一、正常绒毛和葡萄胎中PCNA、AgNORs及DNA含量的比较观察（论文文献综述）
杨春荣[1]（2021）在《补肾安胎冲剂对大鼠骨髓来源EPCs细胞增殖、迁移和分化的影响及其治疗肾虚型早期先兆流产的临床观察》文中进行了进一步梳理第一部分实验研究目的观察不同浓度补肾安胎冲剂药物血清对大鼠骨髓内皮祖细胞（EPCs）增殖活性、迁移能力及向VECs（血管内皮细胞）分化的影响。从细胞分化层面探讨中药对血管生成的影响,揭示“肾主生殖”、”肾主骨生髓”中医理论的科学内涵。方法鉴定分离培养的细胞为大鼠骨髓来源EPCs:首先取3-4周龄SD大鼠（雌性）5只,采用密度梯度离心法分离单个核细胞,然后收集培养7d的细胞,通过免疫荧光法测定对EPCs特异性表面抗原人白细胞分化抗原34（CD34）、血管内皮生长因子受体2（VEGFR-2,又称KDR+）、人白细胞分化抗原133（CD133）予流式细胞仪进行检测,行Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白（Dil-AC-LDC）和异硫氰酸荧光素荆豆凝集素-1（FITC-UEA-1）双摄取实验,鉴定EPCs。按照23.4g/kg.d的中药剂量制备补肾安胎冲剂中药药物血清。运用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法（MTT法）检测不同浓度（5%、10%、15%、20%）以及在不同时间（24h、48h、72h）干预下EPCs的细胞增殖活性。通过细胞迁移侵袭实验技术（Transwell法）检测EPCs的迁移能力、定时定量PCR（Real-time PCR）检测 EPCs 向 VECs 分化情况。结果1.EPCs的鉴定1.1细胞免疫荧光检测DAPI染出来的细胞核在紫外的激发下为蓝色,细胞特异性表面抗原CD34、VEGFR-2、CD133阳性表达为相应荧光素标记的红光或绿色。可见绝大多数培养的EPCs特异性表面抗原CD34、VEGFR-2、CD133均可见阳性表达,7天时阳性率均显着增高,差异有统计学意义（P<0.05）1.2流式细胞仪鉴定EPCs培养7d时,应用流式细胞仪分析培养第7天的细胞表面标志物CD34、CD133、VEGFR的表达情况,见图2。检测结果显示,CD34阳性细胞占94.7%及CD133阳性细胞占93.8%;VEGFR阳性细胞数量98.8%,差异有统计学意义（P<0.05）。结果提示,该细胞为EPCs。2.EPCs的增殖活性检测运用MTT法检测,结果显示空白对照组在24h、48h、72h的吸光度值分别为（0.034±0.003）、（0.026±0.002）、（0.029±0.005）,阴性对照组在24h、48h、72h 的吸光度值分别为（0.404±0.017）、（0.569±0.033）、（0.546±0.025）,5%含药血清实验组在24h、48h、72h 的 D（490）值分别为（0.526±0.018）、（0.768±0.015）、（0.675±0.051）,10%含药血清实验组在24h、48h、72h的吸光度值分别为（0.532±0.014）、（0.843±0.023）、（0.770±0.034）。15%含药血清实验组在24h、48h、72h的吸光度值分别为（0.482 ±0.039）、（0.073±0.025）、（0.705±0.013）。20%含药血清实验组在 24h、48h、72h 的吸光度值分别为（0.381±0.025）、（0.458 ±0.034）、（0.454±0.095）。阴性对照组及各浓度含药血清组吸光度值明显高于空白组,差异具有统计学意义（P<0.01）。不同浓度的补肾安胎冲剂体外干预下大鼠骨髓来源内皮祖细胞的增殖活性之间差异具有统计学意义。3.EPCs的迁移能力检测采用Transwell法检测,每高倍镜视野下空白对照组及药物血清组平均迁移细胞数分别为（51.0±7.94）、（105.5±15.22）,与空白对照组相比,药物血清组EPCs的迁移能力明显增高（P<0.01）。4.EPCs向VECs分化情况提取内皮祖细胞RNA,设计Real-time PCR引物,通过Real-time PCR检测,相对于空白血清处理,药物血清组血管内皮生长因子（VEGF）及血管假性血友病因子（vWF）的相对表达量（2-ΔΔCT）均显着上升,含药血清处理可以显着诱导血管新生标记分子VEGF和vWF的表达。（P<0.01,具有明显统计学差异。）药物血清组vWF的相对表达量更高,差异更显着（P<0.01）。结论1.采用免疫荧光法及流式细胞学检测鉴定培养的细胞为大鼠骨髓内皮祖细胞;2.补肾安胎冲剂可增强内皮祖细胞的增殖活性及迁移能力,影响程度可能与浓度有关,10%浓度含药血清在48h增殖率达到最高值;3.补肾安胎冲剂剂能够显着促进EPC向VECs分化的功能,并通过刺激VEGF及vWF表达发挥作用。第二部分临床研究目的:通过口服补肾安胎冲剂联合地屈孕酮和单独口服地屈孕酮治疗肾虚型早期先兆流产的随机对照临床研究,评价补肾安胎冲剂在改善肾虚型早期先兆流产患者中医证候、血清孕酮（P）、雌二醇（E2）值、VEGF表达水平等方面的临床疗效,为中医药保胎的优势提供数据支持。方法:收集2019年03月至2020年03月就诊于安徽中医药大学第一附属医院妇科门诊的肾虚型早期先兆流产的60例患者,按照1:1的比例随机分成对照组（30例）、观察组（30例）两组。对照组予口服地屈孕酮,观察组予口服补肾安胎冲剂+地屈孕酮联合治疗,治疗疗程为两周（14天）。运用软件IBMSPSS25.0对数据进行处理分析,通过比较两组患者用药前后中医证候积分及血清P、E2值、VEGF表达水平的变化情况,评估补肾安胎冲剂联合地屈孕酮治疗肾虚型早期先兆流产的临床疗效。结果:1.临床综合疗效比较:观察组（补肾安胎冲剂联合地屈孕酮）与对照组（地屈孕酮）的总有效率分别为96.67%、90%,P＜0.05,说明两组均有较好的治疗效果,且观察组的总疗效优于对照组。2.中医证候积分:与治疗前比较,观察组和对照组治疗后中医证候积分均明显下降,P<0.01,差异具有显着统计学意义;两组治疗后的中医证候积分比较,p<0.01,差异具有统计学意义,说明观察组（补肾安胎冲剂联合地屈孕酮）及对照组（地屈孕酮）治疗先兆流产均能有效改善临床证候,且观察组优于对照组。3.中医证候疗效:两组患者治疗后中医证候疗效比较,P=0.035,P<0.05,差异有统计学意义,观察组总有效率93.33%,对照组总有效率为86.67%,说明观察组中医证候疗效优于对照组。4.血清P、E2水平:观察组及对照组治疗后的血清P、E2水平均明显升高,与治疗前比较,P<0.05,差异有显着统计学意义;两组患者治疗后比较,p小于0.01,差异具有统计学意义,说明两组都能有效提高血清P、E2水平,且观察组优于对照组。5.外周血VEGF水平:观察组及对照组治疗后的外周血VEGF水平均明显升高,与治疗前比较,p<0.05,差异具有统计学意义;两组患者治疗后比较p小于0.01,差异具有统计学意义,说明两组都能有效提高外周血VEGF水平,且观察组优于对照组。结论:1.补肾安胎冲剂联合地屈孕酮治疗早期先兆流产的临床综合疗效明确,且优于单纯使用地屈孕酮治疗。2.补肾安胎冲剂联合地屈孕酮能够明显改善患者的肾虚证证候。3.补肾安胎冲剂联合地屈孕酮可提高患者血清P、E2水平,明显优于单纯使用地屈孕酮治疗,值得推广使用。4.补肾安胎冲剂联合地屈孕酮可上调VEGF水平,有助于血管的新生,从而纠正母胎界面血管生成障碍,改变妊娠结局。
刘平[2]（2013）在《奶牛肝功能酶检测与乳房炎白色念珠菌快速诊断试纸条研究》文中进行了进一步梳理易于采样、便于疾病检测的手段对维护奶牛产后健康和奶牛场经济效益至关重要。肝功酶检测不仅对奶牛产后肝脏机能正常与否可以提供直接参考依据,也可对体脂过度动员引起酮病等重要代谢疾病提供参考依据。乳房炎的真菌性病原在广西部分奶牛场不易治愈,诊断也非常困难。本研究：第一,探索奶牛泌乳早期部分肝功能酶在血浆与乳清中的活性及其相关性,评价能否用乳清代替血浆进行肝功酶检测。其目的在于寻找便于监控奶牛产后肝功能状况的途径。第二,对奶牛乳房炎微生物病原调查中对奶牛影响最大的一种真菌性病原一白色念珠菌,进行快速诊断试纸条检测方法研究,旨在建立乳房炎白色念珠菌快速诊断方法。第一部分丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、γ-谷氨酰转肽酶（GGT）、碱性磷酸酶（ALP）是重要的肝功能代谢酶,在动物的肝脏疾病检测中发挥重要的作用。本试验通过监测健康奶牛血液和牛奶中的ALT、AST、GGT及ALP活性,并探讨其相关性。方法：选取广西某规模化奶牛场35头荷斯坦奶牛,在分娩后3～9周之间采集的血液和牛奶样本,每周采样1次,及时分离血浆与乳清,采样常规分析方法分别测定其中的ALT、AST、GGT及ALP活性,对其结果进行统计学相关与回归分析。结果表明：四种酶在血浆和乳清中的活性呈极显着正相关,（ALT,r=0.852,P<0.001;AST,r=0.341,P<0.001;GGT,r=0.628,P<0.001;ALP,r=0.707,P<0.001）。血浆与乳清中ALT（P<0.05）活性十分接近,而血浆的AST（P<0.001）活性明显高于乳清的,而血浆的GGT、ALP活性显着（P<0.001）低于乳清的活性。进一步回归分析显示,以血浆为因变量,乳清为自变量,描述了一个一元的函数方程,即四种酶而伴随着血浆中酶的活性变化,乳清中的酶活性也随着变化（ALT,P<0.001;R2=0.72;AST,P<0.001;R2=0.11;GGT;R2=0.43,P<0.001; ALP;R2=0.52,P<0.001）,其回归模型分别为：ALT:y=1.78（x0.79）,R2=0.72,P<0.001。AST:y=57.48e0.009x,R2=0.11,P<0.001。GGT:y=2.22（x0.34）,R2=0.43,P<0.001。ALP:y=20.74（x0.26）,R2=0.52,P<0.001。结论：本研究中奶牛乳清的GGT、ALP活性均高于血浆,血浆的ALT活性与乳清中十分接近且呈极显着正相关。总的来看,除了AST之外,从乳清中检测这些酶有望成为监测奶牛肝功能的新途径,乳清中ALT检测可作为奶牛泌乳早期血浆ALT检测的替代普检手段。第二部分奶牛乳房炎是造成奶牛业经济损失最严重的疾病之一。本文调查研究了我国广西部分地区奶牛的白色念珠菌性乳房炎的发病率、致病力等情况；研究了不同种药物对白色念珠菌的药物敏感性效果。同时,对牛奶中白色念珠菌快速诊断方法进行研究,探索能够在临床实践中快速检测牛奶中的白色念珠菌的试纸条检测方法,以便及时采取防治措施。本研究对广西的6个规模化牛场疑似感染白色念珠菌病例收集奶样,根据白色念珠菌生长特性,采用传统的病原微生物学、革兰氏染色、无菌膜生长的鉴定、假菌丝鉴定检、墨染法鉴定、TTC—玉米吐温琼脂培养基（TCTA）显色鉴定、聚合酶链式反应（PCR）以及经生化管鉴定方法,对白色念珠菌进行分离鉴定,用统计方法分析感染白色念珠菌的奶牛乳房炎发生率。将随机选取临床鉴定的白色念珠菌菌株进行小鼠攻毒实验,进行致病力的检测。选6只昆云小白鼠注射生理盐水为对照组,实验组选取20只小鼠分3批攻毒白色念珠菌,经48小时观察小鼠生理变化情况。用多种单味药敏实验：西药：林可霉素、环丙沙星、硫酸卡那霉素、硫酸庆大霉素、硫酸小诺霉素、酮康唑、氟康唑。中药：五倍子、土槿皮、黄连、黄柏、知母、丁香、肉桂、大蒜和奶牛场16种常用药物（如澳龙乳炎康、硫酸卡那霉素、乳宫菌毒康等）进行药敏实验。白色念珠菌快速诊断试纸条的相关研究：（1）白色念珠菌抗体制备：采用白色念珠菌颗粒性抗原免疫新西兰大白兔制备白色念珠菌多克隆抗体；同时也免疫Balb/c小鼠,再采用细胞融合技术进行杂交瘤阳性克隆筛选,筛选出阳性杂交瘤细胞进行体外和体内培养制备白色念珠菌单克隆抗体。（2）胶体金颗粒的制备、金标抗的制备、金标抗体结合垫的制备和试纸条的组成。（3）试纸条在临床上的应用：用临床上鉴定的白色念珠菌菌株以及其他的菌株进行敏感性与特异性检测。本研究的结果如下：通过镜检、生化管和RCR等7种方法对临床顽固性的乳房炎的牛奶样进行病原微生物分离鉴定,在6个不同的牛场共检测116份奶样,共分离出509株菌,其中真菌153株（通过镜检）。而真菌中白色念珠菌分离鉴定为阳性的结果：（1）经革兰氏染色镜检,占总分离菌株的20%,占真菌的67%。（2）无菌膜生长的鉴定,占总菌株数的20.08%,占真菌的96.73%。（3）假菌丝鉴定检出率达100%。（4）TCTA检出率分别占总分离菌与真菌的20.43%和67.97%。（5）墨染法鉴定中分别占总菌株数与真菌数的23.97%和79.74%。 （6）菌液PCR中占总菌株数23.18%,占真菌的77.12%。（7）经生化管鉴定,产气葡萄糖的鉴定中有产酸产气和产酸菌株分别占总菌株数的17.29%、5.11%;分别占真菌数的57.51%、16.99%；在甘露糖化管中培养,有产酸产气和只产酸占总菌株数分别为18.27%、4.72%,分别占真菌数为60.78%、15.69%；在半乳糖、麦芽糖、果糖3种生化鉴定中,分别占总菌株数的23.18%、22.00%、22.59%,占真菌中的分离率依次为77.12%、73.20%、75.16%。白色念珠菌攻毒与药敏试验实的结果,本实验用白色念珠菌接种20只小白鼠,死亡11只,死亡率达55%,其致病率达100%,半数致死量（LD5o）达1.97×105 cfu/g,从所有小白鼠的肝脏、腹水、肺以及部分血液中分离到白色念珠菌,小白鼠在剖检后可见腹水增多及各器官充血肿大,器官表面有大小不一的脓肿小结节；通过组织切片镜检观察,发现大多数器官有炎症及细胞病变。药敏实验结果表明：当各种中药的浓度为10mg/mL时,大蒜的效果最好,其次黄连,其它药效较差。当各种中药的浓度为20mg/mL时,药效最好的是大蒜与黄连,其极敏率分别达100%、87.5%。当各种西药浓度为10mg/mL时,本实验选取的7种西药当中,酮康唑与氟康唑较敏感,其高敏率分别达37.5%、25%；选取牛场常用的16种药品中,Lineo（利内奥）、硫酸庆大霉素、消肿通乳、乳立通、乳宫菌毒康、乳炎神针与澳龙乳炎康的中度敏感率分别为43.75%、40.625%、15.625%、9.375%、6.25%、6.25%、3.125%。当各种西药浓度为20mg/mL时,本实选取的7种西药当中酮康唑的高敏率达100%,氟康唑的高敏率达96.88%;但牛场的16种药品的药效与药浓度为10mg/mL效果基本相当。在大蒜与黄连分别对白色念珠菌的最小抑菌浓度（MIC）与最小杀菌浓度（MBC）的结果相比,发现大蒜比黄连的效果更好。通过ELISA对制备白色念珠菌的多克隆抗体效价测定,兔抗血清在稀释到1：32000、1：1400000时仍为阳性：抗体血清纯化后,通过核酸分析仪测定结果分别为：10.3mg/mL、22.28mg/mL。兔抗血清通过SDS-PAGE垂直电泳检测,可见特异性及纯度较高抗体条带。以葡萄球菌、链球菌、大肠杆菌等其它菌株为抗原,用间接ELISA法检测均无交叉反应现象。白色念珠菌免疫Balb/c小鼠60天后就可获得高免血清；进行细胞融合、筛选、获得较稳定的4株杂交瘤细胞株；诱导小鼠腹水,在7-10天获得腹水,其效价可达到1：102400以上。交叉反应实验显示：与葡萄球菌、链球菌、大肠杆菌等其它菌株无交叉反应现象。分别两次纯化单克隆抗体蛋白,其含量分别可达31.32mg/mL、27.65mg/mL。通过SDS-PAGE电泳检测显示,获得较高特异性及高纯度抗体条带。试纸条制备实验结果：制备出20nm的胶体金颗粒较稳定,选出抗体蛋白与胶体金结合最适宜pH值8～9,通过Mey氏稳定化试验选出了最适结合抗体蛋白量为20-40μg/mL。获得最佳稳定剂10% PEG20000。选出最优胶体金复合物缓冲液组分（Tris-HCl缓冲液、1%BSA、0.5% PEG20000、10%蔗糖、2%Tween-20）。用斑点金免疫渗滤试验（Dot Immunogold Filtration Assay, DIGFA）确定最适合结合NC膜的单克隆抗体及羊抗兔IgG包被量分别为1：2、1：16。分析膜封分别用3-5%的脱脂奶粉和BSA做闭液效果较好。试纸条检测灵敏度为2×102cfu·mL-1。试纸条在37℃条件下,保存10天后,试纸条的T线和C线显色变淡,在室温下条件下保存30天后,显色效果开始下降,而4℃条件下保存试纸条的稳定性依然较好。试纸条对其临床白色念珠菌检测的阳性符合率为86.67%（13/15）,阴性符合率为90%（9/10）。结论：本实验成功制备出诊断奶牛白色念珠菌性乳房炎的试纸条,为奶牛患白色念珠菌性乳房炎快速诊断提供了手段,但因缺乏临床试验,还有待临床应用检验。
杜进军[3]（2007）在《自拟方抑癌汤对人肺癌NCI-H446细胞增殖抑制作用的体外实验研究》文中认为目的:本课题应用细胞培养技术,通过自拟方抑癌汤对人肺癌NCI-H446细胞株进行干扰研究,探讨其增殖抑制作用。旨在从苗药中药组方中找到抑制肺癌细胞增殖的新方法,为治疗肺癌提供一种新的治疗思路。方法:将NCI-H446细胞进行培养,绘制NCI-H446细胞生长曲线,取处在对数生长期的NCI-H446细胞进行实验。首先确定抑癌汤的作用浓度范围,将抑癌汤分为1g/ml、100mg/ml、10 mg/ml、1 mg/ml、100ug/ml、10 ug/ml、1 ug/ml、0.1ug/ml共8个浓度梯度,对照组为只加等量的细胞培养液,总共9组。每一组各设4个复孔,使用MTT法测定细胞的存活率。取细胞的存活率为50%时的药物浓度范围做为抑癌汤的给药参考浓度。再将抑癌汤在20ug/ml、40ug/ml、60ug/ml、80ug/ml、100ug/ml五个浓度和在24小时、48小时、72小时这三个观测时间点上与空白组（培养基对照组）进行比较观察。最后取抑癌汤60ug/ml的浓度做为抑癌汤的给药浓度,与西药组;抑癌汤加西药组（60ug/ml浓度组并加用西药）和以只加培养液的空白对照组,共四个大组（抑癌汤组、西药组、抑癌汤加西药组、空白组）,每一组各设4个复孔,进行对照研究,使用MTT法测定细胞的抑制率,以上实验均重复三次。结果:1:绘制细胞生长曲线,通过倒置显微镜下进行细胞计数,得到细胞倍增时间为26小时。2:抑癌汤对NCI-H446细胞毒实验得到细胞存活率50%时的药物浓度范围在1-100ug/ml之间,根据该浓度范围可以为细胞增殖抑制实验提供给药药物参考浓度。3:细胞增殖抑制实验:抑癌汤在20ug/ml、40ug/ml、60ug/ml、80ug/ml、100ug/ml浓度和在24小时、48小时、72小时这三个观测时间点与空白组（培养基对照组）比较均有统计学差异。抑癌汤组三次实验经过统计分析得到:P=0.492,即抑癌汤组三次重复实验无统计学差异,说明实验具有可重复性。结果显示不同浓度抑癌汤作用48h对NCI-H446细胞的增殖具有明显的抑制作用,随着作用时间的延长抑制作用逐渐减弱,且随着给药剂量的增大,抑制作用增强。抑癌汤在24小时、48小时、72小时的抑制率分别达到53.47%、54.47%和10.45%。4:四个给药组之间的比较:抑癌汤组选用的中间浓度（60ug/ml）。抑癌汤加西药组与抑癌汤组;抑癌汤加西药组与西药组;抑癌汤组与西药组;抑癌汤组与空白组;抑癌汤加西药组与空白组;西药组和空白组的细胞抑制率有统计学差异。通过给药组间均数两两比较:抑癌汤加西药组优于抑癌汤组;抑癌汤加西药组优于西药组;西药组优于抑癌汤组;抑癌汤组优于空白组;抑癌汤加西药组优于空白组;西药组优于空白组并有统计学差异。结论:1:人小细胞肺癌NCI-H446细胞倍增时间为26小时,增殖快。2:结果显示不同浓度抑癌汤作用48h对NCI-H446细胞的增殖具有明显的抑制作用,随着作用时间的延长抑制作用逐渐减弱。3:抑癌汤对NCI-H446细胞随着给药剂量的增大,抑制作用增强。4:抑癌汤加西药组优于抑癌汤组;抑癌汤加西药组优于西药组;西药组优于抑癌汤组。抑癌汤在体外对人小细胞肺癌NCI-H446细胞具有抑制作用,通过理气、活血止痛、燥湿祛痰、清热解毒的方法抑制癌细胞增殖。具有潜在药用价值,值得进一步深入研究。
王振国,任力,吕秋兰,王若薇,侯朝晖,朱虹[4]（2006）在《米非司酮对葡萄胎组织增殖细胞核抗原表达影响及意义》文中研究指明目的通过研究葡萄胎米非司酮治疗前后增殖细胞核抗原（PCNA）表达的改变,探讨米非司酮对滋养细胞肿瘤组织的影响,及其用于妊娠滋养细胞肿瘤治疗的可行性。方法葡萄胎组织32例,应用免疫组织化学方法染色检测葡萄胎组织的PCNA表达。选取PCNA阳性表达病例10例,给予米非司酮治疗,1周后二次清宫,取组织重复染色,观察PCNA染色变化情况,分析米非司酮治疗对葡萄胎组织PCNA表达的影响。结果葡萄胎和正常胚胎组织PCNA阳性表达阳性率分别为46.9%和43.3%,差异无显着性（P>0.05）。但经米非司酮治疗后葡萄胎组织PCNA表达减弱,滋养细胞增生程度降低。全部治疗病例随访13～38个月,无1例进展成侵蚀性葡萄胎。结论米非司酮对葡萄胎组织PCNA表达具有明显抑制作用,能有效抑制葡萄胎滋养细胞增生,对葡萄胎预后未见不良影响,是葡萄胎安全的新辅助治疗手段。
史桂芝,高英茂,王宝恒,刘凯,李少玲[5]（2000）在《正常绒毛和葡萄胎中PCNA、AgNORs及DNA含量的比较观察》文中指出
二、正常绒毛和葡萄胎中PCNA、AgNORs及DNA含量的比较观察（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、正常绒毛和葡萄胎中PCNA、AgNORs及DNA含量的比较观察（论文提纲范文）
（1）补肾安胎冲剂对大鼠骨髓来源EPCs细胞增殖、迁移和分化的影响及其治疗肾虚型早期先兆流产的临床观察（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 常用缩略中英文词表 |
| 第一部分 实验研究 补肾安胎冲剂对大鼠骨髓EPCs细胞增殖、迁移和分化的影响 |
| 前言 |
| 1 实验目的 |
| 2 实验材料 |
| 2.1 实验动物 |
| 2.2 实验主要试剂及仪器设备 |
| 2.2.1 主要试剂 |
| 2.2.2 主要仪器 |
| 2.3 实验药物 |
| 3 实验方法 |
| 3.1 大鼠骨髓来源EPCs的鉴定 |
| 3.1.1 双荧光染色法鉴定 |
| 3.1.2 免疫荧光染色 |
| 3.1.3 流式细胞仪动态检测EPC表面标志 |
| 3.2 制备补肾安胎冲剂中药药物血清 |
| 3.3 不同浓度的补肾安胎冲剂干预对EPCs增殖活性的影响 |
| 3.4 采用补肾安胎冲剂的不同干预时间对EPCs增殖的影响 |
| 3.5 Transwell法检测EPCs的迁移能力 |
| 3.6 RT-qPCR检测补肾安胎冲剂干预下EPCs向VECs分化的情况 |
| 3.6.1 Total RNA抽提 |
| 3.6.2 Total RNA质检 |
| 3.6.3 反转录(First Strand cDNA Synthesis) |
| 3.6.4 荧光定量PCR检测 |
| 3.6.5 计算相对表达量 |
| 4 大鼠骨髓来源EPCs的鉴定 |
| 4.1 双荧光染色法鉴定 |
| 4.2 免疫荧光法检测 |
| 4.3 流式细胞仪检测 |
| 5 补肾安胎冲对EPCs增殖活性的影响 |
| 5.1 不同浓度补肾安胎冲剂干预对EPCs增殖活性的影响 |
| 5.2 补肾安胎冲剂的不同干预时间对EPCs增殖活性的影响 |
| 5.3 各组EPCs增殖率结果 |
| 6 补肾安胎冲剂对EPCs迁移能力的影响 |
| 7 补肾安胎冲剂对EPCs分化的影响 |
| 8 讨论 |
| 8.1 大鼠骨髓来源EPCs的分离培养与鉴定 |
| 8.2 补肾安胎冲剂通过促进EPCs增殖和迁移参与母胎界面血管重铸 |
| 8.3 补肾安胎冲剂通过促进EPCs分化为VECs参与血管新生 |
| 9 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 临床研究 补肾安胎冲剂联合地屈孕酮治疗肾虚型早期先兆流产的临床观察 |
| 前言 |
| 1 临床资料 |
| 1.1 病例来源 |
| 1.2 诊断标准 |
| 1.2.1 西医诊断标准 |
| 1.2.2 中医肾虚证证候诊断标准 |
| 1.2.3 纳入标准 |
| 1.2.4 排除标准 |
| 1.2.5 病例剔除及脱落标准 |
| 2 研究方案 |
| 2.1 治疗方案 |
| 2.1.1 对照组(地屈孕酮) |
| 2.1.2 观察组(补肾安胎冲剂+地屈孕酮片) |
| 2.1.3 给药疗程 |
| 2.2 标本的处理 |
| 2.3 观察指标 |
| 2.3.1 疗效性指标 |
| 2.3.2 安全性指标 |
| 2.4 疗效评定标准 |
| 2.4.1 中医证候分级量化标准 |
| 2.4.2 中医证候疗效判定标准 |
| 2.4.3 临床综合疗效判定标准 |
| 2.5 统计方法 |
| 3 研究结果 |
| 3.1 一般资料 |
| 3.1.1 两组年龄、孕周、不良妊娠史比较 |
| 3.1.2 两组治疗前病情程度比较 |
| 3.2 两组患者治疗前后中医证候积分比较 |
| 3.3 两组治疗后中医证候疗效比较 |
| 3.4 两组治疗后临床综合疗效比较 |
| 3.5 治疗前后两组患者血清P、E_2水平比较 |
| 3.5.1 两组患者治疗前后血清P水平比较 |
| 3.5.2 两组患者治疗前后血清E_2水平比较 |
| 3.6 两组患者治疗前后外周血VEGF表达水平比较 |
| 3.7 安全性观察 |
| 4 讨论 |
| 4.1 早期先兆流产与肾虚的关系 |
| 4.2 补肾安胎冲剂的方药分析 |
| 4.3 血清孕酮、雌二醇在先兆流产中的检测意义 |
| 4.4 VEGF表达水平在先兆流产中的检测意义 |
| 4.5 结果分析 |
| 5 结论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 综述 早期先兆流产的中西医研究现状 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 致谢 |
（2）奶牛肝功能酶检测与乳房炎白色念珠菌快速诊断试纸条研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一部分 奶牛肝功能酶检测 |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 奶牛产后肝功能的代谢状态 |
| 1.2 肝功酶在临床疾病中的应用 |
| 1.3 奶牛产后血浆与奶中部分肝功能指标研究目的和意义 |
| 第二章 奶牛产后血浆与乳清中ALT、AST、GGT及ALP测定与相关分析 |
| 前言 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 主要仪器与试剂 |
| 2.1.3 主要试剂配制液 |
| 2.1.4 血与奶样的收集及处理 |
| 2.1.5 实验分析 |
| 2.1.6 数据处理 |
| 2.2 实验结果 |
| 2.2.1 ALT、AST的标准曲线 |
| 2.2.2 奶牛血浆与乳清中ALT、AST、GGT及ALP含量的测定结果 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第二部分 奶牛乳房炎白色念珠菌快速诊断试纸条研究 |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 白色念珠菌的生物特性及其对奶牛养殖业的危害 |
| 1.1.1 白色念珠菌的生物学特性 |
| 1.1.2 白色念珠菌的致病机制 |
| 1.2 白色念珠菌引起真菌性乳房炎对奶牛养殖业的危害 |
| 1.2.1 白色念珠菌引起真菌性奶牛乳房炎的国外现状 |
| 1.2.2 白色念珠菌引起真菌性奶牛乳房炎的国内现状 |
| 1.3 白色念珠菌引起真菌性奶牛乳房炎的治疗 |
| 1.4 白色念珠菌引起真菌性奶牛乳房炎诊断及检测方法 |
| 1.4.1 白色念珠菌引起真菌性奶牛乳房炎临床表现 |
| 1.4.2 白色念珠菌的微生物学检查 |
| 1.4.3 分子生物学方法检测 |
| 1.5 胶体金标记技术基本原理与研究背景 |
| 1.5.1 胶体金标记技术的应用 |
| 1.5.2 抗体用于胶体金中标记应用的进展 |
| 1.5.3 免疫胶体金快速诊断技术在奶牛疾病中的应用 |
| 1.6 颗粒性抗原制备抗体技术 |
| 1.7 多克隆抗体的基本原理 |
| 1.8 单克隆抗体的基本原理 |
| 1.9 奶牛肝功能酶检测与乳房炎白色念珠菌快速诊断试纸条研究目的和意义 |
| 第二章 广西部分地区奶牛乳房炎白色念珠菌发病率的调查 |
| 前言 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 培养基与试剂 |
| 2.1.2 实验设备 |
| 2.1.3 实验动物和奶样 |
| 2.1.4 奶样的采集 |
| 2.1.5 白色念珠菌的镜检观察 |
| 2.1.6 白色念珠菌无菌膜的培养鉴定 |
| 2.1.7 假细菌、厚壁孢子的培养鉴定 |
| 2.1.8 细菌TCTA鉴定 |
| 2.1.9 菌株墨染法鉴定 |
| 2.1.10 菌液PCR鉴定 |
| 2.1.11 白色念珠菌的生化鉴定 |
| 2.1.12 保存菌种用20%甘油法 |
| 2.2 实验结果 |
| 2.2.1 经白色念珠菌感染奶样的外观 |
| 2.2.2 白色念珠菌培养及镜检鉴定 |
| 2.2.3 白色念珠菌无菌膜生长情况 |
| 2.2.4 白色念珠菌假菌丝、厚壁孢子的生长状态 |
| 2.2.5 白色念珠菌在TCTA培养颜色观察 |
| 2.2.6 白色念珠菌夹膜观察 |
| 2.2.7 菌液PCR检测结果 |
| 2.2.8 白色念珠菌的生化鉴定结果 |
| 2.2.9 用20%甘油保菌种效果 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第三章 白色念珠菌的致病力实验及药敏试验分析 |
| 前言 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 实验菌株、药物 |
| 3.1.2 实验动物 |
| 3.1.3 实验设备 |
| 3.1.4 白色念珠菌的致病力实验 |
| 3.1.5 攻毒后小鼠组织石蜡切片制作 |
| 3.1.6 药液制备 |
| 3.1.7 药敏实验的测定方法 |
| 3.1.8 大蒜和黄连的MIC/MBC测定 |
| 3.2 实验结果 |
| 3.2.0 白色念珠菌的致病力情况 |
| 3.2.1 攻毒小鼠各组织切片观察结果 |
| 3.2.2 白色念珠菌对中药药敏结果 |
| 3.2.3 白色念珠菌对七种西药药敏结果 |
| 3.2.4 16种奶牛场治疗乳房炎药物的药敏结果 |
| 3.2.5 大蒜与黄连的MIC/MBC测定结果 |
| 3.3 讨论 |
| 3.3.1 白色念珠菌的毒性与致病力对动物的影响 |
| 3.3.2 白色念珠菌的抗药作用 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 白色念珠菌多克隆抗体的制备 |
| 前言 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 菌株来源 |
| 4.1.2 主要试剂和仪器 |
| 4.1.3 本实验的常用溶液配制 |
| 4.1.4 实验动物 |
| 4.1.5 白色念珠菌的抗原制备 |
| 4.1.6 实验动物免疫 |
| 4.1.7 免疫兔血清抗体效价的测定 |
| 4.1.8 抗原中酶成分的消除 |
| 4.1.9 血清抗体效价检测条件优化 |
| 4.1.10 ELISA检测制备的多克隆抗体 |
| 4.1.11 SDS-PAGE电泳检测 |
| 4.1.12 白色念珠菌多克隆抗体的正辛硫-硫酸铵沉淀法纯化 |
| 4.1.13 蛋白透析 |
| 4.1.14 纯化后抗血清蛋白浓度的测定 |
| 4.1.15 白色念珠菌多克隆抗体交叉反应实验 |
| 4.2 实验结果 |
| 4.2.1 在不同温度下抗原中酶成分的消除 |
| 4.2.2 抗血清效价检测最佳优化条件 |
| 4.2.3 抗血清效价的测定结果 |
| 4.2.4 抗血清SDS-PAGE分析 |
| 4.2.5 测定纯化抗血清蛋白浓度的结果 |
| 4.2.6 多克隆抗体与其它菌株交叉反应实验结果 |
| 4.3 讨论 |
| 4.3.1 制备高纯白色念珠菌的多克隆抗体关键因素 |
| 4.3.2 多克隆抗体纯化方法的选择 |
| 4.4 小结 |
| 第五章 白色念珠菌单克隆抗体的制备与特性分析 |
| 前言 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 实验材料 |
| 5.1.2 实验动物 |
| 5.1.3 药品和试剂 |
| 5.1.4 工作液的配制 |
| 5.1.5 细菌抗原的制备 |
| 5.1.6 试验动物免疫 |
| 5.1.7 BALB/C小鼠抗血清效价的测定 |
| 5.1.8 SP2/0小鼠骨髓瘤细胞复苏 |
| 5.1.9 饲养层细胞制备 |
| 5.1.10 免BALB/C小鼠疫脾细胞的制备 |
| 5.1.11 SP2/0骨瘤细胞悬液的制备 |
| 5.1.12 细胞杂交融合 |
| 5.1.13 阳性杂交瘤细胞株筛选与克隆 |
| 5.1.14 阳性杂交瘤细胞的扩大培养 |
| 5.1.15 有限稀释法单克隆化 |
| 5.1.16 杂交瘤细胞株的冻存 |
| 5.1.17 杂交瘤细胞染色体检测 |
| 5.1.18 腹水的制备 |
| 5.1.19 腹水效价和特异性检测 |
| 5.1.20 白色念珠菌单克隆抗体腹水交叉反应实验 |
| 5.1.21 白色念珠菌单克隆抗体正辛硫-硫酸铵沉淀纯化 |
| 5.1.22 白色念珠菌单克隆抗体蛋白透析 |
| 5.1.23 单克隆抗体抗体蛋白浓度的测定 |
| 5.2 实验结果 |
| 5.2.1 免疫小鼠后的相关生理性状检测 |
| 5.2.2 抗白色念珠菌单克隆抗体杂交瘤细胞株筛选结果 |
| 5.2.3 杂交瘤细胞株上清液效价的检测结果 |
| 5.2.4 小鼠腹水效价的检测结果 |
| 5.2.5 单克隆抗体SDS-PAGE电泳分析 |
| 5.2.6 染色体检测结果 |
| 5.2.7 交叉反应实验结果 |
| 5.2.8 单克隆抗体的纯化结果 |
| 5.2.9 纯化后单克隆抗体蛋白浓度的测定结果 |
| 5.3 讨论 |
| 5.4 小结 |
| 第六章 白色念珠菌的胶金体的制备 |
| 前言 |
| 6.1 材料与方法 |
| 6.1.1 主要试剂 |
| 6.1.2 主要仪器 |
| 6.1.3 使用前玻璃器皿准备 |
| 6.1.4 柠檬酸三钠还原法的胶体金制备 |
| 6.1.5 胶体金紫外光扫描鉴定 |
| 6.1.6 最适宜抗体蛋白结合量 |
| 6.1.7 抗体蛋白与胶体金结合最适宜PH值的选择 |
| 6.1.8 抗体—胶体金复合物稳定剂的选择 |
| 6.1.9 胶体金复合物缓冲液的选择 |
| 6.1.10 胶体金—抗体复合物的制备与纯化 |
| 6.2 实验结果 |
| 6.2.1 胶体金溶液颜色的观察 |
| 6.2.2 最佳的胶体金颗粒直径大小筛选结果 |
| 6.2.3 胶体金颗粒稳定性 |
| 6.2.4 胶体金颗粒抗体浓度的选择 |
| 6.2.5 抗体蛋白与胶体金结合最适宜PH值的选择 |
| 6.2.6 抗体—胶体金复合物稳定剂的选择 |
| 6.2.7 胶体金复合物缓冲液组分的选择 |
| 6.2.8 胶体金—抗体复合物的制备与纯化结果 |
| 6.3 讨论 |
| 6.3.1 影响胶体金颗粒制备的因素 |
| 6.3.2 影响金标抗制备的因素 |
| 6.4 小结 |
| 第七章 试纸条组成及临床应用 |
| 前言 |
| 7.1 材料与方法 |
| 7.1.1 菌株 |
| 7.1.2 主要试剂及耗材 |
| 7.1.3 斑点金免疫渗滤试验 |
| 7.1.4 分析膜预处理 |
| 7.1.5 分析膜封闭液的优化 |
| 7.1.6 分析膜干燥方式选择 |
| 7.1.7 胶体金-抗体复合物结合垫的制备 |
| 7.1.8 样品垫制备 |
| 7.1.9 分析膜的抗体包被 |
| 7.1.10 吸水垫制备 |
| 7.1.11 试纸条组装 |
| 7.1.12 试纸条检测阳性结果判定 |
| 7.1.13 试纸条灵敏度检测 |
| 7.1.14 试纸条特异的性检测 |
| 7.1.15 重复性测试 |
| 7.1.16 稳定性测试 |
| 7.1.17 比较试验 |
| 7.2 实验结果 |
| 7.2.1. 分析膜上抗体包被量的测定结果 |
| 7.2.2 不同的封闭液对分析膜封闭效果 |
| 7.2.3 分析膜在不同温度下干燥效果 |
| 7.2.4 试纸条对不同浓度菌液检测的效果 |
| 7.2.5 试纸条对不同种菌检测的效果 |
| 7.2.6 试纸条重复性检测的效果 |
| 7.2.7 试纸条稳定性检测的效果 |
| 7.2.8 试纸条比较试验结果 |
| 7.3 讨论 |
| 7.3.1 抗体包被量及硝酸纤维素膜封闭方法的分析 |
| 7.3.2 假阳性和假阴性分析 |
| 7.3.3 特异性分析及灵敏度分析 |
| 7.3.4 试纸条的稳定性分析 |
| 7.4 小结 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 文章发表情况 |
（3）自拟方抑癌汤对人肺癌NCI-H446细胞增殖抑制作用的体外实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附录一: 附图 |
| 附录二:英文缩略词 |
| 综述及参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
四、正常绒毛和葡萄胎中PCNA、AgNORs及DNA含量的比较观察（论文参考文献）
- [1]补肾安胎冲剂对大鼠骨髓来源EPCs细胞增殖、迁移和分化的影响及其治疗肾虚型早期先兆流产的临床观察[D]. 杨春荣. 安徽中医药大学, 2021(01)
- [2]奶牛肝功能酶检测与乳房炎白色念珠菌快速诊断试纸条研究[D]. 刘平. 广西大学, 2013(08)
- [3]自拟方抑癌汤对人肺癌NCI-H446细胞增殖抑制作用的体外实验研究[D]. 杜进军. 贵阳中医学院, 2007(03)
- [4]米非司酮对葡萄胎组织增殖细胞核抗原表达影响及意义[J]. 王振国,任力,吕秋兰,王若薇,侯朝晖,朱虹. 中国现代医学杂志, 2006(20)
- [5]正常绒毛和葡萄胎中PCNA、AgNORs及DNA含量的比较观察[J]. 史桂芝,高英茂,王宝恒,刘凯,李少玲. 中国肿瘤临床, 2000(01)