荧光聚合酶链反应检测性病性阴道炎病原体

一、荧光聚合酶链反应用于阴道炎性病病原体检测（论文文献综述）

李祥凌^[1]（2021）在《SAT技术应用于三种不同类型流产解脲脲原体感染的临床研究》文中研究表明目的:探讨实时荧光核酸恒温扩增检测技术（Simuhaneous amplification and testing,以下简称SAT）在三种不同类型流产患者尿液标本中检测解脲脲原体（Ureaplasma urealyticum,以下简称Uu）RNA的效果和临床意义。方法:选择遵义医科大学第五附属（珠海）医院2019年11月至2020年12月期间因早期流产就诊的患者作为本研究的观察对象,分为A组（人工流产组）、B组（先兆流产组）和C组（稽留流产组）,根据纳入排除标准筛选出90例,A组、B组和C组各30例,每例留取一份尿液标本及一份宫颈拭子标本:利用SAT检测尿液标本中Uu-RNA,利用液体培养法检测宫颈拭子标本中Uu,所取得的标本均在同一天内采样送检,以Uu阳性率为观察指标,运用SPSS25.0软件对数据统计分析。结果:1、三组患者的年龄、停经天数、孕产次等一般临床资料,差异无统计学意义（P>0.05）。2、Uu液体培养法和Uu-SAT法中,比较A组和B组、A组和C组Uu阳性率,差异均具有统计学意义（P<0.05）;比较B组和C组Uu阳性率,差异无统计学意义（P>0.05）。3、90例患者中Uu液体培养法阳性率为48.9%,Uu-SAT法阳性率为46.7%,差异无统计学意义（P=0.625>0.05）,两种检测方法的符合率为95.60%,Kappa值为0.91,表明两种方法检测结果的一致性极强。4、90例早孕流产患者用2种方法检测Uu时,有4例结果不一致,其中1例液体培养法阴性而SAT法阳性,3例液体培养法阳性而SAT法阴性。以液体培养法为参考方法,SAT法的灵敏度为93.18%,特异度为97.83%,阳性预测值97.62%,阴性预测值93.75%,约登指数91.01%。ROC曲线结果显示,SAT法的AUC为0.955。结论:1、选用以尿液为标本的Uu-SAT法,可避免孕期拭子取样的危险,减轻拭子取样的尴尬和痛苦,提高患者依从性,减少医生工作量,简化收集流程,在临床工作中有很大的应用价值,值得实验室推广。2、Uu感染与流产具有相关性,正常妊娠女性的Uu感染率也偏高,为是否可以将Uu检查作为孕前、产前或人流术前检查项目提供依据。

陈佳婕^[2]（2021）在《自动化解脲脲原体/微小脲原体联合检测与生殖道病原体感染疾病的应用研究》文中研究说明脲原体是女性下生殖道常见的一类寄生物或共生物,是引起泌尿生殖系感染性疾病的重要病原体之一。脲原体感染的妇女除了可引起泌尿生殖道感染外,还有极大的可能会将病原体传染给性伴侣。脲原体感染也是引起不育、不孕的重要原因之一。怀孕妇女若感染脲原体,还可能导致胎膜早破、早产、新生儿呼吸窘迫综合征、产后感染等不良妊娠后果,需要引起高度重视。目前已知与人类致病有关的脲原体分为2个生物群,14个血清型。其中生物Ⅰ群即为解脲脲原体（Ureaplasma urealyticum,Uu）,包括基因组较大的10个血清型:分别是2、4、5、7、8、9、10、11、12和13;生物Ⅱ群即为微小脲原体（Ureaplasma parvum,Up）,包括基因组较小的4个血清型:1、3、6和14。但目前临床上采用的检测试剂盒无法区分解脲脲原体与微小脲原体,国际上对于两种生物种群致病性的强弱差异研究匮乏,且微小脲原体与生殖系统感染的疾病相关性研究报道也较少。本研究采用由凯杰公司提供的最新研发的解脲脲原体/微小脲原体的联检试剂盒,与配套的全自动核酸提取纯化分析仪,对临床已确定泌尿生殖系统疾病的患者进行两种病原体的分群/联合检测。研究中建立了核酸自动化提取与检测、实时荧光定量PCR分析的标准化流程,相比于一直沿用的“金标准”培养方法,新方法不仅缩短了检测周期,同时能有效避免污染和假阴性。进一步采用标准化流程分析了 321例生殖系统感染的患者样本,包括男性样本48例,标本种类为尿道拭子;女性样本273例,标本种类为宫颈拭子。同时以55例健康人群为对照样本,其为女性宫颈拭子样本。针对联检试剂盒检测获得的结果,以患者与正常人、患者性别、患者年龄、患者所患的疾病种类为基线,分析了这两种不同病原体与这些基线之间的统计学关系。统计结果表明:患者与健康对照组之间,解脲脲原体Uu和微小脲原体Up的p值均小于0.05,且男性感染Uu相对较多（26/48,54.17%）,而女性则以Up感染为主（230/273,84.25%）,但这两种病原体的感染与男性和/或女性之间的不同年龄段并没有明显的相关性（p>0.05）。在男性所患疾病的统计分析中,两种病原体Uu和Up的p值均小于0.05,这说明在本次研究所收集的男性患者样本中,涉及炎症、不育及其他三大类疾病,病原体的感染均具有明显的指向性;而在女性患者样本所涉及的疾病分类中,Uu的感染并不具有统计学意义（p>0.05）,而Up的p值则小于0.05,则说明在女性的某一类或某几类疾病中,Up是其特定的感染病原体。随后利用了不同性别及所患的不同疾病建立了回归模型进行分析,发现微小脲原体与男性不育以及女性不孕之间存在着统计学关系（p<0.05）。细菌性阴道炎（BV）是女性泌尿生殖道的常见疾病,研究中我们同时分析了这两种病原体与女性细菌性阴道炎的相关性。在273例女性检测样本中,共有224例完成了细菌性阴道炎的检测,而BV和Uu/Up相关性统计分析中p值均大于0.05,说明无论是Uu还是Up,均与BV的感染不具有相关性。以上这些结果的获得,为解脲脲原体与微小脲原体致病机制的研究提供了一定的基础,也为临床进行这两类病原体检测的必要性给出了一定的参考依据。

廖春洁,叶美萍,顾昕,石梅,周平玉^[3]（2021）在《PCR荧光探针法、乳胶法及培养法检测生殖道分泌物中沙眼衣原体、淋球菌和解脲支原体的优劣分析》文中指出目的比较PCR荧光探针法、乳胶法及培养法对生殖道分泌物中沙眼衣原体、淋球菌和解脲支原体的检出率差异,评价不同检测方法对不同性病病原体的检测意义。方法收集性病门诊患者的泌尿生殖道分泌物,采用PCR荧光探针法检测沙眼衣原体、淋球菌和解脲支原体,同时采用乳胶法检测沙眼衣原体,培养法检测淋球菌和解脲支原体,并将PCR荧光探针法的检测结果与乳胶法和培养法进行比较。结果 587例标本同时完成沙眼衣原体PCR荧光探针法和乳胶法检测,PCR荧光探针法检测阳性率为11.9%（70/587）显着高于乳胶法（2.9%,17/587）,差异具有统计学意义（P<0.001）;609例标本同时完成淋球菌PCR荧光探针法和培养法检测,PCR荧光探针法检测阳性率为9.0%（55/609）略高于培养法（7.4%,45/609）,差异无统计学意义（P>0.05）;1022例标本同时完成解脲支原体PCR荧光探针法和培养法检测,PCR荧光探针法检测阳性率为44.9%（459/1022）高于培养法（40.0%, 409/1022）,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论与乳胶法相比,PCR荧光探针法能显着提高沙眼衣原体的阳性检出率,有助于临床的早期诊断和及时治疗;相较于培养法,PCR荧光探针法能够提高解脲支原体的阳性检出率,对淋球菌的检出率与培养法相近。PCR探针法具有特异性高、敏感性强、操作简便等优点,培养法检测可以进行病原菌耐药性分析,指导临床合理用药,对于考虑淋球菌或解脲支原体感染的患者,可选择PCR探针法和培养法同时检测。

蒙雨丹^[4]（2020）在《基于重组酶聚合酶扩增（RPA）技术的白色念珠菌快速检测方法的构建及应用》文中进行了进一步梳理目的:（1）本研究基于重组酶聚合酶扩增（Recombinase Polymerase Amplification,RPA）技术,构建白色念珠菌快速检测方法并优化应用,以期为白色念珠菌的快速检测提供技术支持,为白色念珠菌的诊断与防治提供新的可行性方案。（2）实验一,针对白色念珠菌构建了一种实时荧光重组酶聚合酶扩增快速检测方法,并对临床分离株进行了检测,以评测该方法的临床适用性。（3）实验二,为了进一步推广该技术应用于床旁、基层甚至于家庭检测,针对白色念珠菌现场快速检测（Point-of-care testing,POCT）的需求,构建了侧流层析试纸条（Lateral flow strip detection,LFD）结合重组酶聚合酶扩增的快速检测方法（LFD-RPA）,实现检测结果的便捷化（easy-to-answer）,简化对检测结果的判读。方法:（1）实验一:首先,选取白色念珠菌标准株核酸序列保守区ITS2作为鉴定基因,结合exo+试剂盒指南设计一系列的引物及探针,并通过引物筛选实验,选出最适的引物、探针进行后续实验;其次,取1株白色念珠菌标准株,以铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、光滑念珠菌等5株非白色念珠菌菌株为阴性对照菌,提取DNA为模板,依次采用聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction,PCR）、实时荧光定量PCR（Quantitative Real-time PCR,qPCR）及实时荧光RPA进行检测,检测结果送测序并在NCBI进行比对,分析三种方法检测白色念珠菌的特异性并统计其检测的总时长;然后,取1株白色念珠菌标准株进行复苏、摇菌并提取基因组,进行PCR获取目的片段,构建质粒标准品,测定浓度并计算出相应的拷贝数/μL,随后进行倍比稀释,取浓度为107101拷贝数/μL的7个样品,分别采用上述三种方法进行实验,以光滑念珠菌为阴性对照菌,每个梯度至少设定3次重复,同时分析其检测白色念珠菌的灵敏性;最后,以白色念珠菌标准株为阳性对照,阴性对照菌同前所述,采用试剂盒、加热煮沸、液氮反复冻融分别进行DNA提取,对31份疑似感染白色念珠菌的临床样本和1株棉拭子取材的白色念珠菌感染的临床样本进行实时荧光RPA检测,以PCR检测结果作为参考,并检验DNA粗提取方法是否可行。（2）实验二:首先,同样选取ITS2作为鉴定基因,参照侧流层析试纸条说明与nfo+试剂盒设计指南,对上述针对exo+试剂盒已筛选出的最适引物及探针稍作修改,确定本次实验的引物与探针;其次,取1株白色念珠菌标准株,以5株阴性对照菌（同上述）,对实验的反应温度、检测时间进行摸索筛选,确定此次实验的最适反应温度和时间,同时分析检测的特异性并计算检测总时长;然后,采用上述构建成功的7个质粒标准品进行实验,每个梯度至少设置3次重复,统计检出下限,分析其检测白色念珠菌的灵敏性;最后,对白色念珠菌临床样本进行检测,以光滑念珠菌为阴性对照菌,并与PCR、实时荧光RPA检测方法的检测结果进行比对,分析是否一致。结果:（1）3种方法检测中白色念珠菌标准株均出现阳性结果,扩增结果送测序并在NCBI中比对成功,PCR、qPCR、实时荧光RPA检测总时间分别为133、78、35 min;PCR、qPCR、实时荧光RPA的检测下限均为1×101拷贝数/μL,阴性对照均未出现阳性结果,在实时荧光定量PCR、RPA检测中,随着质粒标准品的浓度增加,扩增曲线达到阈值线所需要的循环数越少,检测到阳性结果所需的时间越短,实时荧光RPA检测结果显示:质粒标准品的浓度梯度与检测时间之间呈明显负相关（R2=0.91,P<0.01）,此项实验是可重复的;实时荧光RPA对31份疑似感染白色念珠菌临床样本的阳性检出率为32.26%（10/31）,略低于PCR的35.48%（11/31）,10份经双方均鉴定成功的白色念珠菌临床样本,经实时荧光RPA与PCR检测均出现阳性结果,阴性对照均未出现阳性结果,采用试剂盒、加热煮沸法提取DNA进行RPA,扩增曲线达到阈值所需时间分别为（438±13）、（462±12）s,二者相近（t=1.32,P>0.05）,液氮反复冻融法提取DNA进行实时荧光RPA,扩增曲线达到阈值所需时间为（584±15）s,明显多于另外2种方法（t=7.55、6.39,P<0.01）,用粗提取方法提取的样品作为检测对象是可行的。（2）在RPA结合侧流层析试纸条的检测中,我们发现除白色念珠菌外其余对照病原菌均未出现检测条带,检测总时长为30min;LFD-RPA检测经摸索筛选出本次实验的最适反应温度为37℃,最适反应时间为10 min;其检测的最低限度为101拷贝数/μL,实验结果重复性良好;LFD-RPA对31份疑似感染白色念珠菌临床样本的阳性检出率为41.93%（13/31）,对白色念珠菌临床样本的检测结果中PCR与之相比阳性符合率为84.62%（11/13）,实时荧光RPA与之相比阳性符合率为76.92%（10/13）。结论:（1）成功地构建并优化实时荧光定量RPA检测白色念珠菌具有检测快速、操作简单、敏感性高、特异性好等优点;反应体系的体积约减少为推荐使用量的1/3,加之结合核酸粗提取方法,仍能稳定、较好地完成检测,使得实验成本大大降低,并且检测比常规PCR、qPCR进一步节省时间,可满足大规模样本高通量快速检测的需求;检测需要具备荧光检测装置,更适用于具备条件的实验室团队及临床检测中心推广应用。（2）在实时荧光定量RPA的基础上,进一步构建优化了LFD-RPA对白色念珠菌检测,可实现完全脱离检测设备,仅需要一台水浴锅甚至体温即可提供反应所需温度;检测结果既特异又敏感,可直接通过裸眼判读,适合未经培训的人员操作,可在即时诊断（Point-of-care testing,POCT）和资源受限的环境中得到推广应用。

刘洪庆^[5]（2006）在《山东省农村已婚育龄妇女RTI干预与病原体筛查方法研究》文中认为研究背景 生殖道感染（Reproductive tract infection，RTI）已成为全球特别是发展中国家非常重要的生殖健康和公共卫生问题。采取有效的干预措施预防和控制RTI的发生和流行，减少RTI的损失已成为全球的共识。国家计生委本着“以人为本”的原则，将RTI的防治工作作为全系统战略发展的重点工程，于2001年下半年开始先后在全国20个省市区开展试点工作。各个试点区开展了一系列的RTI研究工作，但这些研究多是横断面的研究，目的多在于了解RTI患病及相关知识、态度和行为的现状。有的地区也开展了一定范围内的干预研究，其中涉及的干预手段有健康促进（包括健康教育），筛查和查找病例，治疗以及临床病例管理，且大多集中在城市与流动人口，而针对农村已婚育龄妇女RTI干预的研究少之又少。由于RTI大多无症状，加之具有症状多样性与不典型性、多重感染与隐私等特点，致使很多感染者不能得到及时诊治，因此开展RTI干预模式研究十分必要。 同时目前对RTI多病原体的检测方法不适应流行病学大规模筛查和实验诊断的需要，主要问题是各种病原体检查需单一测定方法或试剂盒，需进行多次实验方可对一份标本做出诊断，操作繁琐，而且多数检查费用昂贵，患者难以承受。在人群开展流行病学大规模调查更是困难，因此需要研究一种综合性一次可以同时进行多病原体检测的方法。 研究目的 主要目的 本研究旨在探索农村已婚育龄妇女RTI综合防治的可持续发展的模式，为减少RTI传播制订防治策略和进一步推广提供依据。应用分子生物学技术，建立用于常见RTI病原体检测的多重PCR筛查方法。 具体目的 1、通过基线调查，了解农村已婚育龄妇女RTI流行现状。 2、分析农村育龄妇女RTI的主要影响因素。 3、评价在农村开展RTI社区干预对已婚育龄妇女RTI相关知识、态度、行为及

邬玲仟,李小红,蔡珠妇,黄志峰,杨欣源^[6]（2001）在《荧光聚合酶链反应用于阴道炎性病病原体检测》文中指出目的 了解阴道炎患者生殖道性病病原体NGH、CT、Uu、HPV6 ,1 1 流行情况。方法 将PCR技术与荧光素标记探针相结合 （FQ -PCR） ,对阴道炎患者的宫颈柱状上皮进行NGH、CT、Uu、HPV6 ,1 1 定量检测。结果 阴道炎患者中四种病原体总感染率95 .70 % ,阳性率依次为Uu（70 .0 0 % ） >CT（61 .30 % ） >NGH（1 4 .0 0 % ） >HPV6 ,1 1 （1 0 .30 % ）。病原体混合感染率 （51 .30 % ） ,以解尿支原体并发其他病原体感染率最高 （45 .30 % ） ,其次是沙眼衣原体 （44.30 % ） ,淋球菌 （9.0 0 % ） ,尖锐湿疣 （5 .70 % ） ,病例中 2 0～ 39岁患者感染NGH、CT、Uu、明显多于其他年龄组。结论 对阴道炎患者医生应尽可能做各种性病病原体检测 ,以明确诊断 ,及时治疗。

于文彬,苏明权,杨秀芝,马越云,王德堂,张建芳,陈必良,丁振若^[7]（2000）在《聚合酶链反应快速检测加德纳菌的方法和应用》文中指出目的 建立聚合酶链反应快速检测加德纳菌方法 ,用于细菌性阴道病的诊断和治疗 .方法 根据加德纳菌基因序列中 IIS- 2 3sr RNA基因区设计并合成特异性引物 ,应用聚合酶链反应扩增阴道或宫颈分泌物中的加德纳菌 ,并与革兰染色和分离培养进行对照检测 .结果 经对阴道加德纳菌和 5种常见的阴道感染病原体检测 ,证实所用引物具有较高的特异性 ;敏感性实验结果 10 2 可扩增出明显的区带 ;在 5 0例宫颈分泌物标本中 ,革兰染色阳性检出率为 18% （9/ 5 0 ）、分离培养阳性检出率为 16 % （8/ 5 0 ） ,聚合酶链反应阳性率为 2 8% （14/5 0 ） .结论 采用聚合酶链反应检测阴道分泌物中的加德纳菌 ,用于细菌性阴道病的快速诊断 ,有可能成为细菌性阴道病实验室诊断的主要检测方法

邢小微^[8]（2019）在《宏基因组高通量测序对中枢神经系统感染性疾病的诊断价值研究》文中认为目的:1.分析宏基因组高通量测序技术诊断病毒性脑（膜）炎、结核性脑膜炎、化脓性脑膜炎和隐球菌性脑膜炎的敏感度和特异度等指标;2.分析不同的Unique reads条数在鉴别中枢神经系统感染性疾病中的作用;3.分析不同检测时间对宏基因组高通量测序检测结果的影响;4.分析感染累及不同部位时,选择不同样本进行宏基因组高通量测序对诊断结果的影响。方法:2016年11月～2019年2月共计201例患者纳入本研究,包括70例病毒性脑（膜）炎、39例结核性脑膜炎、38例化脓性脑膜炎、24例真菌性脑膜炎和30例对照组。在常规诊治操作中留取脑脊液或血液标本,进行DNA提取和文库构建。将质控合格的文库进行BGISEQ-500/50测序,经过生物信息分析后生成测序数据,根据患者临床信息判读致病体。根据患者临床信息及其他辅助检查结果,形成最终诊断。计算高通量测序对中枢神经系统感染性疾病的诊断敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值等指标。比较在不同的Unique reads条数标准下,高通量测序对中枢神经系统感染性疾病的诊断效能。结果:1.在确诊的病毒性脑（膜）炎患者中,当Unique reads≥ 2时,高通量测序诊断病毒性脑（膜）炎的ROC曲线下面积（0.651）最大,NGS诊断的阳性一致百分比,阴性一致百分比和总一致百分比分别为40.8%,89.3%和76.1%。当感染仅累及脑（脊）膜时,脑脊液组高通量测序阳性率（100%）高于血液组（60%）,脑脊液组Unique reads、基因覆盖度均高于血液组,p<0.05。当感染累及脑实质时,脑组织NGS的Unique reads、基因覆盖度均高于脑脊液标本。2.在确诊和很可能的结核性脑膜炎患者中,当种水平序列数≥1时,ROC曲线下面积（0.610）最大,NGS诊断的阳性一致百分比、阴性一致百分比和总一致百分比分别为25.6%,96.3%和82.6%。在金标准确诊的结核性脑膜炎患者中,NGS诊断的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为60%、96.3%、33.3%和98.7%。将高通量测序与常规检测方法结合时,结核性脑膜炎的诊断阳性率为61.54%（24/39）。3.在金标准确诊的化脓性脑炎中,当Unique reads条数≥ 5时,ROC曲线下面积（0.892）最大,NGS敏感度为83.3%,特异度为95.1%,阳性预测值为55.6%,阴性预测值为98.7%。4.当Uniquereads条数≥2时,NGS诊断隐球菌性脑炎的敏感度为75%,特异度为99.47%,阳性预测值为90%,阴性预测值为98.43%。结论:1.（1）建议将Uniquereads≥2作为NGS检测病毒感染的阳性标准;（2）推荐在病毒性脑（膜）炎发病早期进行高通量测序检测;（3）当感染累及脑膜时,选择脑脊液进行NGS诊断价值优于血液。2.（1）当NGS检出结核分枝杆菌复合群时,建议至少一条以上序列可匹配到种或属时,可作为阳性结果;（2）NGS对结核性脑膜炎的诊断能力尚有待进一步提高,目前可作为一种辅助诊断手段,并可作为排他性诊断方法之一。3.（1）建议将Unique reads数≥5定义为NGS检测化脓性脑膜炎的阳性标准;（2）化脓性脑膜炎的NGS结果较为纷繁复杂,对病原菌和背景污染菌的鉴别是目前的难题。4.（1）NGS对隐球菌性脑膜炎的诊断能力低于常规检测方法;（2）NGS可鉴别隐球菌菌种,有助于隐球菌性脑膜炎的诊治管理;（3）建议早期联合墨汁染色、真菌培养、荚膜抗原检测及高通量测序多种方法,以期早期、精准诊断,为抗感染治疗方案及疗程的选择提供依据。5.（1）尽管NGS对病毒性脑（膜）炎和结核性脑膜炎的诊断能力一般,但在目前临床诊断的困境中,无疑是很有意义的检测手段。（2）NGS对化脓性脑膜炎和隐球菌性脑膜炎的诊断能力较好;（3）临床医生应根据临床各方面证据结合高通量测序结果综合判定病原体。

江国花,吴璇华^[9]（2018）在《人支原体和巨细胞病毒感染对妊娠结局的影响》文中研究指明目的检测性传播支原体、脲原体、单纯疱疹病毒（HSV）和巨细胞病毒（CMV）的诊断测试在临床环境中不作为常规检查,且这些STI（性传播感染）的频率是未知的,探讨人支原体和巨细胞病毒感染对妊娠结局的影响。方法在与妊娠结局相关的200名孕妇及其新生儿中对这些性病病原体的患病率进行前瞻性评估,聚合酶链反应用于检测孕妇的阴道拭子和新生儿的口腔拭子中的细菌和病毒性STI病原体,制定关于前妊娠和当前妊娠的标准化问卷,应用线性回归分析来将病原体检测与妊娠结果相关联。结果脲原体是测试的病原体中最常见的（90.5%阳性女性和47.5%阳性新生儿）,其次是支原体（32.5%和7.5%）,衣原体（14.5%和7.5%）,毛滴虫(8.5%和4.0%和淋球菌（0.5%和0）。在46.5%的孕妇和10.5%的新生儿中发现CMV,仅在2个母亲中发现HSV-2。结论具有解脲脲原体、人支原体、阴道毛滴虫或CMV的母体的定植与对新生儿的垂直传播相关,并且从妊娠妇女到后代的人支原体或CMV的传播与新生儿身长和孕龄的减少有关,应在临床环境中实施其检测的诊断测试。

林敏^[10]（2018）在《阴道毛滴虫和白色念珠菌荧光定量PCR方法的建立及应用》文中指出研究目的:1.建立双重荧光定量PCR检测方法同时检测阴道毛滴虫和白色念珠菌感染,优化该检测方法的反应条件,并评估该方法的特异性、敏感性、重复性等。旨在为临床提供一种快速并同时检测阴道毛滴虫和白色念珠菌的方法,应用于女性阴道炎、尿道炎患者的的临床诊断。2.收集2016年8月至2017年4月期间,在广州医科大学附属第三医院妇产科就诊者的阴道分泌物标本,使用建立好的双重荧光定量PCR检测方法检测标本阴道毛滴虫和白色念珠菌感染情况,分析双重荧光定量PCR检测方法的临床实用性。研究方法:1.通过查看文献获得目的基因序列,并合成阴道毛滴虫和白色念珠菌引物、探针的基因序列,初步确定双重荧光定量PCR检测方法的反应体系;通过对反应体系中Mg2+浓度和酶的种类进行筛选,优化该检测方法的反应条件。2.以生殖道常见微生物,包括大肠杆菌、淋病奈瑟氏菌、加德纳菌、乳酸杆菌、人型支原体临床分离株DNA和人基因组DNA为模板,以阴道毛滴虫（Trichomonas vaginalis,TV）和白色念珠菌（Candida albicans,CA）临床分离株作为阳性对照,以去离子水作为阴性对照,进行双重荧光定量PCR检测方法,评价其特异性;将不同浓度的TV和CA的阳性质粒标准品作为模板,通过双重荧光定量PCR进行检测,评价该检测方法的敏感性;将20 copies质粒和2000 copies TV和CA阳性标准质粒重复性检测10次,评价该检测方法的精密度。3.收集2016年8月至2017年4月在广州医科大学附属第三医院妇产科门诊病患的阴道分泌物标本,采用本文建立好的两重荧光定量PCR检测方法检测阴道毛滴虫和白色念珠菌,并与普通PCR检测方法比较,确定该方法的实用性。研究结果:1.双重荧光定量PCR反应体系中Mg2+离子浓度为4.5 mM时两种基因扩增最佳,由此确定反应体系中镁离子添加浓度为4.5 mM;在ACE、HOT、T-Taq的Taq DNA聚合酶下,聚合酶为T-Taq时两种基因扩增最佳,由此确定双重荧光定量PCR反应体系中DNA聚合酶为T-Taq。2.特异性实验结果表明:该法能特异性扩增阴道毛滴虫和白色念珠菌目的片段,而对乳酸杆菌、大肠杆菌、淋病奈瑟氏菌、加德纳菌、人型支原体临床分离株DNA、人基因组DNA无特异性扩增;敏感度实验结果表明:阴道毛滴虫和白色念珠菌最低检测限为10 copies/ul;重复性实验结果表明:双重荧光定量PCR检测方法对于阴道毛滴虫和白色念珠菌的检测结果重复性好,所有样本都显示阳性,批间CV值在20 copies和2000 copies反应范围均小于5%。因此,本研究建立的阴道毛滴虫和白色念珠菌双重荧光定量PCR检测方法具有较好的特异性、灵敏度及重复性。3.收集2016年8月至2017年4月妇产科门诊就诊者的阴道分泌物标本217份,对样本进行检测,双重荧光定量PCR方法检测TV的阳性率为1%,CA的阳性率为11.06%,而普通PCR测序法检测TV的阳性率为1%,CA的阳性率为10.60%,TV的荧光定量PCR方法和测序法的检测结果总符合率为100%,CA的荧光定量PCR方法和测序法的检测结果总符合率为99.54%,一致性较好（Kappa=0.859,P<0.001）。结论:1.本研究成功构建了能够同时检测阴道毛滴虫和白色念珠菌的双重荧光定量PCR检测方法,该方法特异性好,灵敏度高,且具有很好的重复性。2.采用双重荧光定量PCR检测方法可快速检测临床样本中阴道毛滴虫和白色念珠菌,与普通PCR测序法比较,一致性较好,为女性阴道炎的临床诊断提供了一种可靠的检测途径。

二、荧光聚合酶链反应用于阴道炎性病病原体检测（论文开题报告）

（1）论文研究背景及目的

此处内容要求：

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例：

本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。

（2）本文研究方法

调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。

三、荧光聚合酶链反应用于阴道炎性病病原体检测（论文提纲范文）

（1）SAT技术应用于三种不同类型流产解脲脲原体感染的临床研究（论文提纲范文）

（2）自动化解脲脲原体/微小脲原体联合检测与生殖道病原体感染疾病的应用研究（论文提纲范文）

（3）PCR荧光探针法、乳胶法及培养法检测生殖道分泌物中沙眼衣原体、淋球菌和解脲支原体的优劣分析（论文提纲范文）

（4）基于重组酶聚合酶扩增（RPA）技术的白色念珠菌快速检测方法的构建及应用（论文提纲范文）

（5）山东省农村已婚育龄妇女RTI干预与病原体筛查方法研究（论文提纲范文）

（6）荧光聚合酶链反应用于阴道炎性病病原体检测（论文提纲范文）

（7）聚合酶链反应快速检测加德纳菌的方法和应用（论文提纲范文）

（8）宏基因组高通量测序对中枢神经系统感染性疾病的诊断价值研究（论文提纲范文）

（9）人支原体和巨细胞病毒感染对妊娠结局的影响（论文提纲范文）

（10）阴道毛滴虫和白色念珠菌荧光定量PCR方法的建立及应用（论文提纲范文）

四、荧光聚合酶链反应用于阴道炎性病病原体检测（论文参考文献）

• [1]SAT技术应用于三种不同类型流产解脲脲原体感染的临床研究[D]. 李祥凌. 遵义医科大学, 2021(01)
• [2]自动化解脲脲原体/微小脲原体联合检测与生殖道病原体感染疾病的应用研究[D]. 陈佳婕. 华东理工大学, 2021(08)
• [3]PCR荧光探针法、乳胶法及培养法检测生殖道分泌物中沙眼衣原体、淋球菌和解脲支原体的优劣分析[J]. 廖春洁,叶美萍,顾昕,石梅,周平玉. 中国男科学杂志, 2021(03)
• [4]基于重组酶聚合酶扩增（RPA）技术的白色念珠菌快速检测方法的构建及应用[D]. 蒙雨丹. 西南医科大学, 2020(10)
• [5]山东省农村已婚育龄妇女RTI干预与病原体筛查方法研究[D]. 刘洪庆. 山东大学, 2006(12)
• [6]荧光聚合酶链反应用于阴道炎性病病原体检测[J]. 邬玲仟,李小红,蔡珠妇,黄志峰,杨欣源. 中国煤炭工业医学杂志, 2001(12)
• [7]聚合酶链反应快速检测加德纳菌的方法和应用[J]. 于文彬,苏明权,杨秀芝,马越云,王德堂,张建芳,陈必良,丁振若. 第四军医大学学报, 2000(10)
• [8]宏基因组高通量测序对中枢神经系统感染性疾病的诊断价值研究[D]. 邢小微. 中国人民解放军医学院, 2019(02)
• [9]人支原体和巨细胞病毒感染对妊娠结局的影响[J]. 江国花,吴璇华. 河北医药, 2018(09)
• [10]阴道毛滴虫和白色念珠菌荧光定量PCR方法的建立及应用[D]. 林敏. 广州医科大学, 2018(05)

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