一、人脐血来源的树突状细胞的体外培养扩增（论文文献综述）
姚静欣[1]（2021）在《雌孕激素在妊娠期造血活动中作用的初步探讨》文中指出目的:研究发现,妊娠期造血活动明显增强,且妊娠期激素在妊娠期造血活动中发挥重要作用。然而,妊娠期造血活动及雌、孕激素在其中的作用尚未完全阐明。本研究的目的是初步探讨妊娠期造血活动的变化及雌、孕激素在其中的作用。方法:收集正常足月妊娠女性（n=26）及未孕成年女性（n=24）的外周血,分离外周血单个核细胞（PBMCs）,流式细胞术检测外周血中Lin-CD34+造血干细胞（HSCs）、CD71+CD235a+红系前体细胞（EPCs）分别占单个核细胞（MNCs）的比率,多能祖细胞（MPPs）占HSCs的比率,以及普通髓系祖细胞（CMPs）、巨核细胞-红细胞祖细胞（MEPs）和粒细胞-巨噬细胞祖细胞（GMPs）分别占MPPs的比率。收集脐静脉血（n=36）,分离中收集CD34+HSCs进行体外扩增培养,并给予雌二醇（E2）或孕酮（P4）刺激,以不加激素的为对照组,用羧基荧光素二乙酸酯琥珀酰亚胺酯（CFSE）标记HSCs,分别于培养的第48 h和72 h用流式细胞术检测HSCs中CFSElow细胞占总体细胞的比率及HSCs的增殖指数（PI）。另外,分别于培养的第3、5、7 d用CCK-8试剂盒检测HSCs在450 nm处的光密度（OD）值,间接检测活细胞数量,并通过流式细胞术直接检测HSCs和Lin-细胞的活细胞数以及检测CMPs、MEPs和GMPs分别占MPPs的比率。结果:1.相对于未孕成年女性,正常足月妊娠女性的外周血中HSCs占MNCs的比率明显增高（P<0.05）,MPPs占HSCs的比率无明显差异,CMPs占MPPs的比率明显降低（P<0.0001）,而MEPs及GMPs占MPPs的比率明显增高（P<0.0001,P<0.05）。2.相对于未孕成年女性,正常足月妊娠女性的外周血中EPCs占MNCs的比率明显增高（P<0.01）。3.相对于未给药组,50 ng/ml E2作用48 h和72 h后,HSCs中CFSElow细胞占总体细胞的比率均明显增高（P<0.05,P<0.01）,HSCs的PI也均明显增高（P<0.05,P<0.01）;500 ng/ml P4作用72 h后,HSCs中CFSElow细胞占总体细胞的比率明显增高（P<0.05）,HSCs的PI也明显增高（P<0.01）。4.相对于未给药组,50 ng/ml E2作用5 d和7 d后,HSCs在450 nm处的OD值明显增高（P<0.01,P<0.0001）;500 ng/ml P4作用7 d后,HSCs在450 nm处的OD值明显增高（P<0.01）。5.相对于未给药组,50 ng/ml E2作用5 d和7 d后,HSCs的活细胞数均明显增高（P<0.01,P<0.01）,Lin-细胞的活细胞数也均明显增高（P<0.01,P<0.01）;500ng/ml P4作用7 d后,HSCs的活细胞数明显增高（P<0.05）,Lin-细胞的活细胞数也明显增高（P<0.05）。6.相对于未给药组,50 ng/ml E2或500 ng/ml P4作用3 d、5 d、7 d后,CMPs、MEPs和GMPs分别占MPPs的比率均无明显差异。结论:1.女性在妊娠期间造血活动明显增强且明显向红系细胞和髓系细胞分化偏移。2.雌、孕激素在妊娠期造血活动中可能具有重要作用,雌、孕激素能够促进HSCs的增殖。
金林林[2]（2020）在《脐血移植植入前综合征的发病机制及干预策略研究》文中指出脐血是异基因造血干细胞移植非常理想的干细胞来源,非血缘脐血移植后慢性移植物抗宿主病的发生率低,而移植物抗白血病效应依然较强,因此,患者复发率较低,生活质量较高。虽然非血缘脐血移植已得到广泛应用,但是在过去的几年里,脐血作为干细胞来源的使用率下降了。由于造血恢复和免疫重建的延迟,移植后早期非复发死亡率高导致了非血缘脐血移植广泛应用的放缓,降低移植相关死亡的风险具有重要意义。大量的研究表明,非血缘脐血移植后会发生植入前的免疫反应,也叫植入前综合征,重度植入前综合征患者的死亡率高,严重影响非血缘脐血移植的效率。而关于植入前综合征的发病机制还知之甚少,为了探究植入前综合征发生的免疫学机制,寻找重度植入前综合征的有效干预策略,我们展开了本研究,并取得了如下结果:1、重度植入前综合征患者预后不良我们采用竞争风险模型分析发现脐血移植患者易于发生植入前综合征,而外周血干细胞移植患者几乎不会发生植入前综合征。我们通过Cox回归分析发现了植入前综合征的3个独立高危因素,分别是发生时间早于非血缘脐血移植后+7天、临床症状多于两项和类固醇激素甲强龙治疗无效。利用积分法建立植入前综合征危险度分层的评分系统,并对不同评分的植入前综合征患者临床疗效进行比较。采用竞争风险模型和Kaplan-Meier生存分析的结果显示:重度植入前综合征患者2-4度急性移植物抗宿主病、3-4度急性移植物抗宿主病和3年非复发死亡率显着升高,导致3年总生存率以及3年无病生存率显着降低。这些结果说明,重度植入前综合征患者预后较差,死亡率较高,是非血缘脐血移植成功的一个重要障碍。2、植入前综合征患者单核细胞显着增多我们猜测,植入前综合征的发生与脐血移植物本身的特性有关。首先,我们对患者回输的移植物细胞数量进行分析,结果表明,植入前综合征患者与未发生植入前综合征患者回输的总有核细胞数、干细胞、T细胞、NK细胞、B细胞和单核细胞的数量均无统计学差异。继而我们利用流式细胞术对脐血移植后早期患者外周血的细胞进行动态监测,结果显示,在脐血移植后早期,患者外周血中几乎检测不到B细胞,T细胞和NK细胞在植入前综合征患者与未发生植入前综合征患者外周血中比例相似。值得注意的是,植入前综合征患者外周血中单核细胞比例显着多于未发生植入前综合征患者,对绝对数分析也得到了一致的结果。通过短串联重复序列PCR分析供者嵌合度,结果显示,在脐血移植后+7天供者嵌合度越高,植入前综合征的症状越严重。综上所述,脐血移植后早期植入前综合征患者体内单核细胞大量扩增,供者早期嵌合是发生植入前综合征的重要危险因素。3、脐血来源的单核细胞具有炎症性特征单核细胞在许多炎症性疾病中发挥重要的作用,因此,我们想了解植入前综合征这种炎症反应的发生是否与单核细胞有关。基因组表达谱芯片结果显示脐血来源的单核细胞不同于外周来源的单核细胞,两种细胞有大量基因差异表达,其中脐血单核细胞高表达促炎性细胞因子粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）、白细胞介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）等,实时荧光定量PCR和流式细胞术检测进一步验证了此现象。4、GM-CSF驱动脐血来源单核细胞的炎症性特征通过流式细胞术检测,我们发现脐血中具有一群表达GM-CSF的单核细胞,机采的外周血干细胞中几乎没有检测到表达GM-CSF的单核细胞,而且脐血单核细胞比外周单核细胞GM-CSF受体α（GM-CSFRα）表达水平更高。我们想知道脐血单核细胞促炎性细胞因子IL-6表达水平的升高是否与GM-CSF有关,因此,我们使用了 GM-CSF、粒细胞集落刺激因子（G-CSF）和脂多糖（LPS）进行体外刺激实验。结果表明,即使在未刺激的情况下,脐血单核细胞也表达较高水平的IL-6,加入GM-CSF刺激后,IL-6表达水平进一步升高,而G-CSF不能促进单核细胞IL-6的表达。这表明,脐血中具有一群炎症性的单核细胞,这些单核细胞表达GM-CSF,通过与单核细胞上的GM-CSF受体结合,从而活化更多的单核细胞,促进IL-6的表达。5、植入前综合征患者的单核细胞产生IL-6我们想知道GM-CSF是否在植入前综合症的病理生理学中发挥重要作用。我们用ELISA法动态监测脐血移植后早期患者外周血血浆中细胞因子的水平,结果表明IL-6浓度与GM-CSF浓度变化基本一致,这两种蛋白的水平在植入前综合症患者出现临床症状时达到顶峰,然后又回到基线水平。相关性分析显示血浆中IL-6与GM-CSF的水平呈正相关。发生植入前综合征时患者血浆IL-6水平显着高于未发生植入前综合征患者,IL-6水平越高,植入前综合征患者症状越严重。相比之下,未发生植入前综合征患者血浆中几乎检测不到GM-CSF和IL-6。通过胞内IL-6染色,我们发现植入前综合征患者外周血中含有大量产生IL-6的单核细胞,这表明单核细胞是植入前综合征患者体内IL-6的主要来源。6、阻断IL-6可以缓解植入前综合征本研究中,我们发现IL-6是植入前综合征患者的一个特征性细胞因子,我们猜想阻断IL-6的信号通路可以缓解植入前综合征,为了检验我们的研究在临床应用中的有效性,因此,我们在中国临床试验注册中心登记了临床试验,用特异性阻断IL-6受体（IL-6R）的人源化单克隆抗体—托珠单抗,治疗激素难治性的重症植入前综合征患者,本试验共招募11例患者。对符合条件的激素难治性重度植入前综合征患者静脉滴注4-8 mg/kg的托珠单抗注射液,动态监测体温、皮疹等临床指标。临床试验结果表明,激素难治性植入前综合征患者对托珠单抗应答,体温迅速恢复到正常水平,皮疹消退。所有患者均植入成功,造血功能恢复良好,且在治疗过程中没有出现明显药物不良反应,采用托珠单抗治疗的患者非复发死亡率显着提高。总的来说,这些结果表明托珠单抗治疗可以缓解激素难治性植入前综合征患者的临床症状。综上所述,我们证明脐血来源的单核细胞具有炎症性特征,可以产生GM-CSF和IL-6等促炎性的细胞因子,同时脐血单核细胞也表达高水平的GM-CSF受体,对GM-CSF应答产生更高水平的IL-6。脐血移植后,单核细胞在受者体内迅速扩增,植入前综合征患者血清中GM-CSF和IL-6水平均升高,导致植入前综合征的发生。值得注意的是,托珠单抗干预治疗可以有效缓解激素难治性植入前综合征。总之,本研究揭示了脐血移植后植入前综合征的病理机制,为重度植入前综合征患者提供了新的治疗策略,这些发现对降低脐血移植后早期移植相关死亡率,进一步提高非血缘脐血移植的安全性和有效性,扩大脐血移植的应用,具有重要的指导意义。
郭洋[3]（2019）在《人经血干细胞携带溶瘤腺病毒用于结直肠癌的治疗研究》文中研究说明结直肠癌（Colorectal cancer,CRC）是一类常见的消化系统恶性肿瘤,严重威胁人类健康。传统的放化疗并不能显着提高患者的生存率,因而探索一种新型有效的结直肠癌治疗手段至关重要,近些年溶瘤病毒的肿瘤治疗应运而生。溶瘤病毒可选择性地在肿瘤细胞中复制并裂解肿瘤细胞,同时激活机体的抗肿瘤免疫反应;然而,直接通过静脉注射溶瘤病毒会引起抗病毒免疫反应而降低其作用效果,因而选择合适的载体将溶瘤病毒运输至肿瘤部位是实现安全、高效、精准治疗的关键。本研究我们利用人经血干细胞（Human menstrual blood-derived stem cells,Men SCs）运输溶瘤腺病毒,探索其作为载体的靶向运输能力和结合溶瘤腺病毒对CRC的治疗效果。MenSCs是近年来新发现的一种成体干细胞,与其他间充质干细胞相比,具有来源丰富、采集方便无创、体外扩增迅速、无伦理道德争议等优势。本研究中,我们首先从女性志愿者经血样本中分离获取经血源干细胞,并对其进行传代培养和相关表面标记的鉴定,进而探索其作为病毒运输载体的可行性和结合溶瘤病毒治疗CRC的有效性。为了优化溶瘤病毒对Men SCs的感染效率,我们构建了一种新型嵌合型的溶瘤腺病毒CRAd5/F11,将11型腺病毒的纤毛嵌入5型腺病毒结构中,这种嵌合型病毒主要通过识别细胞表面受体CD46感染细胞;通过一定滴度的CRAd5/F11感染后,Men SCs的细胞活性及其免疫表型并未受到明显影响,且Men SCs-CRAd5/F11细胞株在体内外迁移实验中均能够靶向肿瘤组织或细胞,证实了Men SCs作为溶瘤病毒靶向运输载体的可行性;我们进一步探索了Men SCs-CRAd5/F11细胞株对结直肠癌的治疗潜能,体外研究中,我们利用CCK8和细胞凋亡等体外实验检测了Men SCs-CRAd5/F11对肿瘤细胞的杀伤作用,最后在体内结直肠癌小鼠模型中通过不同方式对Men SCs-CRAd5/F11进行移植,一定时间后观察到小鼠肿瘤的生长明显受到抑制,由此证实利用Men SCs运载CRAd5/F11治疗结直肠癌的有效性。综上所述,Men SCs是一种充满潜能的细胞载体,其能够将嵌合型溶瘤病毒CRAd5/F11安全有效地运输至肿瘤部位并发挥抗肿瘤作用,利用Men SCs装载溶瘤病毒可实现对结直肠癌的病毒靶向治疗,为临床结直肠癌及其他肿瘤的治疗提供了理论依据。
陈橙[4]（2019）在《胀果甘草多糖对树突状细胞表型和功能的影响及作用机制的初步研究》文中研究指明目的:利用体外贴壁法,诱导培养小鼠骨髓源的树突状细胞（DC）,研究胀果甘草多糖对DC表型成熟,和抗原提呈功能的影响,并初步研究其基于TLRs/NF-κB信号通路,促进DC免疫功能的作用机制。方法:1)从C57BL/6雄性小鼠骨髓分离原代细胞,用终浓度为10 ng/mL IL-4、20 ng/mL GM-CSF联合诱导成未成熟DC（imDC）,并利用倒置显微镜、扫描电镜和流式细胞（FCM）术等方法鉴定DC的表型。2)收集培养至第七天的悬浮状细胞,以不同浓度胀果甘草粗多糖GiP及其纯化组分GiP-B1,分别干预DC 24 h和48 h,利用CCK8法检测GiP-B1和GiP对DC的细胞毒性作用;FCM术检测DC表面标志分子CD11c、MHC-II、CD80和CD86的表达;ELISA法检测DC分泌的IL-12、IL-6、IL-1β和TNF-α含量;WB法检测GiP-B1和GiP对DC迁移能力的影响。3)FCM术和ELISA法分别检测TLR2/4单克隆抗体封闭前后GiP-B1和GiP对DC表型和分泌IL-12、IL-6、IL-1β和TNF-α的影响;RT-PCR法检测MyD88、p65、TLR2和TLR4基因表达;WB检测DC中的MyD88、TLR2、TLR4、p65、p-p65、IκB-α及p-IκB-α蛋白表达水平。结果:1)体外培养的imDC形成集落,半贴壁生长,表面较光滑,表面标志分子CD11c、MHC-II、CD80和CD86表达低;成熟DC体积变大,褶皱增多,触角变长,集落减少,大量细胞悬浮,表面标志分子CD11c、MHC-II、CD80和CD86表达升高。2)0400μg/mL的GiP-B1和GiP分别干预DC 24 h和48 h,对DC的生长无影响;与空白对照组比较,干预48 h后GiP-B1（100400μg/mL）和GiP（100400μg/mL）均能增加DC表面标志分子的表达,对MHC-II、CD80和CD86的影响差异显着（P<0.05）;各组GiP-B1和GiP均能显着促进IL-12p40/p70等细胞因子的分泌（P<0.05）;各组GiP-B1和GiP均能显着增加CCR7蛋白的表达（P<0.05）。3)与空白对照组比较,anti-TLR4和anti-TLR2可抑制GiP-B1和GiP诱导的,DC表面标志分子MHC-II和CD80的表达（P<0.05）,降低DC分泌IL-6、IL-1β和TNF-α等细胞因子的含量（P<0.05）;100μg/mL和200μg/mL的GiP-B1和GiP,可上调TLRs/NF-κB信号通路相关的TLR4、TLR2、MyD88和p65的mRNA水平（P<0.05）,以及p65和IκB-α蛋白磷酸化水平。结论:GiP及其纯化组分GiP-B1,均能显着促进DC表型及功能成熟,提高抗原提呈能力,促进DC免疫功能,其作用机制可能与激活TLRs/NF-κB信号通路有关。
孟宪会[5]（2018）在《基于miRNA的间充质干细胞干性维持机制及应用研究》文中提出间充质干细胞（MSCs）是细胞治疗重要的种子细胞,在心血管疾病、糖尿病和神经退行性疾病等衰老相关疾病的治疗中间充质干细胞表现出引入注目的潜能。间充质干细胞治疗的首要条件是在质量和数量上满足临床要求。一方面,体外扩增过程引起的细胞衰老和功能衰退是间充质干细胞培养的主要障碍,研究mi RNA对间充质干细胞干性维持和衰老的作用为解决间充质干细胞的规模化扩增问题提供了新的思路。另一方面,间充质干细胞组分在抗衰老应用中的有效性也需要进一步研究。本论文就这些问题展开研究,取得了以下成果:1.基于mi RNA表达谱探讨了mi RNA对间充质干细胞衰老的作用机制。我们利用高通量测序技术比较了脐带间充质干细胞培养早期和培养晚期两个阶段的mi RNA表达谱特征。通过建立mi RNA与靶基因的作用模型,我们分析了mi RNA表达谱对靶基因表达的影响。对衰老前后差异表达的靶基因进行功能聚类分析后我们揭示了mi RNA在间充质干细胞衰老过程中重要的调节作用。2.深入研究了mi R-18a在间充质干细胞衰老中的作用机制,提出了一种通过mi R-18a的持续表达减缓衰老、维持间充质干细胞自我更新和生物学功能的方法。我们发现内源性的mi R-18a在间充质干细胞的高表达是细胞抵御衰老的关键因素。通过荧光素酶报告基因实验和免疫印迹实验我们首次证明mi R-18a通过直接靶向CTDSPL的3’非编码区抑制了CTDSPL的表达,从而抑制了CTDSPL诱导的细胞衰老。最后我们通过慢病毒感染使mi R-18a在间充质干细胞中稳定表达,证明了mi R-18a的持续表达降低了细胞中活性氧的水平,减缓了间充质干细胞的衰老过程,同时促进了干细胞基因的上调,增强了细胞的生长活性和多向分化能力。3.比较了脐血与脐带间充质干细胞的基因表达特征和应用潜能。我们建立了人脐血间充质干细胞（CBMSCs）的分离培养体系,通过与脐带间充质干细胞的深入比较我们发现,mi RNA的调控特征显示脐带间充质干细胞的衰老主要受分化基因失调的影响,而泛素化依赖的蛋白降解过程对脐血间充质干细胞的衰老起了关键作用。对mi RNA表达谱和转录组的比较分析我们发现脐带和脐血间充质干细胞在代谢、黏附、增殖和免疫调节等方面显着的功能差异。最后我们还利用细胞因子抗体芯片对两种细胞的条件培养液中55种细胞因子的含量进行了检测。通过这些分析我们发现与脐带来源相比,脐血来源的间充质干细胞在神经、血管和胰岛等组织修复、造血干细胞支持以及免疫调节等方面表现出更突出的应用潜能。4.研究了脐血间充质干细胞分泌组分的抗衰老作用。我们首先证明了脐血间充质干细胞分泌组分能够显着降低由过氧化氢诱导的活性氧水平上升,减缓了细胞的衰老。然后以12个月自然衰老的小鼠为模型,我们分析了脐血间充质干细胞分泌组分对小鼠的影响。通过对小鼠外周血淋巴细胞中T、B、髓细胞亚群、NK细胞亚群、调节性T细胞、原始和记忆T细胞亚群的表征分析我们发现与对照组相比间充质干细胞的分泌组分能够显着改善衰老小鼠的免疫调节功能。进一步的组织切片分析显示间充质干细胞的分泌组分也显着改善了小鼠皮肤和肾脏组织的衰老情况。这些结果显示脐血间充质干细胞分泌组分能够抑制活性氧引起的细胞衰老、调节机体免疫功能,改善机体组织的衰老情况,减缓衰老。
李真[6]（2018）在《造血细胞在癌性重编程中干性获得》文中提出体细胞在癌变过程中能够获得类似干细胞的特征,然而,它们具有的自我更新能力是从干细胞保留而来还是致癌因子赋予给体细胞的仍未知晓。本论文首先通过TEL-AML1诱导前白血病干细胞（Pre-LSCs）模型,在人脐带血来源的干细胞（HSCs,Lin-CD34+CD38-CD49f+）和祖细胞（MPPs,Lin-CD34+CD38-CD49f-）中分别表达TEL-AML1,小鼠移植实验（SRC）表明TEL-AML1的靶细胞为干细胞。为了进一步探讨靶细胞的干性潜能是否为TEL-AML1诱导Pre-LSCs所必需,我们引入了iBMI1敲除系统用以干扰干细胞的干性功能。通过小鼠移植实验,我们发现TEL-AML1在敲除iBMI1的HSCs中无重建能力也无法诱发Pre-LSCs。说明靶细胞的自我更新能力对于TEL-AML1起始白血病发生形成Pre-LSCs至关重要。因此,我们推断白血病细胞具有的干性可能是从干细胞保留而来。为了进一步探讨分化了的细胞获得干性和恶性的分子机制,我们首先通过分析发现IKZF1基因突变的白血病细胞具有共同的干性特征谱系,因此我们把IKZF1基因缺失导致的一个常见亚型IK6作为模型,将其导入人的早期造血细胞并移植入小鼠体内。我们验证了IK6确实可以显着提高干细胞的干性潜能,但同TEL-AML1一样不能赋予祖细胞以干性。于是我们进一步考察IK6对由干细胞分化而来的B淋巴细胞的影响。我们将一代小鼠骨髓中重建细胞按照免疫表型划分为干细胞富集群（CD34+CD19-）、B祖细胞富集群（Pro-B,CD34+CD19+）以及不成熟B和成熟B细胞富集群（IM/M-B,CD34-CD19+）,并对这三群细胞进行了功能及转录组分析。体内SRC实验表明IK6阳性的Pro-B及IM/M-B细胞在二代小鼠移植实验中可以成功重建,即具有了干性潜能。RNA-seq数据分析表明IK6异位表达后的B淋巴细胞具有了与白血病细胞同样的干性和恶性表达谱以及其对应的信号转导通路的激活,并且这些分子特征可以在白血病细胞中追溯到。综上所述,本论文提出了一个借由单个基因突变引发出的肿瘤发生模型,在此模型中单个基因突变即可引起体细胞重编程,使其具有与癌细胞相似的基因谱系特征。因此,本论文的研究对于洞悉体细胞的癌性重编程具有重要意义。本课题对于研究肿瘤发生和在体细胞重编程中避免恶性转变具有重要意义。
陈偲[7]（2017）在《云芝糖肽跨肠上皮转运及后继对树突状细胞的激活作用研究》文中研究指明目的:云芝糖肽（Polysaccharopeptide of Trametes versicolor,PSP）是从云芝Cov-1菌株深层发酵菌丝体中提取得到的一种高分子量结合蛋白多糖,临床用于提高机体免疫功能、拮抗放、化疗的毒副作用并抑制肿瘤。本研究探讨了肠上皮细胞对PSP的跨层转运能力,及转运后的PSP对树突状细胞的激活作用。方法:PSP首先用酪胺法标记了FITC。肠上皮层模型采用在Transwell小室中培养Caco-2细胞获得,M细胞模型在Caco-2培养后培养池下层加入Raji共培养后获得。跨上皮层的转运分析通过在小室内加入PSP-FITC,然后在0-16hr小时在下室取样用荧光分光光度仪检测跨细胞层后的PSP-FITC荧光强度。进入Caco-2和M细胞内的PSP还用荧光显微镜进行了观察。PSP在小肠内的吸收采取小鼠离体小肠灌注方法进行,进入肠壁内的PSP-FITC用荧光显微镜法观察冰冻切片进行,肠腔内的PSP降解情况用HPLC法进行了分析。PSP诱导肠细胞和树突状细胞产生TNF-α,IL-8、IL-12等细胞因子的活性用ELISA法进行了检测,小鼠骨髓来源树突状细胞（BMDC）采用GM-CSF,IL-4诱导骨髓细胞获得,PSP调控MHC-II,CD80,CD86的作用用流式细胞仪进行了分析。结果:PSP用酪氨法标记FITC后,显示出与FITC相同的荧光光谱,能用于巨噬细胞荧光染色。加入小室4h后,下室中出现PSP-FITC的荧光且强度随时间延长而增加。这种现象在Caco-2/Raji双培养模型中更为显着,16h时PSP-FITC荧光强度比Caco-2组高26.26%。荧光显微镜观察PSP-FITC进入了Caco-2和M细胞。灌注小肠2小时后,PSP-FITC出现在肠上皮和基底层内,同时还出现在肠绒毛中心的乳糜管的位置。HPLC结果显示PSP在肠内保留了高分子的状态。PSP能显着促进树突状细胞分泌细胞因子TNF-α和IL-12,100μg/m L时诱导的生成量分别是对照的1.96和1.85倍,还促进BMDC细胞表达MHC-II,CD80和CD86,提高幅度分别为6.5%、7.1%和5.0%。经过转运后含有PSP的细胞培养液也能够显着升高DC表达MHC-II,CD80和CD86,提高幅度分别为11.1%,16.8%,27.6%,但对Caco-2和M细胞无细胞因子TNF-α和IL-8的诱生作用。总结:综上所述,高分子PSP可被肠上皮细胞吸收并跨层转运从而进入肠壁,到达乳糜管。M细胞加强了PSP的肠道吸收。PSP不直接刺激肠上皮细胞产生细胞因子,但能激活BMDC。被转运后的PSP仍旧具有DC激活活性。因此PSP的免疫调节机制在通过肠道转运吸收后继而激活树突状细胞,从而起始整体的宿主免疫反应。
欧文全[8]（2016）在《STAT3-siRNA-前胸腺素α共负载热敏性纳米胶束对肿瘤相关树突状细胞免疫功能调控的影响》文中研究指明目的:将负载前胸腺素（ProTα）多肽片段,具有温度敏感性的聚合物胶束用于负载STAT3-siRNA到达肿瘤相关树突状细胞（TADCs）,下调STAT3蛋白的表达,调控肿瘤相关树突状细胞的功能,发挥其体内免疫抗肿瘤效果。方法:通过酰胺键反应合成壳聚糖接枝的泊洛沙姆（PO-CS）载体,采用FT-IR和1H-NMR进行结构验证,并用芘探针测量其形成胶束后的临界胶束浓度。在溶液中形成胶束后,利用马尔文粒径电位测定仪中测量其粒径和电位大小,同时测量15℃,25℃和37℃条件下胶束的粒径变化考察其温度敏感性。本实验还分别测量了泊洛沙姆（PO）、壳聚糖（CS）以及PO-CS载体在不同温度下的粒径变化情况来考察该胶束的温度敏感性来源。将制备好的胶束置于透射电镜（TEM）中观察其表面形态,并通过琼脂糖凝胶电泳验证胶束对siRNA的保护作用。利用MTT的方法考察胶束对树突状细胞（DCs）、脾脏细胞（Spleen Cells）和293T细胞的安全性;并使用流式细胞仪和激光共聚焦显微镜考察PO-CS胶束负载ProTα和siRNA进入DCs的情况及聚合物胶束温度敏感性的考察。利用Western Blot方法检测负载STAT3胶束与TADCs共培养后STAT3蛋白的下调情况,同时使用流式细胞仪检测STAT3-siRNA发挥沉默效果后,ProTα促进TADCs表达CD40,CD86及IL-12的情况。采用IVIS Lumina II小动物成像仪观察胶束负载Cy5-siRNA的体内动态情况,使用红外热成像仪考察胶束体内冷刺激所需的时间。建立B16黑色素瘤肿瘤模型考察负载ProTα和STAT3-siRNA的ProTα-PO-CS载体的体内药效学效果。结果:本实验所构建PO-CS载体容易形成胶束,CMC较低（5.0μg/ml）。TEM结果表明,PO-CS胶束外观圆整,粒径为231.7±4.6nm,电位为17.3±0.3mV,PI值较小,对siRNA的包封率达90%以上,且具有一定的温度敏感性。MTT结果显示,PO-CS胶束的DCs细胞毒性低,并且其负载的siRNA在树突状细胞中的摄取（81%）要比巨噬细胞（25%）高。激光共聚焦显微镜结果表明,ProTα/PO-CS胶束能很好地将siRNA转运到TADCs中,并且具有很好的温度敏感性,能在冷刺激的作用下实现siRNA的释放。Western Blot结果表明,胶束负载的STAT3-siRNA能有效沉默TADCs中STAT3蛋白的表达,并且能在流式细胞仪中观察到ProTα促进TADCs中表面成熟因子CD40,CD86的上调,而未加STAT3-siRNA处理组并无此功能。该结果表明共负载STAT3-siRNA和ProTα处理后,TADCs的功能得到恢复,能向成熟树突状细胞分化。IL-12因子的上调结果也证明经共负载STAT3-siRNA和ProTα胶束治疗后,TADCs恢复正常的功能。体内小动物成像结果表明,胶束负载siRNA后,持续长时间观察到Cy5-siRNA的体内动态情况。红外热成像结果表明,体内达到冷刺激效果温度所需的时间为20-25min。体内肿瘤生长抑制实验结果表明,与PBS组相比,负载ProTα和STAT3-siRNA的ProTα-PO-CS冷刺激胶束组能很好地调控TADCs的功能,发挥免疫抗肿瘤效果,抑制肿瘤的生长,同时释放更多的IL-12,共同抑制肿瘤的生长。结论:ProTα-PO-CS温度敏感性胶束能将siRNA递送到TADCs中,沉默STAT3蛋白的表达,调控TADCs的功能,恢复ProTα促进树突状细胞向成熟树突状细胞分化的功能,发挥联合免疫抗肿瘤的治疗效果。
柴枫,王伟,方勇,鲁广,万宇,张菡,林科佳,徐公林[9]（2015）在《沉默SOCS1及负载MAGE-A3抗原的脐血树突状细胞杀伤肾癌细胞的研究》文中认为目的:研究SOCS1沉默并负载MAGEA3抗原的树突状细胞（DC）特异性抗肿瘤效应中的作用。方法:采用基因克隆技术构建细胞因子信号抑制因子（SOCS1）基因RNA干扰和慢病毒载体,转染人脐血来源的DC,采用Western-Blot鉴定SOCS1的沉默情况,再负载MAGE-A3抗原肽,应用MTT法评估沉默SOCS1并负载MAGE-A3抗原的DC刺激T细胞增殖的能力及杀伤靶细胞的效应。结果:沉默SOCS1及负载MAGE-A3抗原的脐血树突状细胞组杀伤肾癌细胞能力显着高于其他组,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论:SOCS1沉默并负载MAGE-A3抗原的DC疫苗可以产生高效而特异性的抗肾癌免疫应答。
张融玮,赵振林[10]（2014）在《树突状细胞的研究进展》文中指出树突状细胞（DC）是一类来源于骨髓造血系统的异质性细胞,它是由2011年诺贝尔奖获得者、加拿大籍科学家Ralph M.Steinman于1973年发现的,是目前发现的功能最强的抗原递呈细胞（APC）。在过去的十几年中,许多科研人员将研究重点放在DC的起源、分化和生物学特性,并且证实DC在先天性免疫、适应性免疫和维持自身组织免疫耐受的过程中起着非常关键的作用,应用DC的高效抗原呈递
二、人脐血来源的树突状细胞的体外培养扩增（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、人脐血来源的树突状细胞的体外培养扩增（论文提纲范文）
（1）雌孕激素在妊娠期造血活动中作用的初步探讨（论文提纲范文）
| 中英文缩略词对照表 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 研究结果 |
| 讨论 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 综述 雌激素与造血活动研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表的研究成果 |
| 致谢 |
（2）脐血移植植入前综合征的发病机制及干预策略研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 造血干细胞移植 |
| 1.1.1 造血干细胞 |
| 1.1.2 骨髓移植 |
| 1.1.3 外周血干细胞移植 |
| 1.1.4 脐血移植 |
| 1.2 植入前综合征 |
| 1.3 单核细胞 |
| 1.3.1 单核细胞的发育 |
| 1.3.2 单核细胞的分类 |
| 1.3.3 炎症状态单核细胞的招募 |
| 1.3.4 单核细胞与妊娠、先兆子痫 |
| 1.3.5 单核细胞与分娩 |
| 1.4 炎症性细胞因子 |
| 1.4.1 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 |
| 1.4.2 白细胞介素-6 |
| 1.4.3 肿瘤坏死因子-α |
| 1.4.4 白细胞介素-1β |
| 第2章 引言 |
| 第3章 材料与方法 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 临床标本 |
| 3.1.2 实验试剂 |
| 3.2 实验仪器 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 脐带血单个核细胞分离 |
| 3.3.2 磁珠分选CD14~+单核细胞 |
| 3.3.3 流式细胞术 |
| 3.3.4 细胞总RNA提取 |
| 3.3.5 逆转录(RT)反应 |
| 3.3.6 PCR反应(RT-PCR) |
| 3.3.7 琼脂糖凝胶电泳 |
| 3.3.8 实时荧光定量PCR |
| 3.3.9 基因芯片分析 |
| 3.3.10 人外周血血浆的采集 |
| 3.3.11 ELISA检测细胞因子 |
| 3.3.12 临床试验 |
| 3.3.13 统计分析 |
| 第4章 实验结果 |
| 4.1 非血缘脐血移植后重度植入前综合征患者预后不良 |
| 4.2 植入前综合征患者外周血单核细胞显着增多 |
| 4.3 脐血来源的单核细胞具有炎症性表型 |
| 4.4 GM-CSF驱动脐血来源单核细胞的炎症性特征 |
| 4.5 植入前综合征患者的单核细胞产生IL-6 |
| 4.6 阻断IL-6可以缓解植入前综合征 |
| 4.7 附录 |
| 第5章 结果讨论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读博士学位期间的主要研究成果 |
（3）人经血干细胞携带溶瘤腺病毒用于结直肠癌的治疗研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分 经血干细胞的分离培养及鉴定 |
| 1.1 前言 |
| 1.2 材料和试剂 |
| 1.2.1 MenSCs的来源 |
| 1.2.2 主要试剂 |
| 1.2.3 主要设备 |
| 1.3 实验方法 |
| 1.3.1 MenSCs的分离培养 |
| 1.3.2 细胞冻存和复苏 |
| 1.3.3 MenSCs细胞表面标记分子鉴定 |
| 1.3.4 MenSCs诱导分化实验 |
| 1.3.5 免疫荧光检测MenSCs表面干性分子 |
| 1.4 实验结果 |
| 1.4.1 MenSCs的分离培养 |
| 1.4.2 MenSCs细胞成骨成脂分化结果 |
| 1.4.3 MenSCs细胞表面标记分子流式鉴定结果 |
| 1.4.4 MenSCs表面干性标记的表达 |
| 1.5 讨论 |
| 1.6 结论 |
| 第二部分 MenSCs-CRAd5/F11 细胞株的构建及功能鉴定 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 材料与试剂 |
| 2.2.1 主要试剂 |
| 2.2.2 主要设备 |
| 2.2.3 MenSCs及肿瘤细胞系来源 |
| 2.2.4 结直肠癌细胞的培养 |
| 2.2.5 溶瘤腺病毒CRAd5/F11的构建及分离纯化 |
| 2.2.6 动物实验 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 Western Blot检测MenSCs表面受体蛋白表达 |
| 2.3.2 CRAd5/F11 感染MenSCs |
| 2.3.3 电镜的检测CRAd5/F11 |
| 2.3.4 CRAd5/F11对MenSCs毒性作用的检测 |
| 2.3.5 CRAd5/F11 感染后MenSCs上清中病毒颗粒数的检测 |
| 2.3.6 MenSCs-CRAd5/F11 细胞表面标记分子鉴定 |
| 2.3.7 MenSCs-CRAd5/F11 对肿瘤细胞的趋化实验 |
| 2.3.8 MenSCs-CRAd5/F11 在肿瘤小鼠体内的迁移实验 |
| 2.3.9 统计学分析 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.4.1 MenSCs表面受体蛋白的表达 |
| 2.4.2 溶瘤病毒对MenSCs感染效率的检测 |
| 2.4.3 MenSCs细胞内病毒颗粒的电镜检测 |
| 2.4.4 CRAd5/F11对MenSCs的毒性作用 |
| 2.4.5 感染CRAd5/F11的MenSCs上清中病毒颗粒数检测 |
| 2.4.6 MenSCs-CRAd5/F11 表面标记的表达情况 |
| 2.4.7 MenSCs-CRAd5/F11 体外对肿瘤细胞的趋化作用 |
| 2.4.8 MenSCs-CRAd5/F11 在体内对肿瘤组织的归巢作用 |
| 2.5 讨论 |
| 2.5.1 CRAd5/F11 依赖细胞受体CD46 感染MenSCs |
| 2.5.2 CRAd5/F11对MenSCs和肿瘤细胞的毒性作用 |
| 2.5.3 MenSCs-CRAd5/F11 对肿瘤的靶向迁移 |
| 2.6 结论 |
| 第三部分 MenSCs运载CRAd5-F11 治疗结直肠癌的体内外实验研究 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 材料与试剂 |
| 3.2.1 主要试剂 |
| 3.2.2 主要设备 |
| 3.2.3 MenSCs及肿瘤细胞系来源 |
| 3.2.4 溶瘤腺病毒CRAd5/F11及CRAd5/F11-TIS的构建 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 WB检测肿瘤细胞表面腺病毒结合受体的表达 |
| 3.3.2 CRAd5/F11对肿瘤细胞毒性作用的检测 |
| 3.3.3 运载CRAd5/F11的MenSCs对肿瘤细胞的抑制实验 |
| 3.3.4 荷瘤小鼠肿瘤模型的建立及肿块大小的测量 |
| 3.3.5 MenSCs的移植 |
| 3.3.6 组织标本的制备 |
| 3.3.7 肿瘤组织的免疫组化分析 |
| 3.3.8 肿瘤组织细胞凋亡的TUNEL检测 |
| 3.3.9 MenSCs-CRAd5/F11-TIS对肿瘤的作用 |
| 3.3.10 统计学分析 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.4.1 肿瘤细胞表面腺病毒受体蛋白的表达 |
| 3.4.2 溶瘤病毒对肿瘤细胞具有杀伤作用 |
| 3.4.3 携带CRAd5/F11的MenSCs对肿瘤细胞的杀伤作用 |
| 3.4.4 病毒抗体血清对溶瘤病毒杀伤肿瘤细胞的影响 |
| 3.4.5 体内动物实验操作及时间安排示意图 |
| 3.4.6 MenSCs-CRAd5/F11 移植后抑制肿瘤的生长 |
| 3.4.7 肿瘤组织免疫组化相关蛋白的检测 |
| 3.4.8 MenSCs-CRAd5/F11 诱导肿瘤组织凋亡 |
| 3.4.9 MenSCs-CRAd5/F11-TIS在体内对肿瘤的抑制作用 |
| 3.5 讨论 |
| 3.5.1 MenSCs运载CRAd5/F11 对肿瘤的治疗 |
| 3.5.2 溶瘤病毒对肿瘤细胞的杀伤和抑制机制 |
| 3.5.3 溶瘤病毒结合基因治疗 |
| 3.5.4 溶瘤病毒CRAd5/F11从MenSCs胞内释放的机制探讨 |
| 3.5.5 MenSCs结合溶瘤病毒治疗肿瘤的安全性问题 |
| 3.6 结论 |
| 全文总结与展望 |
| 参考文献 |
| 综述 间充质干细胞的基本特性与疾病治疗的应用 |
| 参考文献 |
| 作者简历及在读期间取得的科研成果 |
（4）胀果甘草多糖对树突状细胞表型和功能的影响及作用机制的初步研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略词对照表 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 研究内容 |
| 1 小鼠骨髓源树突状细胞的体外诱导、培养和鉴定 |
| 1.1 实验材料与仪器 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 实验结果 |
| 1.4 讨论 |
| 2 胀果甘草多糖GiP-B1和GiP对树突状细胞表型和功能的影响 |
| 2.1 实验材料与仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.4 讨论 |
| 3 胀果甘草多糖GiP-B1和GiP对树突状细胞作用机制的初步研究 |
| 3.1 实验材料与仪器 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.4 讨论 |
| 小结 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 |
| 导师评阅表 |
（5）基于miRNA的间充质干细胞干性维持机制及应用研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英汉缩略词对照 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 间充质干细胞的生物学功能 |
| 1.2 间充质干细胞衰老 |
| 1.3 miRNA对干细胞衰老和自我更新的作用 |
| 1.4 间充质干细胞临床应用的问题和挑战 |
| 1.5 本文结构安排和研究意义 |
| 参考文献 |
| 第二章 脐带间充质干细胞衰老中的mi RNA表达谱研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 体外扩增脐带间充质干细胞的形态功能特征 |
| 2.3.2 体外扩增间充质干细胞的衰老情况分析 |
| 2.3.3 间充质干细胞衰老相关的mi RNA高通量测序分析 |
| 2.3.4 间充质干细胞衰老相关的mi RNA靶基因功能分析 |
| 2.3.5 参与衰老相关功能的miRNA分析 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 本章小结 |
| 参考文献 |
| 第三章 miR-18a对脐带间充质干细胞衰老的作用机制研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 miR-18a通过靶向CTDSPL对间充质干细胞衰老的影响 |
| 3.3.2 miR-18a持续表达对间充质干细胞衰老和自我更新的作用 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 本章小结 |
| 参考文献 |
| 第四章 脐血间充质干细胞的基因表达和功能特征研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 体外扩增脐血间充质干细胞的形态功能特征 |
| 4.3.2 miRNA对脐带与脐血间充质干细胞衰老的调控特征比较 |
| 4.3.3 miRNA对脐带与脐血间充质干细胞生物功能的作用比较 |
| 4.3.4 脐带与脐血间充质干细胞全基因组表达谱比较 |
| 4.3.5 脐带与脐血间充质干细胞旁分泌能力比较 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 本章小结 |
| 参考文献 |
| 第五章 脐血间充质干细胞分泌组分的抗衰老作用研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 材料与方法 |
| 5.3 结果 |
| 5.3.1 CBMSCs分泌组分对过氧化氢诱导的细胞衰老的影响 |
| 5.3.2 CBMSCs分泌组分对衰老小鼠免疫调节功能的影响 |
| 5.3.3 CBMSCs分泌组分对小鼠组织细胞衰老的影响 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 本章小结 |
| 参考文献 |
| 第六章 总结与展望 |
| 6.1 论文总结 |
| 6.2 论文创新点 |
| 6.3 论文不足 |
| 6.4 展望 |
| 博士期间研究成果 |
| 致谢 |
（6）造血细胞在癌性重编程中干性获得（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 全文主要缩略语中英文对照表 |
| 1 绪论 |
| 1.1 造血干细胞 |
| 1.1.1 造血干细胞的功能研究 |
| 1.1.2 造血干细胞的分子调控 |
| 1.2 肿瘤干细胞 |
| 1.2.1 肿瘤细胞同正常干细胞具有相似的调控机制 |
| 1.2.2 部分类型白血病可能起源于正常造血干细胞 |
| 1.2.3 白血病细胞中包含有白血病干细胞 |
| 1.3 IKZF1 的研究进展 |
| 1.3.1 Ikaros的结构特点 |
| 1.3.2 IKZF1 转录后修饰 |
| 1.3.3 Ikaros的细胞定位 |
| 1.3.4 Ikaros在干细胞领域的研究 |
| 1.3.5 IKZF1 基因改变与白血病 |
| 1.4 IK6 的研究进展 |
| 1.4.1 IK6 在正常造血系统中的研究 |
| 1.4.2 IK6 在疾病状态下的研究 |
| 1.5 课题组前期工作基础 |
| 1.5.1 HSCB程序可以很好地反映正常造血系统发育特点 |
| 1.5.2 ALL中细胞的免疫表型已经不能反映其发育阶段 |
| 1.5.3 ALL各细胞群体拥有同正常早期造血细胞更为相似的表达谱 |
| 1.5.4 课题组前期研究结果总结 |
| 1.6 科学问题及研究内容 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 人脐带血单个核细胞的分离、留样检测并冻存 |
| 2.3 人CB Lin-或CD34~+干祖细胞的富集及冻存 |
| 2.4 流式分选CB来源的细胞群体 |
| 2.5 细胞总RNA的抽提 |
| 2.6 cDNA的制备 |
| 2.7 CFC及重铺板实验 |
| 2.8 LTC-IC实验 |
| 2.9 蛋白质免疫印迹实验 |
| 2.10 质粒构建、转化及抽提 |
| 2.11 慢病毒包装、浓缩及滴度测定 |
| 2.12 慢病毒感染细胞并检测感染效率 |
| 2.13 NS122 小鼠的移植前准备 |
| 2.14 小鼠移植实验 |
| 2.15 移植小鼠八周后处死并收集BM |
| 2.16 生物信息学网络分析及可视化 |
| 3 结果 |
| 3.1 白血病细胞具有的干性可能是从干细胞保留而来 |
| 3.1.1 TEL-AML1 诱导形成前白血病干细胞(Pre-LSCs) |
| 3.1.2 TEL-AML1 的靶细胞为干细胞 |
| 3.1.3 作为TEL-AML1 靶细胞的干细胞必须具备自我更新能力 |
| 3.2 IKZF1 基因改变在正常B细胞中引发出白血病样程序 |
| 3.2.1 IKZF1 基因改变的白血病细胞其转录本中具有更强的干性特征 |
| 3.2.2 IK6 表达可以显着增加HSCs的干性潜能 |
| 3.2.3 IK6 表达使得由干细胞分化而来的B淋巴细胞具有了干性潜能 |
| 3.2.4 IK6 表达使得由干细胞分化而来的B淋巴细胞具有了白血病样程序 |
| 3.2.5 IK6 通过激活信号转导通路推动淋巴细胞重编程 |
| 4 结论与讨论 |
| 4.1 结论 |
| 4.2 讨论 |
| 主要参考文献 |
| 致谢 |
| 学术论文和科研成果目录 |
（7）云芝糖肽跨肠上皮转运及后继对树突状细胞的激活作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 前言 |
| 1.1 云芝糖肽 |
| 1.1.1 云芝糖肽的理化性质 |
| 1.1.2 镇定作用 |
| 1.1.3 抗炎作用 |
| 1.1.4 云芝糖肽的免疫调节作用 |
| 1.1.5 云芝糖肽对肿瘤干细胞的作用 |
| 1.1.6 云芝糖肽的益生元作用 |
| 1.2 M细胞 |
| 1.2.1 M细胞形态特征 |
| 1.2.2 M细胞的作用 |
| 1.2.3 肠上皮和M细胞模型的研究现状 |
| 1.2.4 M细胞与肠道免疫 |
| 1.3 树突状细胞 |
| 1.3.1 树突状细胞的生物学特征及功能 |
| 1.3.2 树突状细胞的体外培养 |
| 1.3.3 肠道树突状细胞 |
| 1.3.4 树突状细胞与肿瘤免疫 |
| 1.4 本课题立题依据 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 材料、试剂与仪器 |
| 2.1.1 材料 |
| 2.1.2 试剂 |
| 2.1.3 主要仪器 |
| 2.2 异硫氰酸荧光素(FITC)标记PSP |
| 2.2.1 FITC(异硫氰酸荧光素)标记 |
| 2.2.2 标记度(Degree)的测定 |
| 2.2.3 细胞培养、复苏与冻存 |
| 2.2.4 PSP-FITC对细胞毒性测定 |
| 2.2.5 PSP-FITC 在细胞中的示踪观察 |
| 2.3 PSP在肠上皮模型和M细胞模型中转运情况 |
| 2.3.1 细胞培养 |
| 2.3.2 肠上皮细胞模型建立 |
| 2.3.3 M细胞模型建立 |
| 2.3.4 SEM观察肠上皮和M细胞模型形态 |
| 2.3.5 PSP跨膜转运情况 |
| 2.3.6 PSP在肠上皮和M细胞内的荧光观察 |
| 2.4 小鼠小肠离体灌注实验 |
| 2.4.1 小鼠预处理 |
| 2.4.2 灌注实验步骤 |
| 2.4.3 荧光观察 |
| 2.4.4 HPLC检测 |
| 2.5 PSP 刺激树突状细胞成熟的研究 |
| 2.5.1 小鼠树突状细胞的制备、培养 |
| 2.5.2 树突状细胞形态观察 |
| 2.5.3 FACS流式检测PSP对树突状细胞的激活作用 |
| 2.5.4 ELISA 检测树突状细胞产生的细胞因子 IL-12 、TNF-α |
| 2.6 转运后的PSP对树突状细胞的刺激作用 |
| 2.6.1 ELISA检测PSP刺激肠上皮和M细胞产生的TNF-α |
| 2.6.2 ELISA检测PSP对肠上皮和M细胞的刺激产生IL-8 的作用 |
| 2.6.3 FACS流式检测被转运后PSP对树突状细胞的激活作用 |
| 第三章 结果与讨论 |
| 3.1 异硫氰酸荧光素(FITC)标记PSP |
| 3.1.1 PSP-FITC合成 |
| 3.1.2 FITC 标记后的 PSP 荧光光谱表征 |
| 3.1.3 PSP-FITC标记度测定结果 |
| 3.1.4 PSP-FITC在细胞中的示踪结果 |
| 3.1.5 PSP-FITC对 Caco-2 细胞的毒性结果 |
| 3.2 肠上皮层和M细胞对PSP的转运情况 |
| 3.2.1 SEM观察肠上皮和M细胞形态结果 |
| 3.2.2 肠上皮/M 细胞模型中 PSP-FITC 的跨层转运比较 |
| 3.2.3 小鼠小肠灌注实验结果 |
| 3.3 HPLC检测 |
| 3.4 PSP对树突状细胞的诱导成熟和激活作用 |
| 3.4.1 树突状细胞的分离和诱导 |
| 3.4.2 FACS流式检测树突状细胞成熟 |
| 3.4.3 ELISA检测树突状细胞分泌TNF-a和 IL-12 |
| 3.5 转运后的PSP对树突状细胞的刺激活性分析 |
| 3.5.1 流式细胞分析转运后的 PSP 对 DC 表面特征分子的调控 |
| 3.5.2 PSP诱导肠上皮层和M细胞产生TNF-a和IL-8 的水平 |
| 第四章 总结与讨论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（8）STAT3-siRNA-前胸腺素α共负载热敏性纳米胶束对肿瘤相关树突状细胞免疫功能调控的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第一章 文献综述 |
| 1 树突状细胞（DCS） |
| 2 肿瘤相关树突状细胞（TADCS） |
| 3 TLR激动剂与ProTα |
| 4 SIRNA干扰技术 |
| 5 温度敏感性载体 |
| 6 本研究的意义和目的 |
| 第二章 壳聚糖接枝泊洛沙姆载体的合成及结构表征 |
| 1 实验材料与仪器 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 壳聚糖的预处理 |
| 2.2 泊洛沙姆的羧基化 |
| 2.3 泊洛沙姆接枝壳聚糖的合成 |
| 2.4 ProTα-PO-CS的合成 |
| 2.5 芘荧光探针法测量PO-CS载体的临界胶束浓度（CMC） |
| 2.6 ProTα 接枝率的测定 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 PO-CS的结构表征 |
| 3.2 PO-CS聚合物的临界胶束浓度（CMC） |
| 3.3 ProTα 的接枝率 |
| 4 本章小结 |
| 第三章 ProTα-PO-CS胶束的制备及评价 |
| 1 实验材料与仪器 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 FAM-siRNA标准曲线的绘制 |
| 2.2 ProTα-PO-CS胶束包封率的考察 |
| 2.3 ProTα-PO-CS胶束的制备及粒径、电位考察 |
| 2.4 胶束的形态考察 |
| 2.5 ProTα-PO-CS胶束温度敏感性的考察 |
| 2.6 胶束温度敏感性来源考察 |
| 2.7 ProTα-PO-CS胶束包载siRNA后的表征 |
| 2.8 包载siRNA胶束的释放考察 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 ProTα-PO-CS胶束的粒径、电位及形态表征 |
| 3.2 温度对ProTα-PO-CS胶束粒径的影响 |
| 3.3 PO-CS胶束温度敏感性来源 |
| 3.4 ProTα-PO-CS胶束对siRNA保护作用的评价 |
| 3.5 包载siRNA胶束的释放情况 |
| 4 本章小结 |
| 第四章 ProTα-PO-CS纳米胶束体外细胞学评价 |
| 1 实验材料与仪器 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 收集肿瘤微环境溶液 |
| 2.2 小鼠骨髓树突状细胞（DC）的提取方法 |
| 2.3 DCs和TADCs成熟表型的测定 |
| 2.4 ProTα-PO-CS胶束对树突状细胞和脾脏细胞的安全性考察 |
| 2.5 ProTα-PO-CS胶束在肿瘤相关树突状细胞中的摄取情况 |
| 2.6 ProTα-PO-CS胶束在细胞中的分布情况 |
| 2.7 沉默STAT3蛋白siRNA序列的筛选 |
| 2.8 负载STAT3-siRNA的ProTα-PO-CS纳米胶束沉默效率考察 |
| 2.9 负载STAT3-siRNA胶束对肿瘤相关树突状细胞CD40，CD86及IL-12 表达水平的影响 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 小鼠骨髓来源树突状细胞的体外诱导培养 |
| 3.2 ProTα-PO-CS胶束的安全性评价 |
| 3.3 ProTα-PO-CS胶束在树突状细胞和巨噬细胞中的摄取 |
| 3.4 ProTα-PO-CS胶束在树突状细胞中的分布及温度敏感性考察 |
| 3.5 高沉默STAT3-siRNA序列的筛选 |
| 3.6 负载STAT3-siRNA的ProTα-PO-CS胶束对TADCs中STAT3和p-STAT3蛋白表达的影响 |
| 3.7 负载STAT3-siRNA的ProTα-PO-CS胶束对TADCs功能恢复的考察 |
| 4 本章小结 |
| 第五章 ProTα-PO-CS温敏性纳米胶束体内组织分布 及药效学评价 |
| 1 实验材料与仪器 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 不同冷刺激时间对小鼠给药部位温度的影响 |
| 2.2 负载Cy5-siRNA纳米胶束体内动态考察 |
| 2.3 免疫抑制肿瘤生长药效学评价 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 冷刺激时间对小鼠给药部位温度的影响 |
| 3.2 负载Cy5-siRNA的ProTα-PO-CS温度敏感性胶束的体内动态情况 |
| 3.3 负载STAT3-siRNA的ProTα-PO-CS胶束的免疫抗肿瘤效果 |
| 4 本章小结 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 本文所用到中英文缩写对照 |
| 致谢 |
（9）沉默SOCS1及负载MAGE-A3抗原的脐血树突状细胞杀伤肾癌细胞的研究（论文提纲范文）
| 1材料与方法 |
| 1.1主要试剂与仪器 |
| 1.2DCs的体外培养 |
| 1.3SOCS1-SiRNA载体构建及病毒产生 |
| 1.4慢病毒感染树突状细胞 |
| 1.5Westernblot检测SOCS1的表达 |
| 1.6MAGE-3处理DC |
| 1.7DC分子表型检测 |
| 1.8DC诱导的CTL的杀伤效应 |
| 1.9统计学分析 |
| 2结果 |
| 2.1Westernblot实验评估基因沉默效果 |
| 2.2流式细胞术检测诱导培养的脐血DCs的表面标志 |
| 2.3T细胞杀伤靶细胞的活性 |
| 3讨论 |
（10）树突状细胞的研究进展（论文提纲范文）
| 1 DC的体内分布及来源 |
| 2 DC在免疫应答中的作用 |
| 2.1 未成熟DC与成熟DC |
| 2.2 DC对内源性抗原的加工提呈途径———MHCⅠ类途径 |
| 2.3 DC对外源性抗原的加工提呈途径———MHCⅡ类途径 |
| 2.4 DC与T细胞之间的相互作用 |
| 3 DC激活CTL特异性杀伤肿瘤细胞 |
| 4 不同细胞因子对DC体外培养的作用 |
| 4.1 粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 (GM-CSF) |
| 4.2 肿瘤坏死因子-α |
| 4.3 白细胞介素-4 (IL-4) |
| 4.4 干细胞因子 (SCF) 和氨酸激酶3配体 (Flt3L) |
| 5 DC的体外培养方案 |
| 5.1 GM-CSF联合TNF-α |
| 5.2 GM-CSF联合IL-4 |
| 5.3 人脐血来源的树突状细胞的培养 |
| 5.4 肿瘤疫苗的制备 |
| 6 DC研究的最新进展 |
| 6.1 基因修饰诱导DC的相关因子 |
| 6.2 DC制备肿瘤疫苗在抗肿瘤方面的应用 |
| 6.3 体外诱导DC相关因子的安全性研究 |
| 7 结语 |
四、人脐血来源的树突状细胞的体外培养扩增（论文参考文献）
- [1]雌孕激素在妊娠期造血活动中作用的初步探讨[D]. 姚静欣. 广州医科大学, 2021
- [2]脐血移植植入前综合征的发病机制及干预策略研究[D]. 金林林. 中国科学技术大学, 2020(09)
- [3]人经血干细胞携带溶瘤腺病毒用于结直肠癌的治疗研究[D]. 郭洋. 浙江大学, 2019(01)
- [4]胀果甘草多糖对树突状细胞表型和功能的影响及作用机制的初步研究[D]. 陈橙. 新疆医科大学, 2019(08)
- [5]基于miRNA的间充质干细胞干性维持机制及应用研究[D]. 孟宪会. 东南大学, 2018(03)
- [6]造血细胞在癌性重编程中干性获得[D]. 李真. 上海交通大学, 2018
- [7]云芝糖肽跨肠上皮转运及后继对树突状细胞的激活作用研究[D]. 陈偲. 上海师范大学, 2017(06)
- [8]STAT3-siRNA-前胸腺素α共负载热敏性纳米胶束对肿瘤相关树突状细胞免疫功能调控的影响[D]. 欧文全. 苏州大学, 2016(02)
- [9]沉默SOCS1及负载MAGE-A3抗原的脐血树突状细胞杀伤肾癌细胞的研究[J]. 柴枫,王伟,方勇,鲁广,万宇,张菡,林科佳,徐公林. 长江大学学报(自科版), 2015(06)
- [10]树突状细胞的研究进展[J]. 张融玮,赵振林. 临床医药实践, 2014(10)