一、槲皮素对血管紧张素Ⅱ致培养乳鼠心肌细胞肥大的抑制作用(英文)（论文文献综述）
李晓文[1]（2021）在《基于PI3K/AKT信号通路探讨糖心平胶囊治疗糖尿病心肌病药效及机制》文中研究指明研究背景糖尿病心肌病（Diabetic cardiomyopathy,DCM）是指在高糖状态下出现的以心脏结构和功能异常为主要特征的病理改变,是糖尿病相关心脏并发症之一。糖心平胶囊（tangxinping capsule,TXPC）是用于治疗和改善糖尿病心脏病的中药制剂,但其机制仍不十分明确。本研究基于北京市科委课题“十病十药研发-治疗糖尿病合并冠心病新药糖心平胶囊成药性研究”,整合网络药理学和动物实验验证的研究方法,挖掘和验证TXPC药效及机制。研究目的通过网络药理学分析结合动物实验验证的研究方法挖掘并评价TXPC对DCM的治疗作用及机制探究。研究方法1、方法一:本研究通过TCMSP、ETCM、TCMID、BATMAN中药材化学信息数据库挖掘TXPC组方中的活性成分化合物;通过Pubchem及Swiss Target Prediction平台预测筛选出组方作用靶点;通过Cytoscape软件构建TXPC药物-成分-靶点网络,利用Network Analyze插件分析筛选出TXPC组方中的核心成分;通过OMIM、Disgenet和Genecards疾病靶点数据库构建DCM靶点合集;通过R Studio软件映射出TXPC靶点及DCM靶点交集;利用String在线蛋白功能分析网站构建TXPC-DCM-靶点网络,并导入Cytoscape软件进行可视化,构建PPI网络,通过Network Analyze分析筛选出PPI网络的核心靶点;通过MCODE插件对PPI网络进行模块分析;最后通过Matescape在线富集分析平台对PPI网络进行GO及KEGG分析,得到核心靶点的生物过程（BP）、分子功能（MF）、细胞组成（CC）及富集通路分析结果。2、方法二:本实验采用高脂饮食喂养联合小剂量STZ腹腔注射的方法制备DCM大鼠模型。在高脂饮食喂养4周后一次性予35mg/kg STZ腹腔注射,STZ注射6周后,采用随机数字法将高脂喂养大鼠分为模型组（Model）、糖心平高（TXPG）、中（TXPZ）、低剂量（TXPD）组及二甲双胍组（Met）,正常饮食组为正常对照组（Control）。分组后连续给药6周,正常对照组和模型对照组采用0.9%NaCl溶液1ml/100g灌胃;糖心平低、中、高剂量组分别使用0.21g/kg、0.42g/kg、0.84g/kg TXPC药粉水溶液1ml/100g灌胃;二甲双胍组采用每日0.15g/kg二甲双胍药粉水溶液1ml/100g灌胃。给药时于第2、4、6周测大鼠空腹血糖;给药结束后,生化测大鼠TC、TG、LDL-C、HDL-C、INs水平,计算HOMA-IR 值;ELISA 检测大鼠血清 CKMB、CRP、BNP、6-KPG、ET-1、TXB2、MDA水平,并通过心脏病理切片观察心肌组织损伤情况,以明确TXPC对DCM的治疗作用;通过心脏超声检查评估心脏功能,利用舌下注射垂体后叶加压素制备大鼠急性心肌缺血模型,观察TXPC治疗后大鼠心电图ST-T段位移;进一步组织学检测DCM大鼠心肌组织 TNF-α、IL-1β、SOD、ATP、ADP、ATP/ADP 水平,蛋白印迹法检测大鼠心肌 NF-κBp65、GLUT4、TGF-β1、PI3KP85、P-AKT、P-GSK3 β 蛋白及 PI3KP85mRNA、P-AKT mRNA、P-GSK3βmRNA、NF-κBp65 mRNA、GLUT4 mRNA转录水平,以探究TXPC药效机制。研究结果1、方法一结果:糖心平组方中活性有效成分共107个;核心成分包括:槲皮素、山奈酚、木犀草素等;共得到对应靶点192个,关键靶点主要包括:AKT1、EGFR、SRC等;通过模块分析共聚类出4个功能模块,其中模块1和模块2所包含靶点数目较多,对糖心平胶囊对糖尿病心肌病的整体治疗效果具有较强的代表性;共富集到生物过程961个;分子功能75个;细胞组成60个;信号通路218条,能通过PI3K/Akt信号通路、MAPK信号通路、内分泌抵抗等途径发挥对DCM的治疗作用。2、方法二结果:①TXPC能够改善DCM大鼠的FPG,降低大鼠TG、TC、LDL-C水平,同时升高HDL-C水平,减轻心肌组织中的脂质沉积,发挥调节糖脂代谢得作用;②TXPC能够降低心肌损伤指标CRP、BNP、CKMB水平,改善心肌纤维断裂、损伤等,可能通过降低炎症水平,发挥心肌保护效应;③TXPC能够降低血清ET-I及TXB2,同时升高6-KPG水平,调节血管内皮细胞功能,预防心肌微血管病变;④TXPC能够降低血清MDA水平,缓解氧化应激损伤;⑤TXPC能降低DCM大鼠LVIDs水平,升高LVIDD、SV、FS及EF水平,维持心脏结构及形态的稳定,从而发挥心肌保护的作用;⑥TXPC能抵抗加压素所引起的ST-T抬高,提高心肌对急性心肌缺血的抵抗能力,从而发挥心脏保护的作用。⑦TXPC能提高DCM大鼠的ATP及ATP/ADP水平,促进GLUT4蛋白及GLUT4 mRNA转录水平的表达,通过激活PI3K/AKT/GLUT4信号通路,调节DCM大鼠能量代谢;⑧TXPC能降低DCM大鼠TNF-α水平,同时降低促炎因子IL-1β水平,抑制NF-κB蛋白表达及NF-κBmRNA转录,通过激活PI3K/AKT/NF-κB信号通路,发挥抑制炎症的作用;⑨TXPC能降低DCM大鼠GSK3β蛋白表达水平,同时降低大鼠大TGF-β1及SOD水平,通过激活PI3K/AKT/GSK-3β信号途径抑制GSK-3β蛋白及GSK-3βmRNA转录表达,发挥抗心肌细胞损伤的作用;TXPC能促进PI3K/AKT通路上靶蛋白PI3K、AKT的磷酸化及表达,同时能促进PI3KP85mRNA、p-AKT mRNA的转录水平的提高,提示TXPC对DCM治疗效应的发挥,与PI3K/AKT通路有关。研究结论1、网络药理学分析结果显示,TXPC能通过PI3K/AKT信号通路,发挥对DCM的治疗作用;2、TXPC能调节糖脂代谢,改善炎症,降低氧化应激水平,发挥血管内皮细胞保护的作用;保护心功能、抗心肌缺血,具有心脏保护的作用;3、TXPC药效的发挥与PI3K/AKT信号通路有关,通过激活PI3K/AKT信号通路,从PI3K/AKT/GLUT4、PI3K/AKT/GSK-3β及PI3K/AKT/NF-κB途径发挥对DCM的治疗作用。
张洋[2]（2021）在《罗布麻叶总黄酮及异槲皮苷对吡柔比星致心脏损伤的保护作用和机制》文中研究说明蒽环类药物,包括多柔比星（Doxorubicin,DOX）、表柔比星（Epirubicin,EPI）、吡柔比星（Pirarubicin,THP）等,广泛用于实体恶性肿瘤和血液系统肿瘤的治疗,但是蒽环类药物的心脏毒性在一定程度上限制了其临床应用。右雷佐生（Dexrazoxane,DZR）是目前FDA唯一批准使用的心脏保护药,但有报道发现DZR可能会加重化疗药物引起的骨髓抑制,并诱发第二癌的发生。因此,寻求一种减轻蒽环类药物所致心脏损伤的药物显得尤为重要。罗布麻叶总黄酮（AVLE）为罗布麻叶的主要活性成分,具有抗高血压、抗焦虑、抗抑郁和保护心脏等药理作用,随着对AVLE研究的不断深入,其对心血管系统疾病的防治作用已成为研究热点。异槲皮苷,又称槲皮素-3-O-葡萄糖苷（Isoquercitrin,IQC）是一种天然黄酮类化合物,是AVLE中有效成份之一,广泛存在于水果、蔬菜、谷物和多种饮品中,具有抗氧化应激、抗肿瘤、保护心血管、降血糖及抗过敏等多种药理作用。非编码RNA（noncoding RNA,ncRNA）在许多重要生命活动中发挥功能,随着微小RNA（microRNA,miRNA）在人类疾病中的作用逐渐被揭示,深化miRNA的研究对于理解疾病发生发展的分子机制具有现实意义。本研究首先通过体内、外实验探讨IQC和AVLE对THP诱导的心脏损伤的保护作用及机制,然后通过生物信息学分析构建miR-190a-5p/Phlpp1/AKT/Bcl-2信号通路,以此信号通路为切入点,利用AKT阻断剂及miRNA过表达/沉默瞬转细胞,从细胞水平加以验证,以期为开发和利用以IQC和AVLE为药效成分的中药资源提供科学依据。研究分为5部分:（1）AVLE对THP诱导大鼠心脏损伤的保护作用及机制首先预防性灌胃给予大鼠不同剂量的AVLE 1w,然后尾静脉注射THP（3mg/kg/w,6w）建立大鼠慢性心脏损伤模型,同时继续灌胃给予大鼠AVLE。观察大鼠心电图和大鼠心脏组织形态变化,并对血液动力学、血清BNP、CK-MB、CTn T和LDH水平、氧化应激相关指标、心肌线粒体膜m RNA水平及AKT/Bcl-2信号通路相关蛋白进行检测,探讨AVLE对THP诱导大鼠心肌损伤的保护作用及其可能的分子机制。结果如下:（1）AVLE中、高剂量组可提高THP所致心脏损伤大鼠的心率,减轻QRS波群改变,降低LVEDP,提高LVSP和±dp/dtmax水平;降低血清BNP、CK-MB、CTn T和LDH水平,提高SOD活性,降低MDA含量;改善THP所致的心肌病理学改变;降低心脏组织内线粒体膜VDAC1、ANT1和CYPD m RNA的表达,改善线粒体膜通透性。AVLE低剂量组对上述指标改善不明显。（2）AVLE抑制Cyt c由线粒体向胞浆的释放;提高pro-caspase-9、pro-caspase-3、p-AKT和Bcl-2蛋白的表达,降低Bax、cleaved-caspase-3的蛋白水平,减轻THP诱导心脏组织细胞凋亡的发生。（2）AVLE的制备及成份分析采用醇提法制备AVL提取物,大孔树脂进行纯化,富集其中黄酮类化合物。利用液相色谱-质谱串联法（HPLC-ESI-MS/MS）和高效液相色谱法（HPLC）分析技术对AVLE进行定性和定量分析。结果如下:AVLE中含有7个黄酮类化合物,随后对其中4个主要单体化合物进行定量分析,确定IQC为AVLE中含量最多的化合物。（3）AKT在AVLE和IQC保护THP诱导H9c2细胞损伤中的作用以THP诱导H9c2细胞损伤,加入IQC/AVLE及AKT inhibitor,应用MTT、DCFH-DA荧光探针、ELISA、Mito-Tracker Red CMXRos探针、JC-1探针、TUNEL、RT-qPCR、Western blot等方法,探讨AKT在AVLE和IQC保护THP诱导H9c2细胞损伤中的作用。结果如下:（1）IQC（5～500μM）和AVLE（5～400μg/ml）在不同时间点（6、12、24及36h）对H9c2细胞无毒性作用;以5μM THP处理H9c2细胞24h,可使细胞发生凋亡,存活率降低;而IQC和AVLE均可抑制THP诱导的H9c2细胞损伤,最佳给药浓度及时间为70μM及70μg/ml,24h。IQC或AVLE均可降低THP处理H9c2细胞内ROS含量,提高SOD活性,降低MDA含量;提高H9c2细胞内线粒体活力,改善细胞线粒体膜电位,降低线粒体膜相关基因的表达。（2）IQC和AVLE提高H9c2细胞内pAKT的蛋白表达,抑制Cyt c由细胞线粒体向胞浆释放,降低细胞凋亡率,同时降低胞浆内cleaved-caspase-3蛋白表达水平,提高pro-caspase-9和procaspase-3的蛋白水平和Bcl-2/Bax的蛋白比值;应用AKT inhibitor可阻断IQC或AVLE对THP诱导细胞损伤的保护作用,说明AKT为IQC或AVLE发挥心脏保护作用的节点分子。（4）THP诱导大鼠心脏损伤miRNA芯片生物信息学分析及miR-190a-5p/Phlpp1/AKT/Bcl-2信号通路的构建和验证对课题组前期构建THP所致大鼠心脏损伤的miRNA表达谱进行分析,最终确定miR-190a-5p作为研究对象。通过对miR-190a-5p靶基因预测和KEGG富集分析,发现在Phlpp1 m RNA的3’UTR处有miR-190a-5p的潜在结合位点,靶向性较好,且Phlpp1位于AKT上游调控分子中;同时搜索AVL靶基因并对其进行KEGG富集分析,结果发现AVL可参与调控AKT及其下游Bcl-2家族蛋白。因此,构建出miR-190a-5p/Phlpp1/AKT/Bcl-2信号通路。采用RT-qPCR和Western blot法对预测得到的miR-190a-5p及其靶基因Phlpp1在THP所致大鼠心脏损伤组织/H9c2细胞中进行初步验证,结果发现IQC和AVLE可提高miR-190a-5p的表达,抑制Phlpp1基因和蛋白表达。采用双荧光素酶报告基因实验证实,miR-190-5p可直接调控Phlpp1,且只有唯一一个结合位点。（5）miR-190a-5p在THP诱导H9c2细胞损伤中的作用及机制通过构建miR-190a-5p过表达/沉默瞬转H9c2细胞,采用DCFH-DA探针、ELISA、Mito-Tracker Red CMXRos探针、JC-1探针、RT-qPCR、TUNEL和Western blot实验方法,探讨miR-190a-5p在THP处理H9c2细胞损伤中的作用及机制。结果如下:（1）miR-190a-5p mimics降低H9c2细胞内ROS的含量,提高SOD活性,降低MDA含量;同时提高H9c2细胞线粒体活力和膜电位,降低线粒体膜基因的表达;而转染miR-190a-5p inhibitor对THP处理H9c2细胞无改善作用。（2）miR-190a-5p mimics升高H9c2细胞内miR-190a-5p的表达,抑制Phlpp1基因及蛋白,升高p-AKT蛋白表达,并抑制Cyt c由线粒体向胞浆释放,降低细胞凋亡率,同时降低胞浆内cleaved-caspase-3蛋白表达,提高procaspase-9和pro-caspase-3的蛋白水平和Bcl-2/Bax蛋白比值;而转染miR-190a-5p inhibitor对THP处理的H9c2细胞中上述基因及蛋白无改善作用。综上所述:本研究分别从整体动物水平和细胞水平探讨IQC和AVLE对THP诱导大鼠心脏组织/H9c2细胞损伤的保护作用及其机制,所得结论如下:1.在体内研究中,AVLE对THP所致大鼠心肌损伤具有保护作用。2.通过对AVLE进行定性和定量分析,推测出7个黄酮类化合物,其中IQC是含量最多的化合物,为16.7%。3.在体外研究中,IQC和AVLE对THP诱导的H9c2细胞的损伤具有保护作用,且二者的保护作用相等。4.IQC和AVLE对THP诱导心脏/心肌细胞损伤的保护作用是通过调控miR-190a-5p/Phlpp1/AKT/Bcl-2信号通路实现的,且AKT为二者发挥心脏保护作用的节点分子。
许火龙[3]（2021）在《槲皮素对肾间质纤维化中p-AMPKα蛋白和TGF-β1/Smad3信号通路的作用研究》文中研究说明目的:研究槲皮素（quercetin,Que）对单侧输尿管梗阻（unilateral ureteral obstruction,UUO）大鼠肾组织中磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶α（Phosphorylationalpha-AMP-activated protein kinase,p-AMPKα）蛋白表达及TGF-β1/Smad3信号通路的影响,探究槲皮素在抗肾纤维化过程中可能存在的作用机制。方法:（1）选取72只体重约200±10g的雄性Wistar大鼠,随机分成假手术组（S ham组）、模型组（UUO组）、槲皮素治疗组（Que组）,每组24只。（2）Sham组、UUO组、Que组大鼠均进行腹腔内注射麻醉（10%水合氯醛0.3ml/100g）,再持镊子夹住碘伏棉球进行术口消毒,覆盖无菌孔巾,用手术刀在手术部位竖形切开,第一步先切开皮肤,接着切开皮下组织,然后钝性分离肌肉层,再剪开壁腹膜和脏腹膜等各层,使左侧输尿管游离:（1）Sham组大鼠只剥离输尿管,不结扎输尿管;（2）UUO组、Que组大鼠结扎左侧输尿管。（3）Que组以100mg/kg/d槲皮素（用DMSO溶解）,在制模手术前1天给予灌胃,1次/天,给予Sham组和UUO组灌胃等量的0.9%生理盐水。（4）每组在造模后的第3、7、14天末随机分批处死各8只大鼠,把梗阻肾组织取出来,再进行中性甲醛液固定、脱水、石蜡包埋、切片,然后将其行HE、Masson染色,进而用400X光学显微镜观察,免疫组化检测（p-AMPKα、TGF-β1、Smad3）,通过Image-Pr o Plus6.0软件计算平均光密度值（AOD）,再使用SPSS25.0统计学软件进行数据分析。结果:1、HE染色结果:Sham组肾组织没有出现很明显的病理改变,组内3、7、14天差别无统计学意义（P>0.05）;在各相应时间点,UUO组比Sham组TIS稍增高,差异具备统计学意义（P<0.05）;UUO组梗阻第3天时,梗阻肾形态发生改变,肾小管慢慢出现损伤,梗阻7天、14天时,肾小管逐步扩张、有些小管出现萎缩破坏、炎性细胞浸润,肾小管间质损伤评分（TIS）渐渐增高,组内3天、7天、14天差别具备统计学意义（P<0.05）;在各相应时间点,Que组比UUO组TIS稍降低,差异具备统计学意义（P<0.05）。2、Masson染色结果:Sham组间质胶原纤维绿染面积较小,组内3、7、14天差异不具备统计学意义（P>0.05）;在各相应时间点,UUO组比Sham组肾间质纤维化面积比（RIF指数）稍增高,差别具备统计学意义（P<0.05）;UUO组梗阻第3天时,开始出现间质纤维,梗阻7天、14天时,肾间质胶原纤维绿染面积逐步增多,RIF指数逐渐升高,组内3天、7天、14天差别有统计学意义（P<0.05）;在各相应时间点,Que组比UUO组RIF指数有所降低,差别有统计学意义（P<0.05）。3、免疫组化结果:（1）p-AMPKα蛋白主要表达在肾小管上皮细胞胞质及胞核,Sham组p-AMPKα蛋白大量表达,组内3天、7天、14天差异不具备统计学意义（P>0.05）;在各相应时间点,UUO组与Sham组相比,p-AMPKα蛋白的表达减少,差别具备统计学意义（P<0.05）;UUO组大鼠随着梗阻时间延长,p-AMPKα蛋白的表达逐渐减少,UUO组3天、7天、14天差异具备统计学意义（P<0.05）;在各相应时间点,Que组与UUO组相比,p-AMPKα蛋白的表达有所增加,差异具备统计学意义（P<0.05）。（2）TGF-β1蛋白表达主要在肾小管上皮细胞,Smad3蛋白表达主要在肾小管上皮细胞胞质及胞核,Sham组TGF-β1、Smad3蛋白较少表达,组内3天、7天、14天差别无统计学意义（P>0.05）;在各相应时间点,UUO组与Sham组相比,TGF-β1、Smad3蛋白的表达增加,差异具备统计学意义（P<0.05）;UUO组大鼠随着梗阻时间延长,TGF-β1、Smad3蛋白的表达逐渐增加,UUO组3天、7天、14天差别有统计学意义（P<0.05）;在各相应时间点,Que组与UUO组相比,TGF-β1、Smad3蛋白的表达有所减少,差异具备统计学意义（P<0.05）。结论:1.p-AMPKα蛋白表达降低、TGF-β1和Smad3蛋白表达升高,提示AMPK及TGF-β1/Smad3信号通路参与肾间质纤维化过程。2.槲皮素治疗后,p-AMPKα蛋白表达升高,TGF-β1和Smad3蛋白表达降低,说明槲皮素可能激活AMPK,作用于TGF-β1信号通路,抑制Smad3磷酸化,导致Smad3表达下降,从而减轻肾纤维化。
刘俊丽[4]（2021）在《新型Pyxinol衍生物的合成、生物活性及药代动力学研究》文中认为为改善先导化合物pyxinol的药代动力学性质,进一步增强其药理活性,本论文在综述pyxinol和其衍生物、以及抗心肌缺血药物研究进展基础上,综合运用药物合成、生物活性筛选以及药代动力学等多项技术,高效制备了系列新pyxinol脂肪酸酯衍生物、系统筛选了抗心肌缺血和抗心衰生物活性、早期评价了药代动力学参数,成功筛选出一个具有良好心脏保护作用的创新候选化合物。论文所取得的主要创新性成果如下:（一）新型pyxinol脂肪酸酯衍生物的合成为避免所合成的衍生物脂溶性过强,论文采用28个碳的饱和脂肪酸,与pyxinol的C3/C12/C25-OH进行酯化,设计并合成了系列衍生物。通过理化性质分析、核磁共振及高分辨率质谱鉴定了32个衍生物的结构,包括:C-3位单酯化产物7个、C-12位单酯化产物7个、C-3,12位双酯化产物5个、C-12,25位双酯化产物6个、C-3,12,25位三酯化产物7个。除化合物1,7外,其余30个衍生物均为首次合成的新化合物。（二）Pyxinol脂肪酸酯衍生物心脏保护作用及机制研究基于文献报道的先导化合物pyxinol具有良好的心脏保护作用,论文对所合成的pyxinol脂肪酸酯衍生物继续开展了心脏保护作用的评价及作用机制的探讨,主要包括抗心肌缺血和抗心衰两个方面的研究。1、对H2O2诱导的H9c2心肌细胞损伤的影响以H2O2刺激H9c2心肌细胞,建立体外心肌细胞损伤模型,采用CCK-8法测定32个脂肪酸酯衍生物对损伤细胞活力的影响。结果表明,pyxinol及其衍生物对H9c2细胞损伤呈现不同程度的保护作用,活性强弱依次为C-3位单酯化产物>C-3,12,25位三酯化产物>C-3,12位双酯化产物>pyxinol>C-12位单酯化产物>C-12,25位双酯化产物,推断C-3位酯键对活性贡献最大,为主要活性基团。所有衍生物中,化合物5（3-己酰-pyxinol）对H9c2细胞损伤的保护作用最强,且呈剂量依赖性,可能是通过提高细胞内SOD活性、减少MDA生成、抑制脂质过氧化反应进而减轻细胞损伤程度来发挥心肌细胞保护作用。2、化合物5对心肌缺血模型大鼠的干预作用采用左前降支冠状动脉结扎法建立大鼠急性心肌缺血模型,灌胃给予化合物5（5、10、20 mg/kg）。以心脏收缩力、心肌梗死面积、LDH、AST、CK、c Tn T、MDA及SOD为评价指标,考察治疗性给予化合物5的作用。结果表明,与模型组比较,化合物5可呈剂量依赖性地减少左心室容积（LVVs）和心肌梗死面积、增加射血分数（EF）、提高心脏收缩力;同时也明显降低LDH、CK、AST、c Tn T和MDA水平,提高SOD活性。与阳性对照药美托洛尔呈类似作用,说明化合物5对心肌缺血大鼠的心脏具有良好的保护作用。3、Pyxinol脂肪酸酯衍生物对ACE酶的抑制作用ACE在心衰中起重要作用,是充血性心力衰竭的病因。论文采用比色法,以赖诺普利为阳性对照药,测定了32个脂肪酸酯衍生物对ACE酶的体外抑制作用。其中化合物5和化合物9（3,12,25-三丙酰-pyxinol）显示出与赖诺普利（抑制率89.17%）相似的活性,抑制率分别为90.31%和87.02%,优于先导化合物pyxinol（57.23%）。化合物5、9和赖诺普利的IC50值分别为105 n M、114 n M和81 n M。研究证明化合物5、9在体外显示出良好的ACE酶抑制活性。分子对接结果表明,化合物5和9可选择性抑制ACE酶的C结构域。4、化合物5和9对心衰斑马鱼模型的干预作用斑马鱼是研究心力衰竭的理想模式动物之一。论文选择受精后48 h的野生型AB系斑马鱼,分别给予化合物5和9（0.5,1,10μg/m L）预处理4 h,加入维拉帕米建立心力衰竭模型,以心率、心脏输出、射血分数、缩短分数、心脏扩大以及静脉充血为指标,评估斑马鱼的心脏功能。结果表明,浓度为1μg/m L的化合物5和9均可减少心脏扩张和静脉充血、增加心输出量、心率、射血分数和缩短分数。其中化合物5生物活性强于化合物9,并显示出与依那普利相似强度的活性。5、化合物5抗心衰的代谢组学研究采用基于UPLC-Q/TOF-MS代谢组学技术,对化合物5干预心衰斑马鱼进行分析。结果表明,与正常斑马鱼比较,心衰斑马鱼中多种内源性代谢物含量发生明显改变,经化合物5干预,胆碱、丙酮酸、花生四烯酸等25种内源性代谢物的水平可显着回调,推断化合物5通过干预花生四烯酸代谢、甘油磷脂代谢、亚油酸代谢、鞘脂代谢、叶酸生物合成代谢、丙酮酸代谢、苯丙氨酸代谢和嘌呤代谢等8条代谢途径发挥抗心衰作用。首次发现叶酸生物合成代谢途径与心衰有关。（三）灌胃给予化合物5的大鼠药代动力学研究1、灌胃给予化合物5的“血药浓度-时间曲线”研究首次建立了HPLC-ELSD分析大鼠血浆中化合物5的定量方法,并测定了灌胃给予化合物5（20.0、40.0、80.0 mg/kg）的大鼠血药浓度-时间曲线,获得药动学参数。结果表明,化合物5体内动力学属线性过程,且在大鼠体内的药代动力学行为不存在性别差异。与文献报道的先导化合物pyxinol比较,化合物5在体内消除缓慢、消除时间明显延长、循环时间较长。首次对主要代谢产物pyxinol血药浓度进行了定量分析。结果表明,在化合物5达峰前,血浆中主要含有原型药物;在达峰至20 h的消除相期间,血浆中同时含有原型药物和其代谢产物;给药20 h至40 h期间,血浆中则主要含有代谢产物pyxinol。2、灌胃给予化合物5的生物利用度研究首次研究了静脉注射化合物5（10.0 mg/kg）的大鼠血药浓度-时间曲线,获得了T1/2、AUC、CL、Vd等基本参数。并以静脉给药AUC（0-t）为参比,计算出灌胃给予化合物5的绝对生物利用度为41.36%,与文献报道的先导化合物pyxinol的绝对生物利用度（43%）相似。3、化合物5的脂水分配系数测定化合物的亲脂性对整个药代动力学过程都有影响,尤其影响口服药物在机体的吸收。论文模拟胃肠道不同部位,采用摇瓶法使化合物5在p H 2.0、p H 5.8和p H 7.4等条件下于水-正辛醇缓冲溶液中达分配平衡,继而采用HPLC-ELSD技术测定两相中化合物5的浓度,获得了化合物5的脂水分配系数Log P为4.18,小于先导化合物pyxinol的Log P值（3.76）,说明结构中引入脂肪酰基团,可增加脂溶性。4、灌胃给予化合物5的生物转化研究应用UPLC-Q/TOF-MS技术结合UNIFI代谢物分析平台,首次对灌胃给予化合物5（80.0 mg/kg）的大鼠血浆、尿、粪及胆汁中主要代谢产物进行快速分析和鉴定。共鉴定了21个代谢物,包括I相代谢物6个和II相代谢物15个。I相代谢反应包括脱水、脱氢、加水、氧化、去己酰基、去己酰氧基等,II相代谢反应包括甲基化、乙酰化、磷酸化、硫酸化、半胱氨酸结合、甘氨酸结合、谷胱甘肽结合和葡萄糖醛酸化等。综上所述,本论文丰富了pyxinol的结构修饰,也筛选出一个活性良好、生物利用度较高的创新候选药物——化合物5（3-己酰-pyxinol）。该化合物具有良好的抗心肌缺血和抗心衰活性,体内消除缓慢、生物利用度较高。论文为其进一步研究与开发提供了理论基础和科学数据。
孙敬辉[5]（2021）在《miR-489调控心肌纤维化的机制及人参皂苷Re的干预作用研究》文中指出心肌纤维化（myocardial fibrosis,MF）是众多心血管疾病发展至后期常见的病理改变,常常引起心肌收缩和舒张功能障碍,是心室重构不断进展和不可逆的主要原因。MF的发病机制十分复杂,涉及到神经体液、生长因子、促炎性细胞因子和基因转录之间复杂的相互作用。心脏成纤维细胞（cardiac fibroblasts,CFs）是MF最主要的效应细胞,可在缺血、炎性因子等促纤维化因素的刺激下分化为肌成纤维细胞。激活的肌成纤维细胞会分泌大量的细胞外基质蛋白,导致心室硬度增加,顺应性降低和心肌电信号传导异常,诱发难治性心力衰竭、恶性心律失常,严重影响心血管疾病的预后。目前MF的治疗尚缺乏特效药物,因此探寻MF发病机制的关键因子及安全可靠的治疗药物,对于MF的治疗刻不容缓。MircoRNAs（miRNAs）是一类在真核细胞中广泛表达的短链非编码RNA。它们可以直接与靶基因的3’UTR区域结合,诱导靶基因mRNAs分解或阻碍其翻译,从而调节多种生理功能和病理过程。miR-489在心肌细胞和CFs中广泛表达。在心肌细胞中miR-489过表达能够下调下游髓样分化因子88（myeloid differentiation factor 88,myd88）的水平,减轻血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ,AngⅡ）诱导的心肌肥厚。重要的是,miR-489转基因小鼠体内AngⅡ诱导的MF明显减轻,说明miR-489能够抑制AngⅡ诱导的MF,miR-489可能是治疗MF的一个潜在靶点。然而,miR-489在MF中的调控机制尚不清楚,尤其是在心肌梗死诱导的MF中miR-489是否也具有同样作用值得进一步研究。中医学中没有MF的直接论述,但MF是众多心血管疾病发展至后期的病理改变,是一种相对慢性渐进性病变。中医传统理论认为“久病多虚”、“久病多瘀”,因此治疗当以补气活血为法。人参是传统医学中补气的要药,具有补益元气,健脾补肺,安神益智等功效,以及抗心肌缺血、抗心律失常、抗动脉粥样硬化和抗纤维化等药理作用。人参皂苷Re是人参的主要活性成分之一,课题组前期研究发现,人参皂苷Re具有抗心肌梗死后MF的作用,并且可以调控Smad2/3的表达。既往研究证实,Smad3是miR-489的直接下游靶点,那么人参皂苷Re是否可以通过调节miR-489来发挥抗MF的作用,值得进行深入研究。本研究通过体外构建miR-489过表达和抑制的CFs模型,证实miR-489对MF和myd88/核因子κB（nuclear factor kappa B,NF-κB）信号通路具有调控作用。在此基础上,以人参皂苷Re为干预手段,通过结扎左冠状动脉前降支构建心肌梗死小鼠模型和AngⅡ干预的乳鼠原代CFs模型,观察人参皂苷Re的抗MF作用,并探讨人参皂苷Re对miR-489及其下游myd88/NF-κB通路的调控作用,为中医药抗MF,改善心血管疾病患者的预后提供科学依据。研究一 miR-489调节心肌纤维化的机制研究目的:在正常培养的CFs和AngⅡ干预的CFs中转染miR-489 mimic和inhibitor观察miR-489模拟物和抑制物对CFs表型分化、迁移和分泌等细胞生物学行为的影响,并探讨其作用机制。方法:提取乳鼠原代CFs,经波形蛋白免疫荧光鉴定纯度后,按照如下分组:（1）在正常培养条件下的CFs中转染miR-489 mimic,构建miR-489过表达模型。CFs分为3组:正常组（Normal）、miR-489过表达组（mimic）、miR-489阴性对照组（mimic-NC）。（2）在AngⅡ干预的CFs中转染miR-489 mimic,构建miR-489过表达模型。CFs 分为 3 组:AngⅡ组（AngⅡ）、AngⅡ+miR-489 过表达组（AngⅡ+mimic）、AngⅡ+miR-489 阴性对照组（AngⅡ+mimic-NC）。（3）在正常培养条件下的CFs中转染miR-489 inhibitor,构建miR-489抑制模型。CFs 分为 3 组:正常组（Normal）、miR-489 抑制组（inhibitor）、miR-489阴性对照组（inhibitor-NC）。（4）在AngⅡ干预的CFs中转染miR-489 inhibitor,构建miR-489抑制模型。CFs 分为 3 组:AngⅡ组（AngⅡ）、AngⅡ+miR-489 抑制组（AngⅡ+inhibitor）、AngⅡ+miR-489 阴性对照组（AngⅡ+inhibitor-NC）。采用qPCR技术检测miR-489 mimic转染的CFs中miR-489的表达水平,验证转染效果。采用Western blot技术检测各组中α-SMA的表达情况,观察CFs的分化情况;检测Collagen Ⅰ和Collagen Ⅲ蛋白表达,观察CFs胶原蛋白的分泌情况;检测CFs中myd88、NF-κB p65和p-NF-κB p65的表达情况,观察miR-489的调控作用。结果:（1）经波形蛋白免疫荧光检测证实提取的CFs纯度在95%以上,符合实验要求。（2）与Normal组和mimic-NC组比较,mimic组miR-489的表达水平显着升高（P<0.01）,Normal组和mimic-NC组之间无显着性差异（P>0.05）,说明 miR-489 mimic 转染成功。与 Normal 组和 inhibitor-NC 组相比,inhibitor 组myd88表达显着上调（P<0.01）,Normal组和inhibitor-NC组之间无统计学差异（P>0.05）,说明miR-489 inhibitor转染成功。（3）在正常条件下培养的CFs和AngⅡ干预的CFs中,miR-489过表达均能够显着抑制myd88、α-SMA、CollagenⅠ和Collagen Ⅲ的表达,降低p-NF-κB p65/p65的比值;抑制miR-489能够促进myd88、α-SMA、Collagen Ⅰ和 Collagen Ⅲ的表达,上调 p-NF-κBp65/p65 的比值。结论:在正常培养的CFs和AngⅡ干预的CFs中miR-489过表达均能够抑制下游myd88/NF-κB通路的活化,减轻CFs的纤维化反应;抑制miR-489能够激活下游myd88/NF-κB信号通路,促进CFs的纤维化反应。这表明在生理和病理情况下CFs中miR-489均可调节myd88/NF-κB信号通路,改善心肌纤维化反应。研究二人参皂苷Re调节心肌梗死后心肌纤维化的机制研究目的:观察人参皂苷Re对急性心肌梗死后小鼠心功能、血清学标志物、组织病理学改变和相关基因蛋白表达的影响,探讨人参皂苷Re改善梗死后MF的分子机制。方法:通过结扎左冠状动脉前降支构建C57BL/6小鼠心肌梗死后MF模型。小鼠被随机分为4组:假手术组（Sham）、模型组（Model）、低剂量人参皂苷Re组（L,19.5mg/kg/d）和高剂量人参皂苷Re组（H,39mg/kg/d）,每组10只。术后第二天开始灌胃给药,1次/天,连续灌胃四周。心脏超声检测各组小鼠左室射血分数（LVEF）和左室短轴缩短率（LVFS）,观察心功能情况;通过心重指数（HWI）、心胫比（HW/TL）以及心肌中ANP、BNP和β-MHC mRNA的表达,观察心梗后心肌代偿性肥厚情况;通过ELISA方法检测血清中心肌损伤（CK-MB）、心力衰竭（BNP）、肝肾功能（ALT、S-Cr）和 RAAS（AngⅡ）等标记物的含量;通过HE和Masson染色,观察心梗后心肌组织及纤维化的病变情况;Western blot 检测 myd88、p-NF-κB p65、NF-κB p65、α-SMA、Collagen Ⅰ和Collagen Ⅲ等相关蛋白表达;qPCR技术检测miR-489和myd88的表达形况。结果:（1）与Sham组相比,Model组LVEF和LVFS显着减低（P<0.01）;与Model组比较,低高剂量人参皂苷Re组LVEF和LVFS明显升高（P<0.01）。（2）与Sham组比较,Model组CK-MB、BNP和AngⅡ水平显着升高（P<0.01）;与Model组比较,低高剂量人参皂苷Re组CK-MB、BNP和AngⅡ水平显着下降（P<0.05）,ALT 和 S-Cr 无明显变化（P>0.05）。（3）与 Sham 组比较,Model组HWI、HW/TL以及心肌中ANP、BNP和β-MHC mRNA的表达显着升高（P<0.01）,给以低高剂量人参皂苷Re干预后,这些指标明显下降（P<0.05）。（4）与Sham组比较,Model组心肌结构排列紊乱,肌丝较粗,呈波状变化,伴有大量炎症细胞浸润和胶原蛋白沉积。给予人参皂苷Re干预后组织病理改变明显减轻。（5）与 Sham 组比较,Model 组 myd88、p-NF-κB p65、α-SMA、Collagen Ⅰ和CollagenⅢ的表达明显升高,miR-489的表达显着下调（P<0.01）;与Model组比较,低高剂量人参皂苷Re组myd88、p-NF-κB p65、α-SMA、Collagen Ⅰ和Collagen Ⅲ的表达明显降低,miR-489的表达显着上调（P<0.05）。以上检测中低高剂量人参皂苷Re组之间无统计学差异（P>0.05）。结论:人参皂苷Re能够改善心肌梗死后小鼠的心脏功能,抑制心肌代偿性肥厚,减轻心肌缺血损伤和胶原蛋白沉积,改善组织病理学病变,且未发现明显肝肾毒性。其机制可能与调节心肌梗死后小鼠心肌中miR-489/myd88/NF-κB信号通路有关。研究三 人参皂苷Re干预AngⅡ诱导CFs生物学行为改变的机制研究目的:采用AngⅡ诱导C57BL/6乳鼠原代CFs,观察人参皂苷Re对CFs分化、迁移和分泌等生物学行为的影响,并探讨其相关机制。方法:提取乳鼠原代CFs后,通过CCK-8法筛选人参皂苷Re的安全浓度范围。CFs被随机分为5组:正常组（Normal）、模型组（Model）和人参皂苷Re低、中、高剂量组。给以相应药物处理后,收集细胞进行相关检测。采用Transwell实验和划痕实验检测各组CFs的迁移情况;采用免疫荧光和Western blot技术检测α-SMA、Collagen Ⅰ和Collagen Ⅲ的表达情况,观察CFs分化为肌成纤维细胞和胶原蛋白的分泌情况;通过qPCR技术和Western blot技术检测miR-489、myd88、NF-κB p65 和 p-NF-κBp65 的表达情况。结果:（1）经 CCK-8 法选定 50μmol/L、100μmol/L 和 200μmol/L 为人参皂苷Re的干预浓度。（2）与Normal组比较,Model组穿过Transwell小室的CFs数量显着增多,迁移距离明显增长（P<0.01）;与Model组相比,低中高剂量人参皂苷Re均能减少穿过Transwell小室的CFs数量,缩短迁移距离（P<0.01）。（3）与 Normal 组比较,Model 组α-SMA、Collagen Ⅰ和 Collagen Ⅲ的荧光强度和蛋白表达量均明显升高（P<0.01）;与Model组相比,低中高剂量人参皂苷Re均能降低α-SMA、Collagen Ⅰ和Collagen Ⅲ的荧光强度和蛋白表达量（P<0.01）。（4）与Normal组比较,Model组miR-489水平显着降低,myd88的表达和p-NF-κB p65/p65比值显着升高（P<0.01）,低中高剂量人参皂苷Re均能抑制这种趋势（P<0.05）。以上检测中低中高剂量人参皂苷Re组之间未发现统计学差异（P>0.05）。结论:人参皂苷Re能够抑制AngⅡ诱导的CFs迁移、表型分化和分泌等生物学行为的改变;其机制可能与调节AngⅡ诱导的CFs中miR-489/myd88/NF-κB信号通路有关。
谭亮[6]（2021）在《基于自噬调控巨噬细胞表型转化探讨三七皂苷R1改善动脉粥样硬化的研究》文中研究指明目的本研究经在体实验,以载脂蛋白E基因（ApoE-/-）敲除小鼠为动物模型,明确三七皂苷R1（Notoginsenoside R1,NR1）通过诱导自噬,调节脂质代谢、介导氧化应激、抑制炎症反应,改善动脉粥样硬化（Atherosclerosis,AS）的作用。并经离体实验,以自噬为切入点,深入探讨NR1经PI3k/Akt/mTOR信号通路诱导自噬促进巨噬细胞由M1型向M2型转化减轻炎症反应的作用及机制,为AS的靶点治疗提供新的理论依据。方法1、理论部分:回顾了自噬作为一种调节方式改善AS病变的研究进展;深入分析了在介导炎症反应过程中自噬与巨噬细胞表型转化的相关性;参考NR1在心血管和神经系统疾病中的研究;并结合扶正祛邪理论探讨自噬与AS中医病机的关联;为诠释AS的中医治疗原则及基于自噬探讨NR1调控巨噬细胞表型转化抗AS提供理论依据。2、体内实验:ApoE-/-小鼠高脂饲喂12周建立AS模型,随机分为:空白组,不作特殊给药;NR1组,每日按25mg/kg行腹腔注射;vehicle组:每日腹腔注射与NR1组等体积的PBS,持续8周。（1）称量小鼠体重;（2）自动生化仪:测定甘油三酯（triglycerides,TG）、总胆固醇（total cholesterol,TC）、低密度脂蛋白胆固醇（low-density lipoprotein-cholesterol,LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（high-density lipoprotein-cholesterol,HDL-C）;（3）生化试剂盒:测定谷胱甘肽过氧化物酶（Glutathione peroxidase,GSH-Px）、超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase,SOD）和丙二醛（malondialdehyde,MDA）;（4）酶联免疫吸附实验检测白细胞介素-6（interleukin-6,IL-6）、白细胞介素-10（interleukin-10,IL-10）;（5）苏木精伊红染色法（hematoxylin eosin staining,HE）检测主动脉根部斑块面积;（6）油红O染色检测主动脉斑块脂质沉积;（7）天狼猩红染色（Picric Sirius red,PSR）检测斑块胶原纤维含量。（8）免疫荧光法:检测CD68、α-平滑肌肌动蛋白（smooth muscle-actin,α-SMA）。（9）透射电子显微镜:观察自噬超微结构;（10）Western blot法:检测血管中p62、LC3Ⅱ/Ⅰ的表达及PI3k/Akt/mTOR信号通路中各因子及其磷酸化水平。3、体外实验:培养巨噬细胞,CCK8法测定细胞生存能力;将细胞随机分为:空白组、AngⅡ模型组、NR1组、Rapa组、3-MA组、3-MA+NR1组。并用LPS、IL-4诱导巨噬细胞向M1、M2分化后给予NR1处理细胞。（1）透射电子显微镜:观察自噬的超微结构;（2）Western blot法:检测p62、LC3Ⅱ/Ⅰ及PI3k/Akt/mTOR信号通路中各因子及其磷酸化水平;（3）流式细胞技术:检测CD16/32、CD206的表达;（4）ELISA法:检测细胞上清液中IL-6、IFN-γ、TNF-α、IL-10的水平。结果1、体内实验:ApoE-/-小鼠高脂饲喂12周后成功建立动脉粥样硬化模型。（1）体重变化:各组小鼠的体重在同时段比较无显着性差异（P>0.05）。（2）脂质代谢指标:治疗前各组小鼠TC、TG、HDL-C、LDL-C无显着差异（P>0.05）。治疗后:与同组比较,各组小鼠血清TC、TG、LDL-C均有明显下降（P<0.01）,HDL-C无明显变化（P>0.05）;三组相比,NR1组在降低血清TC、TG、LDL-C方面优于空白组和vehicle组（P<0.01）。（3）氧化应激指标:与空白组和vehicle组相比,NR1可显着升高SOD和GSH-PX活性,又可降低MDA含量（P<0.01）。（4）炎症反应指标:与空白组和vehicle组相比,NR1组血清中IL-6含量降低,IL-10含量升高（P<0.01）。（5）HE染色:与空白组和vehicle组相比,NR1能明显减少主动脉根部AS斑块面积（P<0.01）。（6）油红O染色:与空白组和vehicle组相比,NR1能明显减少AS斑块内脂质积聚（P<0.01）。（7）PSR染色:与空白组和vehicle组相比,NR1组斑块内弹力膜的胶原纤维明显增厚。（8）免疫荧光检测:与空白组和vehicle组相比,NR1能显着减少AS斑块内的巨噬细胞浸润,同时增加主动脉壁内VSMC的含量。（9）透射电镜:与空白组和vehicle组相比,NR1组自噬体增加,自噬现象明显。（10）Western blot法:与空白组和vehicle组相比,NR1能明显上调LC3Ⅱ/Ⅰ的水平（P<0.01）,抑制P62蛋白水平（P<0.01）;NR1组p-Akt和p-mTOR表达量均显着减少（P<0.01）,而总Akt和总mTOR蛋白表达量没有显着性差异（P>0.05）。2、体外实验:（1）NR1调控巨噬细胞自噬及表型的关系:（1）CCK8结果:50u M NR1孵育24h时细胞存活率最佳;（2）透射电镜:NR1组与Rapa组中可观察到自噬体增加,其余实验组自噬现象不明显;（3）Western blot法:与空白组相比,模型组LC3Ⅱ/Ⅰ的比值减小（P<0.01）,p62蛋白含量增加（P<0.01）;与模型组相比,NR1组p62表达显着降低（P<0.01）,LC3Ⅰ向LC3Ⅱ的转化增强（P<0.01）,且p62的降解和LC3Ⅰ向LC3Ⅱ的转化与阳性药Rapa组相当（P>0.05）。3-MA组LC3Ⅱ/Ⅰ的比值低下,高表达p62蛋白,3-MA与NR1共处理组,蛋白表达水平与3-MA单独处理组相似,而与NR1组相比,LC3Ⅱ/Ⅰ的比值减小（P<0.01）,p62蛋白含量增加（P<0.01）。与模型组相比,Rapa组、NR1组p-Akt和p-mTOR表达量均显着减少（P<0.01）,而总Akt和总mTOR蛋白表达量没有显着性差异（P>0.05）。（4）流式细胞术:与空白组比较,模型组CD16/32表达显着增加（P<0.01）,而CD206的表达两组间差异无统计学意义（P>0.05）;与模型组相比,NR1组CD16/32表达显着减少（P<0.01）,CD206表达显着增加（P<0.01）,NR1组与Rapa组相比无统计学差异（P>0.05）;3-MA组CD16/32和CD206表达与模型组相似（P>0.05）;3-MA与NR1共处理时,结果与3-MA单独处理组相似（P>0.05）,而与NR1组相比,CD16/32表达显着增加（P<0.01）,CD206表达显着减少（P<0.01）。（5）ELISA法:与空白组相比,模型组IL-6、IFN-γ和TNF-α水平显着升高（P<0.01）,而IL-10水平差异无统计学意义（P>0.05）;与模型组相比,NR1组IL-6、IFN-γ和TNF-α水平显着下降（P<0.01）,IL-10水平显着上升（P<0.01）,且结果与Rapa组相当（P>0.05）;3-MA组各炎症因子水平与模型组相似（P>0.05）;3-MA与NR1共处理时,结果与3-MA单独处理组相似（P>0.05）,而与NR1组相比,IL-6、IFN-γ和TNF-α水平显着升高（P<0.01）,IL-10水平下降（P<0.01）。（2）NR1对M1、M2型巨噬细胞的影响:我们用LPS及IL-4在体外构建了M1、M2型巨噬细胞进行实验。（1）流式细胞术:LPS诱导后巨噬细胞髙表达CD16/32,低表达CD206,呈M1型,NR1干预后,CD16/32表达降低,CD206表达升高（P<0.01）;IL-4诱导后巨噬细胞高表达CD206,低表达CD16/32,呈M2型,NR1给药后,CD206及CD16/32表达无明显变化（P>0.05）;（2）ELISA法:M1型巨噬细胞高表达IL-6、IFN-γ和TNF-α,NR1干预后下降（P<0.01）,低表达IL-10,NR1干预后升高（P<0.01）;M2型巨噬细胞高表达IL-10,低表达IL-6、IFN-γ和TNF-α,NR1干预后,各因子水平无明显变化（P>0.05）。（3）Western blot法:对于M1型巨噬细胞,NR1干预后,p62水平表达降低（P<0.01）,LC3Ⅱ/Ⅰ比值增高（P<0.01）;而对于M2型巨噬细胞,NR1干预前后,自噬相关蛋白p62及LC3均无明显差异（P>0.05）。（4）透射电镜:LPS+NR1组自噬体增加,自噬现象明显;其余三组自噬现象不明显。结论1、NR1改善ApoE-/-小鼠AS病变的效果明确,可以抑制斑块内脂质沉积,影响AS斑块成分,使斑块内弹力膜的胶原纤维增厚,巨噬细胞浸润减少,VSMC增加,抑制斑块形成,促使斑块趋向稳定。2、NR1抗AS的作用与调节脂质代谢、介导氧化应激、抑制炎症反应有关。3、NR1具有提高自噬水平的能力,并主要通过促进M1型巨噬细胞自噬使其向M2型转化,在抗AS过程中发挥抗炎作用。4、NR1促进巨噬细胞自噬调控其表型转化的作用机制可能与选择性抑制PI3k/Akt/mTOR信号通路有关。
胡甲乙[7]（2021）在《复方高滋斑片降血压药效及作用机制研究》文中研究说明目的:维吾尔医学、药学是我国传统医药的重要组成部分,维医认为高血压的发生是人体内四种体液质失衡所导致的,因此采取调节、成熟以及清除疗法,改善体内异常体液来治疗高血压。有临床研究表明复方高滋斑片能有效治疗胆黑质异常所引起的高血压症,但暂无任何关于其药效学的研究报道,其作用机制和有效物质基础也尚不明确。本论文通过顶空固相微萃取-气质联用技术对复方高滋斑片及主要药味牛舌草和牛舌草花中的挥发性成分进行了分析;通过自发性高血压大鼠模型来探究复方高滋斑片的药效学及其改善肾损伤机制的研究,为复方高滋斑片治疗高血压提供理论基础和实验依据。方法:通过顶空固相微萃取-气相色谱-质谱联用（HS-SPME-GC-MS）技术分析复方高滋斑片及牛舌草和牛舌草花中的挥发性成分,探究其潜在的有效物质基础。将40只12周龄的自发性高血压大鼠（Spontaneously hypertension rats,SHR）随机分为:模型组、阳性药组（酒石酸美洛托尔片组）、复方高滋斑片高、中、低剂量组;另设正常组为8只同周龄的Wistar-Kyoto（WKY）大鼠,每天以10 m L/kg的灌胃体积,连续口服给予复方高滋斑片9周,并每周定时测量大鼠收缩压（SBP）。给药9周后处死各组大鼠并取材,检测大鼠血清中甘油三酯（Triglyceride,TG）、总胆固醇（Total cholesterol,TC）、葡萄糖（Glucose,Glu）、高密度脂蛋白胆固醇（High density lipoprotein cholesterol,HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（Low density lipoprotein cholesterol,LDL-C）的血脂水平,同时还检测谷丙转氨酶（Alanine aminotransferase,ALT）、谷草转氨酶（Aspartate aminotransferase,AST）、谷胱甘肽S转移酶（Glutathione S-transferase,GST）肝功能水平,用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠血清中肾素（Renin）、血管紧张素Ⅱ（AngiotensinⅡ,AngⅡ）、醛固酮（Aldosterone,ALD）、内皮素1（Endothelin-1,ET-1）的水平;通过HE染色和Masson染色观察大鼠心脏和肾脏的病理变化,并对胶原面积进行统计学分析。实时荧光定量PCR法检测大鼠肾脏中血管紧张素转化酶（Angiotensin-converting enzyme,ACE）、血管紧张素Ⅱ1型受体（AngiotensinⅡtype 1 receptor,AT1R）和内皮型一氧化氮合成酶（Endothelial nitric oxide synthase,e NOS）、磷酸肌醇3-激酶（Phosphoinositide3-kinase,PI3K）、蛋白激酶B（Protein kinase B,AKT）的相对表达量。蛋白免疫印迹反应（Western blotting）检测大鼠肾脏中PI3K、AKT、p-AKT（Phospho-protein kinase B,磷酸化蛋白激酶B）的相对表达水平。结果:1.通过顶空固相微萃取-气质联用技术并结合数据库匹配对复方高滋斑片、牛舌草及牛舌草花中的挥发性成分进行鉴别。其中,复方高滋斑片中共鉴别出39种挥发性成分,含量较高的成分有顺式-α-檀香醇占15.29%,β-檀香醇占10.49%,反式-α-香柠檬醇占8.42%、（E）-香榧醇占6.96%、香叶基香叶醇占4.80%;牛舌草中共鉴别出31个挥发性成分,含量较高的成分有正二十七烷占14.06%、植酮占13.62%、2,6,10-三甲基十四烷占6.71%、顺式-α-檀香醇占6.39%;牛舌草花中共鉴别出27个挥发性成分,含量较高的成分有二十三烷占25.96%、顺式-α-檀香醇占21.37%、反式-β檀香醇占8.41%、植酮占6.08%、反-α-香柠檬醇占5.92%。2.血压结果显示,与模型组比较,经复方高滋斑片给药2周后,低剂量组大鼠的收缩压有显着下降（P<0.05）,灌胃9周后,高剂量组和中剂量组大鼠的收缩压均明显下降（P<0.05）。检测大鼠血清中血脂水平,发现与模型组比较,复方高滋斑片高剂量组和中剂量组的大鼠血清中的TG和HDL-C的水平有显着性的降低作用（P<0.05）,但对大鼠血清中的Glu、TC和LDL-C均无影响（P>0.05）。检测大鼠血清中的转氨酶水平,发现与模型组比较,复方高滋斑片对大鼠血清中的AST、ALT和GST的水平均有不同程度的降低作用（P<0.05,P<0.01）;病理组织学观察显示,与模型组比较,复方高滋斑片能有效改善自发性高血压大鼠肾小球和肾小管的形态,减少炎性细胞的浸润,使其形态更接近正常组,同时复方高滋斑片还能减少心肌细胞的凋亡,减少心肌纤维的断裂和增生,改善心肌细胞的损伤。3.采用ELISA法检测大鼠血清中肾素、血管紧张素Ⅱ、醛固酮、内皮素1的水平,结果显示,与模型组比较,经复方高滋斑片治疗后,高剂量组和中剂量组均能显着性降低大鼠血清中Renin、AngⅡ、ALD、ET-1的含量（P<0.05）。实时荧光定量PCR结果显示,与模型组比较,复方高滋斑片中剂量组和低剂量组大鼠肾组织中的ACE m RNA和AT1R m RNA均有所下调（P<0.05）,而对e NOS m RNA有显着的上调作用（P<0.05）。4.MASSON染色结果显示,与模型组比较,经复方高滋斑片给药后,高剂量组和中剂量组大鼠肾脏中的胶原纤维面积显着减少（P<0.05）,其中中剂量组的胶原纤维面积极显着减少（P<0.01）,接近正常组。蛋白免疫印迹结果显示,与正常组比较,模型组大鼠肾脏中的PI3K蛋白和p-AKT蛋白表达均显着性降低（P<0.05）,经复方高滋斑片治疗后,高剂量组、中剂量组、低剂量组的大鼠肾脏中的PI3K蛋白和p-AKT蛋白表达均有上调（P<0.05）,且呈一定的剂量依赖性。荧光实时定量PCR结果显示,与与正常组比较,模型组大鼠肾脏中的PI3K m RNA和AKT m RNA表达均显着性降低（P<0.05）,经复方高滋斑片治疗后,高剂量组、中剂量组、低剂量组的大鼠肾脏中的PI3K m RNA和AKT m RNA表达均有上调（P<0.05）,且呈一定的剂量依赖性。结论:1.复方高滋斑片方中大部分药味是芳香类的药材,其挥发性成分主要是檀香醇类的成分,同时也是牛舌草、牛舌草花及檀香中的主要挥发性成分,药理研究表明檀香醇类化合物具有良好的抗炎镇静的作用;β-没药醇、反-α-香柠檬醇是牛舌草花中的挥发性成分,其中β-没药醇具有抗炎、镇静的功效;十五烷、α-雪松烯均来自牛舌草中;α-姜黄烯可以归属到牛舌草和檀香中,具有良好的抗氧化的作用;顺-β-金合欢烯、氧化石竹烯来自薰衣草中;库贝醇是香青兰中的挥发性成分;α-檀香烯可以归属到檀香和薰衣草中;香叶基香叶醇能够抗血栓及动脉粥样硬化。从以上分析结果可初步确定挥发性成分是复方高滋斑片主要的药效物质之一。2.复方高滋斑片具有一定的降低自发性高血压大鼠收缩压的作用,虽然未能使大鼠血压达到正常水平,但长期服药后可使自发性高血压模型大鼠收缩压维持于一个较低的水平,稳压效果明显;复方高滋斑片有较好的护肝功能;综合HE染色结果可以明显看出复方高滋斑片能显着改善高血压引发的肾脏和心脏的损伤,有效减缓高血压病的发生和发展、预防和修复心肾等脏器的器质性损伤。3.复方高滋斑片能有效抑制RAAS（肾素-血管紧张素-醛固酮）的过度激活,通过降低Renin,AngⅡ,ALD的含量,从而降低交感神经兴奋性;同时ET-1的含量降低使得血管的扩张能力加强,减少血管周压力,从而达到降低血压的作用;PCR结果显示,复方高滋斑片能下调ACE,AT1R m RNA的表达,上调e NOS m RNA的表达,也是通过基因调控抑制了RAAS的过度激活。4.复方高滋斑片能显着降低大鼠肾脏中的蓝色胶原纤维面积,避免了肾损伤病变的加剧导致的肾纤维化;WB和PCR试验结果均显示出复方高滋斑片能激活细胞存活、增殖通路PI3K/AKT,显着上调PI3K和AKT的表达,从而改善了肾脏的损伤,大大的减缓了肾脏纤维化的进程。
孙娜[8]（2020）在《人参皂苷Rg1通过SIRT1/PGC-1α信号通路抑制AngⅡ诱导乳鼠心肌细胞肥大的研究》文中研究指明目的通过观察人参皂苷Rg1对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导乳鼠心肌细胞肥大及能量代谢的调节作用,及对沉默信息调节因子1（SIRT1）和过氧化物酶体增殖活化受体γ辅助活化因子1α（PGC-1α）表达的影响,以探讨人参皂苷Rg1对心肌肥厚调节作用的相关信号机制。方法采用AngⅡ（0.1μmol/L）诱导原代培养的SD乳鼠心肌细胞,造成离体心肌细胞肥大模型,观察给予心肌肥大模型不同浓度（12.5、25、50μmol/L）的人参皂苷Rg1及SIRT1特异性阻断剂EX527（1μmol/L）对肥大心肌细胞的细胞体积、蛋白质含量、细胞外液游离脂肪酸（FFA）、三磷酸腺苷（ATP）、单磷酸腺苷（AMP）含量、心肌细胞线粒体中细胞色素C氧化酶（CCO）活性、心肌细胞胞浆中细胞色素C（Cyt-C）表达、心肌细胞心房钠尿肽（ANP）、SIRT1及PGC-1α表达的影响。处理完成后,消化分离各处理组心肌细胞,倒置显微镜下放大400倍结合图像分析系统测定心肌细胞直径并计算细胞体积;采用考马斯亮蓝（Bradford）法检测各处理组心肌细胞裂解液中蛋白质含量;Western blot免疫电泳法测定各组心肌细胞中ANP、SIRT1及PGC-1α的蛋白表达;采用Elisa法检测各处理组心肌细胞细胞外液中FFA、ATP及AMP含量并计算ATP/AMP比值;低温离心法分离心肌细胞线粒体,并用紫外分析法测定心肌细胞线粒体中CCO活性,Western blot法测定各组心肌细胞胞浆中Cyt-C蛋白表达。结果与空白对照组比较,模型对照组心肌细胞体积、蛋白质含量及FFA含量明显升高,ATP/AMP比值降低,CCO活性下降,ANP和胞浆Cyt-C表达上调,SIRT1及PGC-1α的表达下调。与模型对照组比较,人参皂苷Rg1中、高剂量（25、50μmol/L）组心肌细胞的细胞体积、蛋白质含量和FFA含量降低,ANP和胞浆Cyt-C表达下调,ATP/AMP比值和CCO活性升高,人参皂苷Rg1中剂量（25μmol/L）组SIRT1及PGC-1α的表达上调。人参皂苷Rg1对心肌细胞体积、蛋白质含量、ANP和胞浆Cyt-C表达及心肌细胞外液FFA含量,ATP/AMP比值和CCO活性作用随人参皂苷Rg1浓度增高而增强。EX527对肥大心肌细胞各项指标的影响无统计学差异,应用EX527后人参皂苷Rg1降低肥大心肌细胞的细胞体积、蛋白质含量和ANP蛋白表达的调节作用,对于心肌细胞外液FFA含量、ATP/AMP比值、CCO活性和胞浆Cyt-C及PGC-1α表达上调作用被部分阻断。结论人参皂苷Rg1对AngⅡ诱导乳鼠心肌细胞肥大具有抑制作用,并能改善肥大心肌细胞的能量代谢,其作用机制与其上调SIRT1进而上调PGC-1α表达有关。
曹雅雯,汤岐梅,侯雅竹,王贤良,赵志强,毛静远[9]（2019）在《葶苈子治疗心力衰竭的药理研究进展》文中指出对葶苈子在心力衰竭治疗中的利尿、正性肌力、抑制心室重构、保护心肌细胞等作用进行综述,以期为葶苈子在心力衰竭治疗中的合理使用和研究开发提供参考。
闫京京[10]（2019）在《抗纤益心方对NE诱导心肌细胞肥大及凋亡因子Bcl-2、Bax的影响》文中认为扩张型心肌病（dilatedcardiomyopathy,DCM）是以一侧或者双侧心室扩大为主要特征,常伴有进行性心肌收缩功能障碍的异质性心脏病。DCM是终末期心力衰竭的主要原因,心室重构是DCM的主要病理过程。DCM大鼠心肌组织中存在着心肌细胞的肥大、变性和坏死,这些病理性改变与交感神经过度增加有关。研究表明,自主神经系统（Autonomic nervous system,ANS）神经递质去甲肾上腺素（norepinephrine,NE）与肾上腺素能受体结合,激活交感神经系统并诱导心肌细胞肥大与凋亡。抗纤益心方（Kangxian Yixin Decoction,KYD）是治疗DCM的临床经验方,对DCM气虚血瘀型的患者具有明显的治疗作用,前期研究证明,KYD能调节DCM大鼠的心功能,抑制心室重构,减少心肌组织中细胞凋亡,但机制尚不明确。因此,研究KYD对NE诱导的心肌细胞肥大及凋亡的影响,无论是对DCM发展过程中心室重构和心力衰竭的预防和治疗,还是对KYD进行系统、客观评价,都具有重要的理论和临床意义。研究目的:利用H9c2大鼠心肌细胞模型,探究KYD对NE诱导的心肌细胞肥大及凋亡的影响。研究方法:1、H9c2大鼠心肌细胞培养。2、KYD及NE的制备。3、q PCR筛选NE诱导心肌细胞肥大及凋亡的最佳干预浓度及时间。4、CCK-8检测KYD对心肌细胞活性的影响。5、显微镜下观察KYD对NE诱导心肌细胞肥大的影响。6、q PCR检测心肌细胞肥大相关指标ANP、BNP mRNA,凋亡相关因子Bcl-2、Bax、Caspase 3 mRNA的表达。7、TUNEL染色用于观察心肌细胞凋亡的发生。8、流式细胞术用于检测心肌细胞的凋亡率。9、Western Blot检测心肌细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase 3的表达。结果:1、100μM的NE作用于H9c2心肌细胞24 h为诱导心肌细胞肥大的最佳条件。2、0.25 mg/ml剂量的KYD无细胞毒性,且能有效拮抗心肌细胞肥大及凋亡的发生。3、q PCR结果显示KYD可有效降低心肌细胞肥大指标ANP、BNP mRNA,且能下调凋亡指标Bax、Caspase 3 mRNA,上调Bcl-2 mRNA。4、TUNEL染色结果显示KYD可以抑制NE诱导的心肌细胞凋亡。5、流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率表明,KYD能显着降低NE诱导的心肌细胞的凋亡率。6、Western Blot检测结果显示,KYD可显着调节NE诱导的心肌细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase 3。结论:1、100μM的NE作用于H9c2心肌细胞24 h可诱导心肌细胞肥大的发生;2.0.25 mg/m L剂量的KYD能拮抗NE诱导H9c2心肌细胞肥大和凋亡;3.KYD通过调节ANP、BNP、Bcl2、Bax、与Caspase 3表达,从而调节心肌细胞的肥大及肥大心肌细胞中的凋亡。
二、槲皮素对血管紧张素Ⅱ致培养乳鼠心肌细胞肥大的抑制作用(英文)（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、槲皮素对血管紧张素Ⅱ致培养乳鼠心肌细胞肥大的抑制作用(英文)（论文提纲范文）
（1）基于PI3K/AKT信号通路探讨糖心平胶囊治疗糖尿病心肌病药效及机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 第一部分 综述 |
| 综述一 糖尿病心肌病的中医认识 |
| 1 糖尿病心肌病中医病名 |
| 2 糖尿病心肌病中医病因 |
| 3 糖尿病心肌病中医病机 |
| 4 糖尿病心肌病治则 |
| 5 糖尿病心肌病论治 |
| 6 小结与展望 |
| 综述二 糖尿病心肌病现代研究进展 |
| 1 糖尿病心肌病流行现状 |
| 2 糖尿病心肌病病程特征 |
| 3 糖尿病心肌病病理机制 |
| 4 糖尿病心肌病诊断策略 |
| 5 糖尿病性心肌病的干预策略 |
| 6 小结和展望 |
| 参考文献 |
| 第二部分 糖心平胶囊网络药理学研究 |
| 1 资料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 实验研究 |
| 前言 |
| 实验一 糖心平胶囊对DCM的保护作用探究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 小结 |
| 实验二 糖心平干预后大鼠心功能及对抗急性心肌缺血能力评价 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 小结 |
| 实验三 基于PI3K/AKT信号通路糖心平胶囊药效机制探究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 小结 |
| 结论 |
| 创新点与不足之处 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 附件 |
（2）罗布麻叶总黄酮及异槲皮苷对吡柔比星致心脏损伤的保护作用和机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 英文缩写词对照表 |
| 第1篇 前言 |
| 第2篇 文献综述 |
| 第1章 蒽环类药物心脏毒性概述 |
| 1.1 蒽环类药物引起心脏损伤的类型 |
| 1.2 蒽环类药物引起心脏损伤的分子机制 |
| 1.2.1 拓扑异构酶抑制 |
| 1.2.2 铁离子代谢紊乱 |
| 1.2.3 线粒体功能障碍 |
| 1.2.4 肌纤维降解和肌浆网钙稳态失衡 |
| 1.2.5 氧化应激 |
| 1.2.6 细胞凋亡 |
| 第2章 罗布麻叶和异槲皮苷研究概述 |
| 2.1 罗布麻叶研究概述 |
| 2.1.1 罗布麻植物学特征和传统医学应用 |
| 2.1.2 罗布麻叶提取物药理学作用 |
| 2.1.3 罗布麻叶提取物安全性 |
| 2.2 异槲皮苷研究概述 |
| 2.2.1 异槲皮苷的制备 |
| 2.2.2 异槲皮苷药理作用 |
| 2.2.3 异槲皮苷的体内吸收过程 |
| 第3章 蒽环类药物所致心脏损伤与miRNAs概述 |
| 3.1 miRNAs简介 |
| 3.2 蒽环类药物心脏损伤心肌组织中miRNAs表达变化 |
| 3.3 蒽环类药物心脏损伤血液miRNAs表达的变化 |
| 3.4 miRNAs在蒽环类药物心脏损伤中预防和治疗的作用 |
| 第3篇 实验研究 |
| 第1章 罗布麻叶总黄酮对THP诱导大鼠心脏损伤的保护作用及机制研究 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 药品及试剂 |
| 1.1.2 实验仪器 |
| 1.1.3 主要溶液配制 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 实验动物分组及处理 |
| 1.2.2 各组大鼠心电图和心脏血流动力学参数 |
| 1.2.3 各组大鼠血清心肌酶水平 |
| 1.2.4 各组大鼠SOD和 MDA含量测定 |
| 1.2.5 各组大鼠心脏取材 |
| 1.2.6 各组大鼠心脏组织HE染色 |
| 1.2.7 各组大鼠心脏组织中线粒体膜基因的表达 |
| 1.2.8 各组大鼠心脏线粒体蛋白制备 |
| 1.2.9 各组大鼠心脏组织中相关蛋白的表达 |
| 1.2.10 统计学分析 |
| 1.3 实验结果 |
| 1.3.1 大鼠一般状态观察 |
| 1.3.2 AVLE对 THP所致心脏损伤大鼠心电图的影响 |
| 1.3.3 AVLE对 THP所致心脏损伤大鼠血流动力学的影响 |
| 1.3.4 AVLE对 THP所致心脏损伤大鼠心肌酶的影响 |
| 1.3.5 AVLE对 THP所致心脏损伤大鼠组织形态学的影响 |
| 1.3.6 AVLE对 THP诱导的心脏损伤大鼠血清SOD和 MDA的影响 |
| 1.3.7 AVLE对 THP所致心脏损伤大鼠心脏组织线粒体膜m RNA表达的影响 |
| 1.3.8 AVLE对 THP所致心脏损伤大鼠心脏组织AKT和 p-AKT表达的影响 |
| 1.3.9 AVLE对 THP所致心脏损伤大鼠心脏组织Cyt c表达的影响 |
| 1.3.10 AVLE对 THP所致心脏损伤大鼠心脏组织胞浆Caspase家族蛋白表达的影响 |
| 1.3.11 AVLE对 THP所致心脏损伤大鼠心脏组织Bcl-2和Bax表达的影响 |
| 1.4 本章小结 |
| 第2章 罗布麻叶总黄酮的制备及成份分析 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 药品及试剂 |
| 2.1.2 实验仪器 |
| 2.1.3 主要溶液配制 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 AVL生药学鉴定 |
| 2.2.2 AVLE提取和纯化 |
| 2.2.3 仪器分析条件 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 AVL性状鉴定 |
| 2.3.2 AVL横切面显微鉴定 |
| 2.3.3 HPLC-ESI-MS/MS法对AVLE进行定性分析 |
| 2.3.4 HPLC法对AVLE部分化合物进行定量分析 |
| 2.4 本章小结 |
| 第3章 AKT在罗布麻叶总黄酮和异槲皮苷保护THP诱导H9c2 细胞损伤中的作用 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 药品及试剂 |
| 3.1.2 实验仪器 |
| 3.1.3 主要溶液配制 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 细胞培养 |
| 3.2.2 细胞传代 |
| 3.2.3 细胞冻存 |
| 3.2.4 MTT检测细胞毒性和存活率 |
| 3.2.5 DCFH-DA探针检测H9c2 细胞ROS水平 |
| 3.2.6 ELISA法检测H9c2 细胞SOD和 MDA的含量 |
| 3.2.7 Mito-Tracker Red CMXRos探针检测H9c2 细胞线粒体活性 |
| 3.2.8 JC-1 探针检测H9c2 细胞线粒体膜电位 |
| 3.2.9 RT-qPCR检测H9c2 细胞线粒体膜基因的表达 |
| 3.2.10 TUNEL检测H9c2 细胞凋亡率 |
| 3.2.11 H9c2 细胞线粒体提取 |
| 3.2.12 Western blot检测H9c2 细胞相关蛋白的表达 |
| 3.2.13 统计学分析 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 IQC、AVLE和 THP对 H9c2 细胞作用的最佳浓度和时间确定 |
| 3.3.2 IQC和 AVLE对 THP处理H9c2 细胞的保护作用 |
| 3.3.3 AKT在 IQC和 AVLE改善THP处理H9c2 细胞凋亡中的作用 |
| 3.4 本章小结 |
| 第4章 THP诱导大鼠心脏损伤miRNA芯片生物信息学分析及miR-190a-5p/Phlpp1/AKT/Bcl-2 信号通路的构建和验证 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.1.1 药品及试剂 |
| 4.1.2 实验仪器 |
| 4.1.3 主要溶液配制 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 差异miRNA筛选 |
| 4.2.2 miR-190a-5p和 AVL靶基因预测及通路富集 |
| 4.2.3 大鼠心脏组织miR-190a-5p、Phlpp1 基因及蛋白的表达 |
| 4.2.4 H9c2 细胞miR-190a-5p、Phlpp1 基因及蛋白的表达 |
| 4.2.5 双荧光素酶报告基因实验 |
| 4.2.6 统计学分析 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.3.1 差异miRNA筛选结果 |
| 4.3.2 miR-190a-5p/Phlpp1/AKT/Bcl-2 信号通路的构建 |
| 4.3.3 AVLE对 THP诱导的心脏损伤大鼠心脏组织miR-190a-5p和 Phlpp1 基因及蛋白表达的影响 |
| 4.3.4 IQC和 AVLE对 THP处理H9c2 细胞miR-190a-5p和Phlpp1 基因及蛋白表达的影响 |
| 4.3.5 双荧光素酶报告基因实验 |
| 4.4 本章小结 |
| 第5章 miR-190a-5p在 THP诱导H9c2 细胞损伤中的作用及机制 |
| 5.1 实验材料 |
| 5.1.1 药品及试剂 |
| 5.1.2 实验仪器 |
| 5.1.3 主要溶液配制 |
| 5.2 实验方法 |
| 5.2.1 荧光显微镜检测miR-190a-5p转染H9c2 细胞效率 |
| 5.2.2 RT-qPCR检测H9c2 细胞miR-190a-5p和 Phlpp1 m RNA的表达 |
| 5.2.3 DCFH-DA探针检测H9c2 细胞ROS含量 |
| 5.2.4 ELISA法检测H9c2 细胞SOD和 MDA含量 |
| 5.2.5 Mito-Tracker Red CMXRos探针检测H9c2 细胞线粒体活性 |
| 5.2.6 JC-1 探针检测H9c2 细胞线粒体膜电位 |
| 5.2.7 RT-qPCR检测H9c2 细胞线粒体膜基因的表达 |
| 5.2.8 TUNEL检测H9c2 细胞凋亡率 |
| 5.2.9 H9c2 细胞线粒体提取 |
| 5.2.10 Western blot检测H9c2 细胞相关蛋白的表达 |
| 5.2.11 统计学分析 |
| 5.3 实验结果 |
| 5.3.1 转染miR-190a-5p对 miR-190a-5p和 Phlpp1 m RNA表达的影响 |
| 5.3.2 miR-190a-5p对 THP处理H9c2 细胞的保护作用 |
| 5.3.3 miR-190a-5p对 THP处理H9c2 细胞miR-190a-5p/Phlpp1/AKT/Bcl-2 信号通路的影响 |
| 5.4 本章小结 |
| 第4篇 讨论 |
| 1.1 THP所致大鼠心脏组织/H9c2 细胞损伤模型复制 |
| 1.1.1 动物模型 |
| 1.1.2 细胞模型 |
| 1.2 AVLE制备及成份分析 |
| 1.3 IQC和 AVLE改善THP处理大鼠心脏组织/H9c2 细胞的作用 |
| 1.3.1 AVLE改善THP处理大鼠心脏组织心电图、血流动力学、心肌酶及组织形态学的变化 |
| 1.3.2 IQC和 AVLE改善THP处理大鼠心脏组织/H9c2 细胞氧化应激和线粒体功能的作用 |
| 1.4 IQC和 AVLE对 THP所致大鼠心脏组织/H9c2 细胞损伤的保护作用机制 |
| 1.4.1 THP诱导大鼠心脏损伤miRNA芯片生物信息学分析及miR-190a-5p/Phlpp1/AKT/Bcl-2 信号通路的构建 |
| 1.4.2 miR-190a-5p/Phlpp1 生物学作用及IQC、AVLE和 DZR对miR-190a-5p/Phlpp1 调控作用的验证 |
| 1.4.3 AKT作为IQC和 AVLE保护THP诱导大鼠心脏组织/H9c2 细胞损伤作用节点的探讨 |
| 1.4.4 miR-190a-5p减轻THP处理H9c2 细胞氧化应激及对线粒体功能的保护作用 |
| 1.4.5 miR-190a-5p在 IQC和 AVLE保护THP诱导H9c2 细胞损伤机制中的探讨 |
| 1.5 IQC与 AVLE药效对比分析 |
| 第5篇 结论 |
| 创新点 |
| 今后工作展望 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（3）槲皮素对肾间质纤维化中p-AMPKα蛋白和TGF-β1/Smad3信号通路的作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 文献综述 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 英文缩写 |
| 攻读学位期间发表的学术成果 |
| 附图 |
（4）新型Pyxinol衍生物的合成、生物活性及药代动力学研究（论文提纲范文）
| 前言 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词说明 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 天然产物pyxinol的研究进展 |
| 1.1.1 Pyxinol简介 |
| 1.1.2 Pyxinol生物活性研究进展 |
| 1.1.3 Pyxinol结构修饰及其生物活性研究进展 |
| 1.2 抗心肌缺血药物的结构类型及作用机制 |
| 1.2.1 人工合成小分子药物 |
| 1.2.2 天然产物及其结构修饰产物 |
| 1.2.3 抗心肌缺血药物的作用机制 |
| 1.3 立题依据 |
| 1.4 论文拟解决的科学问题及研究内容 |
| 第二章 新型pyxinol脂肪酸酯衍生物的合成 |
| 2.1 研究背景 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.2.1 原料与试剂 |
| 2.2.2 实验仪器 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 合成方法及路线 |
| 2.3.2 分离纯化 |
| 2.3.3 结构鉴定 |
| 2.4 实验结果与讨论 |
| 2.4.1 合成产物概况 |
| 2.4.2 合成产物结构鉴定 |
| 2.5 小结 |
| 第三章Pyxinol脂肪酸酯衍生物心脏保护作用及机制研究 |
| 第一节Pyxinol脂肪酸酯衍生物抗心肌缺血活性研究 |
| 3.1.1 对H_2O_2诱导的H9c2心肌细胞损伤的影响 |
| 3.1.2 化合物5对心肌缺血模型大鼠的干预作用 |
| 3.1.3 小结 |
| 第二节Pyxinol脂肪酸酯衍生物抗心衰活性研究 |
| 3.2.1 Pyxinol脂肪酸酯衍生物对ACE酶的抑制作用 |
| 3.2.2 化合物5和9对心衰斑马鱼模型的干预作用 |
| 第三节 化合物5抗心衰的代谢组学研究 |
| 3.3.1 实验材料 |
| 3.3.2 实验方法 |
| 3.3.3 实验结果与讨论 |
| 3.3.4 小结 |
| 第四章 灌胃给予化合物5的大鼠药代动力学研究 |
| 第一节 灌胃给予化合物5的吸收研究 |
| 4.1.1 灌胃给予化合物5的“血药浓度-时间曲线”研究 |
| 4.1.2 灌胃给予化合物5的生物利用度研究 |
| 4.1.3 化合物5的脂水分配系数测定 |
| 4.1.4 小结 |
| 第二节 灌胃给予化合物5的生物转化研究 |
| 4.2.1 实验材料 |
| 4.2.2 实验方法 |
| 4.2.3 实验结果与讨论 |
| 4.2.4 小结 |
| 第五章 总结 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（5）miR-489调控心肌纤维化的机制及人参皂苷Re的干预作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词表 |
| 文献综述 |
| 综述一 心肌纤维化研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 人参皂苷Re药理学研究进展 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 实验研究 |
| 研究一 miR-489调节心肌纤维化的机制研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 1 CFs形态学观察与纯度检测 |
| 2 过表达miR-489抑制CFs分化和分泌 |
| 3 过表达miR-489抑制myd88/NF-κB通路的活化 |
| 4 抑制miR-489促进CFs分化和分泌 |
| 5 抑制miR-489促进myd88/NF-κB通路活化 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 研究二 人参皂苷Re调节心肌梗死后心肌纤维化的机制研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 1 人参皂苷Re改善AMI后心脏功能 |
| 2 人参皂苷Re抑制AMI后心肌代偿性肥厚 |
| 3 人参皂苷Re减轻AMI后心肌损伤 |
| 4 人参皂苷Re改善AMI后心脏组织病理学改变 |
| 5 人参皂苷Re抑制AMI后纤维化相关蛋白的表达 |
| 6 人参皂苷R调控AMI后miR-489和myd88 mRNA的表达 |
| 7 人参皂苷Re抑制AMI诱导的myd88/NF-κB通路活化 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 研究三 人参皂苷Re干预AngⅡ诱导CFs生物学行为改变的机制研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 1 人参皂苷Re干预CFs的浓度筛选 |
| 2 人参皂苷Re抑制AngⅡ诱导的CFs分化 |
| 3 人参皂苷Re抑制AngⅡ诱导的CFs迁移 |
| 4 人参皂苷R抑制AngⅡ诱导的CFs中胶原蛋白的表达 |
| 5 人参皂苷Re抑制AngⅡ诱导的CFs中myd88/NF-κB通路活化 |
| 6 人参皂苷Re调节CFs中miR-489和myd88 mRNA的表达 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 研究结语 |
| 创新点 |
| 基金项目 |
| 主要仪器设备 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 附件 |
（6）基于自噬调控巨噬细胞表型转化探讨三七皂苷R1改善动脉粥样硬化的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 理论研究 |
| 1 自噬在动脉粥样硬化中的作用 |
| 1.1 自噬概述 |
| 1.2 巨噬细胞自噬参与AS脂质氧化修饰过程 |
| 1.3 自噬调节巨噬细胞表型极化参与AS炎症反应过程 |
| 1.4 促进自噬改善AS的药物研究 |
| 1.5 从中医扶正祛邪理论探讨自噬对AS的作用 |
| 2 三七皂苷R1在心血管及神经系统中的应用 |
| 2.1 对心血管系统的保护作用 |
| 2.2 对神经系统的保护作用 |
| 2.3 延缓血管衰老 |
| 参考文献 |
| 第二部分 体内实验:NR1促进自噬改善APOE-/-小鼠动脉粥样硬化的研究 |
| 1.实验材料 |
| 1.1 实验动物及饲料 |
| 1.2 实验试剂 |
| 1.3 实验仪器 |
| 2.实验方法 |
| 2.1 实验分组 |
| 2.2 给药方法 |
| 2.3 标本采集及处理 |
| 2.4 血液中相关指标的检测分析 |
| 2.5 动脉粥样硬化斑块组织病理学检测 |
| 2.6 透射电子显微镜分析 |
| 2.7 Western blot法 |
| 2.8 统计分析 |
| 3.实验结果 |
| 3.1 实验小鼠体重比较 |
| 3.2 NR1对ApoE-/-小鼠脂质代谢的影响 |
| 3.3 NR1对ApoE-/-小鼠氧化应激的影响 |
| 3.4 NR1对ApoE-/-小鼠炎症因子的影响 |
| 3.5 NR1对AS斑块面积的影响 |
| 3.6 天狼猩红胶原染色 |
| 3.7 免疫荧光检测 |
| 3.8 NR1对自噬标志蛋白p62、LC3Ⅱ/Ⅰ表达的影响 |
| 3.9 透射电镜下观察自噬超微结构 |
| 3.10 NR1对mTOR信号通路的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 NR1参与调节脂质代谢、氧化应激及炎症反应 |
| 4.2 NR1对AS斑块的影响 |
| 4.3 NR1对自噬的影响 |
| 5 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 体外实验:三七皂苷R1通过自噬促进巨噬细胞由M1型向M2 型转换的研究 |
| 1.实验材料 |
| 1.1 细胞株 |
| 1.2 实验试剂 |
| 1.3 实验仪器 |
| 2.实验方法 |
| 2.1 实验试剂配制 |
| 2.2 巨噬细胞复苏、传代及冻存 |
| 2.3 CCK8试验 |
| 2.4 实验分组 |
| 2.5 透射电子显微镜分析 |
| 2.6 Western blot法 |
| 2.7 ELISA检测炎症因子 |
| 2.8 流式细胞术检测巨噬细胞表型标志物 |
| 2.9 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 NR1对RAW264.7增值活性的影响 |
| 3.2 NR1对RAW264.7小鼠巨噬细胞自噬标志蛋白表达的影响 |
| 3.3 透射电镜下观察巨噬细胞自噬的超微结构 |
| 3.4 自噬水平对NR1调控巨噬细胞表型标志物表达的影响 |
| 3.5 自噬对NR1调控M1、M2相关炎性因子的影响 |
| 3.6 NR1对巨噬细胞PI3k/Akt/mTOR的影响 |
| 3.7 NR1对M1、M2自噬标志蛋白的影响 |
| 3.8 透射电镜下观察NR1对M1、M2自噬的影响 |
| 3.9 NR1对M1、M2表型标志物的影响 |
| 3.10 NR1对M1、M2分泌炎性因子的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 1.研究结论 |
| 2.创新性 |
| 2.1 创新NR1的药理机制 |
| 2.2 创新AS的防治策略 |
| 3.本研究的不足与展望 |
| 附录 |
| 1.文献综述: 三七皂苷R1药理作用的研究进展 |
| 参考文献 |
| 2.攻读博士期间发表论文 |
| 致谢 |
（7）复方高滋斑片降血压药效及作用机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 第一章 复方高滋斑片及牛舌草、牛舌草花中挥发性成分检测 |
| 1.实验材料 |
| 1.1 试剂与试药 |
| 1.2 实验仪器 |
| 2.实验方法 |
| 2.1 样品预处理 |
| 2.2 GC-MS条件 |
| 2.3 复方高滋斑片及牛舌草、牛舌草花挥发性成分的鉴定 |
| 3.结果 |
| 3.1 复方高滋斑片中挥发性成分的鉴定 |
| 3.2 牛舌草中挥发性成分的鉴定 |
| 3.3 牛舌草花中挥发性成分的鉴定 |
| 4.讨论 |
| 第二章 复方高滋斑片降血压药效学研究 |
| 1.实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 试剂与试药 |
| 1.3 实验仪器 |
| 2.实验方法 |
| 2.1 动物分组 |
| 2.2 给药方法 |
| 2.3 血压监测 |
| 2.4 取材 |
| 2.5 组织样本石蜡包埋与切片 |
| 2.6 HE染色 |
| 2.7 大鼠血清生化指标检测 |
| 2.8 统计学分析 |
| 3.实验结果 |
| 3.1 复方高滋斑片对自发性高血压大鼠血压的影响 |
| 3.2 复方高滋斑片改善自发性高血压大鼠肾脏和心脏病理学变化 |
| 3.3 复方高滋斑片对自发性高血压大鼠血清血脂水平的影响 |
| 3.4 复方高滋斑片对自发性高血压大鼠血清肝功能的影响 |
| 4.讨论 |
| 第三章 复方高滋斑片降血压机制研究 |
| 1.实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 试剂与试药 |
| 1.3 实验仪器 |
| 2.实验方法 |
| 2.1 ELISA法检测大鼠血清中指标Renin、AngⅡ、ALD、ET-1 的含量 |
| 2.2 实时荧光定量法检测大鼠肾组织中AT1R、ACE、eNOS mRNA的相对表达水平 |
| 2.3 统计学分析 |
| 3.结果 |
| 3.1 复方高滋斑片对大鼠血清中RAAS的影响 |
| 3.2 复方高滋斑片对大鼠RAAS信号通路基因水平的影响 |
| 4.讨论 |
| 第四章 基于PI3K/AKT 信号通路复方高滋斑片改善自发性高血压大鼠肾损伤研究 |
| 1.实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 试剂与试药 |
| 1.3 实验仪器 |
| 2.实验方法 |
| 2.1 组织样本包埋与切片 |
| 2.2 MASSON染色 |
| 2.3 蛋白免疫印迹法检测PI3K、AKT、p-AKT蛋白的相对表达水平 |
| 2.4 实时荧光定量法检测PI3K m RNA、AKT m RNA的相对表达水平 |
| 2.5 统计学分析 |
| 3.结果 |
| 3.1 复方高滋斑片对大鼠肾组织中胶原纤维的影响 |
| 3.2 复方高滋斑片对PI3K/AKT信号通路蛋白水平的影响 |
| 3.3 复方高滋斑片对PI3K/AKT信号通路基因水平的影响 |
| 4.讨论 |
| 结语与创新 |
| 参考文献 |
| 附录 文献综述 复方高滋斑片的研究进展 |
| 参考文献 |
| 硕士期间发表论文 |
| 致谢 |
（8）人参皂苷Rg1通过SIRT1/PGC-1α信号通路抑制AngⅡ诱导乳鼠心肌细胞肥大的研究（论文提纲范文）
| 中文论着摘要 |
| 英文论着摘要 |
| 英文缩略语 |
| 前言 |
| 实验材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 本研究创新性自我评价 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 一、文献综述 SIRT1 在心血管疾病中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 二、在学期间科研成绩 |
| 三、致谢 |
| 四、个人简介 |
（9）葶苈子治疗心力衰竭的药理研究进展（论文提纲范文）
| 1 利尿作用 |
| 2 正性肌力作用 |
| 3 抑制心室重构 |
| 3.1 抑制心肌肥厚 |
| 3.2 抑制细胞外基质的改变 |
| 3.2.1 抑制胶原沉积 |
| 3.2.2 抑制心肌细胞纤维化 |
| 4 保护心肌细胞 |
| 4.1 对缺血心肌细胞的保护 |
| 4.2 对心肌缺血-再灌注损伤的保护 |
| 4.3 保护血管内皮细胞 |
| 5 小 结 |
（10）抗纤益心方对NE诱导心肌细胞肥大及凋亡因子Bcl-2、Bax的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文及缩略词表 |
| 前言 |
| 实验材料与方法 |
| 1.实验材料 |
| 2.实验方法 |
| 3.统计学分析 |
| 实验结果 |
| 1.NE作用于H9c2心肌细胞最适浓度 |
| 2.KYD最适干预浓度 |
| 3.KYD溶液对心肌细胞肥大的影响 |
| 4.KYD对肥大心肌细胞中凋亡的作用 |
| 讨论 |
| 1.NE在心肌细胞肥大和凋亡中的作用 |
| 2.中医药对心力衰竭的认识 |
| 3.本实验的研究讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 附录1 文献综述 现代医学对心肌细胞肥大及凋亡的研究 |
| 参考文献 |
| 附录2 在校期间论文论着和科研情况 |
四、槲皮素对血管紧张素Ⅱ致培养乳鼠心肌细胞肥大的抑制作用(英文)（论文参考文献）
- [1]基于PI3K/AKT信号通路探讨糖心平胶囊治疗糖尿病心肌病药效及机制[D]. 李晓文. 中国中医科学院, 2021
- [2]罗布麻叶总黄酮及异槲皮苷对吡柔比星致心脏损伤的保护作用和机制[D]. 张洋. 吉林大学, 2021(01)
- [3]槲皮素对肾间质纤维化中p-AMPKα蛋白和TGF-β1/Smad3信号通路的作用研究[D]. 许火龙. 佳木斯大学, 2021
- [4]新型Pyxinol衍生物的合成、生物活性及药代动力学研究[D]. 刘俊丽. 吉林大学, 2021(01)
- [5]miR-489调控心肌纤维化的机制及人参皂苷Re的干预作用研究[D]. 孙敬辉. 中国中医科学院, 2021
- [6]基于自噬调控巨噬细胞表型转化探讨三七皂苷R1改善动脉粥样硬化的研究[D]. 谭亮. 湖北中医药大学, 2021(01)
- [7]复方高滋斑片降血压药效及作用机制研究[D]. 胡甲乙. 湖北中医药大学, 2021(10)
- [8]人参皂苷Rg1通过SIRT1/PGC-1α信号通路抑制AngⅡ诱导乳鼠心肌细胞肥大的研究[D]. 孙娜. 锦州医科大学, 2020(05)
- [9]葶苈子治疗心力衰竭的药理研究进展[J]. 曹雅雯,汤岐梅,侯雅竹,王贤良,赵志强,毛静远. 中西医结合心脑血管病杂志, 2019(20)
- [10]抗纤益心方对NE诱导心肌细胞肥大及凋亡因子Bcl-2、Bax的影响[D]. 闫京京. 河南中医药大学, 2019
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