一、奥曲肽抑制裸小鼠肝脏移植瘤生长的研究（论文文献综述）
谢琳[1]（2017）在《化合物GA对肺腺癌的实验性治疗作用及相关机制研究》文中提出目的:肺癌是发病率、死亡率上升最快的恶性肿瘤之一,目前多种治疗效果不理想。化合物GA是从一系列赤霉素衍生物中筛选得到、具有抗肿瘤活性的新四环二萜类化合物,前期研究发现对肺癌细胞有生长抑制作用,本课题将在前期研究的基础上,重点针对人非小细胞肺腺癌,以人非小细胞肺腺癌细胞株A549、SPCA1和宣威肺癌细胞株XWLC-05为体外实验模型、以A549和XWLC-05裸小鼠异种移植瘤为体内实验模型,重点评价化合物GA的体内外抗肿瘤作用和体内荷瘤动物重要器官毒性评估,探讨GA潜在的临床应用价值及可能的应用模式,为推动其临床转化奠定基础。方法:第一部分:1.以人非小细胞肺腺癌细胞株A549、SPCA1和宣威肺癌细胞株XWLC-05为体外实验模型,应用MTT法检测化合物GA对肺癌细胞增殖的抑制作用;2.以小鼠移植性肉瘤S180、人非小细胞肺腺癌A549和XWLC-05裸小鼠异种移植瘤为体内实验模型,以抑瘤率、肿瘤相对生长率（T/C）为指标,评估化合物GA灌胃给药体内对肿瘤生长的抑制作用,并同步评估GA对荷瘤小鼠体重、重要免疫器管-胸腺、脾脏的影响。第二部分:裸小鼠体内抑瘤实验结束后,留取骨髓、肠道及肾脏组织检测化合物GA的毒性。骨髓涂片采用瑞氏-姬姆萨染色法观察荷瘤裸小鼠骨髓增殖情况;肠道、肾脏组织制成病理切片,采用HE染色、镜下观察形态学变化,研究化合物GA的相关毒性。第三部分:1.以人非小细胞肺腺癌细胞株A549、SPCA1和XWLC-05为实验模型,采用TUNEL染色、流式细胞术（FCM）检测肺癌细胞经过GA作用后的凋亡情况及形态学变化。Western Blot技术检测化合物GA作用肺癌细胞后,凋亡线粒体途径相关标志性蛋白表达的变化、细胞色素C释放及线粒体膜电位的变化。同样通过Western Blot技术检测死亡受体途径、内质网途径诱导凋亡的标志性蛋白变化。2.体内A549裸小鼠移植瘤实验结束后,通过电镜观察化合物GA作用后,A549移植瘤组织细胞形态、细胞质及细胞核的变化。应用免疫组织化学法,观察肿瘤组织Caspase3、Caspase8、Caspase9表达的变化,并采用TUNEL法检测肿瘤组织细胞凋亡发生。第四部分:1.以人非小细胞肺腺癌细胞株A549、SPCA1和宣威肺癌细胞株XWLC-05为体外实验模型,MTT法初步评估化合物GA联合低浓度DDP对肺癌细胞是否具有增效/等效作用。以小鼠移植性肉瘤S180及人非小细胞肺腺癌A549和XWLC-05裸小鼠移植瘤为体内实验模型,以抑瘤率、肿瘤相对生长率（T/C）及联合指数为指标,评估化合物GA与低剂量DDP联用的体内抑瘤作用,同时通过骨髓、肠道、肾脏的相关病理学检测,初步评估对DDP毒性的影响。结果:1.化合物GA的体内外抑瘤作用及毒性评估1.1化合物GA抑制A549、SPCA1和XWLC-05细胞增殖,其中对A549和SPC-A-1的抑制作用较强,对XWLC-05细胞的抑制作用较弱。高浓度GA的作用强度与阳性对照DDP相近。1.2化合物GA对小鼠移植性肉瘤S180的生长有抑制作用,中、高剂量抑瘤作用较为明显。GA对人肺腺癌A549和XWLC-05裸小鼠移植瘤的生长有抑制作用,以中、高剂量作用明显。1.3化合物GA对荷S180小鼠重要免疫器官-胸腺/脾脏、荷人肺癌裸小鼠脾脏、荷瘤动物体重未观察到明显影响,对荷瘤裸小鼠骨髓、肠道、肾脏组织无明显损伤。而DDP导致小鼠和裸小鼠明显的体重下降、免疫器官重量减轻,肾脏组织损伤明显。2.化合物GA与化疗药顺铂（DDP）联用的体内外抑瘤作用及毒性评估2.1化合物GA联合低浓度DDP对多种肺腺癌细胞增殖有明显抑制作用,DDP较低浓度与GA联用,可达到较高浓度DDP单用的抑制强度,二者在一定浓度范围内呈现协同作用。2.2体内实验结果显示,化合物GA联合低剂量DDP对小鼠S180、A549及XWLC-05裸鼠移植瘤的生长有抑制作用,两药联合在体内表现为相加或协同作用。2.3化合物GA联合低剂量DDP对荷瘤小鼠及裸小鼠的脾脏指数、胸腺指数、体重无额外影响,对骨髓、肠道、肾脏也未增加毒性。3.化合物GA体内外诱导肿瘤细胞凋亡及相关机制3.1化合物GA体外诱导多种肺腺癌细胞凋亡,同时检测到细胞中caspase9被剪切激活、线粒体胞色素C释放、Bax/Bc12出现变化;caspase4被剪切激活,GRP78、GADD153和ATF4的mRNA及蛋白水平显着升高;caspase8未被剪切激活。3.2体内实验结果提示,化合物GA促进肿瘤组织细胞凋亡、其Caspase3、8、9均呈明显的阳性表达。结论:1.化合物GA体内外实验均证实可抑制多个肺腺癌的增殖;2.化合物GA体内对骨髓、肠道、肾脏组织均无明显影响,呈现低毒的特点。3.化合物GA促进肺腺癌细胞凋亡,其机制涉及线粒体和内质网途径,可能未涉及死亡受体途径。GA体内诱导肺癌组织细胞凋亡。4.化合物GA与低剂量DDP联合应用,可提高抗肿瘤效果,未增加毒性,有可能以联合肺腺癌一线化疗药的方式在临床发挥增效减毒作用,为DDP毒性明显的患者提供更多选择。
张云霞,任慕兰[2]（2011）在《奥曲肽抑制人卵巢癌细胞增殖》文中进行了进一步梳理目的探讨生长抑素类似物奥曲肽在体内外对人卵巢癌细胞株SKOV3生长的影响。方法 MTT比色法观察体外奥曲肽对人卵巢癌细胞株SKOV3的生长抑制作用。建立人卵巢癌细胞株SKOV3裸鼠移植瘤模型,随机分成四组,分别给予生理盐水（A组）、奥曲肽（B组）、顺铂（C组）及两药联用（D组）处理,处死裸鼠后采用免疫组织化学法检测肿瘤标本血管内皮生长因子（VEGF）的表达。结果奥曲肽可抑制体外SKOV3细胞生长,且其作用呈时间、浓度依赖性。各用药组瘤重、瘤体积、VEGF的表达均低于A组（P<0.05）。结论奥曲肽能抑制体内外人卵巢癌细胞株SKOV3生长,对肿瘤VEGF表达的抑制可能为其抑瘤机制之一。
陈爽,谢艳,王春晖,唐承薇[3]（2009）在《奥曲肽致裸鼠肝癌原位移植瘤坏死的实验研究》文中认为背景与目的:生长抑素类似物奥曲肽可抑制肝癌的生长,但能否使其坏死、获得更好的抗肿瘤效果呢?本研究旨在观察奥曲肽在体内、外对肝癌细胞株HepG2的作用,探讨其致肿瘤坏死的机制。方法:采用四甲基偶氮唑蓝法检测体外HepG2细胞的增殖,建立裸鼠肝癌HepG2细胞原位移植瘤模型,奥曲肽组裸鼠皮下注射奥曲肽100μg/（kg·d）;对照组皮下注射相同体积的生理盐水,连续用药8周。组织学评估肿瘤坏死程度,免疫组化检测移植瘤中血管内皮生长因子（VEGF）的表达,Westernblot和免疫组化检测生长抑素受体2（SSTR2）的表达。结果:奥曲肽（0.1～1000nmol/L）作用24h,不影响HepG2细胞增殖。奥曲肽组裸鼠肝癌移植瘤重[（7.15±2.96）g]高于对照组[（4.21±3.11）g],移植瘤坏死体积[（81.86%±0.05）%]大于对照组[（43.75±0.06）%],两组相比差异均有统计学意义（P<0.05）。与对照组明显不同的是,奥曲肽组移植瘤中未见VEGF表达。两组移植瘤组织血窦中SSTR2表达无显着性差异（P>0.05）。结论:在肝癌细胞活跃增殖条件下,奥曲肽通过移植瘤血窦中SSTR2介导,仅仅抑制肿瘤血管生成,可致裸鼠肝癌显着坏死的良好效应。
袁梦晖[4]（2008）在《131I-RC-160及5-FC对共表达CD-IRES-hSSTR2肿瘤细胞的协同杀伤作用的实验研究》文中研究表明目的建立稳定共表达人生长抑素受体2亚型（SSTR2）和大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶（CD）的非小细胞型肺腺癌A549细胞系,并建立荷瘤裸鼠模型,通过99Tcm-RC-160进行hSSTR2介导的报告基因放射性核素受体显像,观察其显像特征;通过131I-RC-160联合5-FC进行荷瘤裸鼠肿瘤的实验性治疗并观察其治疗效果。方法应用反转录PCR方法从人胚肾293细胞中克隆人SSTR2基因,通过基因重叠延伸拼接（SOE）结合PCR方法将CD、内部核糖体进入位点（IRES2）和SSTR2连接,并构建表达载体。体外转染人非小细胞型肺腺癌A549细胞并筛选,通过间接免疫荧光、RT-PCR、Western Blot及流式细胞仪技术检测SSTR2的表达,建立稳定表达的pCIS-A549细胞株,将其植入BALB/C雄性裸鼠建立荷瘤裸鼠模型;用酒石酸亚锡作还原剂,用99Tcm直接标记RC-160,进行hSSTR2介导荷瘤裸鼠的报告基因显像,并设立接种未转染CD-IRES-hSSTR2 A549肿瘤的裸鼠为对照组,于30 min、1h、2h、4h、8h、12h、24h等不同时间点观察其显像特征。采用NBS法进行131I标记RC-160,观察131I-RC-160加5-FC、131I-RC-160、5-FC、Na131I对移植瘤的抑制作用,等量的生理盐水作药物的空白对照,治疗结束后,计算抑瘤率,随后处死裸鼠取肿瘤组织作HE染色和免疫组化染色观察移植瘤的病理组织学变化。结果1.成功克隆了人SSTR2基因,并构建了CD和SSTR2基因的双顺反子表达载体,进一步建立了稳定转染上述表达载体的pCIS-A549细胞株,间接免疫荧光、RT-PCR、Western Blot及流式细胞仪技术检测证实了SSTR2的表达;2.99Tcm-RC-160经尾静脉注射后,30min就可见肿瘤部位显像,4-8h肿瘤显影呈放射性高度浓集影,12h持续显影,而对照组肿瘤始终未见显影。3.治疗结果统计中,把对pCIS-A549移植瘤治疗的几个组与生理盐水组比较,131I-RC-160加5-FC联合治疗组、5-FC治疗组和131I-RC-160治疗组的移植瘤生长明显受抑,其抑瘤率分别为（82.75±4.2）%、（70.69±2.9）%和（66.36±3.7）%;HE染色显示:联合治疗组的肿瘤组织大部分片状坏死,坏死区域达80%左右, 131I治疗组瘤体组织也可见部分点片状坏死;免疫组化染色显示联合治疗组呈现大片坏死区域,5-FC治疗组和131I-RC-160治疗组亦呈现小片状坏死区域,131I治疗组坏死区域较小,而生理盐水治疗组则未见明显坏死区域。在各组比较中可以看出,联合治疗组的抑瘤作用明显强于其它各单种药物治疗组。Na131I组对转染或未转染的移植瘤的抑制效应比较差异无统计学差异。结论本研究建立的人非小细胞型肺腺癌细胞系（pCIS-A549）可以共表达人SSTR2和大肠杆菌CD“自杀”基因,99Tcm-RC-160可用于荷pCIS-A549肿瘤裸鼠的报告基因显像,131I-RC-160协同5-FC治疗荷pCIS肿瘤的抑瘤效果优于单独应用131I-RC-160或5-FC。利用CD-IRES-hSSTR2,协同“自杀基因/前体药物”及放射性核素标记SSA,为实现非小细胞肺癌及不表达SSTR受体的其他肿瘤的受体显像及受体介导治疗提供了新的可能的途径。
朱红[5]（2008）在《生长抑素联合血管生长抑素基因治疗人胰腺癌的实验研究》文中提出目的研究生长抑素联合血管生长抑素基因治疗人胰腺癌的作用,观察二者联合应用是否有协同增强效应。方法重组pcDNA3/anglo质粒转染人胰腺癌BXPC—3细胞,利用RT—PCR和Western Blot检测血管生长抑素表达及分泌情况,MTT法和流式细胞仪分别检测生长抑素和血管生长抑素对BXPC—3细胞和血管内皮细胞ECV—304增殖的影响。建立裸鼠移植瘤模型,观察生长抑素和血管生长抑素基因影响肿瘤生长情况,免疫组化检测各组血管内皮生长因子（VEGF）表达情况和微血管密度（MVD）差异,透射电镜检测肿瘤细胞凋亡情况。结果血管生长抑素对血管内皮细胞ECV—304的增殖有明显抑制作用,并能诱导其凋亡;一定浓度（≥10ug/ml）生长抑素类似物思他宁对人胰腺癌细胞BXPC—3有抗增殖作用,并呈剂量依赖性。生长抑素和血管生长抑素均能降低肿瘤细胞VEGF表达,减少肿瘤微血管的生成;抗胰腺癌细胞增殖,并能促进其凋亡、坏死,有效抑制人胰腺癌裸鼠移植瘤的生长。以重组pcDNA3/angio质粒+思他宁组效果最明显。结论（1）生长抑素主要通过抗胰腺癌细胞增殖,促进其凋亡坏死和减少肿瘤血供发挥作用。（2）血管生长抑素主要通过特异性抑制胰腺癌血管内皮细胞的增殖并诱导其凋亡,而发挥抗胰腺癌血管生成的作用。在血管生成过程中,血管生长抑素调节着血管内皮细胞的增殖和迁移。（3）体内转染血管生长抑素基因并联合应用生长抑素能更显着抑制人胰腺癌裸鼠移植瘤的血管生长和瘤体生长,抗胰腺癌的作用更为显着,有协同增强效应。
陈筠,齐自宁,董秀山,陈孝平[6]（2007）在《生长抑素类似物抑制胆管癌细胞增殖的研究》文中研究指明目的探讨生长抑素类似物奥曲肽（OCT）对人胆管癌细胞细胞株QBC939的抑制作用及可能的作用机制。方法四氮唑蓝（MTT）法检测OCT对人胆管癌细胞株QBC939增殖的影响,流式细胞仪检测OCT对细胞周期变化的作用,免疫组织化学法研究OCT对人胆管癌细胞株QBC939P27KIP1蛋白表达变化的影响。建立胆管癌裸鼠模型,进一步探讨生长抑素的作用。结果MTT法检测不同浓度OCT（5、0.5、0.05、0.005mg/L）作用于QBC93948h后,实验组0.5、5mg/L组和对照组吸光度（A）值比较差异有统计学意义（P<0.05）。细胞生长率分别为83.80%,80.28%,77.53%,65.32%。流式细胞仪分析显示不同浓度OCT作用于QBC93948h后,G0/G1期细胞明显增多（P<0.05）。免疫组织化学P27KIP1蛋白表达随OCT浓度的增加而增强（P<0.05）。建立胆管癌裸鼠模型后,OCT干预21d后实验组瘤重明显小于对照组（P<0.05）。结论OCT可抑制人胆管癌细胞的增殖。在一定范围内呈剂量依赖性,其抗肿瘤作用机制主要是通过细胞周期阻滞来实现的,而这一作用的实现可能与P27KIP1蛋白表达的上调有关。
蔡利军,吕宾,倪桂宝,胡萍萍,郑华君,张璐[7]（2006）在《温郁金对人胃癌裸鼠原位移植瘤生长转移的抑制作用及对COX-2和VEGF表达的影响》文中研究指明目的:通过建立人胃癌裸鼠原位移植瘤模型,研究移植瘤生长及其转移的抑制作用。方法:BALB/c裸小鼠12只,以荷SGC-7901人胃癌胞株裸鼠皮下移植瘤为材料,通过手术将癌组织转移到裸小鼠胃壁建立胃癌原位移植模型;造模后,12只荷瘤裸鼠随机分为两组（对照组、治疗组）,每组6只;原位移植24h后开始灌胃,治疗组给予温郁金水蒸气蒸馏液（2.5g/mL）,0.4mL灌胃,每日1次,对照组予等量生理盐水。当动物出现明显消瘦、弓背、神萎等衰竭征象（约9周）时处死动物,观察和比较两组肿瘤抑制率和肿瘤转移情况。用免疫组化法检测两组移植瘤瘤体中COX-2和VEGF的表达。结果:所有荷瘤鼠胃壁均有肿瘤生长,荷瘤率100%,治疗组与对照组瘤重分别为（0.4189±0.1086）g、（0.7296±0.210）g,P<0.01,抑瘤率为42%;模型组腹膜转移6/6、肝脏转移5/6、腹水1/6,治疗组腹膜转移2/6、肝脏转移1/6、腹水0/6,其中腹膜及肝脏转移情况差异具有统计学意义（P<0.05）。温郁金治疗组瘤体中COX-2和VEGF的表达明显下调。结论:温郁金具有抑制人胃癌裸鼠原位移植瘤生长和转移的作用,其作用机制可能与下调COX-2和VEGF的表达有关。
张骏,姒健敏,梅彦,李勇,崔盈,王凡,贾宾[8]（2006）在《生长抑素受体介导90Y-DOTA-Octreotide靶向抗肿瘤效应初探》文中研究表明目的初步探讨生长抑素受体（SSTR）介导90Y-DOTA-Octreotide[90Y-DOTATATE]靶向放疗对裸鼠人肝癌移植模型的抗肿瘤效应。方法合成90Y-DOTATATE,用裸鼠人肝癌移植模型,观察该靶向药物对肿瘤体积、重量、肿瘤细胞细胞器等的影响。结果治疗后90Y-DOTATATE治疗组肿瘤体积为628.32 mm3±403.01 mm3,奥曲肽组肿瘤体积为2073.84±537.61（P<0.01）,而生理盐水对照组为2624.91±1257.82 mm3（P<0.01）;90Y-DOTATATE组瘤重抑制率为74.67%。细胞超微结构检查发现90Y-DOTATATE治疗组肿瘤细胞损伤主要表现为内质网空泡化、线粒体水肿、细胞核浓缩、染色质边缘化乃至裂解,并可见凋亡小体。结论生长抑素受体介导的90Y-DOTATATE靶向放射治疗确有良好的体内抗肿瘤效应,是一值得进一步深入研究的靶向药物。
齐自宁[9]（2006）在《生长抑素类似物抑制胆管癌细胞增殖的研究》文中进行了进一步梳理目的:探讨生长抑素类似物奥曲肽（OCT）对人胆管癌细胞细胞株QBC939的抑制作用及可能的作用机制。方法: MTT法检测OCT对人胆管癌细胞株QBC939增殖的影响,流式细胞仪检测OCT对QBC939细胞细胞周期变化的作用,免疫组化法研究OCT对人胆管癌细胞株QBC939 P27KIP1蛋白表达变化的影响。利用细胞建立胆管癌裸鼠模型,OCT干预,测其瘤重进行比较及瘤体打成单细胞悬液流式细胞仪检测OCT对QBC939细胞细胞周期变化的作用,进一步探讨生长抑素的体内抑瘤作用及其机制。结果:MTT法检测不同浓度OCT（5、0.5、0.05、0.005 mg/L）作用于QBC939 48小时后,实验组和对照组OD值比较有显着性P<0.05.细胞生长率分别为83.8%、80.28%、77.53%、65.32%,与对照组相比,0.5mg/L、5 mg/L组有显着性P<0.05.这两组间比较也有显着性P<0.05。流式细胞仪分析显示,不同浓度OCT作用于QBC939细胞48小时后G0/G1期细胞明显增多, G0/G1期细胞所占比例为53.37%、55.96%、61.55%、74.79%,与对照组52.83%相比P<0.05,S期和G2M期分别为32.07%、31.02%、29.74%、17.21%和14.53%、14.05%、10.51%、7.33%与对照组31.38%和15.79%相比P<0.05,0.5 mg/L 5 mg/L组有显着性P<0.05.这两组间比较也有显着性P<0.05.免疫组化P27KIP1蛋白表达随OCT浓度的增加增强,实验组和对照组灰度值比较P<0.05。建立胆管癌裸鼠模型后一周,使用OCT 20ug干预21天后,实验组瘤重明显小于对照组P<0.05,但瘤体单细胞悬液细胞周期经流式细胞仪检测无显着性P<0.05。结论: OCT可抑制人胆管癌细胞的增殖。在体外,其抑制作用在一定范围内呈剂量依赖性,其抗肿瘤作用机制主要是通过细胞周期阻滞来实现的,而这一作用的实现可能与P27KIP1蛋白表达的上调有关。OCT在体内也有抑制胆管癌增殖的作用,其作用机制可能是多方面的多因素结合的结果.
徐彬[10]（2006）在《生长抑素2型受体的核素报告基因显像和对胰腺癌抑制作用的研究》文中研究指明背景与目的：生长抑素是一种在人体中广泛分布的激素，通过靶细胞膜上的生长抑素受体（somatostatin receptor，SSTR）介导，负性调节多种生理功能。SSTR共有5种亚型，其中2型受体（somatostatin receptor 2，SSTR2）被认为与肿瘤的关系最为密切。生长抑素或生长抑素类似物可通过SSTR2抑制肿瘤细胞的增生。胰腺癌中SSTR2表达缺失或是低表达，导致SSA治疗胰腺癌的效果不佳。通过基因转移的方法，将SSTR2基因导入肿瘤细胞内，通过SSTR2在细胞表面的再表达可以进行基因治疗。为评价基因治疗，需要随时对治疗基因的定位和表达进行监测，随着分子影像学的发展，可以利用放射性核素报告基因显像技术探测基因治疗中治疗基因表达情况。报告基因是监测治疗基因表达的外源基因，SSTR2可作为报告基因，利用放射性核素标记的生长抑素类似物进行显像，通过SSTR2基因的表达情况来间接评价治疗基因的表达情况。在SSTR2基因治疗胰腺癌的过程中，SSTR2既是报告基因，又是治疗基因。为此，本研究以SSTR2为报告基因，建立放射性核素锝标记奥曲肽(99mTc-奥曲肽)在胰腺癌基因治疗中的报告基因表达显像的方法，为胰腺癌基因治疗的疗效监测提供新的途径，观察SSTR2基因对裸鼠人胰腺癌移植瘤生长的影响，并以调控肿瘤生长的关键基因为靶点，对其影响机制作初步探讨。 方法：①构建重组腺病毒穿梭质粒pDC316-SSTR2和pDC316-LacZ，分别通过脂质体与腺病毒骨架质粒pBHGloxdeltaE1，3Cre共转染293细胞，经位点特异性重组获得重组腺病毒Ad-SSTR2和Ad-LacZ，并通过PCR鉴定Ad-SSTR2和Ad-LacZ，再经293细胞扩增，纯化制备高滴度病毒感染液，用X-gal染色法测定重组腺病毒感染能力。②以病毒感染液感染人胰腺癌细胞capan-2，应用RT-PCR、Western blot和免疫细胞化学方法检测SSTR2 mRNA和蛋白的表达。③MTT法检测Ad-SSTR2对capan-2细胞生长的影响。④SD大鼠经静脉注射99mTc-奥曲肽后，在不同时间内显像并测定心血池放射性计数，计算奥曲肽血药
二、奥曲肽抑制裸小鼠肝脏移植瘤生长的研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、奥曲肽抑制裸小鼠肝脏移植瘤生长的研究（论文提纲范文）
（1）化合物GA对肺腺癌的实验性治疗作用及相关机制研究（论文提纲范文）
| 英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 第一部分 化合物GA抑制肺癌作用的实验研究 |
| 前言 |
| 一、材料与方法 |
| 二、结果 |
| 三、讨论 |
| 四、结论 |
| 第二部分 化合物GA对荷瘤动物骨髓、肠道及肾脏组织的毒性评估 |
| 前言 |
| 一、材料与方法 |
| 二、结果 |
| 三、讨论 |
| 四、结论 |
| 第三部分 从细胞凋亡角度探讨化合物GA抑制肺癌生长的相关机制 |
| 前言 |
| 一、材料与方法 |
| 二、结果 |
| 三、讨论 |
| 四、结论 |
| 第四部分 化合物GA与顺铂联合应用抑制肺癌生长的作用和毒性评估 |
| 前言 |
| 一、材料与方法 |
| 二、结果 |
| 三、讨论 |
| 四、结论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 文献综述 抗肿瘤药物概况和化合物GA特性 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间的学术成果 |
| 致谢 |
（3）奥曲肽致裸鼠肝癌原位移植瘤坏死的实验研究（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 细胞培养 |
| 1.2.2 MTT实验 |
| 1.2.3 DNA末端原位标记染色法 (TUNEL) 实验 |
| 1.2.4 Annexin-V荧光标记法检测早期凋亡细胞 |
| 1.2.5 肝癌原位种植模型 |
| 1.2.6 动物体内实验 |
| 1.2.7 Western blot法检测肿瘤组织中SSTR2的表达 |
| 1.2.8 免疫组化法检测肿瘤组织中VEGF、SSTR2的表达 |
| 1.3 统计学处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 奥曲肽对Hep G2细胞增殖的影响 |
| 2.2 奥曲肽对Hep G2细胞凋亡的作用 |
| 2.3 奥曲肽增加裸鼠肝癌移植瘤的坏死 |
| 2.4 奥曲肽对肿瘤组织血供及VEGF表达的影响 |
| 2.5 肿瘤组织内SSTR2的表达 |
| 3 讨论 |
（4）131I-RC-160及5-FC对共表达CD-IRES-hSSTR2肿瘤细胞的协同杀伤作用的实验研究（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 文献回顾 |
| 正文 |
| 第一部分 建立共表达 CD-IRES-hSSTR2 基因 A549 细胞系 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第二部分 ~(99m)Tc-RC-160 在荷pCIS-A549 肿瘤裸鼠体内的放射受体显像研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第三部分 ~(131)I-RC-160 及5-FC 对裸鼠体内转染CD-IRES-hSSTR2 基因A549 移植瘤的协同抗肿瘤效应观察 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 个人简历和研究成果 |
| 致谢 |
（5）生长抑素联合血管生长抑素基因治疗人胰腺癌的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 缩略语 |
| 引言 |
| 一、胰腺癌临床治疗及研究现状 |
| 二、研究的目的和意义 |
| 第一部分:生长抑素联合血管生长抑素基因治疗人胰腺癌的体外实验研究 |
| 一 实验材料和方法 |
| 1.实验材料 |
| 2.实验方法 |
| 二 结果 |
| 三 讨论 |
| 四 结论 |
| 第二部分:生长抑素联合血管生长抑素基因治疗人胰腺癌的体内实验研究 |
| 一 实验材料和方法 |
| 1.实验材料 |
| 2.实验方法 |
| 二 结果 |
| 三 讨论 |
| 四 结论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 攻读学位期间发表文章情况 |
| 致谢 |
（6）生长抑素类似物抑制胆管癌细胞增殖的研究（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 细胞增殖实验: |
| 1.2.2 细胞周期检测: |
| 1.2.3 细胞爬片P27KIP1蛋白表达变化检测: |
| 1.2.4 动物实验方法: |
| 1.3 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 OCT可抑制QBC939细胞的增殖: |
| 2.2 OCT对QBC939细胞株细胞周期的作用: |
| 2.3 OCT作用后P27KIP1蛋白表达变化: |
| 2.4 OCT对胆管癌裸鼠模型的作用: |
| 3 讨论 |
（9）生长抑素类似物抑制胆管癌细胞增殖的研究（论文提纲范文）
| 论文 |
| 前言 |
| 第一部分 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第二部分 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 正文 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 致谢 |
（10）生长抑素2型受体的核素报告基因显像和对胰腺癌抑制作用的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 1 研究背景 |
| 1.1 生长抑素及其类似物 |
| 1.2 生长抑素受体 |
| 1.3 生长抑素2型受体与肿瘤 |
| 1.4 生长抑素及其类似物治疗肿瘤 |
| 1.4.1 直接抗增殖作用 |
| 1.4.2 间接抗增殖作用 |
| 1.5 基因转移的方法 |
| 1.6 基因表达显像 |
| 1.7 放射性核素报告基因显像 |
| 1.7.1 报告基因显像的原理和条件 |
| 1.7.2 报告基因显像的技术和方法 |
| 1.7.3 SSTR2报告基因显像研究现状 |
| 1.8 胰腺癌SSTR2的基因治疗 |
| 2 研究目的和意义 |
| 3 研究内容 |
| 3.1 携带人SSTR2基因的腺病毒载体的构建和表达 |
| 3.2 ~(99m)Tc-奥曲肽体内药代动力学及与腺病毒转染后capan-2细胞体外受体结合特性研究 |
| 3.3 SSTR2在胰腺癌中的核素报告基因显像 |
| 3.4 SSTR2对裸鼠人胰腺癌移植瘤抑制作用的研究 |
| 4 研究技术路线 |
| 第一部分 携带人SSTR2基因的腺病毒载体的构建和表达 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 主要仪器 |
| 2.2 质粒、菌株、细胞株 |
| 2.3 主要试剂 |
| 2.4 主要溶液配方 |
| 2.5 方法 |
| 2.5.1 DH5a大肠细菌感受态的制备 |
| 2.5.2 质粒的转化和扩增 |
| 2.5.3 质粒的提取和纯化 |
| 2.5.4 转化质粒的鉴定 |
| 2.5.5 pDC316-SSTR2和pDC316-1acZ重组子的构建 |
| 2.5.6 SSTR2和LacZ基因腺病毒载体重组策略 |
| 2.5.7 pDC316-SSTR2、pDC316-LacZ、pFG140和pBHGloxdeltaE1,3Cre的转化、提取和鉴定 |
| 2.5.8 293细胞培养 |
| 2.5.9 位点特异性重组构建SSTR2和LacZ基因腺病毒载体及其鉴定 |
| 2.5.10 重组腺病毒Ad-SSTR2和Ad-LacZ的扩增和保存 |
| 2.5.11 重组腺病毒的纯化 |
| 2.5.12 重组腺病毒的滴度测定 |
| 2.5.13 胰腺癌细胞capan-2的培养 |
| 2.5.14 重组腺病毒的感染能力测定 |
| 2.5.15 重组腺病毒Ad-SSTR2在胰腺癌细胞capan-2的表达测定 |
| 2.5.16 重组腺病毒对capan-2细胞增殖的影响 |
| 2.5.17 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 腺病毒穿梭质粒载体的构建 |
| 3.1.1 pCMVSPORT6-SSTR2,pSV-β-Gal和pDC316质粒的酶切鉴定结果 |
| 3.1.2 pDC316-SSTR2、pDC316-LacZ和pBHGloxdeltaE1,3Cre酶切鉴定结果 |
| 3.2 腺病毒载体的位置特异性重组 |
| 3.2.1 脂质体介导腺病毒穿梭质粒和腺病毒骨架质粒共转染293细胞 |
| 3.2.2 重组腺病毒的PCR鉴定 |
| 3.3 重组腺病毒的扩增、纯化和滴度测定 |
| 3.4 重组腺病毒感染能力测定 |
| 3.5 Ad-SSTR2在capan-2中的表达 |
| 3.5.1 RT-PCR检测SSTR2 mRNA表达 |
| 3.5.2 Western blot检测SSTR2蛋白的表达 |
| 3.5.3 免疫细胞化学检测SSTR2蛋白的表达 |
| 3.6 重组腺病毒对capan-2细胞增殖的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 基因治疗载体的选择 |
| 4.2 Ad-SSTR2和Ad-LacZ的构建和鉴定 |
| 4.3 重组腺病毒的感染能力 |
| 4.4 Ad-SSTR2在capan-2中的表达 |
| 4.5 重组腺病毒对capan-2细胞增殖的影响 |
| 5 小结 |
| 第二部分 ~(99m)Tc-奥曲肽体内药代动力学及与腺病毒转染后capan-2细胞体外受体结合特性研究 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 主要仪器 |
| 2.2 主要试剂 |
| 2.3 主要溶液配方 |
| 2.4 方法 |
| 2.4.1 ~(99m)Tc-奥曲肽的制备及放化纯度测定 |
| 2.4.2 ~(99m)Tc-奥曲肽在大鼠体内的分布和药代动力学分析 |
| 2.4.3 ~(99m)Tc-奥曲肽与重组腺病毒转染后capan-2细胞体外受体结合特性分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 ~(99m)Tc-奥曲肽的放化纯 |
| 3.2 ~(99m)Tc-奥曲肽在大鼠体内的分布和药物代谢动力学 |
| 3.3 重组腺病毒转染后capan-2细胞受体的放射性配基结合实验 |
| 3.3.1 饱和结合实验 |
| 3.3.2 竞争抑制实验 |
| 4 讨论 |
| 4.1 ~(99m)Tc-奥曲肽在大鼠体内的分布和药代动力学分析 |
| 4.2 ~(99m)Tc-奥曲肽与Ad-SSTR2转染后capan-2细胞受体结合特性分析 |
| 5 小结 |
| 第三部分 SSTR2在胰腺癌中的核素报告基因显像 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 主要仪器 |
| 2.2 腺病毒、细胞株 |
| 2.3 主要试剂 |
| 2.4 主要溶液配方 |
| 2.5 方法 |
| 2.5.1 细胞培养 |
| 2.5.2 细胞株SSTR2表达的检测 |
| 2.5.3 裸鼠胰腺癌模型的制备 |
| 2.5.4 重组腺病毒Ad-SSTR2和Ad-LacZ转染裸鼠胰腺癌移植瘤 |
| 2.5.5 Ad-LacZ转染裸鼠胰腺癌移植瘤后β半乳糖苷酶蛋白的检测 |
| 2.5.6 Ad-SSTR2转染裸鼠胰腺癌移植瘤后SSTR2蛋白的检测 |
| 2.5.7 转染后荷胰腺癌裸鼠生长抑素2型受体显像 |
| 2.5.8 ~(99m)Tc-奥曲肽在荷胰腺癌裸鼠体内的生物学分布 |
| 2.5.9 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 细胞株SSTR2表达的检测 |
| 3.1.1 细胞株SSTR2 mRNA表达的检测 |
| 3.1.2 细胞株SSTR2蛋白表达的检测 |
| 3.2 Ad-LacZ转染裸鼠胰腺癌移植瘤后β半乳糖苷酶蛋白的检测 |
| 3.3 Ad-SSTR2转染裸鼠胰腺癌移植瘤后SSTR2蛋白的检测 |
| 3.3.1 免疫组织化学 |
| 3.3.2 Western blot |
| 3.4 转染后荷胰腺癌裸鼠生长抑素2型受体显像 |
| 3.5 ~(99m)Tc-奥曲肽在荷胰腺癌裸鼠体内的生物学分布 |
| 4 讨论 |
| 4.1 多数肿瘤表达SSTR2 |
| 4.2 胰腺癌能进行SSTR2核素报告基因显像 |
| 5 小结 |
| 第四部分 SSTR2对裸鼠人胰腺癌移植瘤抑制作用的研究 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 主要仪器 |
| 2.2 主要试剂 |
| 2.3 主要溶液配方 |
| 2.4 方法 |
| 2.4.1 裸鼠胰腺癌模型的制备 |
| 2.4.2 Ad-SSTR2和Ad-LacZ转染裸鼠胰腺癌移植瘤后抑瘤效果观察 |
| 2.4.3 肿瘤组织苏木素-伊红(HE)染色 |
| 2.4.4 肿瘤组织周期检测 |
| 2.4.5 Western blot检测p16、p21、Bax、Bcl-2、caspase-3、p53、survivin、ERK2、ras、VEGF、TIMP-2和PARP-1的蛋白表达水平 |
| 3 结果 |
| 3.1 Ad-SSTR2对裸鼠胰腺癌移植瘤生长的抑制作用 |
| 3.2 HE染色结果 |
| 3.3 肿瘤组织周期检测结果 |
| 3.4 Western blot结果 |
| 3.4.1 Ad-SSTR2在裸鼠肿瘤组织中的表达 |
| 3.4.2 Ad-SSTR2对裸鼠胰腺癌移植瘤生长的抑制作用的可能机制 |
| 4 讨论 |
| 4.1 SSTR2抑制胰腺癌的生长 |
| 4.2 SSTR2通过G_0/G_1期阻滞抑制胰腺癌生长 |
| 4.3 SSTR2通过影响Ras-Raf-MEK-ERK信号转导通路抑制胰腺癌生长 |
| 4.4 SSTR2通过影响肿瘤血管生成抑制胰腺癌生长 |
| 4.5 SSTR2通过诱导细胞凋亡抑制胰腺癌生长 |
| 5 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 在校期间发表论文 |
四、奥曲肽抑制裸小鼠肝脏移植瘤生长的研究（论文参考文献）
- [1]化合物GA对肺腺癌的实验性治疗作用及相关机制研究[D]. 谢琳. 昆明医科大学, 2017(01)
- [2]奥曲肽抑制人卵巢癌细胞增殖[J]. 张云霞,任慕兰. 江苏医药, 2011(10)
- [3]奥曲肽致裸鼠肝癌原位移植瘤坏死的实验研究[J]. 陈爽,谢艳,王春晖,唐承薇. 癌症, 2009(07)
- [4]131I-RC-160及5-FC对共表达CD-IRES-hSSTR2肿瘤细胞的协同杀伤作用的实验研究[D]. 袁梦晖. 第四军医大学, 2008(02)
- [5]生长抑素联合血管生长抑素基因治疗人胰腺癌的实验研究[D]. 朱红. 昆明医学院, 2008(10)
- [6]生长抑素类似物抑制胆管癌细胞增殖的研究[J]. 陈筠,齐自宁,董秀山,陈孝平. 中国药物与临床, 2007(01)
- [7]温郁金对人胃癌裸鼠原位移植瘤生长转移的抑制作用及对COX-2和VEGF表达的影响[J]. 蔡利军,吕宾,倪桂宝,胡萍萍,郑华君,张璐. 中医药学刊, 2006(10)
- [8]生长抑素受体介导90Y-DOTA-Octreotide靶向抗肿瘤效应初探[J]. 张骏,姒健敏,梅彦,李勇,崔盈,王凡,贾宾. 实用肿瘤学杂志, 2006(03)
- [9]生长抑素类似物抑制胆管癌细胞增殖的研究[D]. 齐自宁. 山西医科大学, 2006(12)
- [10]生长抑素2型受体的核素报告基因显像和对胰腺癌抑制作用的研究[D]. 徐彬. 暨南大学, 2006(06)