一、外源性神经节甘脂对缺氧缺血性脑损伤新生鼠学习记忆的增强作用（论文文献综述）
闵颖俊[1]（2021）在《新生儿缺氧缺血性脑损伤后脑内髓系细胞吞噬—炎症失衡参与突触损伤的机制研究》文中研究指明[目的]缺氧缺血性脑损伤（HIBD）是新生儿致死致残的首要原因,30%的幸存患儿会遗留神经系统后遗症,但发病机制不清。突触是信息传递的核心,突触损伤为HIBD患儿行为异常的关键机制。髓系细胞是指由髓系前阶段幼稚细胞分化的所有髓细胞,在广义上包括粒系细胞、红系细胞、巨核系细胞以及单核系细胞,在脑内主要为小胶质细胞（MGs）及外周入侵的单核细胞（MDMs）。由髓系细胞活跃带来的神经炎症是HIBD发生的核心机制之一。吞噬和炎症是髓系细胞（MGs及MDMs）的主要功能,并籍此调控突触可塑性。生理情况下,发育脑内吞噬与炎症维持在一定的水平,“吞噬-炎症”平衡将帮助形成稳定的神经环路。病理情况下,“吞噬”和/或“炎症”功能失去原有稳态,出现激活或抑制,不再保有平衡状态,此为“吞噬-炎症”失衡。除了吞噬和炎症功能,目前的研究认为MGs和MDMs作为脑内最重要的免疫细胞,生理情况下可通过吞噬及炎症功能参与调控突触修剪,从而参与神经环路形成;病理情况下,它启动脑内炎症反应,还可通过吞噬作用对微环境稳态的损伤及修复发挥作用。HIBD后脑内“吞噬-炎症”出现失衡,它在HIBD所致突触损伤中的发病机制,及其分子机理尤其是可能的调控还有待进一步研究。我室的前期研究证实,HIBD后除MGs活化外,MDMs亦入侵脑实质,MGs炎症及吞噬功能活跃,但二者与突触损伤修复的关系尚不清楚。据此本课题拟从髓系细胞（MGs及MDMs）在HIBD所致“吞噬-炎症”失衡的角度入手,重点研究它们在突触损伤、修复中的作用,试揭示HIBD后两种髓系细胞“吞噬-炎症”失衡在HIBD后突触损伤中的作用机制及其可能的调控。[方法]1.采用CX3CR1GFP/+CCR2RFP/+双转基因小鼠及C57BL/6J小鼠通过改良的Rice-Vannucci法建立新生鼠HIBD模型,以进一步确认两种不同髓系细胞的功能。随机将动物分为假手术组（Sham）及缺氧缺血组（HI）,其中缺氧缺血组依据前期研究又进一步分为缺氧缺血轻度损伤组（HIM）、缺氧缺血重度损伤组（HIS）。2.行为学实验明确HIBD后6 w小鼠的行为学改变。3.TTC染色确认HIBD后3 d小鼠脑梗死范围。4.HE染色揭示HIBD后3 d及6 w小鼠的脑组织形态学改变。5.尼氏染色评估HIBD后3d及6 w的小鼠脑神经元损伤。6.Tunel染色评估HIBD后3 d的小鼠脑细胞的凋亡。7.FJB染色评估HIBD后1 d及3 d脑组织神经元的损伤。8.Western Blotting 检测 HIBD 后 3 d 突触相关蛋白（PSD95 及 SYP）、TREM2 的表达,以及OGD前后MGs细胞系BV2突触后膜蛋白表达的改变。9.免疫荧光技术检测HIBD后3 d脑内两种髓系细胞在脑皮层及海马的活跃情况,及其与突触相关蛋白间的关系。10.免疫荧光技术检测HIBD后3 d脑内CD11b+细胞LAMP1、PSD95的表达。11.利用两种髓系细胞系（MGs细胞系-BV2,单核巨噬细胞系-Raw264.7）进行吞噬刺激实验,检测两种髓系细胞在糖氧剥夺（OGD）前后吞噬能力的变化。12.磁珠分选结合的流式细胞学实验检测HIBD后3 d脑内两种髓系细胞TREM2及CD200R的表达。13.免疫荧光技术检测HIBD后3 d脑内两种髓系细胞TREM2及其衔接子DAP12和促炎因子IL-1β、IL-6的表达。14.免疫荧光技术检测炎症因子（IL-1β、IL-6）刺激后,原代MGs分泌PSD95蛋白的情况。[结果]1.验证HIBD后脑损伤情况（1）HIBD后行为学改变a.旷场实验结果证实HIBD后6 w各组小鼠的运动功能未受到明显损害,但HIM组小鼠在旷场实验检测的10-15 min时间段以及20-25 min时间段内,其在中间区域停留时间较Sham组小鼠增加。b.黑白箱实验结果证实HIBD后6 w,HIM及HIS组小鼠在黑箱与白箱之间的穿梭次数减少。（2）HIBD后脑组织病理学异常a.HIBD后3 d,HIS组小鼠脑组织出现明显梗死灶,Sham组及HIM组均未见到明显梗死灶。b.HIBD后3d,HIS组小鼠脑皮层及海马区域质地疏松、染色变浅、可见噬元现象,可见局灶性巨噬细胞、MGs和少量中性粒细胞浸润,部分细胞出现典型坏死,HIM组小鼠脑组织形态学未见明显改变;HIBD后6w,HIS组海马CAI、CA2、CA3区均可见组织结构破坏、细胞数量减少、神经元丢失;HIM组小鼠海马CAI区域细胞变少,部分神经元丢失。（3）HIBD后神经元受损a.HIBD后3d,HIS组小鼠脑皮层及海马区域尼氏小体数量减少、染色变浅;HIM组小鼠脑内尼氏小体数量及颜色深浅未见明显改变;HIBD后6 w,HIS组小鼠海马CAI、CA2、CA3区均可见尼氏小体数量减少、染色变浅;HIM组小鼠脑组织海马CAI区域尼氏小体数量减少,染色变浅。b.HIBD后3d,HIS组小鼠脑皮层及海马CA1、CA2、CA3区域出现大量凋亡细胞,且以皮层及CA2区域最为严重,海马齿状回未见凋亡细胞。c.HIBD后1 d及3 d小鼠脑皮层及海马CA2区域有大量急性坏死的神经元。2.验证HIBD后突触受损情况（1）突触的丢失及清除:HIBD后突触丢失增多,MGs为吞噬突触的髓系细胞a.HIBD后3 d,HIS组皮层及海马部位神经元标记物-NeuN的表达下降,突触素蛋白SYP的表达未见明显变化,突触后膜蛋白PSD95表达增高。b.HIBD后3 d,HIS组皮层及海马CA2区域梗死灶中心及边缘区域突触后膜蛋白PSD95表达增高并与MGs共定位;HIM组皮层及海马CA2区域突触后膜蛋白PSD95的表达未见明显变化。c.HIBD后3 d,HIS组皮层及海马CA2区域突触素蛋白SYP的表达在梗死灶中心区域出现下降,在梗死灶的边缘区域均出现增高,且主要与MGs共定位;HIM组皮层及海马CA2区域突触素蛋白SYP的表达出现增加。（2）MGs表达突触蛋白a.HIBD后3 d,Sham及HIM组PSD95散在分布在MGs周围,未观察到脑实质内存在MDMs,MGs胞体较小,突起较长,分支较多,分支及胞体内部分可见PSD95。HIS组皮层及海马PSD95表达增多,MGs胞体变圆,突起缩短,胞体内存在有大量PSD95,部分可沿着胞膜分布,MDMs主要存在于梗死的中心区域,但不与PSD95接触。b.HIBD后3d,Sham及HIM组SYP呈现厚厚一层,铺在MGs胞体一端,未观察到脑实质内存在MDMs,MGs胞体较小,突起较长,分支较多,分支及胞体内部分可见SYP。HIS组皮层及海马SYP依旧是厚厚一层,但并不是铺在MGs胞体一端,而是横贯铺在MGs胞体中间,MGs胞体变圆,突起缩短,部分细胞的突起几乎不可见,胞体内存在有少量突触素蛋白SYP,MDMs主要存在于梗死灶的中心区域,但几乎不与突触素蛋白SYP接触。c.HIBD后3 d,HIS组皮层及海马区域,CD11b+细胞内部分突触后膜蛋白PSD95与溶酶体蛋白1 LAMP 1共定位,部分未与LAMP 1共定位。d.OGD后0 h,MGs细胞系PSD95的表达明显增加,OGD后24 h恢复到OGD前水平。e.OGD后0h,原代MGs其PSD95的表达出现增多,仅炎症因子IL-6刺激后,在正常培养条件下,MGs分泌PSD95较未加炎症因子刺激组出现增多,OGD后MGs分泌PSD95蛋白的水平进一步增高,均高于炎症刺激后的正常培养组。3.HIBD后脑内“吞噬-炎症”失衡（1）HIBD后吞噬活跃,MGs主要执行吞噬突触的功能a.HIBD后3d,HIS组皮层及海马部位TREM2表达增加。b.HIBD后3 d,HIS组皮层及海马实质均可见到外周血单核细胞（MDMs）浸润。c.正常培养条件及糖氧剥夺（OGD）后,小鼠MGs细胞系-BV2的吞噬能力始终强于单核巨噬细胞系-Raw264.7;OGD后BV2细胞始终保持很强的吞噬能力,但Raw264.7细胞系的吞噬能力下降。（2）HIBD后炎症反应活跃,MGs与MDMs均表达炎症介质,但仅MDMs表达 IL-6a.HIBD后3 d,HIS组皮层梗死灶边缘区MGs与MDMs促炎因子IL-1β水平增高;HIM组皮层IL-1β水平未见明显变化;HIS组海马CA2区梗死灶边缘及中心区MGs与MDMs促炎因子IL-1β水平增高;HIM组海马MGs与MDMs促炎因子IL-1β水平下降。b.HIBD后3 d,HIS组皮层及海马CA2区域梗死灶中心区MDMs促炎因子IL-6水平增高,梗死灶边缘区MDMs促炎因子IL-6水平出现下降;HIM组皮层MDMs促炎因子IL-6水平未见明显变化,但HIM组海马MDMs促炎因子IL-6水平出现下降。各组别未见MGs表达IL-6。4.HIBD后脑内“吞噬-炎症”失衡可能的调控机制a.HIBD后3 d,HIS组脑皮层内MGs表达TREM2及CD200R均增加,但MDMs上二者的表达未见明显变化;HIM组中仅MDMs表达CD200R出现增加。b.HIBD后3 d,HIS组皮层及海马CA2区域梗死灶中心及边缘区MGs表达TREM2增高;HIM组皮层及海马CA2区域MGs表达TREM2未见明显变化;各组别MDMs未见TREM2表达。HIS组皮层及海马CA2区梗死灶中心及边缘区的MGs、MDMs表达TREM2衔接子DAP12增高;HIM组皮层及海马CA2区MGs、MDMs表达TREM2衔接子DAP 12未见明显变化。c.HIBD后3 d,HIS组皮层及海马CA2区梗死灶中心区PSD95、TREM2、DAP12表达出现增加,放大到600X后,可见有部分细胞可以共表达TREM2、PSD95以及DAP12,但具体细胞类型还有待进一步研究。[结论]1.HIBD后脑内神经元及突触受损,MGs为脑内执行突触吞噬的髓系细胞,可表达吞噬蛋白TREM2,TREM2可能参与调控HIBD后MGs及MDMs吞噬活动。2.MG可吞噬及分泌突触后膜蛋白PSD95,炎症因子（IL-6及IL-1β）均可刺激MGs 表达 PSD95。3.MGs与MDMs均可释放炎症因子IL-1β,但MDMs的炎症反应更强烈并主要表达IL-6,且其释放的IL-6对MGs的吞噬功能可能具有调控作用,CD200R参与调控MGs及MDMs炎症释放。
曲乐[2]（2020）在《针刺本神穴抑制宫内窘迫HIBD大鼠海马炎症反应研究》文中提出目的:探讨针刺对缺氧缺血性脑损伤（hypoxic-ischemic brain damage,以下简称HIBD）模型大鼠行为学的影响;探讨核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（NLRP3）炎性小体介导的海马炎症反应和小胶质细胞在HIBD中的作用,评价针刺对HIBD大鼠海马炎症反应和小胶质细胞的影响,初步研究针刺对缺氧缺血损伤后脑组织神经保护作用和改善社交障碍的机制。方法:采用宫内窘迫造模法制作HIBD模型,于离乳后针刺双侧本神穴,每日一次,连续干预14天。本实验主要包括:通过行为学实验如蔗糖偏好率、旷场实验、三箱社交实验、Morris水迷宫实验以评价针刺对HIBD大鼠行为学的影响,采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）法检测大鼠血清白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-1β（IL-18）含量,应用蛋白免疫印迹实验（Western Blot）技术检测大鼠海马组织NLRP3、凋亡相关斑点蛋白（ASC）、天冬氨酸蛋白水解酶-1（Caspase-1）蛋白相对表达量,采用免疫荧光法检测大鼠海马组织小胶质细胞阳性标记物离子钙结合蛋-1（IBA-1）表达,应用苏木精-伊红染色法（HE染色）观察各组大鼠脑组织海马区病理结构变化。结果:（1）与正常组相比,模型组大鼠探索陌生鼠时间（%）明显减少（P<0.01）,HIBD大鼠存在一定程度的社交障碍,与模型组大鼠相比,针刺组大鼠探索陌生鼠时间（%）明显增加（P<0.01）,与假针刺组相比,针刺组大鼠探索陌生鼠时间（%）显着增多（P<0.001）,提示针刺可以改善HIBD大鼠的社交障碍。（2）与正常组相比,模型组大鼠血清IL-1β、IL-18的含量显着增多（P<0.01,P<0.05）;与模型组相比,针刺组大鼠血清IL-1β、IL-18的含量降低（P<0.01,P<0.05）。与正常组相比,模型组大鼠海马组织的NLRP3、ASC、Caspase-1表达升高（P<0.05,P<0.05,P<0.01）;与模型组相比较,针刺组大鼠海马组织的NLRP3、ASC、Caspase-1表达降低（P<0.01,P<0.01,P<0.01）。与正常组比较,模型组大鼠海马组织CA1、CA3区IBA-1免疫荧光染色积分光密度值升高（P<0.001,P<0.01）;与模型组比较,针刺组大鼠海马组织CA1、CA3区IBA-1免疫荧光染色积分光密度值降低（P<0.01,P<0.01）。（3）正常组大鼠海马CA1、CA3区脑组织神经元细胞排列整齐、层次清晰,细胞圆润饱满且轮廓清楚;模型组大鼠脑组织神经元受损,表现为神经元细胞排列松散、固化萎缩,胞质与核仁分界模糊,整个细胞着色深染;针刺组大鼠海马CA1、CA3区脑组织神经元细胞结构较模型组有所改善,虽然细胞排列不如正常组整齐致密,但细胞边界较光滑,核仁较清晰,出现细胞固化、萎缩、深染的情况较少。结论:1.本研究发现HIBD大鼠存在一定程度的社交障碍,针刺可改善HIBD大鼠的社交障碍;2.针刺能够减轻HIBD大鼠脑部海马组织炎症反应,降低血清中炎症细胞因子含量以及减少小胶质细胞激活,从而促进缺氧缺血损伤后脑组织神经保护作用。
农雪娟[3]（2020）在《灵芝三萜联合外源性GM1对戊四氮致大鼠癫痫模型记忆受损的干预及其分子机制研究》文中认为目的:初步探讨灵芝三萜联合外源性单唾液酸四己糖神经节苷脂（monosialotetrahexosylganglioside,GM1）对戊四氮（pentylenetetrazol,PTZ）致痫大鼠学习记忆能力的影响,以及在海马突触结构和功能可塑性重建中的干预作用机制。方法:（1）选取健康雄性成年SD大鼠50只,随机分为空白对照组、癫痫模型组、灵芝三萜组、GM1组、灵芝三萜联合GM1组,每组10只。除空白对照组外其余各组用PTZ亚惊厥剂量（35mg/kg）腹腔注射,每日1次,持续28天,复制慢性癫痫模型;用药各组在每日腹腔注射PTZ的同时进行相应给药。给药28天后进行Morris水迷宫实验,结束后取材。（2）应用HE染色观察癫痫大鼠海马CA1区神经元病理变化;透射电镜观察癫痫大鼠海马CA1区神经元的超微结构。（3）采用免疫组化染色法观察大鼠海马CA1区肌动蛋白结合蛋白（actin-binding protein,Cofilin）及其磷酸化p-Cofilin和突触素（synaptophysin,SYN）、神经生长相关蛋白-43（neuronal growth associated protein43,GAP-43）的表达。（4）Western blot检测大鼠海马Cofilin、p-Cofilin、SYN、GAP-43的蛋白表达;Real-time PCR检测相关基因m RNA表达水平。结果:（1）与癫痫模型组比较,联合用药组大鼠癫痫发作持续时间缩短（P<0.05）,发作潜伏期延长（P<0.05）。与灵芝三萜组、GM1组比较,联合用药组发作持续时间有所缩短,发作潜伏期有所延长。（2）Morris水迷宫结果显示:各组大鼠逃避潜伏期随实验训练时间有不断缩短的趋势。与空白对照组比较,各时间点癫痫模型组的逃避潜伏期延长（P<0.05）,在目标象限停留的时间明显缩短（P<0.01）,穿越平台的次数明显减少（P<0.01）;与癫痫模型组比较,各用药组逃避潜伏期均缩短,部分时间点有显着性差异（P<0.05）,在目标象限停留的时间明显延长（P<0.01）,穿越平台次数均明显增多（P<0.01）。联合用药组第1天逃避潜伏期比灵芝三萜组明显缩短（P<0.05）,其他天相对灵芝三萜组、GM1组逃避潜伏期有所缩短,在目标象限停留的时间有所延长,穿越平台次数均有所增多。（3）HE染色结果显示:癫痫模型组海马神经元细胞较少,排列疏松、紊乱,部分胞体肿胀变形,胞核溶解碎裂,呈空泡状。各用药组海马神经元细胞较模型组有所改善,神经元细胞数量增多,细胞形态趋于正常,排列比较整齐,间隙明显缩小,胞核碎裂固缩减少。（4）透射电镜结果显示:癫痫模型组神经元细胞形状不规则,皱缩,线粒体等细胞器数量较少,线粒体嵴断裂,部分嵴消失,突触数量减少,突触小泡数量变少,突触前后膜结构不清楚;各用药组神经元细胞核形状较规则,线粒体等细胞器数量增加,结构有所改善,突触数量增加,突触结构较完整,突触小泡数量增多,突触前后膜间隙较清楚。（5）免疫组化结果显示:与空白对照组比较,癫痫模型组的Cofilin蛋白表达升高（P<0.01）,p-Cofilin、SYN、GAP-43表达下降（P<0.05）;与癫痫模型组比较,各用药组Cofilin表达降低（P<0.05）,GAP-43表达升高（P<0.05）;灵芝三萜组和联合用药组SYN表达升高（P<0.05）;联合用药组p-Cofilin表达升高（P<0.05）。与GM1组和灵芝三萜组比较,联合用药组p-Cofilin表达升高（P<0.05）。（6）海马组织蛋白表达:与空白对照组比较,癫痫模型组大鼠海马组织内的Cofilin蛋白表达量升高（P<0.05）,p-Cofilin、SYN和GAP-43的表达量明显减少（P<0.05）;与模型组比较,各用药组大鼠海马组织内Cofilin蛋白表达下降（P<0.05）,GAP-43蛋白的表达增加（P<0.05）,联合用药组p-Cofilin、SYN蛋白表达上升（P<0.05）。（7）海马组织基因m RNA表达:与空白对照组相比,癫痫模型组中Cofilin m RNA水平上调（P<0.05）,SYN m RNA和GAP-43 m RNA的表达水平降低（P<0.05）;与癫痫模型组比较,各用药组Cofilin m RNA表达下调（P<0.05）,SYN m RNA表达水平升高（P<0.05）,仅联合用药组GAP-43 m RNA表达水平升高（P<0.05）。结论:（1）癫痫后大鼠学习记忆能力损伤,可能与海马Cofilin、p-Cofilin、SYN、GAP-43蛋白及基因表达异常,出现突触丢失与重排,影响突触重塑等机制有关。（2）灵芝三萜、外源性GM1及灵芝三萜联合外源性GM1均可提高PTZ致痫大鼠认知与学习记忆能力,改善海马神经元的形态结构,尤其灵芝三萜联合外源性GM1可以更好地提高大鼠认知与学习记忆能力,改善海马神经元的形态结构,作用机制可能与其提高癫痫大鼠海马SYN、GAP-43、p-Cofilin蛋白及基因表达,下调Cofilin蛋白及基因表达,促进突触重建与神经生长,从而干预海马突触可塑性改变有关,以达到保护大脑神经元的作用。
牛瑞泽[4]（2020）在《灯盏花乙素对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤中的脑保护作用及其机制的初步研究》文中提出[目 的]探讨灯盏花乙素在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤中的治疗效果,并研究灯盏花乙素治疗新生大鼠HIE的潜在作用机制。[方 法]1.应用原代皮质神经元构建OGD模型体外模拟新生鼠缺氧缺血性脑损伤,结合RNA干扰技术,探讨灯盏花乙素对氧糖剥夺神经元的影响及其潜在作用机制。2.采用网络药理学和生物信息学预测灯盏花乙素和新生儿缺氧缺血性脑病的相关靶点,筛选灯盏花乙素治疗HIE的潜在作用通路及机制。3.采用经典Vannucci法构建新生鼠缺氧缺血性脑损伤模型筛选体内灯盏花乙素最佳药物浓度:60只SD大鼠随机分为假手术组（Sham）、HI+生理盐水组（HI+NS）、HI+灯盏花乙素高浓度组（HI+SCUhigh）、HI+灯盏花乙素中浓度组（HI+SCUmedium）和HI+灯盏花乙素低浓度组（HI+Sculow）,每组10只。采用TTC染色评价模型构建是否成功,以及药物对缺氧缺血造成的损伤的缓解作用;对各组动物进行Zea-longa、水迷宫、转棒、旷场和Y迷宫等行为学评价,应用QRT-PCR检测相关信号通路分子或基因的表达水平。4.构建GAP43基因敲除大鼠,采用经典Vannucci法构建新生鼠HIE模型,40只SD大鼠,随机分为假手术组（Sham）、GAP43 野生型+生理盐水组（GAP43+/++HI+NS）、GAP43 野生型+灯盏花乙素组（GAP43+/++HI+SCU）、GAP43基因敲除+灯盏花乙素组（GAP43-/-+HI+SCU）,结合TTC染色和Zea-longa、水迷宫、转棒、旷场、Y迷宫等行为学评价,应用QRT-PCR检测相关信号通路分子或基因的表达水平,进一步验证GAP43敲除后灯盏花乙素与差异表达基因的关系。[结果]一、体外实验:1.灯盏花乙素能够显着增加OGD神经元的数量和活力（P<0.05）。TUNEL染色结果显示,灯盏花乙素显着降低了 OGD细胞凋亡（P<0.05）。2.qRT-PCR检测结果显示,灯盏花乙素治疗后神经元中的GAP43表达升高（P<0.05）。3.GAP43干扰实验结果表明,GAP43干扰之后,灯盏花乙素促进细胞增殖和抑制细胞凋亡的现象被逆转,即与OGD+Scu+NC组相比,OGD+Scu+GAP43-si组的细胞凋亡增加（P<0.05）;4.免疫荧光染色显示,与OGD+Scu+NC组相比,OGD+Scu+GAP43-si组的Tuj阳性细胞数量减少（P<0.05）。5.QRT-PCR结果显示,GAP43干扰之后,神经元中的JAK2、STAT3和PTN表达均显着升高,差异有统计学意义（P<0.05）。二、灯盏花乙素靶蛋白预测:1.DRUGBANK、STITCH、SwissTargetPrediction、TCMSP 和 PUBCHEM 等数据库对灯盏花乙素潜在的作用靶点进行了预测。总共筛选到224个靶点,除去重复的共筛选到206个灯盏花乙素特有的靶点。。2.Genecard、Disgenet和OMIM等数据库查询了新生儿缺氧缺血性脑病的疾病靶点。总共筛选到1476个靶点,除去重复的共筛选到1161个HIE特有的靶点。3.GO分析和KEGG通路分析表明,80个靶点总共参与了 1721个GO条目。4.GeneMania分析表明JAK2、STAT3与GAP43和PTN之间存在相互作用关系。三、体内药物浓度筛选及GAP43 Knockout大鼠体内验证1.TTC染色结果显示:中浓度组（20mg/kg）灯盏花乙素能够显着降低大鼠脑梗死比例（P<0.001）。2.Zea-longa评分结果显示:灯盏花乙素显着改善了 HIE大鼠的神经功能缺损症状（P<0.05）;3.水迷宫和Y迷宫实验结果显示:灯盏花乙素显着改善了 HIE大鼠的空间学习和记忆能力（P<0.05）;4转棒实验结果显示:灯盏花乙素显着改善了 HIE大鼠的躯体运动功能（P<0.05）;5.旷场实验结果显示,灯盏花乙素改善了HIE大鼠暴露在新环境下的焦虑抑郁样行为（P<0.05）。6.GAP43 Knockout大鼠体内验证:TTC染色结果显示:与野生型大鼠相比,纯合子大鼠的脑梗死比例和脑水肿显着加重,差异有统计学意义（P<0.001）。Zea-longa评分显示:在术后第8天,GAP43+/++HI+Scu组恢复至正常,而GAP43+/++HI和GAP43-/-+HI+Scu组在第9天恢复至正常。水迷宫和Y迷宫结果显示:灯盏花乙素显着改善了 GAP43野生型大鼠的空间学习和记忆能力,差异均有统计学意义（P<0.05）。然而GAP43 KO大鼠的学习和记忆能力没有得到明显的改善。转棒结果显示:与GAP43+/++HI+Scu组相比,GAP43-/-+HI+Scu组大鼠在转棒上的最长停留时间显着降低（P<0.05）。旷场结果显示:与GAP43-/-+HI+Scu组相比,GAP43-/-+HI+Scu组大鼠的理毛次数、外周潜伏期和中心潜伏期显着升高,外周路程、总新路程和站立次数显着降低,差异有统计学意义（P<0.05）。QRT-PCR检测结果显示:GAP43+/++HI+Scu组大鼠皮质中的GAP43表达升高,PTN、JAK2、STAT3 表达降低（P<0.05）;此外,GAP43-/-+HI+Scu 组大鼠皮质中 JAK2、STAT3、PTN表达显着升高（P<0.05）。[结 论]1.灯盏花乙素能够显着改善HIE大鼠的学习记忆和运动功能。2.灯盏花乙素改善HIE大鼠的学习记忆和运动功能的作用与GAP43有关。3.灯盏花乙素治疗改善HIE大鼠的学习记忆和运动功能的作用与JAK2/STAT3/PTN/GAP43 信号通路有关。
唐清[5]（2019）在《基于EPO右归饮改善慢性肾衰小鼠学习记忆障碍的作用及机制研究》文中提出研究背景学习记忆障碍是慢性肾衰中末期患者常见并发症,严重影响患者生活质量。目前关于慢性肾衰学习记忆障碍的发生机制尚未被阐明。近年来研究表明,促红细胞生成素（EPO）除促进造血之外,还有诸多其他作用,对学习记忆的影响是其中一种。但EPO是否与慢性肾衰病人的学习记忆障碍相关目前尚未见报道。右归饮是阴阳双调、补肾益精的经典方剂,有研究报道右归饮对慢性肾衰具有一定的改善作用,但其作用机制不清,右归饮对慢性肾衰学习记忆障碍是否具有改善作用及作用机制尚未见报道。研究目的1.研究EPO与慢性肾衰小鼠学习记忆障碍是否相关;2.研究EPO对小鼠海马区学习记忆重要通路Ca2+/CaM/CaMKⅡα/CREB1是否具有调控作用;3.研究右归饮对慢性肾衰小鼠学习记忆障碍是否具有改善作用,以及其作用机制是否与上调EPO及其海马区学习记忆重要通路Ca2+/CaM/CaMKⅡα/CREB1相关。方法与结果1.EPO与慢性肾衰小鼠学习记忆障碍的相关性研究方法:（1）采用腺嘌呤复制慢性肾衰小鼠模型,以肌酐清除率（Ccr）低于7μL·min-1为慢性肾衰模型成功标准。（2）取模型成功的小鼠与正常对照小鼠进行新物体识别和Morris水迷宫试验,以试验指标显着低于正常小鼠判定慢性肾衰学习记忆损伤合格。（3）检测模型小鼠血清EPO含量及海马区EPO表达。（4）从造模第15天起,持续造模的同时给予模型小鼠腹腔注射rhEPO 5000 IU·kg-1或相同体积的生理盐水,隔天1次共22天。给药结束后,检测rhEPO给药组小鼠的体质以及学习记忆改善情况。结果:（1）腺嘌呤所致慢性肾衰模型成功率100%。与正常对照组相比,模型组小鼠体重、体温显着降低,肾脏外观及组织形态出现明显病变,血清肌酐（CREA）、尿素氮（BUN）显着升高,尿液CREA、BUN显着降低,Ccr显着降低,血清Ca、P、Mg显着升高（均p<0.05）。（2）腺嘌呤所致慢性肾衰小鼠学习记忆能力显着下降。与正常对照组相比,模型组小鼠探索新物体的时间显着变短;在水迷宫中逃避潜伏期显着变长,穿越原平台次数显着减少,在原平台所在象限停留时间/总时间显着降低,在原平台所在象限游程/总游程显着降低（均p<0.05）,小鼠海马区组织形态出现明显病变。（3）腺嘌呤所致慢性肾衰小鼠血清EPO与海马区EPO及其下游蛋白表达显着减少。与正常对照组相比,模型组小鼠血清EPO含量、海马区EPO及其下游蛋白EPOR、p-EPOR（Tyr485）、STAT5、p-STAT5（Tyr694）、AKT1、p-AKT1（Ser129）的表达均显着降低（均p<0.05）。（4）rhEPO对腺嘌呤所致慢性肾衰小鼠体质及其学习记忆障碍具有显着改善作用。与模型组小鼠相比,rhEPO组小鼠体重、体温显着升高,肾脏外观及组织形态均有不同程度的改善,血清CREA、BUN显着降低,尿液CREA、BUN显着升高,Ccr显着升高,血清Ca显着降低（均p<0.05）;并且探索新物体的时间显着变长,水迷宫中逃避潜伏期显着变短,穿越原平台次数显着增加,在原平台所在象限停留时间/总时间显着升高,在原平台所在象限游程/总游程显着升高（均p<0.05）,海马区组织形态明显改善。2.EPO对小鼠海马区学习记忆重要通路Ca2+/CaM/CaMKⅡα/CREB1的调控作用研究方法:（1）取复制成功的慢性肾衰小鼠以及rhEPO给药组小鼠,检测其海马区学习记忆第二信使Ca2+浓度以及学习记忆重要通路蛋白CaM、CaMKⅡα、p-CaMKⅡα（Thr286）、CREB1、p-CREB1（Ser133）的表达水平。（2）构建条件性EPO基因敲除小鼠,检测其海马区CaM、CaMKⅡα、p-CaMKⅡα（Thr286）、CREB1、p-CREB1（Ser133）的表达水平。（3）体外培养小鼠原代海马星形胶质细胞,分别检测EPO基因敲除以及rhEPO给药后细胞内Ca2+浓度以及CaM、CaMKⅡα、p-CaMKⅡα（Thr286）、CREB1、p-CREB1（Ser133）的表达水平。结果:（1）rhEPO显着上调腺嘌呤所致慢性肾衰小鼠海马区学习记忆重要通路Ca2+/CaM/CaMKⅡα/CREB1。与模型组小鼠相比,rhEPO组小鼠海马区细胞内Ca2+浓度显着升高,CaM、CaMKⅡα、p-CaMKⅡα（Thr286）、CREB1、p-CREB1（Ser133）的表达显着上调（均p<0.05）。（2）EPO基因敲除小鼠海马区CaM/CaMKⅡα/CREB1通路蛋白表达显着降低。与野生型对照小鼠相比,EPO基因敲除小鼠海马区CaM、CaMKⅡα、p-CaMKⅡα（Thr286）、CREB1、p-CREB1（Ser133）的表达水平显着降低（均p<0.05）。（3）EPO基因敲除星形胶质细胞Ca2+/CaM/CaMKⅡα/CREB1通路显着下调。与野生型对照组相比,EPO基因敲除组星形胶质细胞内Ca2+浓度显着降低,CaM、CaMKⅡα、p-CaMKⅡα（Thr286）、CREB1、p-CREB1（Ser133）的表达显着减少（均p<0.05）。（4）rhEPO显着逆转EPO敲除星形胶质细胞Ca2+/CaM/CaMKⅡα/CREB1通路的下调。与EPO基因敲除组相比,EPO基因敲除+rhEPO组星形胶质细胞内Ca2+浓度显着升高,CaM、CaMKⅡα、p-CaMKⅡα（Thr286）、CREB1、p-CREB1（Ser133）的表达水平显着升高（均p<0.05）。（5）rhEPO显着上调正常星形胶质细胞Ca2+/CaM/CaMKⅡα/CREB1通路。与空白对照组相比,rhEPO处理组星形胶质细胞内Ca2+浓度显着升高,CaM、CaMKⅡα、p-CaMKⅡα（Thr286）、CREB1、p-CREB1（Ser133）的表达显着上调（均p<0.05）。3.右归饮对腺嘌呤所致慢性肾衰小鼠体质及学习记忆障碍的改善作用及其与EPO的相关性研究方法:（1）采用高效液相色谱法检测右归饮水煎液中已知9种有效成分的含量,采用液质联用色谱法检测右归饮水煎液中已知毒性成分及其衍生物含量。（2）采用腺嘌呤复制慢性肾衰小鼠模型,并于造模第15天时将造模小鼠随机分成模型组、右归饮5 g·kg-1、10 g·kg-1、20 g·kg-1给药组,以体重、体温和Ccr确定组间无显着性差异后,持续造模的同时灌胃给予右归饮组小鼠相应剂量的右归饮水煎液并给予模型组相同体积的纯水,每天给药一次,共给药22天。另设一个正常对照组,每天饲喂普通饲料并给予相同体积的纯水。给药结束后,检测各组小鼠的体质,以Ccr低于7μL·min-1为慢性肾衰模型成功标准。（3）取各组小鼠进行新物体识别和Morris水迷宫试验,以试验指标显着低于正常组小鼠判定慢性肾衰学习记忆损伤合格,并观察右归饮对慢性肾衰小鼠学习记忆障碍的改善作用。（4）检测各组小鼠血清EPO含量、海马区EPO及其上下游蛋白的表达。（5）检测各组小鼠海马区细胞内Ca2+浓度以及CaM、CaMKⅡα、p-CaMKⅡα（Thr286）、CREB1、p-CREB1（Ser133）的表达。结果:（1）试验用右归饮水煎液主要成分含量测定结果。试验用右归饮水煎液中主要有效成分含量京尼平苷酸0.1046 mg·g-1,莫诺苷0.3487 mg·g-1,绿原酸0.1100 mg·g-1,栀子苷0.0850 mg·g-1,马钱苷0.1880 mg·g-1,松脂醇二葡萄糖苷0.1630 mg·g-1,甘草苷0.0610 mg·g-1,芦丁0.1600 mg·g-1,甘草酸0.0791 mg·g-1;与毒副作用相关成分含量乌头碱7.5μg·g-1,新乌头碱24.0μg·g-1,次乌头碱70.5μg·g-1,苯甲酰乌头原碱66.5μg·g-1,苯甲酰新乌头原碱473.5μg·g-1,苯甲酰次乌头原碱62.0μg·g-1,符合药典规定。（2）右归饮对腺嘌呤所致慢性肾衰小鼠的体质具有显着的改善作用。与模型组小鼠相比,右归饮5 g·kg-1、10 g·kg-1、20 g·kg-1组小鼠的体重、体温显着升高,血清CREA、BUN显着降低,Ccr显着升高,血清P、Mg显着降低;右归饮20 g·kg-1组小鼠尿液CREA显着升高;右归饮10g·kg-1、20 g·kg-1组小鼠尿液BUN显着升高（均p<0.05）,肾脏外观及组织形态明显改善。（3）右归饮对腺嘌呤所致慢性肾衰小鼠学习记忆障碍具有显着的改善作用。与模型组小鼠相比,右归饮5 g·kg-1、10 g·kg-1、20 g·kg-1组小鼠探索新物体的时间显着变长,在水迷宫中于原平台所在象限停留时间/总时间显着升高;右归饮10 g·kg-1、20 g·kg-1组小鼠在水迷宫中逃避潜伏期显着缩短,穿越原平台次数显着增多;右归饮20 g·kg-1组小鼠在水迷宫中于原平台所在象限游程/总游程显着升高（均p<0.05）;右归饮5 g·kg-1、10 g·kg-1、20 g·kg-1组小鼠海马区组织形态明显改善。（4）右归饮改善腺嘌呤所致慢性肾衰小鼠学习记忆障碍的作用与上调EPO密切相关。与模型组小鼠相比,右归饮10 g·kg-1和20 g·kg-1组小鼠血清EPO含量显着上升;海马区星形胶质细胞显着增多,HIF2α表达显着升高,EPO mRNA及蛋白水平显着升高,EPO下游蛋白EPOR、p-EPOR（Tyr485）、STAT5、p-STAT5（Tyr694）、p-AKT1（Ser129）的表达显着增多（均p<0.05）。（5）右归饮改善腺嘌呤所致慢性肾衰小鼠学习记忆障碍的作用与上调受EPO调控的海马区Ca2+/CaM/CaMKⅡα/CREB1通路密切相关。与模型组小鼠相比,右归饮5g·kg-1、10 g·kg-1、20 g·kg-1组小鼠海马区细胞内Ca2+浓度显着升高;右归饮10g·kg-1组小鼠海马区CaM表达显着上调;右归饮10 g·kg-1、20 g·kg-1组小鼠海马区CaMKⅡα表达显着增多;右归饮20 g·kg-1组小鼠海马区p-CaMKⅡα（Thr286）水平显着升高;右归饮5 g·kg-1、10 g·kg-1、20 g·kg-1组小鼠海马区CREB1、p-CREB1（Ser133）的表达水平显着上调（均p<0.05）。研究结论1.腺嘌呤所致慢性肾衰小鼠学习记忆障碍与海马区EPO的表达下调密切相关;2.EPO对海马区学习记忆重要信号通路Ca2+/CaM/CaMKⅡα/CREB1具有显着的调控作用;3.右归饮对腺嘌呤所致慢性肾衰小鼠体质及其学习记忆障碍均具有显着的改善作用;4.右归饮改善腺嘌呤所致慢性肾衰小鼠体质及学习记忆障碍的作用机制与升高血中和脑内EPO含量,进而上调海马区学习记忆重要通路Ca2+/CaM/CaMKⅡα/CREB1密切相关。
黄格朗[6]（2019）在《从CT灌注成像探讨灯盏细辛对缺血性卒中临床疗效及机制的研究》文中研究说明目的:通过CT灌注成像（computed tomography perfusion,CTP）评价灯盏细辛注射液在治疗缺血性卒中过程中侧支循环形成情况,及中药对患者康复功能、预后的影响;观察灯盏细辛注射液对血管内皮生长因子（vascular endothelial growthfactor,VEGF）、缺氧诱导因子-1 α（hypoxiainducible factor-1,HIF-1 α）、血管生成素1（Angiopoietin,Ang-1）、Ang-2、白介素-6（Interleukin-6,IL-6）、血浆同型半胱氨酸（Homocysteine,Hey）的调节作用,探讨灯盏细辛注射液治疗缺血性卒中的疗效与侧支循环形成之间的机制及对患者康复预后的影响。方法:本研究包括两部分内容:第一部分为文献研究,第二部分为临床研究。第一部分文献研究通过对知网、维普、万方数据库查询文献,总结近年来现代医学及中医学对缺血性卒中的认识,通过了解侧支循环的建立对缺血性卒中的临床意义及方法,并研究了缺血性卒中的康复预后情况,为临床治疗提供充分的理论依据;第二部分临床研究采用随机对照的方法,以缺血性卒中患者为研究对象,其中试验组38例,对照组35例,两组患者均予对症、支持治疗,试验组患者在此基础上静脉滴注灯盏细辛注射液,30ml/次,用250ml 0.99%氯化钠注射液稀释后使用,1次/d,连续治疗2周;对照组患者则用同规格250ml 0.99%氯化钠注射液静脉滴注,1次/d,连续治疗2周。两组患者在入院后48小时内及第30天,分别行CTP检测评估患者脑血管侧支循环灌注情况;分别于入院后1天、14天、30天空腹静脉采血,检测血清VEGF、HIF-1 α、Ang-1、Ang-2、IL-6、Hey 蛋白浓度;分别第 1 天、14 天、30 天使用美国国立卫生院卒中量表（national institutes of health stroke scale,NIHSS）、Barthel index（BI）、简易 Fugl-Meyer 评定（FMA）、通用 ICF 组合进行评分,评估患者的神经功能缺损程度、日常生活能力、运动功能、综合能力等康复指标。结果:1.血液检验指标结果:治疗第14天,试验组患者血清中VEGF、Ang-2的表达与治疗前比较明显增高,HIF-1 α、Ang-1、IL-6、Hey等反应因子表达降低,差异有统计学意义（P<0.05）;对照组患者血清中VEGF、Ang-2的表达增高,HIF-1 α、IL-6、Ang-1、Hey表达降低,其中Ang-2、HIF-1、IL-6、Ang-1、Hey表达的改变与治疗前对比差异有统计学意义（P<0.05）,但对照组VEGF表达与治疗前增高对比差异无统计学意义（P>0.05）。治疗第30天,试验组患者血清中VEGF、Ang-2表达的仍能维持升高与治疗前比较差异有统计学意义（P<0.05）,HIF-1 α、IL-6、Ang-1、Hey炎症反应因子表达则进一步降低;对照组患者血清VEGF、Ang-2、IL-6、Ang-1、Hey等因子表达较前均逐步下降。组间结果显示,试验组与对照组间比较血清VEGF、Ang-2表达增高、Ang-1表达下降在治疗第14天、30天对比差异均具有统计学意义（P<0.05）;HIF-1 α、IL-6、Hey表达下降,其中HIF-1 α下降幅度较对照组慢,IL-6、Hey下降幅度较对照组快,在治疗第14天两组差异有统计学意义（P<0.05）,在治疗第30天比较差异无统计学意义（P>0.05）。2.影像学指标结果:治疗前CTP检测提示患侧病灶感兴趣区域（ROI）脑血流量（cerebral blood flow,CBF）、脑血容量（cerebral blood volume,CBV）较健侧轻度降低,但达峰时间（time to peak,TTP）、平均通过时间（mean transit time,MTT）明显延长,治疗30天患者该区域CBF、CBV较入院时提高、改善,TTP、MTT时间入院时缩短,试验组与对照组比较,差异有统计学意义（P<0.05）。3.康复评定指标结果:两组患者治疗第14天、30天康复评定进行组内比较,患者NIHSS、BI、FMA、ICF评分差异均具有统计学意义（P<0.05）;试验组与对照比较,在治疗第14天、30天,患者NIHSS、BI、FMA、ICF评分差异均具有统计学意义（P<0.05）。结论:1.本研究结果显示,灯盏细辛注射液可能促进缺血性卒中患者大脑中动脉供血区域侧支循环的形成,通过增加患者血清中VEGF、Ang-2的表达增高,及Ang-1、IL-6、Hey等反应因子的表达降低来实现,其中HIF-1 α在发病早期含量明显增高并到达高峰,并随时间推移逐渐下降,但经灯盏细辛药物干预后,试验组HIF-1 α下降幅度和水平与对照组比较慢,提示侧支循环的形成与HIF-1 α/VEGF信号通路关系密切。2.经CTP检测,根据CBF、CBV与TTP、MTT时间的变化,治疗30天患者CBF、CBV较入院时提高、改善,TTP、MTT时间入院时缩短,提示缺血半暗带区域血流较前丰富,考虑患者侧支循环的建立恢复局部血供,与CTA可观察到的侧支循环对比,结果显示CTP在侧支循环的判断上有着较强的敏感性。3.NIHSS、BI、FMA、ICF康复量表评分显示,灯盏细辛注射液能明显降低试验组缺血性卒中患者NIHSS、ICF评分,减轻神经功能残损,增加患者身体的参与能力,提高BI、FMA评分,改善患者日常生活能力,提高肢体功能恢复,其作用与侧支循环的有效建立,脑部血流的恢复有一定相关性,侧支循环建立良好,则脑功能、日常生活能力、肢体行为能力恢复越好。
刘晓欢[7]（2019）在《EPO对缺氧U251细胞ADM和缺血小鼠Caspase3转录水平的影响》文中研究指明目的:构建人脑胶质U251细胞的CoCl2缺氧模型,对之评价后,讨论加促红细胞生成素（erythropoietin,EPO）后U251细胞肾上腺髓质素（adrenomedullin,ADM）和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Cysteiny laspartate specific proteinase,Caspase 3）基因在转录水平的变化。通过结扎左侧颈总动脉建立小鼠缺血性脑损伤模型,对之进行评价后,讨论加EPO后对小鼠脑组织细胞Caspase3基因的影响。为探讨EPO在缺氧缺血性脑损伤中神经保护作用的机制奠定实验基础。方法:1.用CCK-8的方法检测不同浓度、不同时间CoCl2对细胞活性的影响。2.采用实时定量反转录PCR（quantitativereal-timeRT-PCR,qPCR）的方法检测不同CoCl2浓度下,各组细胞低氧诱导因-1α（hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α）mRNA表达量的变化,细胞流式术检测对细胞凋亡的影响。3.用CCK-8方法检测缺氧环境下不同浓度、不同时间EPO对细胞活性的影响,并应用细胞流式术检测EPO对细胞凋亡的影响。4.采用高通量测序技术筛选出CoCl2组和CoCl2+EPO组中和神经保护有关的差异表达基因,并用qPCR进行结果的验证。5.将46只3周龄的昆明小白鼠随机分成假手术组、缺血组（各组n=23）,假手术组仅分离左侧颈总动脉,缺血组分离左侧颈总动脉并结扎,术后2周,提取小鼠脑组织的mRNA,qPCR检测Caspase3基因表达的变化。6.小鼠缺血性脑损伤模型建立成功后,将46只3周龄的小鼠随机分成缺血组、EPO治疗组（各组=23只）,EP0治疗组给予每天腹腔注射EPO（5000IU/kg）1次,缺血组仅给予腹腔注射生理盐水。7.1周后提取小鼠脑组织mRNA,采用qPCR检测Caspase3基因表达的变化。结果:1.通过CCK-8实验和qPCR实验得出U251细胞CoCl2最佳浓度为400μmol/ml,作用时间为48h,不同CoCl2组与对照组相比HIF-1αmRNA的表达量显着增高;2.细胞流式术测得400μmol/ml组的凋亡率显着高于0μmol/ml组,P<0.01,有统计学意义;3.通过CCK-8实验得出EPO最佳浓度为75IU/ml,作用时间为48h,细胞流式术测得CoC12+EPO组凋亡率显着低于CoC12组,P<0.01,有统计学意义;4.采用高通量测序的技术筛选出和神经保护有关的差异表达基因ADM和Caspase3,qPCR验证,得出ADM的表达量增高,Caspase3的表达量降低,与高通量测序结果相符;5.小白鼠通过颈动脉结扎术处理2周后,处死小鼠并提取脑组织中的mRNA,通过qPCR的技术检测,得出缺血组Caspase3比假手术组中Caspase3的表达量增高。表明缺血组脑组织细胞凋亡较多,提示缺血性脑损伤模型构建成功。6.缺血性脑损伤模型构建成功后,给与腹腔注射EPO（5000IU/kg）1周后,处死小鼠并提取脑组织中的mRNA,通过qPCR的技术检测,得出EPO治疗组Caspase3的表达量比缺氧组中Caspase3的表达量低,P<0.05,有统计学意义。结论:1.用CoCl2成功的构建神经胶质U251细胞缺氧模型,并且研究出得EPO可以抑制缺氧条件下U251神经细胞的凋亡。同时上调ADM,下调Caspase3基因的转录,证明了EPO对神经细胞有保护作用。2.EPO能够下调小鼠缺血性脑损伤模型中Caspase3转录的水平,得出外源性EPO的治疗可明显改善小鼠缺血性脑损伤,对脑组织起保护作用。
刘结民[8]（2019）在《热敏灸对缺氧缺血性脑病新生小鼠脑组织细胞凋亡的影响》文中研究表明目的:研究热敏灸大椎穴治疗新生儿小鼠缺氧缺血性脑病（NHIE）疗效并探讨其作用机制。方法:SPF级健康ICR小鼠（重约3～5g）按随机对照原则分成假手术组、缺氧缺血模型组、艾灸治疗组;艾灸治疗组依据小鼠尾温变化再次分为非热敏灸组（尾温未上升）和热敏灸组（尾温升高）。缺氧缺血模型组、艾灸治疗组按照Rice-Vannucci和Levine的方法制备NHIE模型;以生长发育的体重、神经行为学测试（翻正反射、悬崖躲避试验、趋地反射试验、抓力试验）、形态学观察、TTC、TUNEL、caspase-9为检测指标。结果:纳入统计的四组新生小鼠体重统计学上无差异（P>0.05）,在术后三天,与缺氧缺血模型组比较,非热敏灸组和热敏灸组的小鼠体重增长较快,统计学上有差异（P<0.05）。与缺氧缺血模型组比较,非热敏灸组和热敏灸组小鼠的翻正反射时间、悬崖躲避试验时间、趋地反射试验时间明显缩短,而抓力试验时间延长,统计学上有差异（P<0.05）。非热敏灸组和热敏灸组梗死面积较缺氧缺血模型组均减少（P<0.05）,且热敏灸组梗死面积明显减少（P<0.05）。缺氧缺血模型组小鼠左侧脑组织表面出现大面积苍白、液化现象,且脑组织萎缩,大面积梗死;与缺氧缺血模型组比较,非热敏灸组梗死面积较小,热敏灸组梗死面积最小。缺氧缺血模型组左侧脑组织细胞排列顺序杂乱无章,细胞大量丢失,缝隙变大;与缺氧缺血模型组比较,非热敏灸组仅少量细胞脱落,热敏灸组细胞脱落数量最少。非热敏灸组和热敏灸组表达的TUNEL阳性细胞总数较缺氧缺血模型组减少（P<0.05）;热敏灸组较非热敏灸组表达的TUNEL阳性细胞总数减少（P<0.05）。非热敏灸组和热敏灸组表达的caspase-9阳性细胞总数较缺氧缺血模型组减少（P<0.05）;热敏灸组较非热敏灸组表达的caspase-9阳性细胞总数减少（P<0.05）。结论:热敏灸大椎穴可以增加缺氧缺血性脑病新生小鼠的体重,提高其运动功能,减少脑梗死面积,抑制细胞脱落,其机理也许与降低脑组织中caspase-9的阳性表达和细胞凋亡的数量有关。
韩露[9]（2018）在《丰富环境对HIBD大鼠海马区神经元及GSK3β、p-GSK3β蛋白表达的影响》文中进行了进一步梳理目的:探讨丰富环境对HIBD大鼠海马区神经元及GSK3β、p-GSK3β蛋白表达的影响,为丰富环境在临床康复中应用提供理论指导。方法:选用随机数字表法将7日龄SD仔鼠分为假手术组、模型组以及丰富环境组,每组24只。参照最新改良的Rice-Vannucci法制备HIBD幼鼠模型。丰富环境组给予7 日的早期抚触按摩疗法后给予丰富环境笼干预治疗,假手术组与模型组进行标准笼环境饲养,只给予同等条件抓取。建模14d和28d后,选用Morris水迷宫评估各组大鼠学习记忆能力;尼氏染色检测各组大鼠海马神经元存活情况;Western blot法检测各组大鼠海马GSK3β、p-GSK3β蛋白表达的影响。结果:学习记忆能力:脑缺氧缺血14d、28d之后,与假手术组比较,模型组逃避潜伏期明显增长,平台穿越的次数变少,差异具有统计学意义（P<0.05）。与模型组比较,丰富环境组逃避潜伏期显着减少,平台穿越的次数增加,差异具有统计学意义（P<0.05）。神经元存活情况:脑缺氧缺血14d、28d之后,与假手术组比较,模型组大鼠海马区神经元形态病理损伤明显改变,神经胞体呈排列稀疏、不规则形、较整齐、神经纤维排列紊乱、扭曲以及断裂,差异具有统计学意义（P<0.05）;与模型组比较,丰富环境组海马区胞体呈规则形（圆形、锥体形、椭圆形）,排列整齐紧密、尼氏小体密集均表现正常,差异具有统计学意义（P<0.05）。GSK3β、p-GSK3β蛋白表达:脑缺氧缺血14d、28d之后,与假手术组大鼠比较,模型组大鼠海马区GSK3β蛋白表达减少,p-GSK3β蛋白表达显着增加,差异具有统计学意义（P<0.05）;与模型组比较,丰富环境组大鼠海马区GSK3β蛋内表达有所增加,大鼠海马区p-GSK3β蛋白表达较少,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论:1.丰富环境可改善缺氧缺血性脑损伤大鼠学习记忆能力,改善海马区神经元存活情况,具有神经保护作用。2.丰富环境可下调海马区GSK3β,上调p-GSK3β蛋白的表达。
杨艳春[10]（2016）在《头穴丛刺结合丰富环境对HIBD大鼠海马CA1区细胞凋亡及BDNF/TrkB通路相关蛋白的影响》文中指出目的：探讨头穴丛刺结合丰富环境对缺氧缺血脑损伤大鼠海马CA1区细胞凋亡及BDNF/TrkB通路相关蛋白的影响。方法：选用清洁级7日龄Sprague-Dawley幼鼠,参照Rice-Vannucci法建立缺氧缺血性脑损伤（HIBD）幼鼠模型。按照随机数字表法随机分成5个实验组：假手术组、缺氧缺血组、头穴丛刺组、丰富环境组及头穴丛刺结合丰富环境组。假手术组、缺氧缺血组大鼠给予同等条件抓取,不进行任何治疗；头穴丛刺组大鼠给予头穴丛刺治疗；丰富环境组给予丰富环境治疗；头穴丛刺结合丰富环境组给予头穴丛刺结合丰富环境治疗。缺氧缺血后14d、28d,采用Morris水迷宫实验评估各组大鼠空间学习记忆能力；HE法观察各组大鼠海马CA1区病理形态改变；TUNEL法观测各组大鼠海马CA1区细胞凋亡水平；Western Blot法检测各组大鼠海马CA1区Caspase-3、 Bcl-2、BDNF、TrkB、p-ERK及p-Akt蛋白表达水平。结果：1.Morris水迷宫判断各组大鼠空间学习记忆能力（1）定位航行实验造模后14d、28d,缺氧缺血组大鼠逃避潜伏期较假手术组明显延长,有显着差异（P<0.05）；经头穴丛刺、丰富环境、头穴丛刺结合丰富环境治疗后,大鼠逃避潜伏期较缺氧缺血组明显缩短,差异显着（P<0.05）；其中以头穴丛刺结合丰富环境组大鼠逃避潜伏期缩短最为明显,与头穴丛刺组、丰富环境组比较,差异有统计学意义（P<0.05）。（2）空间探索实验造模后14d、28d,缺氧缺血组大鼠穿台次数较假手术组明显减少,有显着差异（P<0.05）；经头穴丛刺、丰富环境、头穴丛刺结合丰富治疗后,大鼠穿台次数较缺氧缺血组明显增加,差异显着（P<0.05）；其中以头穴丛刺结合丰富环境组大鼠穿台次数增加最为明显,较头穴丛刺组、丰富环境组比较,差异有统计学意义（P<0.05）。2.HE染色观察海马CA1区病理形态改变假手术组大鼠海马CA1区神经元细胞轮廓清楚,排列紧密,布局有序,形态完整,胞核居中,核仁明显,胞浆丰富,无神经元丢失；而缺氧缺血组神经元细胞轮廓模糊或消失,胞体缩小,排列紊乱,细胞间隙变大,可见神经元细胞变性、坏死、崩解,核固缩、碎裂,可见大量神经元丢失。各治疗组各时间点病理损伤有所减轻,以头穴丛刺结合丰富环境组最为明显。3.TUNEL法检测各组大鼠海马CA1区细胞凋亡情况造模后14d、28d,缺氧缺血组大鼠海马CA1区TUNEL阳性细胞数较假手术组明显增多,有显着差异（P<0.05）；经头穴丛刺、丰富环境、头穴丛刺结合丰富环境治疗后,大鼠海马CA1区TUNEL阳性细胞数较缺氧缺血组明显减少,差异显着（P<0.05）；其中以头穴丛刺结合丰富环境大鼠海马CA1区TUNEL阳性细胞数减少最为明显,与头穴丛刺组、丰富环境组比较,差异有统计学意义（P<0.05）。4.Western Blot法检测海马CA1区Caspase-3、Bcl-2、BDNF、TrkB、 p-ERK及p-Akt蛋白的表达水平（1）Caspase-3:造模后14d、28d,缺氧缺血组大鼠海马CA1区Caspase-3表达较假手术组明显升高,有显着差异（P<0.05）；经头穴丛刺、丰富环境、头穴丛刺结合丰富环境治疗后,大鼠海马CA1区Caspase-3表达较缺氧缺血组降低,差异显着（P<0.05）；其中以头穴丛刺结合丰富环境组Caspase-3表达降低最为明显,与头穴丛刺组、丰富环境组比较,差异有统计学意义（P<0.05）。（2）Bcl-2：造模后14d、28d,缺氧缺血组大鼠海马CA1区Bcl-2表达较假手术组明显升高,有显着差异（P<0.05）；经头穴丛刺、丰富环境、头穴丛刺结合丰富环境治疗后,大鼠海马CA1区Bcl-2表达进一步升高,差异显着（P<0.05）；其中以头穴丛刺结合丰富环境组Bcl-2表达增加最为明显,与头穴丛刺组、丰富环境组比较,差异有统计学意义（P<0.05）。（3）BDNF:造模后14d、28d,缺氧缺血组大鼠海马CA1区BDNF表达较假手术组明显升高,有显着差异（P<0.05）；经头穴丛刺、丰富环境、头穴丛刺结合丰富环境治疗后,大鼠海马CA1区BDNF表达较缺氧缺血组明显上调,差异显着（P<0.05）；其中以头穴丛刺结合丰富环境组BDNF表达升高最为明显,与头穴丛刺组、丰富环境组比较,差异有统计学意义（P<0.05）。（4）TrkB:造模后14d、28d,缺氧缺血组大鼠海马CA1区TrkB表达较假手术组明显升高,有显着差异（P<0.05）；经头穴丛刺、丰富环境、头穴丛刺结合丰富环境治疗后,大鼠海马CA1区TrkB表达较缺氧缺血组明显上调,差异显着（P<0.05）；其中以头穴丛刺结合丰富环境组TrkB表达升高最为明显,与头穴丛刺组、丰富环境组比较,差异有统计学意义（P<0.05）。（5）p-ERK:造模后14d、28d,缺氧缺血组大鼠海马CA1区p-ERK表达较假手术组明显升高,有显着差异（P<0.05）；经头穴丛刺、丰富环境、头穴丛刺结合丰富环境治疗后,大鼠海马CA1区p-ERK表达较缺氧缺血组明显上调,差异显着（P<0.05）；其中以头穴丛刺结合丰富环境组p-ERK表达升高最为明显,与头穴丛刺组、丰富环境组比较,差异有统计学意义（P<0.05）。（6）p-Akt:造模后14d、28d,缺氧缺血组大鼠海马CA1区p-Akt表达较假手术组明显升高,有显着差异（P<0.05）；经头穴丛刺、丰富环境、头穴丛刺结合丰富环境治疗后,大鼠海马CA1区p-Akt表达较缺氧缺血组明显上调,差异显着（P<0.05）；其中以头穴丛刺结合丰富环境组p-Akt表达升高最为明显,与头穴丛刺组、丰富环境组比较,差异有统计学意义（P<0.05）。结论：1.头穴丛刺结合丰富环境可改善缺氧缺血性脑损伤大鼠学习记忆能力,降低海马CA1区的病理损伤,发挥神经保护作用。2.头穴丛刺结合丰富环境可降低缺氧缺血性脑损伤大鼠海马CA1区细胞凋亡程度,抑制海马CA1区Caspase-3蛋白表达,促进Bcl-2蛋白表达。3.头穴丛刺结合丰富环境可上调缺氧缺血性脑损伤大鼠海马CA1区BDNF、TrkB、p-ERK、p-Akt蛋白表达,提示其神经保护作用可能与调控BDNF/TrkB信号通路有关。
二、外源性神经节甘脂对缺氧缺血性脑损伤新生鼠学习记忆的增强作用（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、外源性神经节甘脂对缺氧缺血性脑损伤新生鼠学习记忆的增强作用（论文提纲范文）
（1）新生儿缺氧缺血性脑损伤后脑内髓系细胞吞噬—炎症失衡参与突触损伤的机制研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 综述 围产期缺氧缺血性脑损伤的免疫调节机制及潜在治疗 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间获得的学术成果 |
| 致谢 |
（2）针刺本神穴抑制宫内窘迫HIBD大鼠海马炎症反应研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 文献研究 |
| 第一节 新生儿缺氧缺血性脑病研究进展 |
| 一、现代医学对新生儿缺氧缺血性脑病的认识 |
| 二、中医对新生儿缺氧缺血性脑病的认识 |
| 三、“靳三针”对新生儿缺氧缺血性脑病的治疗及研究 |
| 四、NLRP3 炎症复合小体及小胶质细胞激活介导的神经炎症反应 |
| 五、研究思路 |
| 六、技术路线图 |
| 第二章 实验研究 |
| 第一节 HIBD大鼠模型制备 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 第二节 针刺对HIBD大鼠模型的效应研究 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 第三节 针刺抑制HIBD模型大鼠海马炎症反应研究 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 第四节 针刺对HIBD模型大鼠脑部病理形态的影响 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在校期间发表论文情况 |
| 致谢 |
| 附件 |
（3）灵芝三萜联合外源性GM1对戊四氮致大鼠癫痫模型记忆受损的干预及其分子机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英汉缩略词对照表 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试剂及器材 |
| 1.1.1 主要试剂 |
| 1.1.2 主要器材 |
| 1.2 实验动物及样品采集 |
| 1.2.1 动物分组、模型构建及给药处理 |
| 1.2.2 癫痫行为学观察 |
| 1.2.3 样品采集及处理 |
| 1.3 实验方法与步骤 |
| 1.3.1 Morris水迷宫观察大鼠空间探索和学习记忆能力 |
| 1.3.2 苏木素-伊红(HE)染色 |
| 1.3.3 透射电镜观察海马CA1区神经元超微结构 |
| 1.3.4 免疫组化染色检测大鼠海马CA1区Cofilin、p-Cofilin、SYN、GAP-43 蛋白表达水平 |
| 1.3.5 免疫印迹Western Blot检测大鼠海马Cofilin、p-Cofilin、SYN、GAP-43 蛋白表达水平 |
| 1.3.6 Real-time PCR检测大鼠海马Cofilin、SYN、GAP-43 m RNA表达水平 |
| 2 结果 |
| 2.1 各组大鼠相应用药后的发作级别、发作潜伏期及发作持续时间 |
| 2.2 Morris水迷宫实验结果 |
| 2.3 海马神经元苏木素-伊红(HE)染色结果 |
| 2.4 大鼠海马组织透射电镜观察结果 |
| 2.5 大鼠海马CA1区Cofilin、p-Cofilin、SYN、GAP-43 蛋白免疫组化结果 |
| 2.6 大鼠海马Cofilin、p-Cofilin、SYN、GAP-43 蛋白免疫印迹结果 |
| 2.7 大鼠海马Cofilin、SYN、GAP-43 m RNA表达结果 |
| 3 讨论 |
| 3.1 灵芝三萜联合外源性GM1对戊四氮致痫大鼠行为学的影响 |
| 3.2 灵芝三萜联合外源性GM1对癫痫大鼠学习记忆的影响 |
| 3.3 灵芝三萜联合外源性GM1对癫痫大鼠海马神经细胞损伤的影响 |
| 3.4 灵芝三萜联合外源性GM1 对癫痫大鼠海马的突触可塑性相关蛋白Cofilin、p-Cofilin、SYN及GAP-43表达的影响 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 癫痫发病机制的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文及获得的科研成果 |
（4）灯盏花乙素对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤中的脑保护作用及其机制的初步研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分 体外验证灯盏花乙素治疗作用及其与GAP43的关系 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 小结 |
| 第二部分 HIE大鼠体内灯盏花乙素有效药物浓度筛选 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 小结 |
| 第三部分 GAP43 Knockout大鼠验证灯盏花乙素与GAP43的关系及其作用机制 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 小结 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 综述 新生儿缺氧缺血性脑病研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间获得的学术成果 |
| 致谢 |
（5）基于EPO右归饮改善慢性肾衰小鼠学习记忆障碍的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一章 EPO与慢性肾衰小鼠学习记忆障碍的相关性研究 |
| 第一节 腺嘌呤所致慢性肾衰小鼠的学习记忆能力以及EPO的表达观察 |
| 1 试验材料 |
| 2 试验方法 |
| 3 试验结果 |
| 3.1 腺嘌呤所致慢性肾衰小鼠复制成功 |
| 3.2 腺嘌呤所致慢性肾衰小鼠学习记忆能力显着受损 |
| 3.3 腺嘌呤所致慢性肾衰小鼠血清EPO与海马区EPO及其下游蛋白表达均显着减少 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第二节 rhEPO对腺嘌呤所致慢性肾衰小鼠体质及其学习记忆障碍的改善作用观察 |
| 1 试验材料 |
| 2 试验方法 |
| 3 试验结果 |
| 3.1 rhEPO显着改善腺嘌呤所致慢性肾衰小鼠的体质 |
| 3.2 rhEPO显着改善腺嘌呤所致慢性肾衰小鼠的学习记忆能力 |
| 3.3 rhEPO显着增加腺嘌呤所致慢性肾衰小鼠血中及脑内EPO并上调海马区EPO下游蛋白的表达 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第二章 EPO对小鼠海马区学习记忆重要通路Ca~(2+)/Ca M/Ca MKIIα/CREB1的调控作用研究 |
| 第一节 EPO对腺嘌呤所致慢性肾衰小鼠海马区学习记忆重要通路Ca~(2+)/Ca M/Ca MKIIα/CREB1的调控观察 |
| 1 试验材料 |
| 2 试验方法 |
| 3 试验结果 |
| 3.1 rhEPO显着逆转腺嘌呤所致慢性肾衰小鼠海马区学习记忆第二信使Ca~(2+)浓度的下降 |
| 3.2 rhEPO显着逆转腺嘌呤所致慢性肾衰小鼠海马区学习记忆重要通路Ca M/Ca MKIIα/CREB1蛋白表达的下调 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第二节 EPO基因敲除小鼠海马区学习记忆重要通路Ca M/Ca MKIIα/CREB1 的表达观察 |
| 1 试验材料 |
| 2 试验方法 |
| 3 试验结果 |
| 3.1 条件性EPO基因敲除小鼠构建成功 |
| 3.2 EPO基因敲除小鼠海马区EPO及其下游蛋白表达显着减少 |
| 3.3 EPO基因敲除小鼠海马区CaM/CaMKIIα/CREB1 通路蛋白表达显着下调 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第三节 EPO基因敲除细胞学习记忆重要通路Ca~(2+)/Ca M/Ca MKIIα/CREB1 的变化观察 |
| 1 试验材料 |
| 2 试验方法 |
| 3 试验结果 |
| 3.1 小鼠海马EPO主要分泌细胞——星形胶质细胞体外原代培养纯度达97.7% |
| 3.2 EPO基因敲除星形胶质细胞Ca~(2+)/CaM/CaMKIIα/CREB1 通路显着下调 |
| 3.3 rhEPO显着逆转EPO敲除星形胶质细胞Ca~(2+)/Ca M/Ca MKIIα/CREB1 通路的下降 |
| 3.4 rhEPO显着上调正常星形胶质细胞Ca~(2+)/CaM/CaMKIIα/CREB1 通路 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第三章 右归饮对腺嘌呤所致慢性肾衰小鼠体质及学习记忆障碍的改善作用及其与EPO的相关性研究 |
| 第一节 试验用右归饮水煎液的主要成分含量测定报告 |
| 1 试验材料 |
| 2 试验方法 |
| 3 试验结果 |
| 3.1 试验用右归饮水煎液中主要有效成分的含量测定结果 |
| 3.2 试验用右归饮水煎液中毒性成分及其衍生物的含量测定结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第二节 右归饮对腺嘌呤所致慢性肾衰小鼠体质及其学习记忆障碍的改善作用观察 |
| 1 试验材料 |
| 2 试验方法 |
| 3 试验结果 |
| 3.1 右归饮显着改善腺嘌呤所致慢性肾衰小鼠的体质 |
| 3.2 右归饮显着改善腺嘌呤所致慢性肾衰小鼠的学习记忆能力 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第三节 右归饮改善腺嘌呤所致慢性肾衰小鼠学习记忆障碍的作用与EPO的相关性研究 |
| 1 试验材料 |
| 2 试验方法 |
| 3 试验结果 |
| 3.1 右归饮显着提高腺嘌呤所致慢性肾衰小鼠血清EPO的含量 |
| 3.2 右归饮显着减少腺嘌呤所致慢性肾衰小鼠海马区星形胶质细胞的丢失 |
| 3.3 右归饮显着上调腺嘌呤所致慢性肾衰小鼠海马区HIF2α的表达 |
| 3.4 右归饮显着提高腺嘌呤所致慢性肾衰小鼠海马区EPO mRNA及蛋白表达 |
| 3.5 右归饮显着上调腺嘌呤所致慢性肾衰小鼠海马区EPO下游蛋白的表达 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第四节 右归饮改善腺嘌呤所致慢性肾衰小鼠学习记忆障碍的作用与EPO调控的学习记忆重要通路Ca~(2+)/Ca M/Ca MKIIα/CREB1 的相关性研究 |
| 1 试验材料 |
| 2 试验方法 |
| 3 试验结果 |
| 3.1 右归饮显着升高腺嘌呤所致慢性肾衰小鼠海马区EPO调控的细胞内Ca~(2+)浓度 |
| 3.2 右归饮显着上调腺嘌呤所致慢性肾衰小鼠海马区EPO调控的Ca M/Ca MKIIα/CREB1通路蛋白的表达 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 全文总结 |
| 1.腺嘌呤所致慢性肾衰小鼠学习记忆障碍与EPO的表达降低密切相关 |
| 2.EPO对海马区学习记忆重要通路Ca~(2+)/Ca M/Ca MKIIα/CREB1 有显着的调控作用 |
| 3.右归饮对腺嘌呤所致慢性肾衰小鼠体质及学习记忆障碍均具有显着的改善作用 |
| 4.右归饮改善腺嘌呤所致慢性肾衰小鼠体质及学习记忆障碍的作用机制与EPO及其信号通路密切相关 |
| 创新与意义 |
| 思考与展望 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 博士期间科研工作汇报 |
| 附录:中英文缩略词对照表 |
（6）从CT灌注成像探讨灯盏细辛对缺血性卒中临床疗效及机制的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 文献研究 |
| 1.1 缺血性卒中现代医学认识 |
| 1.1.1 缺血性卒中治疗现状 |
| 1.1.2 缺血性卒中侧支循环建立 |
| 1.1.3 缺血性卒中侧支循环建立的评估 |
| 1.1.4 缺血性卒中侧支循环建立意义 |
| 1.1.5 小结 |
| 1.2 中医对缺血性卒中的认识 |
| 1.2.1 病因病机 |
| 1.2.2 中风证型分类 |
| 1.2.3 中医药治疗 |
| 1.2.4 小结 |
| 1.3 缺血性卒中的康复预后 |
| 1.3.1 脑卒中后神经功能缺损的恢复与改善 |
| 1.3.2 康复训练对神经可塑性的影响 |
| 1.3.3 缺血性卒中预后 |
| 1.3.4 小结 |
| 第二章 临床研究 |
| 2.1. 研究对象 |
| 2.1.1 病例来源 |
| 2.1.2 诊断标准 |
| 2.1.3 病例纳入标准 |
| 2.1.4 病例排除标准 |
| 2.1.5 病例脱落标准 |
| 2.1.6 治疗师入选标准 |
| 2.1.7 试验中止标准 |
| 2.2 研究方法 |
| 2.2.1 研究设计 |
| 2.2.2 随机分组方法 |
| 2.2.3 随机的隐藏 |
| 2.2.4 盲法的控制 |
| 2.2.5 研究方案 |
| 2.2.6 指标检测方法 |
| 2.3 统计学分析 |
| 2.4 研究结果 |
| 2.4.1 患者一般资料 |
| 2.4.2 血液检验结果指标 |
| 2.4.3 两组患者影像学指标比较 |
| 2.4.4 两组患者康复评定结果比较 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 讨论 |
| 3.1 缺血性卒中与细胞因子 |
| 3.1.1 血管内皮生长因子和缺氧诱导因子-1α |
| 3.1.2 血管生成素和白介素-6 |
| 3.2 中医对缺血性卒中的认识 |
| 3.2.1 病因病机 |
| 3.2.2 中医药治疗 |
| 3.3 灯盏细辛注射液对缺血性卒中的作用机制研究 |
| 3.3.1 灯盏细辛的化学结构 |
| 3.3.2 灯盏细辛的药理作用及多学科应用 |
| 3.3.3 野黄芩苷及其药理作用 |
| 3.3.4 总咖啡酸酯及其药理作用 |
| 3.4 灯盏细辛对缺血性卒中治疗作用 |
| 3.5 灯盏细辛与缺血性卒中的辨证分型 |
| 3.6 灯盏细辛注射液对侧支循环形成的机制分析 |
| 3.7 灯盏细辛注射液对康复预后的影响 |
| 3.8 灯盏细辛注射液使用过程的安全性评价 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 综述一 脑卒中侧支循环研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 灯盏细辛主要有效成分脑保护机制研究进展 |
| 参考文献 |
| 在校期间发表论文情况 |
| 致谢 |
| 统计学审核证明 |
| 附件 |
（7）EPO对缺氧U251细胞ADM和缺血小鼠Caspase3转录水平的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 实验材料和方法 |
| 实验材料 |
| 实验方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 缩略语表 |
| 攻读学位期间发表文章情况 |
| 个人简历 |
| 致谢 |
（8）热敏灸对缺氧缺血性脑病新生小鼠脑组织细胞凋亡的影响（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 中文摘要 |
| abstract |
| 缩略词表 |
| 引言 |
| 第一部分 文献研究 |
| 1 西医对NHIE的研究 |
| 2 中医对NHIE的研究 |
| 第二部分 实验研究 |
| 1 实验材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方案 |
| 1.3 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 热敏灸对HI模型小鼠尾温的影响 |
| 2.2 热敏灸对HI模型小鼠体重的影响 |
| 2.3 热敏灸对HI模型小鼠行为学测试结果的影响 |
| 2.4 热敏灸对HI模型小鼠脑梗死面积的影响 |
| 2.5 热敏灸对HI模型小鼠脑组织形态观察 |
| 2.6 热敏灸对HI模型小鼠脑组织TUNEL阳性细胞数的影响 |
| 2.7 热敏灸对HI模型小鼠脑组织caspase-9 阳性细胞数的影响 |
| 3 小结 |
| 讨论 |
| 1 实验动物的选择 |
| 2 HI模型的选择 |
| 2.1 气管夹闭术 |
| 2.2 延迟剖宫产术 |
| 2.3 动脉结扎法 |
| 3 热敏灸的概述 |
| 4 针灸大椎穴与脑病的探讨 |
| 5 腧穴热敏化的探讨 |
| 6 热敏灸治疗HI模型疗效的探讨 |
| 6.1 热敏灸对HI模型小鼠生理发育和行为学测试的探讨 |
| 6.2 热敏灸对HI模型的探讨 |
| 6.3 热敏灸对HI模型脑组织形态学的探讨 |
| 7 热敏灸治疗HI模型作用机制的探讨 |
| 7.1 热敏灸对HI模型小鼠脑组织TUNEL阳性细胞数的探讨 |
| 7.2 热敏灸对HI模型小鼠脑组织caspase-9阳性细胞数的探讨 |
| 结论 |
| 1 文献研究 |
| 2 实验研究 |
| 本研究创新与不足之处 |
| 创新之处 |
| 不足之处 |
| 展望 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 作者简介 |
| 答辩委员会名单 |
（9）丰富环境对HIBD大鼠海马区神经元及GSK3β、p-GSK3β蛋白表达的影响（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 文献综述 |
| 1 现代医学对缺氧缺血性脑损伤的认识 |
| 1.1 定义及流行病学 |
| 1.2 缺氧缺血性脑损伤的发病机制 |
| 1.3 发病机制 |
| 2 治疗现状 |
| 2.1 药物治疗 |
| 2.2 康复治疗 |
| 3 丰富环境与缺氧缺血性脑损伤 |
| 3.1 丰富环境的定义 |
| 3.2 丰富环境对缺氧缺血性脑损伤的保护作用 |
| 3.3 丰富环境的相关作用机制 |
| 4 GSK3B、P-GSK3B在脑损伤中的保护作用 |
| 实验研究 |
| 1 实验材料与方法 |
| 1.1 实验动物与分组 |
| 1.2 主要器械仪器设备 |
| 1.3 主要实验试剂 |
| 1.4 丰富环境的设计和缺氧箱的制作 |
| 1.5 缺氧缺血动物模型制备 |
| 2 指标检测及方法 |
| 2.1 行为学测试 |
| 3 组织取材与制备 |
| 3.1 常规石蜡包埋病理切片制备 |
| 3.2 尼式染色检测各组大鼠海马区神经元存活的情况 |
| 3.3 免疫印迹(Western blot)各组大鼠海马区GSK3β、p-GSK3β蛋白表达 |
| 3.4 统计学分析 |
| 结果 |
| 1 水迷宫实验结果 |
| 1.1 逃避潜伏期 |
| 1.2 跨越平台次数 |
| 2 各组大鼠海马组织尼式染色结果 |
| 3 各组大鼠海马区GSK3β蛋白表达 |
| 讨论 |
| 5.1 HIBD动物模型的选择及建立 |
| 5.2 丰富环境方法的选择 |
| 5.3 丰富环境对HIBD大鼠学习记忆能力及海马神经元存活的影响 |
| 5.4 丰富环境对HIBD大鼠海马区GSK3β信号通路及相关蛋白表达的影响 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士期间发表的论文 |
| 作者简历 |
（10）头穴丛刺结合丰富环境对HIBD大鼠海马CA1区细胞凋亡及BDNF/TrkB通路相关蛋白的影响（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 文献综述 |
| 一、中医学对缺氧缺血性脑病的认识 |
| 1. 病名 |
| 2. 病因病机 |
| 3. 治疗概述 |
| 二、现代医学对缺氧缺血性脑病的认识 |
| 1. 定义及流行病学 |
| 2. 发病原因 |
| 3. 发病机制 |
| 4. 治疗进展 |
| 三、BDNF/TrkB信号通路与缺氧缺血性脑损伤 |
| 实验部分 |
| 第一部分 头穴丛刺结合丰富环境对HIBD大鼠的神经保护作用 |
| 引言 |
| 1 实验材料与方法 |
| 1.1 实验动物与分组 |
| 1.2 主要仪器设备 |
| 1.3 主要试剂及药品 |
| 1.4 有机玻璃缺氧箱的制作 |
| 1.5 模型制备 |
| 1.6 丰富环境的建立 |
| 1.7 各组干预方法 |
| 1.8 指标检测及方法 |
| 1.9 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 各组大鼠各时间点空间学习记忆能力的比较 |
| 2.2 各组大鼠各时间点海马CA1区病理形态变化 |
| 第二部分 头穴丛刺结合丰富环境对HIBD大鼠海马CA1区细胞凋亡的影响 |
| 引言 |
| 1 实验材料与方法 |
| 1.1 实验动物及分组 |
| 1.2 主要仪器设备 |
| 1.3 主要试剂及药品 |
| 1.4 有机玻璃缺氧箱的制作 |
| 1.5 模型制备 |
| 1.6 丰富环境的建立 |
| 1.7 各组干预方法 |
| 1.8 指标检测及方法 |
| 1.9 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 各组大鼠各时间点海马CA1区TUNEL阳性细胞数 |
| 2.2 各组大鼠各时间点海马CA1区Caspase-3蛋白表达 |
| 2.3 各组大鼠各时间点海马CA1区Bcl-2蛋白表达 |
| 第三部分 头穴丛刺结合丰富环境对HIBD大鼠海马CA1区BDNF、TrkB、p-ERK及p-Akt蛋白表达的影响 |
| 引言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物及分组 |
| 1.2 主要仪器设备 |
| 1.3 主要试剂及药品 |
| 1.4 有机玻璃缺氧箱的制作 |
| 1.5 模型制备 |
| 1.6 丰富环境的建立 |
| 1.7 各组干预方法 |
| 1.8 指标检测及方法 |
| 1.9 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 各组大鼠各时间点海马CA1区BDNF蛋白表达 |
| 2.2 各组大鼠各时间点海马CA1区TrkB蛋白表达 |
| 2.3 各组大鼠各时间点海马CA1区p-ERK蛋白表达 |
| 2.4 各组大鼠各时间点海马CA1区p-Akt蛋白表达 |
| 讨论 |
| 一、动物模型的选择 |
| 二、头穴丛刺结合丰富环境治疗HIBD大鼠的可行性 |
| 三、头穴丛刺结合丰富环境对HIBD大鼠海马CA1区病理形态改变和学习记忆能力的影响 |
| 四、头穴丛刺结合丰富环境对HIBD大鼠海马CA1区神经元凋亡的影响 |
| 五、头穴丛刺结合丰富环境对HIBD大鼠海马CA1区BDNF/TrkB通路相关蛋白表达的影响 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读博士期间发表的论文 |
| 个人简历 |
四、外源性神经节甘脂对缺氧缺血性脑损伤新生鼠学习记忆的增强作用（论文参考文献）
- [1]新生儿缺氧缺血性脑损伤后脑内髓系细胞吞噬—炎症失衡参与突触损伤的机制研究[D]. 闵颖俊. 昆明医科大学, 2021
- [2]针刺本神穴抑制宫内窘迫HIBD大鼠海马炎症反应研究[D]. 曲乐. 广州中医药大学, 2020(08)
- [3]灵芝三萜联合外源性GM1对戊四氮致大鼠癫痫模型记忆受损的干预及其分子机制研究[D]. 农雪娟. 右江民族医学院, 2020
- [4]灯盏花乙素对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤中的脑保护作用及其机制的初步研究[D]. 牛瑞泽. 昆明医科大学, 2020(02)
- [5]基于EPO右归饮改善慢性肾衰小鼠学习记忆障碍的作用及机制研究[D]. 唐清. 西南大学, 2019(05)
- [6]从CT灌注成像探讨灯盏细辛对缺血性卒中临床疗效及机制的研究[D]. 黄格朗. 广州中医药大学, 2019(08)
- [7]EPO对缺氧U251细胞ADM和缺血小鼠Caspase3转录水平的影响[D]. 刘晓欢. 内蒙古医科大学, 2019(03)
- [8]热敏灸对缺氧缺血性脑病新生小鼠脑组织细胞凋亡的影响[D]. 刘结民. 江西中医药大学, 2019(02)
- [9]丰富环境对HIBD大鼠海马区神经元及GSK3β、p-GSK3β蛋白表达的影响[D]. 韩露. 黑龙江中医药大学, 2018(01)
- [10]头穴丛刺结合丰富环境对HIBD大鼠海马CA1区细胞凋亡及BDNF/TrkB通路相关蛋白的影响[D]. 杨艳春. 黑龙江中医药大学, 2016(08)