一、组织工程化血管的研究进展(论文文献综述)
陈国宝,杨欢,周江一,田吉迅,邓雅心[1](2022)在《天然生物材料在组织工程化血管构建中的作用及研究进展》文中进行了进一步梳理心血管疾病是威胁人类健康的主要疾病之一。除了通过施加药物改善血管内膜血栓的凝结状况外,利用组织工程化血管对病变血管进行修复与置换,成为临床治疗的一种新的策略。天然生物材料的组织工程化血管由于具有良好的生物相容性、可降解性、低免疫原性以及快速诱导血管新生,展现出巨大的临床应用潜能。总结了基于不同天然生物材料构建的组织工程化血管的最新研究进展,分析了其在血管再生中的作用,并探讨了目前该领域存在的问题和面临的挑战。
吴姝涵,祝旭龙,白璐,张菲菲,蔺光帅,李江,杜嘉,李建辉[2](2022)在《水凝胶组织工程脂肪的血管化策略》文中认为背景:当前,从种子细胞、支架材料及细胞外微环境三方面着手构建工程化脂肪组织,是软组织缺损修复及重建最具发展潜力的方向之一,但由于缺乏有效的血管生成及血液供应,移植物再吸收一直是脂肪组织工程广泛应用的主要限制。目的:对基于水凝胶支架的组织工程脂肪如何建立血管网络、有效达到血管化的相关研究予以综述。方法:利用计算机检索CNKI中国知网、万方医学网、PubMed数据库2010年1月至2020年6月发表的相关文章,检索词为"组织工程,脂肪组织,血管化,水凝胶,脂肪干细胞,Adipose-derived stem cell,tissue engineering,adipose tissue,hydrogel,vascularization"。总结相关文章,最终共纳入88篇文献进行结果分析。结果与结论:利用水凝胶材料构建的组织工程化脂肪,其血管化策略主要有以下4种:使用组织工程室模型;将脂肪干细胞与血管内皮细胞共培养;水凝胶支架材料负载细胞因子促进新生血管形成;应用具有血管生成特性的水凝胶材料。因此,应用水凝胶材料建立高度仿生化的脂肪组织单元,结合有效的血管化技术手段,将进一步提高软组织的修复重建效果。
李光照,陈锐,贾洪林,任利玲[3](2022)在《组织工程血管化基因治疗的研究进展》文中认为背景:在大块工程化移植物内部迅速形成功能性血管系统,是其在宿主体内成功存活的基本前提。利用基因工程技术实现工程组织血管化具有治疗效果好、费用低、安全性高等优点,开展工程组织血管化基因治疗的相关研究对实现长期有效的组织修复有着重大意义。目的:综述目前组织工程血管化基因治疗的种子细胞、目的基因和基因载体的研究现状及存在的主要问题,以期进一步探讨基因治疗在组织工程血管化中的应用前景。方法:在Pub Med、Web of Science、CNKI上进行了文献检索,并以"Tissue engineering;Vascularization;Gene therapy;Seed cells;Target genes;Vectors"作为英文检索词,以"组织工程;血管化;基因治疗;种子细胞;目的基因;载体"作为中文检索词,对最终纳入的61篇文献进行了归纳总结。结果与结论:间充质干细胞、血管内皮细胞及内皮祖细胞是组织工程血管化基因治疗中最具潜力的种子细胞,不仅具有良好的血管诱导性,而且有利于多种病毒和非病毒载体的导入及血管化目的基因的表达。血管内皮生长因子、血管生成素1、碱性成纤维细胞生长因子、骨形态发生蛋白2、缺氧诱导因子1α等血管化目的基因,主要通过双/多基因联合、成骨与成血管耦合及上游基因调控等方式在工程化移植物内部构建出高效、稳定的血管网络。由于不同的病毒和非病毒载体具有各自的优缺点,因此在应用时主要根据基因转染效率、生物安全性、成本等方面来选择合适的载体。目前,尽管基因治疗在组织工程血管化中的应用研究已取得很大进展,但是要真正应用于临床实践,还需要突破众多技术瓶颈,例如如何提高目的因子的释放靶向性和降低安全风险等,这也是未来组织工程血管化基因治疗的研究方向和热点。
冯世明,胡继仲,刘威,李立[4](2021)在《组织工程化胆管研究进展》文中研究指明目的总结近年来组织工程化胆管的研究进展。方法通过收集近年来组织工程化胆管领域中与体外测试平台、支架材料、种子细胞的获取方式及种子细胞与材料复合后的体内修复效果相关的文献,对组织工程化胆管的基础和临床应用研究情况作一综述。结果组织工程化胆管的发展极为迅速,在体外测试平台、支架材料、种子细胞、动物模型修复效果方面已经取得了长足的进展,但是在临床上的使用还有待进一步研究。体外胆管平台包括3D打印、生物模拟等;支架材料方面除了各种人工材料的进步外又引入了脱细胞基质;种子细胞的选择包括胆管来源的干细胞、人骨髓间充质干细胞(hMSCs)、肝卵圆细胞(HOC)、多能干细胞(PSCs)等各种干细胞的诱导分化;动物模型方面,组织工程化胆管在猪、狗等动物模型上也取得了良好效果。结论组织工程化胆管的发展会使肝外胆道疾病的体外基础研究更加便利,也给临床上肝外胆道损伤的治疗带来了新的选择。
冯世明[5](2021)在《异种脱细胞动脉基质修复猪肝外胆道缺损及良性狭窄的机制研究》文中提出[目的]研究人源异种脱细胞动脉基质修复滇南小耳猪肝外胆道缺损模型的短段(2-3cm)、长段(4-6cm)及长期(12个月)效果;探究吻合口瘢痕愈合时上皮间质转化(EMT)的形成机制。[方法]通过滇南小耳猪肝外胆道缺损模型的建立与不同长度脱细胞动脉基质修补后的血液学检查判断人源异种脱细胞动脉基质的修复效果;通过HE染色、Masson染色、免疫组化等实验方法判断胆道瘢痕愈合的机制。[结果]短段的人源异种脱细胞动脉基质可以稳定修复滇南小耳猪肝外胆道缺损模型,血液学显示短段人源异种脱细胞动脉基质可以改善胆道离断性损伤的吻合口愈合效果;长段修复较短段效果差,有待进一步深入研究;胆道的节段性缺损愈合时形成上皮间质转化。[结论]人源异种脱细胞动脉基质能够修复滇南小耳猪的肝外胆道缺损长达12个月,修复部位发生上皮间质转化,可以为临床上胆道损伤的修复提供新的治疗方法。[目的]检测VEGF对胆管上皮细胞增殖迁移能力的影响;制备VEGF-DOPA-脱细胞动脉基质并检测其作为组织工程化胆管的适用性。[方法]通过二步酶消化法制备脱细胞基质;通过CCK8、Transwell、细胞划痕及平板克隆等实验检测VEGF对胆管上皮细胞的迁移及增殖的影响;使用2mg/ml的DOPA-Tris-HCL溶液浸泡人源脱细胞动脉基质形成邻二苯酚基团平台,使用VEGF-A修饰该平台;通过CCK8检测材料浸出液的细胞毒性;通过镜下观察、HE染色、免疫荧光、Western Blot、电镜观察等实验技术检测猪胆管上皮细胞在该平台上的粘附、增殖特性;通过裸鼠皮下基质胶成血管实验检测材料诱导血管形成能力。[结果]VEGF可以促进胆管上皮细胞的增殖迁移;VEGF-DOPA-脱细胞动脉基质不具有细胞毒性,具有良好的生物相容性,在体外可以促进胆管上皮细胞的粘附,可以加快脱细胞动脉基质的再细胞化进程,且该材料可以促进血管定向生长。[结论]VEGF-DOPA-脱细胞动脉基质可以为组织工程胆管快速提供切实可行的材料,有望发展成为商品化的组织工程化胆管,为胆道损伤尤其是肝外胆道损伤的治疗提供更加优化的解决方案。
沈炎冰[6](2021)在《具有炎症缓解特性的软骨组织工程仿生支架的构筑和功效评价》文中认为关节软骨缺损治疗是目前临床上面临的最具挑战性的问题之一,由于软骨组织无血管、无神经和无淋巴的特性,在受损之后很难自行愈合。炎症反应是影响软骨损伤进程的一个关键因素,期间产生的大量促炎症因子会引起细胞的代谢紊乱和软骨基质分解增强,最终导致软骨缺损修复的失败,因此如何有效调控炎症反应是应对软骨损伤修复的重要策略。近年来,通过组织工程方法构建具有仿生天然软骨细胞外基质(ECM)特性的生物材料支架修复受损软骨组织,可为关节软骨缺损的治疗提供新的思路和可能性。其中,基于脂肪族聚酯材料(如聚乳酸PLA、聚乙醇酸PGA及二者的共聚物PLGA等)的电纺纤维支架,由于具有在结构上仿生天然软骨组织ECM中的胶原纤维的独特优势,已受到领域研究者的广泛关注。然而,脂肪族聚酯材料降解过程中产生的酸性降解产物(乳酸、乙醇酸及其低聚物),会引起严重的无菌炎症反应;同时,支架本身在植入体内后也常常由于免疫反应而引起早期炎症反应的发生。因此,如何构建具有炎症缓解特性的软骨组织工程仿生支架是实现软骨损伤有效再生修复的关键所在。本学位论文基于可生物降解的脂肪族聚酯电纺仿生纤维,分别以原位中和其酸性降解产物和引入抗炎生化信号为主要炎症缓解策略,构建具有高度仿生天然软骨ECM结构和生化信号的微环境,探讨仿生支架的炎症缓解作用及对软骨损伤的再生修复功效和应用潜力。具体研究内容如下:(1)从原位中和脂肪族聚酯材料酸性降解产物的角度,本研究提出发展“中性纤维”功能纤维的设计思路。利用同轴电纺技术,通过调节壳层壳聚糖(CTS)溶液的注射速率制备具有不同CTS含量涂层的CTS/PLGA壳芯取向纤维,然后通过体外降解方法,研究壳层碱性天然成分CTS对芯层PLGA降解产物的原位酸度中和作用,并从细胞和组织层面评价CTS/PLGA纤维的pH中和特性对炎症反应的缓解作用。结果表明,体外降解过程中,CTS/PLGA纤维中壳层CTS成分能有效中和芯层PLGA降解引起的pH下降,降解8周后,CTS/PLGA组的pH维持在接近中性,而PLGA组的pH则下降至3.1。利用降解液模拟的降解酸性微环境,发现CTS的酸度中和作用可显着减少人成纤维细胞的促炎症因子IL-6和IL-8的分泌(分别为PLGA组的37%和34%)和下调促炎症基因IL-6、IL-8和IL-1β的表达(分别为PLGA组的34%、69%和56%),同时促进ECM相关基因COL-1和COL-3的表达。对支架体外生物相容性评价的实验结果表明,相比于PLGA纤维,CTS/PLGA“中性纤维”虽然减缓了成纤维细胞的增殖和粘附能力,但却促进细胞的迁移和胶原蛋白的分泌。在植入大鼠皮下2周和4周后,对新生组织进行H&E染色和CD68免疫组化染色,发现CTS/PLGA“中性纤维”能显着减缓体内炎症细胞的募集和异物巨细胞的形成,同时减少新生血管化的形成及促进成纤维细胞长入支架内部和分泌大量细胞外基质。(2)基于壳聚糖的pH中和特性及其与天然软骨ECM中糖胺聚糖(GAGs)化学结构相似的优势,将PLGA电纺纤维制备成短纤维后复合到柠檬酸改性的壳聚糖水凝胶(CC)中,以仿生软骨ECM的纤维-水凝胶复合结构,同时增强壳聚糖基CC水凝胶的力学性能;接着,引入软骨脱细胞基质(CDM)作为软骨分化诱导的生化信号,通过冷冻成胶法(cryogelation)和冷冻干燥法(lyophilization)制备了可在组成、结构和生化上对天然软骨基质微环境高度仿生的3D多孔支架,然后研究该仿生支架对软骨形成和再生修复的促进作用。结果表明,PLGA短纤维和CDM的引入能显着增强CC水凝胶的力学性能(压缩应力提升了349%,杨氏模量提升了153%),同时具有大孔径、合适的孔隙率及快速吸水能力。PLGA短纤维增强的CC水凝胶体系(即Fib/CC)同样具有pH中和特性,能有效减缓包埋皮下后炎症细胞的募集和异物巨细胞的形成。而对于同时含有PLGA短纤维和CDM的复合水凝胶(即CDM-Fib/CC)仿生支架,在体外细胞实验中能有效促进软骨细胞的粘附和增殖及形成成熟的新生软骨组织,伴随着丰富的软骨特异性ECM(GAGs和II型胶原)的沉积;进一步,通过动物实验将CDM-Fib/CC仿生支架植入兔软骨下骨缺损处,发现该仿生支架增强的力学性能及软骨诱导活性能有效促进缺损的再生修复。(3)从将抗炎生化信号引入仿生支架的角度,本研究通过在电纺PLLA取向纤维的表面涂覆聚多巴胺(PDA)涂层,利用PDA分子中的非共价键(π-π叠加和氢键)吸附作用负载具有炎症缓解作用的小分子药物橙皮素(Hes),然后研究了该支架中Hes介导的炎症缓解作用及对软骨细胞功能的影响。结果表明,PDA涂覆后的PLLA支架可成功负载Hes,并在体外实现缓慢释放。通过体外细胞实验发现,Hes@PDA/PLLA仿生支架有效下调RAW264.7巨噬细胞促炎基因表达(TNF-α、IL-1β和INOS)和上调抗炎基因(CD206和IL-4)表达,从而调控炎症激活的巨噬细胞从促炎M1表型向抗炎M2表型转换。除此之外,发现Hes@PDA/PLLA仿生支架也能通过下调炎症激活的软骨细胞促炎基因(TNF-α、IL-1β和INOS)和基质金属蛋白酶3(MMP3)的表达,实现软骨特异功能相关基因(Aggrecan、CollagenⅡ和Sox9)的表达和相关蛋白(GAGs和胶原)的分泌,利于软骨形成。综上所述,本研究通过同轴电纺技术制备了具有壳芯结构的CTS/PLGA“中性纤维”,利用壳层CTS的原位酸度中和特性缓解芯层PLGA降解引起的pH下降,从而缓解了炎症反应,利于提高该仿生纤维支架的长期生物相容性;基于壳聚糖的pH中和特性及其与软骨基质中的GAGs化学结构相似的优势,将PLGA短纤维和CDM复合到壳聚糖基水凝胶中制备了力学及软骨诱导能力均显着增强的仿生软骨支架,通过其结构和成分的高度仿生特性及足够的力学性能,实现了有效修复和再生软骨缺损;最后通过将小分子药物Hes引入到PDA改性的PLLA纤维上,构建了有潜力缓解(植入初期)炎症反应特性的工程化仿生纤维支架,研究通过Hes的缓释对炎症缓解及软骨细胞功能的影响和机制。这些研究不仅丰富和加深了构建具有炎症缓解特性的工程化纤维仿生支架应用于组织再生(如软骨组织)的功效和机理的认识,同时也为软骨组织工程中仿生支架的设计和构建提供了新的思路和方向,对推动具有良好生物相容性的工程化软骨支架的构建和促进其临床应用转化具有重要指导作用和参考价值。
杨国珺[7](2021)在《组织工程弹性软骨构建及MRI T2 mapping无创监测体内转归的研究》文中研究表明研究背景:软骨组织缺损修复一直是整形外科临床工作的一大难点。近年来,软骨组织工程的发展为此提供了新的思路。尽管目前已有将组织工程软骨应用于临床的成功个案报道,其临床转化仍然需克服很多问题。目前,组织工程软骨在体转归的评估仍是以组织病理学切片检查为金标准,迫切需要一种安全无创的动态监测手段以检测工程化组织植入后的转归。磁共振成像(Magnetic Resonance Imaging,MRI)是一种软组织对比度出色,具有丰富成像序列的无创检查手段。MRIT2 mapping成像在组织工程关节软骨生化定量中的价值已有报道,但在组织工程弹性软骨中的有效性尚无定论。研究目的:1.明确基于兔耳软骨细胞-丝素蛋白支架体外构建组织工程软骨构建效果;2.明确基于兔耳软骨细胞-丝素蛋白支架构建的工程化软骨在家兔皮下的成熟与转归过程;3.明确T2 mapping监测基于耳软骨细胞构建的组织工程软骨植入有免疫动物皮下后的转归的应用价值;4.进一步探讨工程工程化软骨在体T2值与GAG、ELN、总胶原、Ⅱ型胶原、Ⅰ型胶原含量之间的相关性。研究方法和结果:1.组织工程弹性软骨构建及在体实验研究1.1基于兔耳软骨细胞-丝素蛋白支架体外构建组织工程弹性软骨的研究方法:将P2代兔耳软骨细胞接种于丝素蛋白支架,体外培养4周后取材进行组织学染色、软骨相关生化定量检测与基因表达检测,评价体外构建效果。结果:P2代耳软骨细胞接种于丝素蛋白支架,经4周体外培养后获得了较满意的弹性软骨样组织。1.2组织工程弹性软骨在家兔皮下的成熟与转归方法:将体外构建的组织工程弹性软骨样组织(EC)与自体耳软骨(AC)、无细胞丝素蛋白支架(SF)植入家兔自体皮下,第2,4,8周后取材进行组织学检测与软骨相关评价。结果:基于耳软骨细胞-丝素蛋白支架构建的工程化软骨在家兔自体皮下早期(~2周)受到急性炎症反应攻击,软骨细胞存活量减少,但存活的软骨细胞至移植后4周仍然能够保持较好的弹性软骨表型。皮下植入后8周,支架尚未完全降解,工程化组织基质中胶原成分改变。2.MRI T2 mapping无创监测组织工程弹性软骨在体转归的实验研究方法:将体外构建的组织工程弹性软骨样组织(EC)与自体耳软骨(AC)、无细胞丝素蛋白支架(SF)植入家兔自体皮下,术后第1,2,4,8周进行MRI检查,然后按规定时间取材进行组织学检测与软骨相关检测。结果:多长TE回波T2映射(2D MIXED T2 Mutislices clear序列)能够区分显示工程化软骨组织、自体皮下移植耳软骨组织以及无细胞丝素蛋白支架在体差别;并能够反映工程化软骨在家兔皮下环境中的成熟与转归过程。工程化软骨在家兔皮下的平均T2值与总胶原、弹性蛋白、GAG含量呈现高度的负相关性(r=-0.946,-0.939,-0.933;P<0.001);而与Ⅱ型胶原、Ⅰ型胶原含量表现出较弱的负相关性(r=-0.797,P=0.01;r=-0.837,P<0.001)。研究结论:1.基于兔耳软骨细胞-丝素蛋白支架构建的工程化组织在体外培养4周后,能够获得较满意的工程化弹性软骨样组织。2.工程化软骨植入家兔自体皮下早期(~2周)由于急性炎症反应软骨细胞存活量减少,存活的软骨细胞至移植后4周仍然能够保持较好的弹性软骨表型。8周时工程化软骨支架降解尚不完全,并出现纤维化倾向。3.多长TE回波T2映射(2D MIXED T2 Mutislices clear序列)能够清晰显示工程化软骨组织、自体皮下移植耳软骨组织以及无细胞丝素蛋白支架并加以鉴别;并能够反映工程化软骨在家兔皮下环境中的成熟与转归过程。4.基于兔耳软骨细胞-丝素蛋白支架构建的工程化软骨在家兔皮下的平均T2值与总胶原、弹性蛋白、GAG含量呈现高度的负相关性(r=-0.946,-0.939,-0.933;P<0.001)
李兴茂[8](2020)在《双层双取向仿生血管组织工程支架的制备及其性能研究》文中研究说明随着社会经济的发展,人民生活水平的提高,心血管疾病已经成为了阻碍人类健康的一个巨大的障碍。目前,大中口径人工血管已经应用于临床,并取得了良好的效果;小直径人工血管移植后易产生血栓造成血管的再狭窄,其低长期通畅率限制了它在临床上的应用。应用材料科学与生物科学相结合,构建仿生天然血管细胞外基质(ECM)结构和组成的组织工程支架,体外接种血管细胞进行组织工程化培养,可以降低移植物的免疫原性,防止血栓形成,提高移植物的长期通畅率,所以体外构建组织工程血管作为替换严重病变血管的人工替代物具有巨大潜能。天然血管ECM是由胶原蛋白与弹性蛋白等构成的三维纳米纤维网络状结构,血管功能性细胞在其上呈现多层双取向生长。人工构建的血管组织工程支架需具备合适的力学性能、生物相容性、降解性能及类天然血管ECM结构等特点。静电纺丝技术可制备微米至纳米范围的超细纤维,能够很好的仿生天然血管ECM的结构和功能。本课题利用静电纺丝技术,制备了双层双取向管状小直径高分子复合纳米纤维支架,并对支架的理化性能和组织工程化进行了研究。通过研究不同高分子纤维膜的亲水性和力学性能,最终确定使用(PCL):聚乳酸羟基乙酸共聚物(PLGA):明胶(GE)质量比=1:1:1的复合材料制备管状支架。为了尽可能的仿生天然血管的结构与功能,我们改进静电纺丝技术,设计两步纺丝法制备了双层双取向管状小直径血管支架。通过对电纺纳米纤维形貌和管状支架结构特点的表征,证实了管状支架具有类天然血管中功能性细胞取向排布生长的结构特点。其次,分别对支架的力学性能、亲水性、体外降解进行研究和分析。该支架的极限拉伸应力为2.04±0.15 MPa,断裂伸长率为342.48±4.13%,在湿润状态下支架的破裂压力达到了 111.03±6.03 kPa;支架完全亲水,水滴在其上5秒时,接触角变化为0;支架在第4周已经发生了明显得降解,第12周支架重量降解为初始重量的49±2%。体外接种平滑肌细胞(SMCs)和内皮细胞(ECs)后,发现支架对细胞的增殖生长具有良好的促进作用,纤维的取向结构对细胞的生长发挥了良好的接触引导效应,在其上生长的细胞呈现和纤维一样的取向排布生长;扫描电子显微镜(SEM)观察发现细胞的伪足牢牢抓住或跨过单根纤维,有向纤维膜内部的迁移生长的趋势;对细胞骨架染色后,发现细胞的骨架沿纤维的取向方向生长,细胞呈现纺锤体结构。这些结果均表明,复合材料PCL:PLGA:GE=1:1:1(下文简称PPG)具有良好的细胞活性和生物相容性。最后,我们设计制备了仿生天然血管生理微环境的双循环动态灌注系统,对管状支架进行4周的体外组织工程化。HE染色结果表明三维管状支架呈现疏松多孔结构,且观察到丰富的亮粉红色染的胶原纤维,支架形成了类天然血管壁ECM的结构,该结构有利于后续细胞向支架内部的迁移生长。总之,通过改进静电纺丝方法,成功制备具有天然血管壁功能性细胞取向排列结构特点的双层双取向纳米纤维血管支架。研究结果表明,该管状支架可以满足血管组织工程支架对力学、亲水性、体外降解和生物相容性的要求。取向结构纤维可以对其上生长的细胞起到接触引导的效果,取向纤维的孔径也足以支持血管SMCs向支架内部的迁移生长。组织工程化结果表明,其具有疏松多孔的结构和内部含有丰富的亮粉红色的胶原纤维,说明形成了类天然血管ECM结构。
陈笑笑[9](2020)在《基于GelMA微纤维的骨骼肌单轴拉伸诱导生成及致动特性研究》文中研究指明生物混合致动器具有固有的安全性、高能效、低能耗、高敏感度以及自修复能力,为仿生机器人设计提供了新的思路。生物混合致动器的主要动力来源是可收缩的细胞或组织,在此之中,组织工程化骨骼肌具有细胞来源广、组织工程化难度低、可控性高、功率重量比高且可自修复等特性,使其成为最有潜力的生物混合致动器的动力来源。骨骼肌是常见的纤维状组织,其结构对其功能完整性及基于骨骼肌的致动器的应用场景具有重要影响,因此有必要在体外复制出其微纤维状结构。然而,现有的微纤维加工方法或由于其极端的加工条件不适宜于纤维状细胞衍生物的构建,或由于多步固化、离子型凝结剂暴露容易造成细胞损伤。天然骨骼肌长期处于机械场中,这对于骨骼肌的发育具有重要意义。然而,机械刺激诱导骨骼肌体外生成的系统性研究,受到设备复杂控制系统、较大占用空间或细胞高污染风险等限制,很难在培养系统中进行。另外,组织工程化骨骼肌有限的致动能力及寿命,为其在生物混合致动方面的应用带来了重重挑战。本论文从用于生物混合致动的组织工程化骨骼肌的需求出发,制备了致密排列、长寿命且高性能的基于明胶-甲基丙烯酰基(GelMA)微纤维的骨骼肌。主要研究内容和结果如下:1.仿骨骼肌胞外基质GelMA微纤维的制备。提出了基于有机硅管的无凝固浴法进行GelMA微纤维的加工,通过一次UV曝光获得数十厘米长的均质多孔微纤维。该方法易于操作、材料限制小且成本低,适用性广。通过改变曝光时间得到了结构和刚度类似于天然骨骼肌的微纤维。温和的加工条件和GelMA优异的物理特性避免了由于剪切应力、极端环境和离子凝结剂暴露引起的细胞损伤,有利于培养过程中营养物质的扩散和高细胞活性的维持,使其在骨骼肌组织工程中具有较大的应用潜力。2.单轴拉伸诱导微纤维状骨骼肌生成的研究。我们设计了基于柱-孔阵列的拉伸装置,将单轴拉伸用于GelMA微纤维中C2C12成肌细胞的行为调控。这种独立的小型化拉伸装置可重复使用、成本低、损耗低、灵活度高。通过将其与培养系统集成,为细胞机械响应的系统性分析提供了研究平台。单轴拉伸的施加有效改善了细胞的扩散、伸长和取向,显着增加了肌管的尺寸及成熟度,并在应变≥35%时达到饱和水平。以上结果表明单轴拉伸能够有效地促进微纤维状骨骼肌的生成和成熟。微纤维状骨骼肌的致动性能具有优异的可控性,且随着应变的增加,其致动能力明显提高,而致动模式则从扭转模式(应变<25%)转变为线性收缩(应变≥25%)。对机械刺激诱导微纤维中成肌细胞定向生长及骨骼肌生成的系统性分析,使我们对机械刺激在骨骼肌生成的各个阶段所起的作用有了更深入的了解。而单轴拉伸对微纤维状骨骼肌致动能力及致动模式的影响,使得生物混合致动器的定制更加便利,可拓宽其应用领域。3.微纤维状骨骼致动性能优化研究。为了提高微纤维状骨骼肌的细胞密度,本文引入了单轴拉伸与类胰岛素样生长因子-I(IGF-I)。它们共同作用,对微纤维状骨骼肌生成进行调控,明显促进了肌管密度和尺寸的增大,并延缓了肌管收缩能力随培养时间的衰减,有利于延长其使用寿命。为了改善微纤维状骨骼肌的致动性能,我们引入了电刺激训练。单轴拉伸、IGF-I与电刺激训练相结合,极大地促进成肌细胞的增殖和肌管的生成以及成熟,使肌管的收缩位移增大为原来的~3.2倍。这种具有高密度肌管序列、致动能力改善的微纤维状骨骼肌在生物混合致动方面具有巨大的应用潜力。基于以上内容,本论文的创新点如下:提出了一种基于有机硅管的无凝固浴的方法来制造微纤维状的仿骨骼肌胞外基质。设计了基于柱-孔阵列的小型化、低能耗的拉伸装置,用于细胞行为、骨骼肌生成及致动性能的调控。并且引入了单轴拉伸、IGF-I与电刺激训练的综合作用,使得微纤维状骨骼肌的致动性能得到大幅度提高,同时延缓了其功能的衰退,使其能够满足在生物混合驱动等方面的应用需求。
赵乐[10](2020)在《重组Resilin蛋白源水凝胶的制备及其在心肌组织工程中的应用》文中研究指明心肌梗死在我国具有很高的发病率和死亡率。心梗后心肌细胞死亡,由于心脏再生能力极其有限,依靠其自身修复机制无法弥补损失的心肌细胞,梗死心肌组织纤维化及残存心肌的代偿性肥大进一步使患者发展为心力衰竭,进而导致死亡。现有治疗手段虽能在一定程度上缓解患者症状,但不能从根本上解决缺血后心肌损伤修复的难题,从而无法抑制心梗后负性心室重构,终将导致心衰。可注射性心肌组织工程策略,即以可注射性水凝胶材料为载体携带细胞和/或生长因子注射到心肌损伤部位进行损伤修复,有望成为除药物、血运重建术、心脏移植以外新的治疗手段。近年来,随着心肌组织工程可注射性水凝胶材料相关研究的不断深入,具有良好生物相容性的弹性材料逐渐受到研究人员的关注。研究表明,弹性水凝胶材料不仅可以作为携带细胞、生长因子等目标物质的载体,还因具备良好的弹性和可拉伸性,能够为心肌组织提供机械性辅助并改善梗死组织的力学微环境,从而改善梗死组织局部心肌运动障碍、降低室壁应力,有利于损伤部位的修复和心脏功能的改善。节肢弹性蛋白(Resilin)是一种在昆虫节肢中发现的弹性蛋白,因其表现出显着的弹性、回弹性以及抗疲劳性等特点而备受关注。自鉴定出第一个resilin蛋白的基因序列以来,人们已经设计出多种基于resilin序列的重组序列并构建出多种resilin样蛋白,已成功应用于组织工程与药物递送领域,尤其在血管、声带、软骨和肌肉等组织工程研究中进展迅速。在重组resilin蛋白源弹性材料研究中,基于RLP12蛋白的resilin水凝胶材料的因具有良好的力学性能和生物活性近年来备受关注。RLP12蛋白是在resilin核心弹性序列的基础上添加了细胞结合域,因此其交联形成的水凝胶能够表现出优异的细胞粘附性以及促细胞增殖的能力,并对声带损伤具有修复作用。然而,在可注射性心肌组织工程中,resilin样蛋白来源的水凝胶是否能够作为干细胞的可注射载体用于梗死心肌的损伤修复尚不明确。本研究首先通过基因工程方法构建不同的重组resilin蛋白表达载体,经诱导表达和纯化后分别获得resilin样蛋白rec1-resilin以及RLP12,并利用化学交联法制备基于RLP12蛋白的resilin水凝胶材料;在此基础上,以RLP12源resilin水凝胶为载体携带红色荧光蛋白标记的BADSCs进行大鼠心梗移植,对其心梗损伤修复能力进行深入研究,验证RLP12源resilin水凝胶携带BADSCs心梗注射进行心肌损伤修复的可行性与效果。本论文主要包含以下两部分研究内容:第一部分:Resilin样蛋白源水凝胶材料的制备目的:制备resilin样蛋白源水凝胶并对其力学性能进行测定。方法:构建两种重组resilin蛋白表达载体RLP12与rec1-resilin并对其进行诱导表达与纯化;利用化学交联法制备出基于RLP12蛋白的resilin水凝胶材料,并通过振荡剪切流变特性检测试验对其力学性能进行鉴定。结果:成功构建了重组resilin蛋白表达载体RLP12与rec1-resilin,诱导表达纯化后分别获得RLP12蛋白与rec1-resilin蛋白;利用THP交联获得了3种不同PEG含量的RLP12-resilin水凝胶,振荡剪切流变特性检测结果表明其剪切模量为10k Pa-15k Pa。结论:成功制备了RLP12蛋白与rec1-resilin蛋白并获得了基于RLP12蛋白的resilin水凝胶材料。第二部分:以Resilin水凝胶为载体携带棕色脂肪源干细胞(BADSCs)心梗移植的心肌损伤修复研究目的:验证resilin样蛋白水凝胶材料作为干细胞可注射性载体用于梗死心肌损伤修复的可行性与效果。方法:以RLP12蛋白源resilin水凝胶为载体携带红色荧光蛋白标记的BADSCs进行大鼠心梗移植,通过心脏超声对移植4周后心脏功能进行测定;通过组织学、免疫组织化学染色、免疫荧光染色等方法对心梗面积、胶原沉积、微血管密度、BADSCs体内存活与分化进行检测。结果:RLP12源resilin水凝胶作为BADSCs的载体,能显着提高BADSCs在心肌组织中存活;移植4周后可以显着改善心梗大鼠的心脏功能、减少心梗面积、降低纤维沉积水平并提高微血管密度;RLP12源resilin水凝胶能够提高Ⅲ型胶原在心梗区域与心梗边缘区域的分布水平。此外,RLP12源resilin水凝胶能够提高BADSCs在体内向c Tn T阳性细胞、α-SMA阳性细胞的分化能力。结论:RLP12源resilin水凝胶能够作为干细胞的可注射性载体用于心肌梗死的治疗,其可能通过改善心梗部位力学微环境增加Ⅲ型胶原的分布,进而提高心肌组织的顺应性。本研究首次以RLP12源resilin水凝胶为载体携带棕色脂肪源干细胞进行大鼠心梗移植,实现了抑制心梗后负性心室重塑、提高心脏功能的作用。本研究有望拓展resilin样蛋白作为弹性材料在心肌组织工程中的应用范围,也可为基于可注射水凝胶与干细胞的心梗治疗提供新的指导,对未来缺血性心脏病治疗具有重要意义。
二、组织工程化血管的研究进展(论文开题报告)
(1)论文研究背景及目的
此处内容要求:
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景,再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题,并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例:
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
(2)本文研究方法
调查法:该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法:用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法:通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法:通过调查文献来获得资料,从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法:依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法:对研究对象进行“质”的方面的研究,这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法:通过具体的数字,使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法:运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法:这是社会科学用来分析社会现象的一种方法,从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法:通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、组织工程化血管的研究进展(论文提纲范文)
(1)天然生物材料在组织工程化血管构建中的作用及研究进展(论文提纲范文)
1 脱细胞血管基质来源类生物材料 |
1.1 脱细胞血管 |
1.2 脱细胞血管基质复合支架 |
2 蛋白质类生物材料 |
2.1 胶原 |
2.2 角蛋白 |
2.3 弹性蛋白 |
2.4 纤维蛋白 |
2.5 明胶 |
2.6 蛋清 |
2.7 丝素蛋白 |
3 多糖类生物材料 |
3.1 壳聚糖 |
3.2 细菌纤维素 |
3.3 海藻酸盐 |
3.4 透明质酸 |
4 结论 |
(3)组织工程血管化基因治疗的研究进展(论文提纲范文)
文章快速阅读: |
文题释义: |
0引言Introduction |
1 资料和方法Data and methods |
1.1 资料来源 |
1.2 筛选标准 |
1.3 文献的提取 |
2 结果Results |
2.1 基因治疗中的成血管种子细胞 |
2.2 基因治疗中的促血管化目的基因 |
2.3 基因治疗中的载体 |
3 总结与展望Summary and prospects |
(4)组织工程化胆管研究进展(论文提纲范文)
1 胆管的体内修复 |
1.1 支架材料 |
1.1.1 不可吸收材料 |
1.1.2 可降解高分子合成材料 |
1.1.3 脱细胞的ECM |
1.1.4 复合材料 |
1.2 种子细胞 |
1.3 细胞和材料的复合及体内修复 |
2 体外胆管平台 |
3 小结 |
(5)异种脱细胞动脉基质修复猪肝外胆道缺损及良性狭窄的机制研究(论文提纲范文)
缩略词表 |
第一部分 猪肝外胆道缺损及良性狭窄的修复机制研究 |
中文摘要 |
英文摘要 |
前言 |
材料与方法 |
结果 |
讨论 |
结论 |
第二部分 再细胞化脱细胞动脉基质的制备及修饰 |
中文摘要 |
英文摘要 |
前言 |
材料与方法 |
结果 |
讨论 |
结论 |
参考文献 |
综述 组织工程化胆管研究进展 |
参考文献 |
攻读学位期间获得的学术成果 |
致谢 |
(6)具有炎症缓解特性的软骨组织工程仿生支架的构筑和功效评价(论文提纲范文)
摘要 |
abstract |
缩略词 |
第一章 绪论 |
1.1 关节软骨损伤与修复方法 |
1.1.1 关节软骨损伤 |
1.1.2 关节软骨损伤的修复方法 |
1.2 软骨组织工程与仿生支架 |
1.2.1 天然关节软骨的结构 |
1.2.2 软骨组织工程 |
1.2.3 原位软骨组织工程 |
1.2.4 软骨仿生支架 |
1.3 软骨再生与炎症反应 |
1.3.1 创伤性炎症反应 |
1.3.2 软骨组织工程与免疫反应 |
1.3.3 组织工程缓解炎症反应的方法 |
1.4 脂肪族聚酯材料在组织工程应用中的无菌炎症问题 |
1.4.1 脂肪族聚酯材料的基本性质 |
1.4.2 脂肪族聚酯材料的降解对组织再生的影响 |
1.4.3 缓解脂肪族聚酯材料引起的炎症反应的方法 |
1.5 课题的研究意义及内容 |
1.5.1 论文立题意义及研究设想 |
1.5.2 研究目的与内容 |
1.6 论文的创新点 |
1.7 参考文献 |
第二章 具有酸度中和特性的仿生纤维的制备及其炎症缓解作用 |
2.1 引言 |
2.2 材料与方法 |
2.2.1 实验试剂与仪器 |
2.2.2 CTS/PLGA壳芯取向纤维的制备与表征 |
2.2.3 CTS/PLGA壳芯取向纤维的酸度中和特性检测 |
2.2.4 降解培养液炎症反应检测 |
2.2.5 壳芯取向纤维对人成纤维细胞行为的影响 |
2.2.6 壳芯取向纤维对体内炎症反应的影响 |
2.2.7 统计分析 |
2.3 结果与讨论 |
2.3.1 CTS/PLGA壳芯取向纤维的形貌观察 |
2.3.2 CTS/PLGA壳芯取向纤维的化学结构表征 |
2.3.3 CTS/PLGA壳芯取向纤维的拉伸力学性能 |
2.3.4 CTS/PLGA壳芯取向纤维的降解性能 |
2.3.5 CTS/PLGA降解产物对人成纤维细胞的炎症标志物表达的影响 |
2.3.6 CTS/PLGA壳芯取向纤维对人成纤维细胞的行为及功能作用 |
2.3.7 CTS/PLGA壳芯取向纤维皮下包埋后炎症反应的评价 |
2.4 本章小结 |
2.5 参考文献 |
第三章 具有炎症缓解作用的高仿生软骨组织工程支架的构筑与评价 |
3.1 引言 |
3.2 材料与方法 |
3.2.1 实验试剂与仪器 |
3.2.2 CDM-Fib/CC仿生支架的制备与表征 |
3.2.3 纤维增强CC复合支架的体内炎症反应检测 |
3.2.4 CDM-Fib/CC仿生支架对软骨细胞的行为影响 |
3.2.5 CDM-Fib/CC仿生支架体外软骨构建 |
3.2.6 CDM-Fib/CC仿生支架体内软骨修复实验 |
3.2.7 统计分析 |
3.3 结果与讨论 |
3.3.1 CDM-Fib/CC仿生支架的表征 |
3.3.2 纤维增强CC复合支架的降解性能及炎症反应 |
3.3.3 CDM-Fib/CC仿生支架对软骨细胞的行为影响 |
3.3.4 CDM-Fib/CC仿生支架体外软骨构建及评价 |
3.3.5 CDM-Fib/CC仿生支架体内软骨修复及评价 |
3.4 本章小结 |
3.5 参考文献 |
第四章 负载Hes的仿生纤维支架对炎症缓解和软骨细胞功能的影响 |
4.1 引言 |
4.2 材料与方法 |
4.2.1 实验试剂与仪器 |
4.2.2 Hes@PDA-PLLA纤维的制备与表征 |
4.2.3 Hes@PDA-PLLA纤维的药物负载及释放的研究 |
4.2.4 负载Hes的取向纤维对巨噬细胞极化特性的影响 |
4.2.5 负载Hes的取向纤维对软骨细胞功能表达的影响 |
4.2.6 统计分析 |
4.3 结果与讨论 |
4.3.1 Hes@PDA-PLLA纤维的形貌变化 |
4.3.2 Hes@PDA-PLLA纤维的表面化学结构分析 |
4.3.3 Hes@PDA-PLLA纤维的药物负载率及释放行为 |
4.3.4 Hes@PDA-PLLA纤维对巨噬细胞极化特性的影响 |
4.3.5 Hes@PDA-PLLA纤维对软骨细胞炎症反应及软骨功能表达的影响 |
4.4 本章小结 |
4.5 参考文献 |
第五章 结论与展望 |
5.1 论文主要结论 |
5.2 研究展望 |
攻读博士学位期间发表论文、获奖及承担科研项目情况 |
致谢 |
(7)组织工程弹性软骨构建及MRI T2 mapping无创监测体内转归的研究(论文提纲范文)
中文摘要 |
Abstract |
前言 |
第一部分 组织工程弹性软骨构建及在体实验研究 |
研究背景 |
第一章 基于兔耳软骨细胞-丝素蛋白支架体外构建组织工程弹性软骨的研究 |
一、实验方法 |
二、实验结果 |
三、讨论 |
第二章 组织工程弹性软骨在家兔皮下的成熟与转归 |
一、实验方法 |
二、实验结果 |
三、讨论 |
小结 |
第二部分 MRI T2 mapping无创监测组织工程弹性软骨在体转归的实验研究 |
研究背景 |
技术路线 |
一、实验方法 |
二、实验结果 |
三、讨论 |
四、小结 |
全文结论 |
参考文献 |
文献综述 耳廓软骨组织工程研究进展 |
参考文献 |
中英文缩略语表 |
致谢 |
博士期间发表文章 |
(8)双层双取向仿生血管组织工程支架的制备及其性能研究(论文提纲范文)
摘要 |
Abstract |
第一章 绪论 |
1.1 静电纺丝技术 |
1.1.1 静电纺丝技术的发展历程 |
1.1.2 静电纺丝的原理与过程 |
1.1.3 静电纺丝的影响因素 |
1.2 血管组织工程支架 |
1.2.1 天然血管的结构与功能 |
1.2.2 血管组织工程支架 |
1.3 静电纺丝技术在血管组织工程支架中的应用 |
1.3.1 静电纺丝血管组织工程支架的材料 |
1.3.2 血管组织工程支架的研究现状 |
1.3.3 管状支架的组织工程化培养 |
1.4 课题的提出及研究意义 |
第二章 仿生小直径管状支架的制备及表征 |
2.1 引言 |
2.2 实验部分 |
2.2.1 实验材料与试剂 |
2.2.2 实验所用设备 |
2.2.3 血管支架的制备 |
2.3 血管支架的物理性能 |
2.3.1 支架的形貌结构 |
2.3.2 支架的亲水性 |
2.3.3 支架的力学性能 |
2.3.4 支架的降解 |
2.4 细胞与支架的相互作用 |
2.4.1 细胞的来源与培养 |
2.4.2 材料的准备 |
2.4.3 细胞的接种 |
2.4.4 细胞活性 |
2.4.5 细胞在材料上的形态、黏附和骨架 |
2.5 结果与分析 |
2.5.1 支架的物理性能分析 |
2.5.2 支架的生物相容性 |
2.6 小结 |
第三章 双循环动态灌注培养系统的设计与应用 |
3.1 引言 |
3.2 动态灌注培养系统的设计 |
3.2.1 系统的模块化设计 |
3.2.2 关键单元培养腔的设计 |
3.3 动态灌注培养系统的参数范围 |
3.3.1 灌注流速与脉冲频率的确定 |
3.3.2 压力的确定 |
3.4 管状支架的组织工程化 |
3.4.1 细胞接种前的准备 |
3.4.2 动态灌注培养 |
3.4.3 血管组织HE染色 |
3.5 组织工程化结果 |
3.5.1 支架的组织学检测结果 |
3.5.2 组织工程支架的宏观检测 |
3.6 小结 |
第四章 结论与展望 |
4.1 总结 |
4.2 展望 |
参考文献 |
致谢 |
附: 攻读硕士期间取得的学术成果 |
(9)基于GelMA微纤维的骨骼肌单轴拉伸诱导生成及致动特性研究(论文提纲范文)
摘要 |
ABSTRACT |
第一章 绪论 |
1.1 生物混合驱动 |
1.2 生物混合致动器 |
1.2.1 不可扩展的生物混合致动器 |
1.2.2 可扩展的生物混合致动器 |
1.2.3 现有生物混合致动器的局限性 |
1.3 用于生物混合驱动的工程化骨骼肌 |
1.3.1 骨骼肌的结构及功能 |
1.3.2 体外诱导骨骼肌生成的影响因素 |
1.3.3 用于生物混合驱动的工程化骨骼肌构建体 |
1.3.4 工程化骨骼肌用于生物混合驱动面临的挑战 |
1.4 本课题的研究内容与目标 |
1.5 本文的结构安排 |
第二章 仿骨骼肌胞外基质GelMA微纤维的加工及表征 |
2.1 用于组织工程的微纤维状结构的研究现状 |
2.2 明胶-甲基丙烯酰基(GelMA)水凝胶的合成及性能表征 |
2.2.1 GelMA水凝胶的合成 |
2.2.2 GelMA取代率的表征 |
2.2.3 GelMA流变性的确定 |
2.2.4 GelMA流变性与温度、单体浓度的关系 |
2.3 GelMA微纤维的制备及表征 |
2.3.1 GelMA微纤维的制备 |
2.3.2 GelMA微纤维的孔径结构及机械性能的表征 |
2.3.3 曝光参数对GelMA微纤维的机械性能和孔径的影响 |
2.4 GelMA微纤维用于C2C12细胞的三维包裹 |
2.4.1 包裹有C2C12成肌细胞的GelMA微纤维的加工 |
2.4.2 GelMA微纤维中细胞存活率的确定 |
2.4.3 曝光参数对包裹在GelMA微纤维中的细胞存活率的影响 |
2.5 小结 |
第三章 单轴拉伸用于GelMA微纤维中成肌细胞的取向调控 |
3.1 机械拉伸对细胞取向的调控 |
3.1.1 细胞取向在组织工程中的意义 |
3.1.2 机械拉伸对细胞取向的调控机理 |
3.2 单轴拉伸用于GelMA微纤维中细胞取向调控及表征 |
3.2.1 基于柱-孔阵列的拉伸装置用于单轴拉伸的施加 |
3.2.2 细胞荧光染色 |
3.2.3 数据处理及统计分析 |
3.3 单轴拉伸对GelMA微纤维中成肌细胞行为的影响 |
3.3.1 参数的定义 |
3.3.2 单轴拉伸对成肌细胞伸长及铺展的影响 |
3.3.3 单轴拉伸对成肌细胞取向的影响 |
3.4 小结 |
第四章 微纤维状骨骼肌的单轴拉伸诱导生成及致动能力表征 |
4.1 机械刺激对骨骼肌生成的影响机制 |
4.2 GelMA微纤维中骨骼肌生成的表征 |
4.2.1 GelMA微纤维中成肌细胞的分化 |
4.2.2 GelMA微纤维中骨骼肌的免疫荧光染色 |
4.3 单轴拉伸对微纤维状骨骼肌生成的影响 |
4.3.1 单轴拉伸对微纤维状骨骼肌的肌管尺寸及取向的影响 |
4.3.2 单轴拉伸对微纤维状骨骼肌中肌管成熟度的影响 |
4.4 微纤维状骨骼肌的致动性能的研究 |
4.4.1 微纤维状骨骼肌的电刺激驱动 |
4.4.2 微纤维状骨骼肌收缩响应的记录及数据处理 |
4.4.3 微纤维状骨骼肌的可控性研究 |
4.4.4 单轴拉伸对微纤维状骨骼肌的致动性能的影响 |
4.4.5 单轴拉伸对致动模式的影响 |
4.5 小结 |
第五章 多因素诱导微纤维状骨骼肌致动性能的优化 |
5.1 生物混合致动器的性能需求 |
5.2 机械-生化刺激共同作用对微纤维状骨骼肌致动性能的影响 |
5.2.1 类胰岛素样生长因子(IGF-I)的简介 |
5.2.2 单轴拉伸-IGF-I共同作用对微纤维状骨骼肌生成的影响 |
5.2.3 单轴拉伸-IGF-I共同作用对微纤维状骨骼肌致动性能的影响 |
5.3 机械-生化-电多因素作用对微纤维状骨骼肌致动性能的影响 |
5.3.1 单轴拉伸-IGF-I-电刺激训练多因素的引入 |
5.3.2 单轴拉伸-IGF-I-电刺激训练对微纤维状骨骼肌生成的影响 |
5.3.3 单轴拉伸-IGF-I-电刺激训练对微纤维状骨骼肌致动性能的影响 |
5.4 微纤维状骨骼肌在生物混合驱动方面的应用前景 |
5.5 小结 |
第六章 总结与展望 |
6.1 本文工作总结 |
6.2 本文的主要创新点 |
6.3 展望 |
参考文献 |
在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果 |
致谢 |
(10)重组Resilin蛋白源水凝胶的制备及其在心肌组织工程中的应用(论文提纲范文)
致谢 |
摘要 |
Abstract |
前言 |
第一部分 Resilin样蛋白源水凝胶材料的制备 |
1 材料 |
1.1 菌株与质粒 |
1.2 主要试剂 |
1.3 主要仪器设备 |
1.4 主要溶液配制 |
2 方法 |
2.1 RLP12蛋白的表达和纯化 |
2.1.1 RLP12基因合成 |
2.1.2 RLP12表达载体构建 |
2.1.3 重组表达载体转化 |
2.1.4 液体培养基发酵 |
2.1.5 蛋白提取 |
2.1.6 Ni~+柱纯化目的蛋白 |
2.1.7 SDS-PAGE |
2.1.8 Western Blot |
2.2 Rec1-resilin的表达和纯化 |
2.2.1 PCR获得rec1-resilin基因片段及鉴定 |
2.2.2 Rec1-resilin表达载体构建 |
2.2.3 重组表达载体转化 |
2.2.4 Rec1-resilin蛋白的表达和纯化 |
2.3 基于RLP12的Resilin水凝胶材料的制备及鉴定 |
2.3.1 基于RLP12的Resilin水凝胶材料的制备 |
2.3.2 水凝胶材料的振荡剪切流变特性检测 |
3 结果 |
3.1 RLP12的表达和纯化 |
3.1.1 RLP12基因合成 |
3.1.2 RLP12表达载体构建 |
3.1.3 Ni~+柱层析纯化RLP12蛋白 |
3.1.4 RLP12 蛋白的Western Blot检测 |
3.2 Rec1-resilin表达载体的构建 |
3.2.1 通过PCR获得rec1-resilin基因片段 |
3.2.2 Rec1-resilin表达载体构建 |
3.2.3 Ni~+柱层析纯化rec1-resilin蛋白 |
3.2.4 Rec1-resilin蛋白的Western Blot检测 |
3.3 基于RLP12的Resilin水凝胶材料的制备及鉴定 |
3.3.1 基于RLP12的Resilin水凝胶材料的外观 |
3.3.2 水凝胶材料的振荡剪切流变特性检测 |
4 讨论 |
第二部分 以Resilin水凝胶为载体携带棕色脂肪源干细胞(BADSCs)心梗移植的心肌损伤修复研究 |
1 材料 |
1.1 实验动物 |
1.2 主要试剂 |
1.3 主要仪器设备 |
1.4 主要溶液配制 |
2 方法 |
2.1 BADSCs的分离、培养与鉴定 |
2.2 BADSCs慢病毒转染 |
2.2.1 慢病毒包装系统转染293T细胞 |
2.2.2 MOI测定 |
2.2.3 慢病毒转染BADSCs |
2.3 大鼠心梗模型的建立及注射移植 |
2.3.1 大鼠心梗模型的建立 |
2.3.2 Resilin水凝胶及BADSCs注射移植 |
2.4 心功能检测 |
2.5 组织学检测 |
2.5.1 石蜡切片制备 |
2.5.2 Masson染色与纤维化水平检测 |
2.5.3 免疫组织化学染色 |
2.5.4 免疫荧光染色 |
2.6 统计学分析 |
3 结果 |
3.1 BADSCs的分离、培养与鉴定 |
3.1.1 BADSCs免疫表型鉴定 |
3.1.2 BADSCs形态学特征及心肌分化鉴定 |
3.2 BADSCs红色荧光蛋白标记 |
3.3 心脏功能检测 |
3.4 Resilin水凝胶携带BADSCs梗死心肌移植后细胞的存活 |
3.5 心梗面积大小与纤维化水平 |
3.6 Ⅰ型与Ⅲ型胶原在心梗区域与心梗边缘区域的分布水平 |
3.7 BADSCs移植4 周后的体内分化 |
3.8 微血管密度 |
4 讨论 |
结论 |
参考文献 |
综述 节肢弹性蛋白 Resilin 在生物医学研究中的应用 |
参考文献 |
作者简历及攻读硕士学位期间取得的研究成果 |
学位论文数据集 |
四、组织工程化血管的研究进展(论文参考文献)
- [1]天然生物材料在组织工程化血管构建中的作用及研究进展[J]. 陈国宝,杨欢,周江一,田吉迅,邓雅心. 重庆理工大学学报(自然科学), 2022
- [2]水凝胶组织工程脂肪的血管化策略[J]. 吴姝涵,祝旭龙,白璐,张菲菲,蔺光帅,李江,杜嘉,李建辉. 中国组织工程研究, 2022(22)
- [3]组织工程血管化基因治疗的研究进展[J]. 李光照,陈锐,贾洪林,任利玲. 中国组织工程研究, 2022(28)
- [4]组织工程化胆管研究进展[J]. 冯世明,胡继仲,刘威,李立. 中国普外基础与临床杂志, 2021(11)
- [5]异种脱细胞动脉基质修复猪肝外胆道缺损及良性狭窄的机制研究[D]. 冯世明. 昆明医科大学, 2021(02)
- [6]具有炎症缓解特性的软骨组织工程仿生支架的构筑和功效评价[D]. 沈炎冰. 东华大学, 2021(01)
- [7]组织工程弹性软骨构建及MRI T2 mapping无创监测体内转归的研究[D]. 杨国珺. 北京协和医学院, 2021(02)
- [8]双层双取向仿生血管组织工程支架的制备及其性能研究[D]. 李兴茂. 贵州大学, 2020(04)
- [9]基于GelMA微纤维的骨骼肌单轴拉伸诱导生成及致动特性研究[D]. 陈笑笑. 中国科学技术大学, 2020(01)
- [10]重组Resilin蛋白源水凝胶的制备及其在心肌组织工程中的应用[D]. 赵乐. 北京交通大学, 2020(03)