白表达水平明显升高,而RU486干预处理可显着降低慢性应激诱导的睾丸组织GR蛋白的高表达。以上结果提示,慢性心理应激可提高大鼠糖皮质激素水平,通过激活睾丸组织细胞的GR通路诱导睾丸精子细胞凋亡和精原细胞G0/G1期周期阻滞,最终导致睾丸生精上皮损伤和附睾精子数量的减少。4.GILZ在糖皮质激素诱导的GC-1小鼠精原细胞周期进展阻滞中的作用机制研究随着CORT染毒剂量增加,GC-1小鼠精原细胞活力逐渐降低。在0.5、5.0、50μM剂量条件下,细胞增殖抑制呈剂量依赖性升高,G0/G1期细胞比例显着增加并伴随着细胞周期G1期向S进展相关蛋白CDK4、Cyclin D1和p-Rb表达的显着降低。GR拮抗剂RU486处理可明显抑制CORT诱导的细胞活力降低、G0/G1期进展阻滞以及相关蛋白表达的降低,提示GR参与介导CORT所致精原细胞损伤。同时,CORT可诱导GR蛋白表达升高及核转位,GILZ基因的mRNA和蛋白表达也呈现相似的改变趋势,而RU486处理可降低CORT诱导的GR蛋白表达和核转位,并降低其诱导的GILZ表达,进一步干扰GILZ的表达后观察到CORT诱导的细胞周期阻滞也得到缓解,这些结果提示受GR调控的GILZ表达异常参与介导了CORT所致的精原细胞周期进展阻滞。此外,通过蛋白质谱分析筛选出CORT处理后GILZ的相互作用蛋白,葡萄糖调节蛋白94（Glucose-regulated protein 94,GRP94）,并检测证实GILZ与GRP94蛋白的共定位和结合。功能分析显示,抑制GRP94蛋白可诱导细胞G0/G1期进展阻滞,干扰细胞周期进展调控通路AKT1-FOXO1-p15相关蛋白的表达。研究同时发现CORT可降低GRP94蛋白水平,并提高GRP94蛋白泛素化水平并诱导其降解,且干扰GILZ表达可显着减缓GRP94的降解。上述结果提示,CORT通过诱导GR的核转位及GILZ的转录表达,促进GILZ与GRP94蛋白的结合,并介导GRP94蛋白的泛素化降解,最后通过AKT1-FOXO1-p15通路参与调控精原细胞的G0/G1期阻滞。研究结论:本研究同时在两个重庆市的普通人群证明慢性心理应激与男性精子密度和精子总数负相关,并发现心理应激和社会-行为因素（社会支持和体育运动）对精液参数的影响存在交互作用。动物实验证实GR介导了慢性心理应激诱导的大鼠精子细胞凋亡和精原细胞G0/G1期细胞周期阻滞。体外实验进一步揭示了糖皮质激素致生精细胞损伤的分子机制:糖皮质激素诱导的GR核转位促进了GILZ的转录表达,GILZ通过诱导GRP94蛋白泛素化降解参与介导精原细胞的G0/G1期阻滞。本研究发现了慢性心理应激生殖毒性的损伤效应及其特征,明确了糖皮质激素受体在慢性心理应激致雄性生殖损伤中的作用及相关机制,揭示了GILZ基因介导糖皮质激素诱导的生精细胞周期阻滞的分子调控机制,有可能为慢性心理应激诱导的男（雄）性生殖损伤提供新的潜在的药物干预靶点及理论支持。
肖龙菲[3]（2019）在《褪黑素在绵羊卵巢中的生成及其调控机制》文中认为褪黑素是一种主要由松果体合成的激素。作为一种强效的抗氧化物,褪黑素能清除体内自由基从而保护机体免受氧化损伤。同时,褪黑素除通过调控下丘脑垂体影响哺乳动物生殖生理外,还直接参与对卵巢功能的调节。目前已在哺乳动物的生殖系统中检测到褪黑素两种膜受体MT1和MT2的表达,并且发现卵巢自身能够合成褪黑素,这表明褪黑素参与对卵巢功能的调节。然而卵巢中褪黑素的合成及膜受体表达是否受其他因素调节还尚不清楚。本研究以绵羊卵巢为研究对象,首先通过qPCR、western blotting以及免疫组织化学等实验技术,分析褪黑素合成酶（AANAT和HIOMT）及其膜受体（MT1和MT2）在绵羊不同发情时期的周期黄体以及不同大小卵泡内卵丘复合体中的表达及分布特征。其次,通过体外培养绵羊黄体细胞及卵丘复合体,分析孕酮（P4）、雌二醇（E2）及其受体拮抗剂对黄体细胞及卵丘复合体中褪黑素相关蛋白表达的影响。最后通过Lable-free非定量蛋白质组学方法分析褪黑素对绵羊体外培养颗粒细胞中蛋白质组水平的影响,进一步阐明褪黑素调控绵羊卵巢功能影响的分子机制。本研究取得的主要结果如下:1.本实验通过qPCR、western blotting、免疫组织化学法和ELISA技术,分析了绵羊不同发情时期的周期黄体中MT1、MT2、AANAT和HIOMT的定量和定位表达,以及黄体中褪黑素水平的变化。结果显示,MT1、MT2、AANAT和HIOMT在中期黄体（排卵后6-12天）中表达最高,而在早期（排卵后1-5天）和晚期黄体（排卵后13-18天）中表达较低。同时,中期黄体中褪黑素水平显着高于早期和晚期黄体。上述结果不仅表明绵羊黄体能够合成褪黑素,而且表明黄体也是褪黑素的作用靶点之一,提示褪黑素在黄体的发育和维持中发挥重要作用。2.体外培养处于发情周期中期的绵羊黄体细胞,并用不同浓度的P4及孕酮受体（PGR）拮抗剂RU486处理黄体细胞。通过qPCR和western blotting检测发现,10-9和10-8M P4能够促进黄体细胞中MT1和MT2的表达。但与10-8M P4处理组相比,10-7M P4则抑制黄体细胞中MT1和MT2的表达。同时RU486也显着抑制黄体细胞中MT1和MT2的表达,并且较高水平的P4(10-7M)显着抑制了黄体细胞中PGR的表达。表明P4通过其核受体途径促进了黄体细胞中MT1和MT2的表达。但较高水平的P4通过抑制PGR的表达,从而阻断了P4对MT1和MT2表达的促进作用。3.本实验通过qPCR、western blotting、免疫组织化学和ELISA技术,分析了绵羊不同大小卵泡内的卵丘复合体中MT1、MT2、AANAT和HIOMT的表达以及不同大小卵泡液中褪黑素水平的变化。结果显示,MT1、MT2、AANAT和HIOMT在小卵泡内卵丘复合体中的表达水平显着高于大卵泡内的卵丘复合体。然而,大卵泡液中褪黑素水平显着高于小卵泡液。这些结果不仅表明褪黑素通过自分泌或旁分泌途径参与卵泡和卵母细胞的发育调控,而且提示绵羊卵丘复合体自身能够合成并分泌褪黑素,并且大卵泡内卵丘复合体自身分泌的褪黑素可能不是卵泡液中褪黑素的主要来源。4.体外培养绵羊卵丘复合体并用E2及雌激素受体（ER）抑制剂ICI182780进行处理。通过qPCR和western blotting检测发现,E2下调卵丘复合体中MT1、MT2、AANAT和HIOMT的表达以及褪黑素的分泌。而ICI182780则缓解了E2对卵丘复合体中褪黑素相关蛋白表达的抑制作用,并一定程度的恢复了卵丘复合体中褪黑素水平。上述结果表明,E2通过雌激素受体途径参与调节卵丘复合体中褪黑素的合成及其膜受体的表达。5.通过Lable-free非标记定量蛋白质组学技术分析鉴定10-9M褪黑素处理后,绵羊卵巢颗粒细胞中的差异蛋白。经过生物学分析共发现64个差异蛋白,其中褪黑素处理后的颗粒细胞中18个蛋白表达上调,6个表达下调。另外,共有34个蛋白在褪黑素处理组中不表达,而在对照组中表达;而6个蛋白则在褪黑素处理组中表达而在对照组中不表达。通过western blotting验证5个差异蛋白SOD1、EGFR、CAV1、FADD及COLIA1的表达。结果显示所选蛋白的表达变化趋势与Lable-free鉴定结果基本一致,表明Lable-free所得的结果可靠。结合生物信息学分析表明褪黑素主要通过抗氧化、抗凋亡与炎症反应等多种途径参与了对绵羊卵巢颗粒细胞功能的调节。综上所述,绵羊不同时期周期黄体以及不同大小卵泡内卵丘复合体中均有褪黑素相关蛋白的表达和褪黑素的合成,并且褪黑素相关蛋白的表达和褪黑素的合成受E2及P4的调控;此外,褪黑素可通过抗氧化、抗凋亡与炎症反应等多种途径参与对绵羊卵巢颗粒细胞功能的调节。该结果初步为进一步研究绵羊生殖机理的调控机制提供了基础资料。
高飞霞[4]（2017）在《菟丝子总黄酮调控miRNA-126-3p促进滋养细胞侵袭功能机制研究》文中研究表明自然流产（SA）是指怀孕至20周以前发生的流产,是妇产科常见的生殖障碍疾病。近年来随着自然流产的发生率增加,学术界对自然流产机制研究仍然是一个热门的话题,但自然流产的发生机制却尚未明确,很多已有研究提出滋养细胞侵袭功能不足易引发自然流产,滋养细胞维持正常的迁移和侵袭功能是保证正常妊娠的重要因素。因此滋养细胞则成了研究自然流产病理机制常用的工具,而划痕试验和Transwell试验分别作为检测滋养细胞迁移和侵袭功能常用的实验室检测方法。miRNA存在人体内的微小RNA,在多种疾病中存在着不同的作用。经过对比自然流产患者和正常早孕者的绒毛组织发现miRNA-126-3p的表达差异,提示miRNA-126-3p可能与自然流产的发生有关系。而菟丝子总黄酮作为补肾安胎的代表药物,其对滋养细胞侵袭功能的调控作用尚未见报导,因此深入研究菟丝子总黄酮的对滋养细胞影响的药效机制具有重要意义,菟丝子总黄酮是否会通过调控miRNA-126-3p来促进滋养细胞的侵袭功能是本课题即将探讨的问题。目的:研究自然流产患者绒毛组织与正常早孕者绒毛组织内miRNA-126-3p表达差异,探讨miRNA-126-3p对滋养细胞迁移和侵袭功能的影响;构建自然流产状态滋养细胞模型,探讨菟丝子总黄酮对正常滋养细胞和自然流产状态细胞模型滋养细胞的调控机制研究。方法:1.miRNA-126-3p的验证及其功能研究:通过RT-qPCR方法验证自然流产患者和正常早孕者绒毛组织中miRNA-126-3p的表达差异,利用Lipofectamine（?）2000作为载体将miRNA-126-3p过表达与抑制型序列转染至滋养细胞,划痕试验和Transwell试验观察滋养细胞的迁移和侵袭能力,并用RT-qPCR方法检测滋养细胞内miRNA-126-3p的表达变化。2.菟丝子总黄酮对正常滋养细胞侵袭和迁移功能的影响:采用UV和HPLC方法测定菟丝子总黄酮的含量,用MTT法检测菟丝子总黄酮对滋养细胞的毒性。划痕试验和Transwell试验检测菟丝子总黄酮对正常滋养细胞侵袭和迁移功能影响。3.菟丝子总黄酮对米非司酮所致EVT细胞自然流产状态细胞模型的迁移和侵袭功能影响:采用检测不同浓度米非司酮对滋养细胞的迁移功能影响,再进一步用米非司酮处理已转染miRNA-126-3p的滋养细胞,构建自然流产状态滋养细胞模型,同时用划痕试验检测其迁移功能的变化,RT-qPCR方法检测该细胞内miRNA-126-3p的变化。用菟丝子总黄酮处理自然流产状态细胞模型,划痕试验和Transwell试验检测不同组的迁移和侵袭功能,以及用RT-qPCR方法检测细胞内miRNA-126-3p的表达变化。4.菟丝子总黄酮对米非司酮所致EVT细胞内自然流产状态细胞模型的迁移和侵袭功能的内在机制研究:采用miRanda,miRDB,TargetScan,CLIP四个数据库预测miRNA-126-3p的靶基因,采用GO富集分析和KEGG通路分析预测miRNA-126-3p的靶基因、可能的细胞功能和参与的信号通路,并用RT-qPCR和WB的验证可能作用的靶基因变化。最后用双荧光素酶报告基因和绒毛组织验证确定miRNA-126-3p与靶基因的调控关系。5.菟丝子总黄酮通过影响滋养细胞内MMP9调控其迁移和侵袭功能:通过用RT-qPCR检测经菟丝子总黄酮处理后滋养细胞EVT内MMP9 mRNA表达,采用western blotting方法检测菟丝子总黄酮不同浓度与不同给药时间对EVT细胞内MMP9与相关信号通路的表达调控。结果:一、miRNA-126-3p的验证及其功能研究1.自然流产患者绒毛组织中miRNA-126-3p的表达比正常早孕者绒毛组织上调,两组间有统计学差异（p<0.05）。2.成功转染miRNA-126-3p至滋养细胞,构建miRNA-126-3p过表达和干扰模型,与正常滋养细胞相比,miRNA-126-3p mimic组的miRNA-126-3p表达明显上调（p<0.001）,miRNA-126-3p inhibitor 组的 miRNA-126-3p 表达明显下调（p<0.01）。3.过表达miRNA-126-3p后,滋养细胞的迁移和侵袭能力降低,侵袭细胞数目明显降低（p<0.05）;而干扰miRNA-126-3p后,滋养细胞的迁移和侵袭能力提高,侵袭的细胞数目明显增加（p<0.01）。二、菟丝子总黄酮对正常滋养细胞侵袭和迁移功能的影响1.UV法测得菟丝子总黄酮的总黄酮含量达90.876%,再用HPLC方法检测得菟丝子总黄酮内单体含量包括含芦丁77.75%,槲皮素占0.41%,及其极少量的异鼠李素0.03%,其总黄铜的含量总达78.19%。2.不同浓度的菟丝子总黄酮对滋养细胞无明显毒性。3.1 μ g/ml和5 μ g/ml的菟丝子总黄酮能明显促进滋养细胞的迁移功能,呈时间和剂量依赖性;1 μg/ml和5μg/ml的菟丝子总黄酮能提高滋养细胞的侵袭能力,细胞侵袭数目与DMSO组相比有统计学差异（p<0.05）。三、菟丝子总黄酮对米非司酮所致EVT细胞自然流产状态细胞模型的迁移和侵袭功能影响1.30 μ mol/L和60 μmol/L的米非司酮明显抑制滋养细胞的迁移和侵袭能力,同时上调滋养细胞内源性miRNA-126-3p的表达。2.30 μmol/L米非司酮干预转染miRNA-126-3p后的滋养细胞,成功对米非司酮干预miRNA-126-3p mimic-MIF组构建自然流产状态下滋养细胞模型,该模型组对比米非司酮干预miRNA-126-3p inhibitor-MIF组迁移能力降低,且miRNA-126-3p表达更高。3.以 miRNA-126-3p mimic negative-DMS0 组为对照,miRNA-126-3pmimic-DMSO迁移能力降低,用菟丝子总黄酮干预后,miRNA-126-3p mimic negative-TSZ组较其DMSO组细胞迁移能力增加,同样地miRNA-126-3p mimic-TSZ组较其DMSO组细胞迁移能力增加,说明用菟丝子总黄酮干预后,对比DMSO,能提高正常或过表达miRNA-126-3p滋养细胞的迁移能力。4.以 miRNA-126-3p inhibitor negative-DMSO 组为对照组,miRNA-126-3p inhibitor-DMSO迁移能力增加,用菟丝子总黄酮干预后,miRNA-126-3p inhibitor negative-TSZ组较其DMSO组细胞迁移能力增加,同样地miRNA-126-3p inhibitor-TSZ组较其DMSO组细胞迁移能力也增加,而且miRNA-126-3p inhibitor-TSZ组的细胞迁移能力高于miRNA-126-3p inhibitor negative-TSZ组,说明在菟丝子总黄酮作用下,对比DMSO,能明显增加干扰miRNA-126-3p后的滋养细胞的迁移能力。5.miRNA-126-3p inhibitor-TSZ 组的细胞迁移能力高于 miRNA-126-3p mimic-TSZ组,从而说明了菟丝子总黄酮能提高滋养细胞的迁移能力,而且也能提高自然流产状态的滋养细胞的迁移功能,如果干扰滋养细胞内miRNA-126-3p的表达,使其下调,此时菟丝子总黄酮提高滋养细胞迁移能力作用更明显。6.菟丝子总黄酮促进米非司酮诱导EVT细胞内自然流产状态细胞模型的侵袭功能。miRNA-126-3pmimic-TSZ组较其DMSO组细胞侵袭能力增加,对比miRNA-126-3p mimic negative-DMSO 组有统计学差异（p<0.05）。miRNA-126-3p inhibitor-TSZ组也较其DMSO组细胞侵袭能力增加,对比miRNA-126-3p inhibitor negative-DMSO组有统计学差异（p<0.05）。而miRNA-126-3p inhibitor-TSZ组的细胞侵袭能力高于 miRNA-126-3p mimic-TSZ 组（p<0.001）。7.以 miRNA-126-3p mimic negative-DMSO 组为对照组,miRNA-126-3p mimic-DMSO组和-TSZ组的miRNA-126-3p表达上调,有统计学差异（p<0.05）;以miRNA-126-3p inhibitor negative-DMSO 组为对照组,miRNA-126-3p inhibitor-TSZ组的miRNA-126-3p的表达明显下调,对比有统计学差异（p<0.05）。造模组的miRNA-126-3p mimic-TSZ 组和 miRNA-126-3p inhibitor-TSZ 组两两比较,miRNA-126-3p inhibitor-TSZ 组的 miRNA-126-3p 水平明显降低（p=0.05）。四、菟丝子总黄酮对米非司酮所致EVT细胞内自然流产状态细胞模型的迁移和侵袭功能的内在机制研究1.通过数据库筛选出miRNA-126-3p的靶基因,并从中挑选出关于细胞迁移和侵袭功能的靶基因有10个,主要包括VEGFA,SDC2,GOLPH3,SLC7A5,PEX5,ITGA6,NAV1,SMURF2,PLXNB2,PPP3CB,关于细胞血管生成功能的有CRK,PIK3R2靶基因。2.通过RT-qPCR方法检测SLC7A5,NAV1,PLXNB2,PEX5四个靶基因的mRNA的水平在miRNA-126-3p mimic组表达下调,而miRNA-126-3p inhibitor组表达上调。3.转染miRNA-126-3p至滋养细胞作用48h后,靶基因PLXNB2,对比miRNA-126-3p mimic negative组,mimic组的PLXNB2蛋白水平明显下调,两组间有统计学差异（p<0.01）;以miRNA-126-3p mimic为对照组,inhibitor组和菟丝子总黄酮组的PLXNB2蛋白水平明显提高,具有统计学差异（p<0.01）。4.转染miRNA-126-3p至滋养细胞作用48h后,靶基因PEX5,对比miRNA-126-3p mimic negative组,mimic组的PEX5蛋白水平明显下降,两组间有统计学差异（p<0.05）;以miRNA-126-3p mimic为对照组,inhibitor组PEX5蛋白水平明显提高,具有统计学差异（p<0.01）,但菟丝子总黄酮组的PEX5蛋白水平未见明显升高。5.双荧光素酶报告基因结果提示,相对比野生型PLXNB2-WT+Non-target Control组,PLXNB2-WT+mimic组的荧光素蛋白的表达水平降低,两组具有显着性统计学差异（p<0.001）;而突变型 PLXNB2-Mut+Non-target Control 组相对于PLXNB2-WT+Non-target Control组荧光素蛋白表达水平无明显差异,PLXNB2-Mut+mimic 组的荧光素蛋白的表达水平与 PLXNB2-Mut+Non-target Control组相比有少许降低,差异不显着。PLXNB2是miRNA-126-3p的靶基因。6.WB试验结果证明自然流产组织中PLXNB2蛋白水平相比正常妊娠组织水平表达下降,具有统计学差异（p<0.001）。五、菟丝子总黄酮通过影响滋养细胞内MMP9调控其迁移和侵袭功能1.经菟丝子总黄酮干预后,0.5 μ g/ml、1 μ g/ml和5 μ g/ml的菟丝子总黄酮组中MMP9的基因水平均显着升高（p<0.01）,1 μ g/ml和5μg/ml的菟丝子总黄酮组MMP9的蛋白水平显着上调（p<0.01）。1 μ g/ml的菟丝子总黄酮治疗滋养细胞内的MMP9蛋白和mRNA水平表达升高（p<0.01）,干预8h和12h后,MMP9蛋白和mRNA表达水平差异有统计学差异。2.对MAPK通路的影响,1 μ g/ml和5 μ g/ml的菟丝子总黄酮组对比与DMSO组,p-ERK升高最明显（p<0.01）,而ERK总蛋白水平不受影响;在不同的作用时间,1 μ g/ml的菟丝子总黄酮作用于滋养细胞后,ERK的磷酸化水平在1h,2h和8h时呈现显着性改变。1 μ g/ml和5 μ g/ml菟丝子总黄酮能促进滋养细胞内p38的磷酸化水平升高（p<0.01）,具有统计学差异,而p38总蛋白水平则无明显变化。3.对AKT通路的影响,1 μ g/ml和5 μ g/ml的菟丝子总黄酮作用于滋养细胞时,AKT（308）的磷酸化水平上调（p<0.05）,其总蛋白AKT水平不影响;5 μ g/ml的菟丝子总黄酮能上调p-AKT（473）的蛋白表达水平（p<0.05）,而不影响其总蛋白的变化;1 μg/ml的菟丝子总黄酮不同的作用时间,p-AKT（308）和p-AKT（473）在1h时升高具有统计学差异（p<0.05）。4.对Notch通路的影响,与对照组相比,0.5 μ g/ml,1 μ g/ml和5μg/ml菟丝子总黄酮均能够显着提高滋养细胞的Notch1和Notch2的蛋白水平,差异具有统计学意义（p<0.01）;Notch2的表达在1h和8h变化具有统计学差异,其中8h时Notch2表达显着上调（p<0.01）。结论:1.miRNA-126-3p在自然流产绒毛组织中表达上调,在滋养细胞内过表达miRNA-126-3p能抑制细胞的迁移和侵袭能力,干扰miRNA-126-3p后其迁移和侵袭能力增加。2.用米非司酮诱导已转染miRNA-126-3pmimic的滋养细胞,构建模拟自然流产状态滋养细胞模型。证实30 μmol/L的米非司酮造模后能抑制滋养细胞迁移能力,同时上调滋养细胞内miRNA-126-3p的表达。此模型的迁移和侵袭能力明显降低,miRNA-126-3p表达明显上调。3.深入研究发现菟丝子总黄酮能明显增加滋养细胞的迁移和侵袭能力,且能通过激活MAPK/AKT/Notch通路上调MMP9的表达。4.菟丝子总黄酮能下调自然流产状态滋养细胞模型内miRNA-126-3p的表达,同时提高其迁移和侵袭能力,说明菟丝子总黄酮能通过调控miRNA-126-3p来促进滋养细胞的迁移和侵袭能力。5.菟丝子总黄酮通过调控miRNA-126-3p下游的PLXNB2蛋白进一步影响自然流产状态细胞模型滋养细胞的迁移和侵袭功能。体现其安胎,防治流产的细胞药理作用。
董莲花,冉茂良,李智,陈斌[5]（2016）在《TGF-β超家族信号通路及其调控睾丸发育和精子生成的研究进展》文中研究表明转化生长因子β（transforming growth factorβ,TGF-β）超家族是一类结构、功能相关的多肽,能够调节动物细胞的增殖、分化、凋亡,影响动物的胚胎发育、器官形成以及细胞外基质合成及稳态。此外,TGF-β超家族对胚胎原始生殖细胞形成和迁移及定植、胚胎性别分化和睾丸发育、生殖细胞增殖和静止及分化、动物出生后睾丸正常功能维持、生精干细胞自我维持更新、精子生成等过程发挥着重要的生理调控作用。本文综述了TGF-β超家族在动物睾丸发育和精子生成过程中的信号传递及调节机制,以期为后续的相关研究提供参考。
秦姣[6]（2015）在《卡麦角林对黄毛鼠的不育效果及其作用机理》文中进行了进一步梳理害鼠的不育控制一方面降低了种群生育率,另一方面可影响正常个体的社会行为,引起种群内等级关系和社群结构的变化,进而干扰了种群繁殖策略。研究以不同卡麦角林剂量在处理后不同时间内雌雄黄毛鼠生殖器官、激素含量以及标志性酶活力等指标,阐明了卡麦角林对华南农区优势鼠种黄毛鼠（Rattus losea）的不育效果及可能的作用机制；并通过遭遇实验比较了雌雄黄毛鼠在卡麦角林处理前后的行为差异,从行为学及可能的激素调节机制方面探讨卡麦角林的不育作用机制,为野外应用卡麦角林有效控制黄毛鼠提供基础数据。1.50和100μg/kg卡麦角林连续3天灌胃雄鼠,处理后第7和24d镜检附睾和睾丸,分析睾丸中ACP、AKP、LDH和GSH-Px活力及血清中睾酮、LH、FSH和PRL含量。结果显示：50μg/kg处理后第24d时,附睾和睾丸鲜重降低。生精小管出现萎缩,曲细精管内生精细胞、间质细胞和支持细胞受损。精子活力降低,畸形率增加。100μg/kg卡麦角林降低ACP活力,导致LDH活力显着增加,但随剂量增加LDH活力增加幅度下降。100μg/kg处理组第24d GSH-Px活力高于对照组。LH含量随剂量增加及处理时间的延长而显着降低。与对照组相比,100μg/kg卡麦角林处理后第7d,睾酮浓度降低48.6%。结论：卡麦角林处理可明显降低雄鼠精子活力增加精子畸形率,降低LH和睾酮含量,影响睾丸标志酶活力,从而降低雄鼠的繁殖能力。2.50和100μg/kg卡麦角林连续3天灌胃雌鼠,处理后第7和24d镜检卵巢和子宫,检测血清中雌二醇、孕酮和PRL含量。结果显示：50μg/kg处理组第7d卵巢鲜重显着高于对照组。处理组子宫水肿,子宫腔内充满液体,部分存在瘀血瘢现象；50μg/kg卡麦角林处理使卵巢闭锁卵泡的数量增加。100μg/kg处理组卵巢各级卵泡细胞数量较正常对照组减少。雌鼠PRL含量受卡麦角林处理时间的影响显着。结论：卡麦角林通过干扰雌鼠PRL和雌激素的分泌,抑制卵泡的发育成熟以及成功排卵的过程,降低雌鼠的生育能力。3.测定了50和100μg/kg卡麦角林处理雄、雌鼠后分别与正常（同/异）鼠遭遇,比较了给药前后个体行为的差异。结果显示：卡麦角林降低雄鼠对正常雄鼠的探究、攻击时间；增加雌鼠对正常雌鼠的探究时间,降低雄鼠对正常雌鼠的攻击时间和频次；100μg/kg卡麦角林降低雄鼠对正常雌鼠的探究频次；卡麦角林处理后的雌鼠对正常雄鼠攻击和防御行为较处理前降低。结论：卡麦角林降低了处理个体与同性遭遇时的攻击行为,增强了雌性对异性鼠的友好行为,推测处理个体可干扰正常雌雄鼠的交配,产生竞争性繁殖干扰的作用。
冯婷[7]（2014）在《减味寿胎丸补肾安胎有效部位对RU486诱导滋养细胞损伤模型的影响》文中进行了进一步梳理目的:改进及完善滋养细胞原代培养方法,并对所培养的细胞进行鉴定。建立米非司酮对滋养细胞损伤模型。研究减味寿胎丸各个有效部位的对不同配比对米非司酮诱导滋养细胞损伤模型的影响,筛选优选配比,并对其进行验证及作用机制的初步探讨。方法:实验一:滋养细胞原代培养采用0.25%胰酶消化法对绒毛组织进行细胞分离,通过Percoll密度梯度分离及差时贴壁对其进行纯化,通过电镜、免疫组化、流式细胞术、细胞上清液的HCG测定对其进行鉴定。实验二:米非司酮诱导滋养细胞损伤模型建立,以不同浓度米非司酮作用滋养细胞,选取造模24h、造模24h撤退24h、造模24h撤退48h,造模48h、造模48h撤退24h、造模48h撤退48h,6个不同时间点,通过MTT检测细胞增殖活力、AnnexinV-PI流式检测早期凋亡率、Hoechest染色及电镜观察细胞凋亡。选取造模24h、造模24撤退24,以Western blot检测滋养细胞Caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白表达、PCR检测 Caspase-3、Bax、Bcl-2mRNA 表达情况。实验三:减味寿胎丸有效部位之不同配比对滋养细胞损伤模型的作用:将减味寿胎丸各个有效部位分为10个浓度梯度,以均匀设计法将不同有效部位组合成10组,以MTT检测细胞增殖活力、AnnexinV-PI流式检测早期凋亡率、放免法检测细胞上清液β-HCG表达情况。并对结果采用逐步回归分析、典型相关分析及最优化结果分析。实验四:优选配比组药效作用的验证:通过MTT检测细胞增殖活力、AnnexinV-PI流式检测早期凋亡率、细胞上清HCG检测、Western blot检测XIAP、Caspase-3、Caspase-9、Bax、Bcl-2 蛋白表达、PCR 检测 XIAP、Caspase-3、Caspase-9 Bax、Bcl-2的mRNA表达,进一步验证优选配比组对米非司酮损伤滋养细胞损伤模型的影响。结果:实验一:原代培养滋养细胞电镜下细胞表明呈观察细胞表面有微绒毛丰富及颗粒,细胞质较丰富,细胞质内有明显的脂滴。免疫鉴定细胞CK7、CK18表达呈阳性、而Vimentin表达呈阴性,流式鉴定细胞CK7表达阳性,Vimentin表达为弱阳性。β-HCG测定细胞上清液水平,培养第二天细胞上清液HCG为913.27 MIUml,传代当天HCG水平为3.79 MIU/ml,传代后第二天细胞上清液HCG水平为1.14MIU/mL。实验二:米非司酮作用24h后细胞增值率组间比较无统计学差异（P>0.05）;20μmol/L 组、40μmol/L 组、60μmol/L 组、80μmol/L 组、100μmol/L 组细胞早期凋亡率与空白组相比显着上升（P<0.01）;100μmol/L组Caspase-3蛋白表达与空白组相比增加（P<0.05）;100μmol/L、80μmol/L的Bax蛋白表达与空白组相比显着增加（P<0.01）,40μmol/L、60μmol/L的Bax的蛋白表达与空白组相比增加（P<0.05）;对于Bcl-2蛋白表达,100μ mol/L组、80μ mol/L组与空白组相比显着降低（P<0.01）,60μmol/L组与空白组相比降低（P<0.05）;bcl-2/Bax结果显示60μmol/L组比空白组降低（P<0.05）,80μmol/L组、100μmol/L组与空白组相比显着下降（P<0.01）造模24撤退24h:20μmol/L细胞增值率比空白组降低（P<0.05）,40μmol/L、60μmol/L、80μmol/L、100μmol/L组细胞增值率与空白组相比显着下降（P<0.01）;60μmol/L组、80μmol/L组、100μmol/L组细胞早期凋亡率与空白组相比显着上升（P<0.01）;80μmol/L、60μmol/L 比 20μmol/L 组 Caspase-3 蛋白表达增加（P<0.05）;60 μ mol/L、80 μ mol/L 组 Bax 蛋白表达比空白组升高（P<0.05）;80 μ mol/L组、100μmol/L组的Bcl-2蛋白表达比空白组降低（P<0.05）;bcl-2/Bax结果:空白组与60μmol/L组相比降低（P<0.05）,与80μmol/L组、100μmol/L组相比显着下降（P<0.01）;60μmol/L 组;60μmol/L 组 BaxmRNA 表达较空白组上升（P<0.05）作用24-48h40μ mol/L,60μmol/L组的细胞增值率比空白组降低（P<0.05）;40μmol/L组、60μmol/L组、80μmol/L组、100μmol/L组的细胞早期凋亡率与空白组相比组均有显着上升（P<0.01）;作用48h,对于细胞增值率:80μmol/L、100μmol/L比空白组降低（P<0.05）,60μmol/L与空白组相比显着降低（P<0.01）;作用48-24细胞增值率100μmol/L与空白组相比显着降低（P<0.01）;作用48-48细胞增值率80 μ mol/L、100 μ mol/L组比空白组相比显着降低（P<0.01）;对于细胞早期凋亡率:80μmol/L、100μmol/L组与空白组相比上升（P<0.05）;实验三:模型组细胞增值率比空白组降低、24h早期凋亡率比空白组相比增加（P<0.05）,作用48h空白组早期凋亡率与模型组相比有显着差异（P<0.01）;第10组Caspase-3表达与模型组相比降低（P<0.05）;根据逐步回归、相关回归及最优结果分析及根据各指标权重,计算出减味寿胎丸有效部位的最佳配比对滋养细胞损伤模型的影响:菟丝子黄酮:桑寄生黄酮:桑寄生多糖:续断皂苷=0.9:0.00342:0.09037:0.0795（mg/ml）;实验四:优选配比组与模型组相比,作用24h增值率显着增加（P<0.01）;作用24h、48h早期凋亡率显着降低（P<0.01）;作用48h Caspase-3蛋白及mRNA表达显着降低（P<0.01）;作用24h,Caspase-9蛋白表达降低（P<0.05）;作用24h显着降低Bax蛋白及mRNA的表达（P<0.01）,β-HCG表达有上升趋势,但与模型组、空白组比较无显着差异（P>0.05）;优化第10组与模型组相比细胞增殖率增加（P<0.05）,作用48h HCG分泌显着增加（P<0.01）;作用24h后早期凋亡率显着下降（P<0.01）;作用48h,Caspase-3蛋白及mRNA表达显着降低（P<0.01）;作用24h后,Caspase-9的表达降低（P<0.05）;作用24h后,Bax蛋白及mRNA的表达显着降低（P<0.01）;菟丝子黄酮组与模型组相比,作用24h显着降低早期凋亡率（P<0.01）;作用24h,Bax蛋白及mRNA的表达显着降低（P<0.01）;作用24h,显着降低Caspase-3mRNA表达（P<0.01）;金丝桃苷组与模型组相比,作用24h,显着降低早期凋亡率（P<0.01）;作用48h降低Caspase-3蛋白表达（P<0.05）;作用24h,降低Caspase-9蛋白表达（P<0.05）;作用24h,显着降低Bax蛋白及mRNA的表达（P<0.01）;川续断皂苷VI与模型组相比:作用24h后,显着降低早期凋亡率（P<0.01）;作用 24h 降低 Caspase-3 表达（P<0.05）、作用 48h 显着降低 Caspase-3 表达（P<0.01）;作用24h,降低Caspase-9的表达（P<0.05）;作用24h显着降低Bax蛋白的表达（P<0.01）;结论:1.改良并确定了滋养细胞原代培养与传代的条件。通过鉴定确定所培养的细胞为人类妊娠滋养细胞。2.建立RU486滋养细胞损伤模型。确定米非司酮对体外培养滋养细胞有抑制其增殖和诱导凋亡的作用,米非司酮药物撤退后对细胞的损伤有一定的持续性。并以此模型为工具进行中药有效部位的细胞学研究。3.初步确立减味寿胎丸补肾安胎有效部位优选组合（菟丝子黄酮:桑寄生黄酮:桑寄生多糖:续断皂苷=0.9:0.00342:0.09037:0.0795（mg/ml））,验证认为该组合可以促进损伤细胞增殖、抑制细胞凋亡,其作用机理可能是通过降低CasPase-3蛋白及mRNA、CasPase-9蛋白及抑制Bax蛋白及mRNA来实现的.
苏欠欠[8]（2013）在《卡麦角林（Cabergoline）对雌性小鼠的不育效果及作用机制》文中提出本文通过测定卡麦角林（Cabergoline）对雌性小鼠不同生理阶段的繁殖能力的影响,确定卡麦角林作为不育剂影响小鼠繁殖的作用机制和合适剂量,为安全、有效的鼠类不育剂的开发提供科学依据。研究结果如下：（1）成年雌鼠在交配前灌胃单剂量卡麦角林油溶液,不影响雌鼠的产仔率、出生胎仔数和幼鼠的生长发育,但可显着的降低幼鼠存活率。150μg/kg、300μg/kg、600μg/kg组幼鼠死亡窝数分别为2、7、7,幼鼠死亡数分别为4、10、12,对应幼鼠存活率分别为96.85%、92.59%、91.24%,而对照组幼鼠无死亡。该结果表明交配前灌胃单剂量卡麦角林油溶液可影响幼鼠存活。（2）妊娠1-3天连续3天灌胃200μg/kg卡麦角林油溶液可有效的控制雌鼠繁殖。妊娠1-3天每天灌胃100μg/kg卡麦角林油溶液可降低雌鼠的产仔率、胎仔数和幼鼠存活率,其产仔率、胎仔数、幼鼠存活率分别为对照组的50%、72%、89%,但100μg/kg组存活幼鼠生长发育显着大于对照组；而妊娠1-3天连续3天灌胃雌鼠200μg/kg或400μg/kg可完全抑制雌鼠的繁殖,且停药后再次配对后其繁殖力仍未完全恢复（44%,40%）,但200μg/kg和400μg/kg组母鼠的繁殖参数无显着差异。实验表明妊娠1-3天连续3天灌胃雌鼠200μg/kg卡麦角林即可完全控制雌鼠的繁殖。（3）妊娠15-17天连续3灌胃不同剂量卡麦角林油溶液不影响雌鼠的产仔率和幼鼠出生胎仔数,但可显着的降低幼鼠断奶胎仔数和存活率。50μg/kg、100μg/kg、200μg/kg、400μg/kg组幼鼠死亡数分别为12、14、20、32,幼鼠存活率分别为91.61%、90.07%、84.62%、76.81%,且幼鼠死亡数和卡麦角林剂量正相关,且卡麦角林处理组存活幼鼠的生长发育与对照组之间无显着差异。表明妊娠末期灌胃卡麦角林油溶液可有效的降低幼鼠存活。（4）雌鼠哺乳1-3天连续3天灌胃卡麦角林油溶液可显着的降低幼鼠的存活率,并可连续7天抑制存活幼鼠的生长发育。50μg/kg、100μg/kg、200μg/kg、400μg/kg组幼鼠的断奶胎仔数显着小于对照组,幼鼠存活率显着低于对照组,分别为96.15%、95.92%、92.62%、78.81%。表明哺乳早期灌胃母鼠卡麦角林油溶液可显着降低幼鼠存活率,并可短暂的抑制幼鼠生长发育。综上所述,400μg/kg卡麦角林是可抑制妊娠期或哺乳期母鼠繁殖的最小剂量,该剂量卡麦角林抑制妊娠早期母鼠繁殖的机制是阻止受精卵着床和终止母鼠妊娠；而抑制妊娠末期和哺乳期母鼠繁殖的机制为抑制母鼠泌乳,使幼鼠因营养不足而出现死亡,进而降低幼鼠存活率。本研究结果提示卡麦角林用于鼠害防治时,应选用适中剂量,连续投放饵料,使鼠类持续进食药饵,以达到最佳抑制效果；另外,在繁殖季节给药,不育控制效果更好。
陈悦洲[9]（2012）在《米非司酮的糖皮质激素拮抗效应对人子宫NK细胞的影响及机制研究》文中认为米非司酮是一种人工合成的19-去甲基睾酮衍生物,具有抗孕激素和糖皮质激素作用。从首次合成米非司酮以来,米非司酮已被广泛用作抗早孕治疗,并成功用于紧急避孕。多年来的基础和临床研究表明,米非司酮在妇产科学、内分泌学、肿瘤学及免疫学等多个领域表现出一定的应用潜力。近年的研究表明,米非司酮对女性的排卵、激素水平以及月经出血模式没有明显影响,但是能够延缓子宫内膜的成熟,从而达到内膜避孕的作用。然而,米非司酮内膜避孕的作用机制还不十分清楚。第一部分人子宫内膜间质细胞对uNK细胞体外存活及功能的影响目的：明确人子宫内膜间质细胞对uNK细胞体外存活、增殖及毒性功能的影响。方法：分离不同时期女性子宫内膜和蜕膜间质细胞,体外培养制备间质细胞条件培养液。从早孕蜕膜组织中分离、分选得到高纯度的人uNK细胞,采用流式细胞方法检测细胞的表型。在光镜下观测了不同时期间质细胞条件培养液对uNK细胞形态学的影响；采用基于乳酸脱氢酶活性为基础的MTS试剂盒检测不同时期间质细胞条件培养液对uNK细胞增殖的影响,并采用流式细胞方法检测uNK细胞对靶细胞K562的细胞杀伤作用。结果：在本实验中,采用细胞免疫磁珠分选方法可以得到高纯度的人uNK细胞（94.52±2.44%）。外源性IL-2能够明显维持uNK细胞的体外存活,并对靶细胞的细胞毒性有促进作用。单独的不同时期间质细胞条件培养液均不能维持uNK细胞的体外存活,但分泌期和早孕期间质细胞条件培养基能够明显增加uNK细胞体外增殖（1.12±0.03和1.22±0.06,p<0.05）。与对照组相比（63.39±±5.18%）,不同时期间质细胞条件培养液均能明显降低uNK细胞毒性功能（46.98±±3.58%,45.28±±4.05%,43.72±±1.67%,p<0.05）,而这种抑制作用在不同时期间质细胞条件培养液间并没有显着差异（p>0.05）。结论：人子宫间质细胞条件培养基不能维持uNK细胞的体外存活,但能够通过细胞增殖和毒性的影响来调节uNK细胞功能。第二部分米非司酮对人子宫NK细胞生物活性的影响目的：研究米非司酮对人uNK细胞体外增殖、凋亡、IFN-γ分泌、细胞毒性功能及穿孔素和颗粒酶-B蛋白表达水平的影响。方法：体外分选得到的高纯度人uNK细胞,采用不同浓度米非司酮进行体外处理。采用MTS试剂盒检测细胞增殖情况；采用流式细胞方法检测细胞凋亡、毒性功能及毒性颗粒的表达情况；ELISA试剂盒检测细胞IFN-γ分泌水平。结果：不同浓度米非司酮对人uNK细胞的体外增殖、凋亡及IFN-γ的分泌功能均没有明显影响。经65nmol/L和200nmol/L的米非司酮处理后,uNK细胞的毒性分别为68.92±5.96%和69.62±4.22%,虽然高于对照组（62.24±4.39%）,但没有显着性差异（p>0.05）；1000nmol/L的米非司酮能够明显增加其细胞毒性（73.16±4.27%,p<0.05）。1000nmol/L米非司酮不会影响人uNK细胞颗粒酶-B的蛋白表达（50.50±0.02%和45.97±0.03%,p>0.05）,但能够增加穿孔素的蛋白表达水平（49.13±0.03%和36.23±0.05%,p<0.05）。结论：米非司酮对人uNK细胞的体外增殖、凋亡及IFN-γ的分泌功能均没有影响,但可能通过对穿孔素表达水平的上调作用来增加uNK细胞的毒性功能。第三部分米非司酮在人子宫NK细胞毒性调节中的作用及机制目的：研究米非司酮的糖皮质激素拮抗效应在人uNK细胞毒性功能和穿孔素蛋白表达调节中的作用及可能的信号途径。方法：体外分离得到的高纯度人uNK细胞,分别采用不同浓度的孕激素、皮质醇以及米非司酮进行体外处理。采用流式细胞方法检测了uNK细胞毒性功能和穿孔素蛋白的表达情况；采用免疫蛋白印迹检测了ERK1/2、p38和JNK蛋白磷酸化水平的变化；采用ERK1/2蛋白活化的特异性抑制剂PD98059检测了ERK1/2活性在米非司酮诱导的uNK细胞毒性功能和穿孔素表达调节中的作用。结果：不同浓度的孕激素对uNK细胞毒性没有明显影响；而1×10-6M和1×10-5M的皮质醇能够明显降低uNK细胞的细胞毒性（55.07±4.04%、56.20±3.11%和62.30±2.69%,p<0.05）。1×10-6M的米非司酮能够促进uNK细胞毒性功能（62.30±2.69%和73.16±4.26%,p<0.05）和穿孔素蛋白的表达（36.23±4.84%和49.13±2.92%,p<0.05）；1×10-6M皮质醇能够抑制米非司酮对uNK细胞毒性功能（73.16±4.26%3和66.92±2.87%,p<0.05）和穿孔素蛋白表达的诱导（49.13±2.92%和33.14±3.45%,p<0.05）。1×10-6M的米非司酮能够增加ERK1/2蛋白的磷酸化水平,但对p38和JNK蛋白磷酸化水平没有明显影响；皮质醇对米非司酮诱导的ERK1/2蛋白的磷酸化水平具有抑制作用（0.87±0.09和0.48±0.07,p<0.05）。此外,PD98059能够明显降低米非司酮对uNK细胞毒性和穿孔素蛋白表达的诱导作用。结论：米非司酮通过糖皮质激素拮抗效应来促进人uNK细胞毒性功能和穿孔素的表达,并诱导ERK1/2蛋白的磷酸化。ERK1/2信号途径可能参与了米非司酮对uNK细胞毒性功能和穿孔素表达的调节。
秦姣,刘全生,黄小丽,郭明昉[10]（2011）在《米非司酮对雄性小鼠繁殖抑制作用研究》文中指出为确定米非司酮抑制雄性小鼠繁殖的有效剂量及其生理机制,以不同浓度米非司酮油溶液灌胃给药,测定了各组雄性小鼠的体重、器官、精子活力及激素等生理指标和繁殖能力。结果表明:不同剂量米非司酮处理对雄性小鼠体重、睾丸鲜重和附睾鲜重无显着影响,对精子数量和活动性影响主要在高剂量时较强,而随着剂量增加,精子的存活率显着降低且畸形率显着增加;高浓度米非司酮可导致雄鼠血清LH上升和睾酮浓度降低;随米非司酮剂量增加,小鼠繁殖成功率呈下降趋势,且显着减少子代数量,但不影响繁殖个体的胎仔数及幼体存活和发育。米非司酮对雄鼠繁殖具有一定的抑制作用,作用机理在于降低精子存活率和增加畸形率,因此具有鼠类两性不育剂的开发应用潜力。
二、米非司酮对体外培养大鼠睾丸间质细胞分泌睾酮的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、米非司酮对体外培养大鼠睾丸间质细胞分泌睾酮的影响（论文提纲范文）
（1）培元补肾安胎方治疗RSA的临床研究及基于内膜衰老的药物机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一章 文献综述 |
| 综述一 复发性流产的西医研究进展 |
| 1 复发性流产的病因研究 |
| 2 复发性流产的治疗现状 |
| 3 小结 |
| 参考文献 |
| 综述二 中医药治疗复发性流产的研究进展 |
| 1 中医病因病机 |
| 2 复发性流产的中医证型分布状况 |
| 3 复发性流产的中医治疗现状 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 综述三 子宫细胞衰老与女性生殖功能 |
| 1 衰老细胞 |
| 2 子宫的生理解剖及功能 |
| 3 子宫衰老细胞对女性生殖功能的影响 |
| 4 子宫衰老细胞的治疗现状 |
| 5 小结与展望 |
| 参考文献 |
| 第二章 培元补肾安胎方治疗黄体功能不足型复发性流产临床疗效观察 |
| 前言 |
| 1 研究材料 |
| 2 研究方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结与展望 |
| 参考文献 |
| 第三章 基于网络药理学和分子对接探讨培元补肾安胎方治疗复发性流产的作用机制 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结与展望 |
| 参考文献 |
| 第四章 孕酮诱导“种植窗期”子宫内膜细胞衰老在胚胎着床中的作用研究 |
| 前言 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结与展望 |
| 参考文献 |
| 第五章 基于“种植窗期”内膜衰老探讨培元补肾安胎方对复发性流产作用机制的研究 |
| 前言 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 1 研究总结 |
| 2 创新点 |
| 3 不足与展望 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 在学期间主要研究成果 |
（2）慢性心理应激致男（雄）性生殖损伤的流行病学调查和相关机制研究（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 英文摘要 |
| 中文摘要 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 慢性心理应激与精液参数关联的人群流行病学研究 |
| 2.1 大学生抑郁症状与精液参数的关联分析:MARHCS研究 |
| 2.2 工人工作压力与精液参数的关联分析:重庆市两区县人群研究 |
| 2.3 小结 |
| 第三章 糖皮质激素受体在慢性心理应激诱导大鼠生精损伤中的作用研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料和方法 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 GILZ在糖皮质激素诱导的GC-1 小鼠精原细胞周期进展阻滞中的作用机制研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 文献综述 心理应激致男(雄)性生殖损害的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读博士期间相关科研成果 |
| 致谢 |
（3）褪黑素在绵羊卵巢中的生成及其调控机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| SUMMARY |
| 缩略词表 |
| 第一部分 文献综述 |
| 第一章 卵巢中卵泡及黄体的发育模式 |
| 1 卵泡的发育 |
| 2 卵泡募集、优势化及选择 |
| 3 卵泡的闭锁和退化 |
| 4 黄体的发育及功能 |
| 5 黄体的退化与溶解 |
| 第二章 褪黑素及其相关研究 |
| 1 褪黑素的生物合成 |
| 2 褪黑素的代谢途径 |
| 3 褪黑素的生物学作用 |
| 4 褪黑素受体及信号转导途径 |
| 5 褪黑素对卵巢功能的影响 |
| 第三章 雌激素和孕激素的研究进展 |
| 1 雌激素 |
| 2 孕酮 |
| 第四章 蛋白质组学在卵巢功能中的研究应用 |
| 1 蛋白质组学的研究进展 |
| 2 蛋白质组学技术 |
| 3 蛋白质组学技术在哺乳动物卵巢功能中的研究应用 |
| 4 本研究的意义和目的 |
| 第二部分 实验部分 |
| 第一章 褪黑素合成酶及其膜受体在不同时期周期黄体中的表达模式 |
| 1 实验材料及方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二章 P_4及其受体抑制剂RU486 对黄体细胞中MT1和MT2 表达的影响 |
| 1 试验材料及方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三章 褪黑素合成酶及其膜受体在不同大小卵泡中卵丘复合体的表达模式 |
| 1 试验材料及方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第四章 E_2对绵羊卵丘复合体褪黑素的合成及其膜受体表达的影响 |
| 1 实验材料及方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第五章 颗粒细胞Lable-free蛋白质组学分析 |
| 1 实验材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
| 导师简介 |
（4）菟丝子总黄酮调控miRNA-126-3p促进滋养细胞侵袭功能机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 文献综述 |
| 第一节 自然流产机制研究 |
| 一、基因因素(染色体异常) |
| 二、免疫因素 |
| 三、血管生成因素(血栓) |
| 四、代谢及内分泌因素 |
| 第二节 滋养细胞的功能 |
| 一、细胞凋亡 |
| 二、细胞增殖 |
| 三、细胞侵袭与迁移 |
| 四、细胞血管生成 |
| 五、米非司酮对滋养细胞迁移和侵袭功能的影响 |
| 第三节 菟丝子总黄酮治疗自然流产的研究 |
| 一、改善生殖内分泌的功能 |
| 二、改善缺氧、凋亡的作用 |
| 三、保护心脑血管的作用 |
| 四、改善免疫调节作用 |
| 五、改善骨代谢的作用 |
| 第四节 miRNA在自然流产中的作用 |
| 一、影响滋养细胞凋亡功能 |
| 二、影响滋养细胞增殖功能 |
| 三、影响滋养细胞侵袭与迁移功能 |
| 四、影响滋养细胞血管生成功能 |
| 五、miRNA-126-3p与滋养细胞 |
| 第二章 实验研究 |
| 第一节 立论依据及其实验技术路线 |
| 一、立论依据 |
| 二、技术路线 |
| 第二节 miRNA-126-3p的验证及其功能研究 |
| 一、实验目的 |
| 二、实验材料与方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 五、小结 |
| 第三节 菟丝子总黄酮对正常滋养细胞迁移和侵袭功能的影响 |
| 一、实验目的 |
| 二、实验材料与方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 五、小结 |
| 第四节 菟丝子总黄酮对米非司酮所致EVT细胞内自然流产状态细胞模型的迁移和侵袭功能影响 |
| 一、实验目的 |
| 二、实验材料与方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 五、小结 |
| 第五节 菟丝子总黄酮对米非司酮所致EVT细胞内自然流产状态细胞模型的迁移和侵袭功能的内在机制研究 |
| 一、实验目的 |
| 二、实验材料与方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 五、小结 |
| 第六节 菟丝子总黄酮通过影响滋养细胞内MMP9调控其迁移和侵袭功能 |
| 一、实验目的 |
| 二、实验材料与方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 五、小结 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在校期间发表论文情况 |
| 致谢 |
（6）卡麦角林对黄毛鼠的不育效果及其作用机理（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 目录 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 鼠类危害及防治中的问题 |
| 1.2 害鼠不育控制理论 |
| 1.3 不育控制的种类 |
| 1.3.1 手术不育 |
| 1.3.2 化学不育剂 |
| 1.3.3 免疫不育 |
| 1.3.4 内分泌干扰不育 |
| 1.4 内分泌干扰不育剂的生理机制 |
| 1.5 内分泌干扰不育剂的生态效应 |
| 1.6 卡麦角林的研究进展 |
| 1.7 黄毛鼠 |
| 1.7.1 危害特性 |
| 1.7.2 防治对策 |
| 1.8 研究目的和意义 |
| 第二章 卡麦角林对雄性黄毛鼠生殖生理的影响 |
| 2.1 研究方法 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 实验处理 |
| 2.1.3 统计分析 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.2.1 卡麦角林对雄性黄毛鼠体重的影响 |
| 2.2.2 卡麦角林对雄性黄毛鼠繁殖器官的影响 |
| 2.2.3 卡麦角林对雄性黄毛鼠精子数量和品质的影响 |
| 2.2.4 卡麦角林对雄性黄毛鼠睾丸标志酶的影响 |
| 2.2.5 卡麦角林对雄性黄毛鼠激素的影响 |
| 2.2.6 精子密度和品质与酶活力和血清激素关系 |
| 2.3 讨论 |
| 第三章 卡麦角林对雌性黄毛鼠生殖生理的影响 |
| 3.1 研究方法 |
| 3.1.1 实验动物 |
| 3.1.2 实验处理 |
| 3.1.3 统计分析 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 卡麦角林对雌性黄毛鼠体重的影响 |
| 3.2.2 卡麦角林对雌性黄毛鼠繁殖器官的影响 |
| 3.2.3 卡麦角林对雌性黄毛鼠激素的影响 |
| 3.3 讨论 |
| 第四章 卡麦角林对同性黄毛鼠遭遇行为的影响 |
| 4.1 研究方法 |
| 4.1.1 实验材料 |
| 4.1.2 实验处理 |
| 4.1.3 统计分析 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.2.1 卡麦角林处理前后的雄鼠与正常雄鼠的遭遇行为时间比较 |
| 4.2.2 卡麦角林处理前后的雄鼠与正常雄鼠的遭遇行为频次比较 |
| 4.2.3 卡麦角林处理前后的雌鼠与正常雌鼠的遭遇行为时间比较 |
| 4.2.4 卡麦角林处理前后的雌鼠与正常雌鼠的遭遇行为频次比较 |
| 4.3 讨论 |
| 第五章 卡麦角林对异性黄毛鼠遭遇行为的影响 |
| 5.1 研究方法 |
| 5.1.1 实验材料 |
| 5.1.2 实验处理 |
| 5.1.3 统计分析 |
| 5.2 结果与分析 |
| 5.2.1 卡麦角林处理前后的雄鼠与正常雌鼠的遭遇行为时间比较 |
| 5.2.2 卡麦角林处理前后的雄鼠与正常雌鼠的遭遇行为频次比较 |
| 5.2.3 卡麦角林处理前后的雌鼠与正常雄鼠的遭遇行为时间比较 |
| 5.2.4 卡麦角林处理前后的雌鼠与正常雄鼠的遭遇行为频次比较 |
| 5.3 讨论 |
| 第六章 结论与展望 |
| 6.1 结论 |
| 6.1.1 卡麦角林影响雄性黄毛鼠繁殖的生理机制 |
| 6.1.2 卡麦角林影响雌性黄毛鼠繁殖的生理机制 |
| 6.1.3 卡麦角林影响黄毛鼠同性间行为的内分泌机制 |
| 6.1.4 卡麦角林影响黄毛鼠异性间行为的内分泌机制 |
| 6.2 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（7）减味寿胎丸补肾安胎有效部位对RU486诱导滋养细胞损伤模型的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 文献研究 |
| 1.1 细胞凋亡对自然流产影响研究进展 |
| 1.1.1 细胞凋亡死亡受体通路与自然流产的关系 |
| 1.1.2 细胞凋亡线粒体通路与自然流产的关系 |
| 1.1.3 相关凋亡蛋白及因子表达对自然流产的影响 |
| 1.1.4 丝分裂原则激活的蛋白激酶级联系统相关因子与自然流产关系 |
| 1.2 损伤型滋养细胞模型的研究进展 |
| 1.2.1 缺氧-复氧滋养细胞损伤模型 |
| 1.2.2 感染损伤滋养细胞模型 |
| 1.2.3 米非司酮诱导滋养细胞损伤模型 |
| 1.3 中医药防治自然流产对相关细胞凋亡情况的影响 |
| 第二章 实验研究 |
| 2.1 立论依据 |
| 2.2 实验设计及技术路线 |
| 2.3 人早孕绒毛滋养细胞的原代培养及鉴定 |
| 2.3.1 实验目的 |
| 2.3.2 实验材料及方法 |
| 2.3.3 结果 |
| 2.3.4 讨论 |
| 2.3.5 小结 |
| 2.4 建立米非司酮诱导滋养细胞损伤模型 |
| 2.4.1 实验目的 |
| 2.4.2 实验材料及方法 |
| 2.4.3 结果 |
| 2.4.4 讨论 |
| 2.4.5 小结 |
| 2.5 寿胎丸有效部位组合对米非司酮诱导滋养细胞损伤模型的影响 |
| 2.5.1 实验目的 |
| 2.5.2 实验材料及方法 |
| 2.5.3 结果 |
| 2.5.4 均匀设计结果分析 |
| 2.5.5 讨论 |
| 2.5.6 小结 |
| 2.6 减味寿胎丸有效部位的优选配比组的验证实验及抗凋亡机制的初步探索 |
| 2.6.1 实验目的 |
| 2.6.2 实验材料及方法 |
| 2.6.3 结果 |
| 2.6.4 讨论 |
| 2.6.5 小结 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在读期间发表论文 |
| 致谢 |
| 详细摘要 |
（8）卡麦角林（Cabergoline）对雌性小鼠的不育效果及作用机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 1 绪论 |
| 1.1 鼠害概述 |
| 1.2 传统鼠害控制方法 |
| 1.3 不育控制技术 |
| 1.3.1 不育控制的优点 |
| 1.3.2 不育控制的类型 |
| 1.4 卡麦角林 |
| 1.4.1 卡麦角林终止妊娠 |
| 1.4.2 卡麦角林抑制泌乳 |
| 1.4.3 卡麦角林影响动情周期 |
| 1.4.4 卡麦角林对雄性的作用 |
| 1.5 科学问题的提出及选题依据 |
| 2 卡麦角林对成年雌鼠繁殖能力影响研究 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 实验动物及药物配制 |
| 2.1.2 实验处理 |
| 2.1.3 统计分析 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.2.1 妊娠期母鼠体重变化 |
| 2.2.2 哺乳期母鼠体重变化 |
| 2.2.3 母鼠繁殖能力 |
| 2.2.4 幼鼠体重变化 |
| 2.3 讨论 |
| 3 卡麦角林对孕鼠繁殖能力的影响研究 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 卡麦角林对妊娠早期雌鼠繁殖能力影响 |
| 3.1.2 卡麦角林对妊娠末期雌鼠繁殖能力影响 |
| 3.1.3 统计分析 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 卡麦角林对妊娠早期雌鼠繁殖能力影响 |
| 3.2.2 卡麦角林对妊娠末期雌鼠繁殖能力影响 |
| 3.3 讨论 |
| 4 卡麦角林处理哺乳期母鼠对子代存活和生长的影响 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 实验动物与药物配制 |
| 4.1.2 实验处理 |
| 4.1.3 统计分析 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.2.1 母鼠体重变化 |
| 4.2.2 幼鼠存活率 |
| 4.2.3 幼鼠平均体重 |
| 4.2.4 幼鼠体重相对增长率 |
| 4.3 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 攻读硕士学位期间的主要学术成果 |
| 致谢 |
（9）米非司酮的糖皮质激素拮抗效应对人子宫NK细胞的影响及机制研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词表 |
| 目次 |
| 序言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 人子宫内膜间质细胞对uNK细胞体外存活及功能的影响 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 米非司酮对人子宫NK细胞生物活性的影响 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 米非司酮在人子宫NK细胞毒性调节中的作用及机制 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 作者简历 |
（10）米非司酮对雄性小鼠繁殖抑制作用研究（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.2.1 试验处理 |
| 1.2.2 指标测定 |
| (1) 激素测定。 |
| (2) 睾丸、附睾鲜重。 |
| (3) 精子密度。 |
| (4) 精子活力。 |
| (5) 精子存活率。 |
| (6) 精子形态。 |
| (7) 繁殖情况。 |
| 1.3 数据统计 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 米非司酮对雄性小鼠体重的影响 |
| 2.2 米非司酮对雄性小鼠睾丸、附睾的影响 |
| 2.3 米非司酮对雄性小鼠精子品质的影响 |
| 2.4 米非司酮血清激素含量的影响 |
| 2.5 米非司酮对雄性小鼠繁殖效力的影响 |
| 3 结论与讨论 |
四、米非司酮对体外培养大鼠睾丸间质细胞分泌睾酮的影响（论文参考文献）
- [1]培元补肾安胎方治疗RSA的临床研究及基于内膜衰老的药物机制研究[D]. 奚婷. 北京中医药大学, 2021(01)
- [2]慢性心理应激致男（雄）性生殖损伤的流行病学调查和相关机制研究[D]. 邹鹏. 中国人民解放军陆军军医大学, 2019(03)
- [3]褪黑素在绵羊卵巢中的生成及其调控机制[D]. 肖龙菲. 甘肃农业大学, 2019
- [4]菟丝子总黄酮调控miRNA-126-3p促进滋养细胞侵袭功能机制研究[D]. 高飞霞. 广州中医药大学, 2017(05)
- [5]TGF-β超家族信号通路及其调控睾丸发育和精子生成的研究进展[J]. 董莲花,冉茂良,李智,陈斌. 中国畜牧杂志, 2016(03)
- [6]卡麦角林对黄毛鼠的不育效果及其作用机理[D]. 秦姣. 中国农业大学, 2015(07)
- [7]减味寿胎丸补肾安胎有效部位对RU486诱导滋养细胞损伤模型的影响[D]. 冯婷. 广州中医药大学, 2014(06)
- [8]卡麦角林（Cabergoline）对雌性小鼠的不育效果及作用机制[D]. 苏欠欠. 中南林业科技大学, 2013(09)
- [9]米非司酮的糖皮质激素拮抗效应对人子宫NK细胞的影响及机制研究[D]. 陈悦洲. 浙江大学, 2012(12)
- [10]米非司酮对雄性小鼠繁殖抑制作用研究[J]. 秦姣,刘全生,黄小丽,郭明昉. 广东农业科学, 2011(19)